ImpedingMacrophageEntryintoHypoxicTumorAreasbySema3A/Nrp1SignalingBlockadeInhibitsAngiogenesisandRestoresAntitumorImmunity（通過阻斷Sema3A/Nrp1信號(hào)通路抑制巨噬細(xì)胞進(jìn)入腫瘤低氧區(qū)以抗血管生成并恢復(fù)抗腫瘤免疫）

——AndreaCasazza,DamyaLaoui,MathiasWenes,etal.

CancerCell24,695–709,December9,20132023/9/141文獻(xiàn)閱讀ImpedingMacrophageEntryinto2023/9/142文獻(xiàn)閱讀2023/8/62文獻(xiàn)閱讀研究背景腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAM）：浸潤(rùn)至腫瘤組織中的巨噬細(xì)胞，通常與腫瘤的不良預(yù)后相關(guān)。大多數(shù)情況下，TAM↑，預(yù)后越差；少數(shù)情況，則相反。TAM具有促腫瘤（M2型）和抗腫瘤（M1型）的雙重作用。M2促血管生成、抑制免疫反應(yīng)；M1促炎癥反應(yīng)，殺傷腫瘤細(xì)胞。功能相反的TAM占據(jù)腫瘤組織的不同位置。低氧區(qū)TAM——促腫瘤，常氧區(qū)TAM—抗腫瘤

巨噬細(xì)胞受到微環(huán)境中特殊信號(hào)的“訓(xùn)導(dǎo)”？2023/9/143文獻(xiàn)閱讀研究背景腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAM）：浸潤(rùn)至腫瘤組織中的巨噬細(xì)研究背景Nrp1是Sema3A的受體，已有研究表明阻斷Nrp1可抑制腫瘤生長(zhǎng)，通過抑制多種癌細(xì)胞的血管生成及增殖。前期研究表明，Nrp1可作為促血管生成的巨噬細(xì)胞（M2）標(biāo)記物。2023/9/144文獻(xiàn)閱讀研究背景Nrp1是Sema3A的受體，已有研究表明阻斷Nrp研究思路2023/9/14文獻(xiàn)閱讀5Nrp1作為Sema3A受體Nrp1作為促血管生成巨噬細(xì)胞標(biāo)記物，低氧區(qū)的巨噬細(xì)胞促血管生成通過阻斷Sema3A/Nrp1信號(hào)是否可以抑制巨噬細(xì)胞進(jìn)入腫瘤低氧區(qū)，從而起到抗血管生成并恢復(fù)抗腫瘤免疫的作用？阻斷Nrp1，抑制血管生成，抗腫瘤生長(zhǎng)研究思路2023/8/6文獻(xiàn)閱讀5Nrp1作為Sema3A受1.巨噬細(xì)胞中NRP1缺失抑制腫瘤生長(zhǎng)2.NRP1缺失阻止巨噬細(xì)胞進(jìn)入低氧區(qū)8.Sema3A限制了TAM在腫瘤組織中位置5.低氧區(qū)巨噬細(xì)胞的NRP1的轉(zhuǎn)錄受到抑制7.NRP1表達(dá)與否Sema3A活化相反信號(hào)途徑3.NRP1缺失導(dǎo)致TAM再分布抑制腫瘤生長(zhǎng)6.低氧調(diào)節(jié)NRP1限制巨噬細(xì)胞對(duì)Sema3A的應(yīng)答4.NRP1缺失導(dǎo)致TAM再分布恢復(fù)抗腫瘤免疫/減少血管生成阻斷Sema3A/Nrp1信號(hào)抑制巨噬細(xì)胞進(jìn)入低氧區(qū)抗腫瘤的作用機(jī)制研究?jī)?nèi)容2023/9/146文獻(xiàn)閱讀表型機(jī)制1.巨噬細(xì)胞中NRP1缺失抑制腫瘤生長(zhǎng)2.NRP1缺失阻止巨研究結(jié)果：1.巨噬細(xì)胞中NRP1的缺失抑制腫瘤生長(zhǎng)建立LysM-Cre;Nrp1L/L轉(zhuǎn)基因小鼠（簡(jiǎn)稱L/L），特征：TAM中Nrp1的表達(dá)下降92%，單核細(xì)胞中Nrp1下降81%，TAN或DC中Nrp1下降60%。對(duì)照組LysM-Cre;Nrp1+/+簡(jiǎn)稱野生型WT，基本正常。2023/9/147文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：1.巨噬細(xì)胞中NRP1的缺失抑制腫瘤生長(zhǎng)建立Lys研究結(jié)果：1.巨噬細(xì)胞中NRP1的缺失抑制腫瘤生長(zhǎng)2023/9/148文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：1.巨噬細(xì)胞中NRP1的缺失抑制腫瘤生長(zhǎng)2023/研究結(jié)果：1.巨噬細(xì)胞中NRP1的缺失抑制腫瘤生長(zhǎng)建立iCSF1R-Cre;Nrp1L/L轉(zhuǎn)基因小鼠，特異性刪失TAM中Nrp1，其他骨髓細(xì)胞中Nrp1的表達(dá)不受影響。對(duì)照組iCSF1R-Cre;Nrp1+/+簡(jiǎn)稱野生型WT，基本正常。2023/9/149文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：1.巨噬細(xì)胞中NRP1的缺失抑制腫瘤生長(zhǎng)建立iCS研究結(jié)果：2.巨噬細(xì)胞中NRP1的缺失阻止其進(jìn)入低氧區(qū)對(duì)比WT組，Nrp1缺失組（即L/L），TAM總的數(shù)量增加；且低氧區(qū)的面積擴(kuò)大2023/9/1410文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：2.巨噬細(xì)胞中NRP1的缺失阻止其進(jìn)入低氧區(qū)對(duì)比W研究結(jié)果：2.巨噬細(xì)胞中NRP1的缺失阻止其進(jìn)入低氧區(qū)對(duì)比WT組，Nrp1缺失組（即L/L），TAM主要集中在常氧區(qū)，而在低氧區(qū)中的數(shù)量減少在iCSF1R-Cre;Nrp1L/L轉(zhuǎn)基因小鼠觀察到相同的結(jié)果2023/9/1411文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：2.巨噬細(xì)胞中NRP1的缺失阻止其進(jìn)入低氧區(qū)對(duì)比W研究結(jié)果：3.NRP1缺失導(dǎo)致TAM再分布抑制原位和自發(fā)性腫瘤生長(zhǎng)建立兩種原位腫瘤模型（LLC原位肺癌模型、Panc02原位胰腺癌模型）和PyMT自發(fā)性乳腺癌模型，同樣證實(shí)Nrp1缺失可以導(dǎo)致TAM再分布，并抑制腫瘤生長(zhǎng)，說明Nrp1缺失效應(yīng)與腫瘤組織來源無關(guān)2023/9/1412文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：3.NRP1缺失導(dǎo)致TAM再分布抑制原位和自發(fā)性腫研究結(jié)果：3.NRP1缺失導(dǎo)致TAM再分布抑制原位和自發(fā)性腫瘤生長(zhǎng)2023/9/1413文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：3.NRP1缺失導(dǎo)致TAM再分布抑制原位和自發(fā)性腫研究結(jié)果：3.NRP1缺失導(dǎo)致TAM再分布抑制原位和自發(fā)性腫瘤生長(zhǎng)2023/9/1414文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：3.NRP1缺失導(dǎo)致TAM再分布抑制原位和自發(fā)性腫研究結(jié)果：4.NRP1缺失導(dǎo)致TAM再分布恢復(fù)免疫功能及減少血管生成前面觀察到LysM-Cre;Nrp1L/L轉(zhuǎn)基因小鼠TAM不能進(jìn)入腫瘤低氧區(qū)，那么這將對(duì)TAM功能表型有何影響？方法：將分離自轉(zhuǎn)基因小鼠的TAM與EC共培養(yǎng)2023/9/1415文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：4.NRP1缺失導(dǎo)致TAM再分布恢復(fù)免疫功能及減少研究結(jié)果：4.NRP1缺失導(dǎo)致TAM再分布恢復(fù)免疫功能及減少血管生成來自L/L組TAM促EC遷移和毛細(xì)血管網(wǎng)形成減少釋放更多NO、對(duì)腫瘤細(xì)胞更具細(xì)胞毒性，促進(jìn)T細(xì)胞增殖2023/9/1416文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：4.NRP1缺失導(dǎo)致TAM再分布恢復(fù)免疫功能及減少研究結(jié)果：4.NRP1缺失導(dǎo)致TAM再分布恢復(fù)免疫功能及減少血管生成促進(jìn)CD8+CTL增殖2023/9/1417文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：4.NRP1缺失導(dǎo)致TAM再分布恢復(fù)免疫功能及減少研究結(jié)果：4.NRP1缺失導(dǎo)致TAM再分布恢復(fù)免疫功能及減少血管生成Th1因子增多2023/9/1418文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：4.NRP1缺失導(dǎo)致TAM再分布恢復(fù)免疫功能及減少研究結(jié)果：4.NRP1缺失導(dǎo)致TAM再分布恢復(fù)免疫功能及減少血管生成呈現(xiàn)M1型增多、M2型減少（M1表達(dá)NOS2/Cxcl9/Il-12/Cxcl10，M2表達(dá)Arg1/Ym1/Il-10/Ccl22）2023/9/1419文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：4.NRP1缺失導(dǎo)致TAM再分布恢復(fù)免疫功能及減少研究結(jié)果：5.缺氧巨噬細(xì)胞的NRP1的轉(zhuǎn)錄受到抑制明確Nrp1的效應(yīng)之后，進(jìn)一步研究了Nrp1調(diào)控TAM在缺氧區(qū)域的定位機(jī)制2023/9/1420文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：5.缺氧巨噬細(xì)胞的NRP1的轉(zhuǎn)錄受到抑制明確Nrp研究結(jié)果：5.缺氧巨噬細(xì)胞的NRP1的轉(zhuǎn)錄受到抑制進(jìn)一步探索缺氧抑制巨噬細(xì)胞中Nrp1表達(dá)的分子機(jī)制，HIF-2α可以抑制Nrp1表達(dá)過表達(dá)NF-kB的亞基p50/p65，在Hif2a-KO或Ikbkb-KO巨噬細(xì)胞中將恢復(fù)Nrp1轉(zhuǎn)錄抑制2023/9/1423文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：5.缺氧巨噬細(xì)胞的NRP1的轉(zhuǎn)錄受到抑制進(jìn)一步探索研究結(jié)果：5.缺氧巨噬細(xì)胞的NRP1的轉(zhuǎn)錄受到抑制HIF-2在巨噬細(xì)胞中的低氧穩(wěn)定作用解開了經(jīng)由IKK介導(dǎo)的NF-kB經(jīng)典途徑。因此，釋放活化的p50/p65異質(zhì)二聚體可以阻斷Nrp1的表達(dá)。2023/9/1424文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：5.缺氧巨噬細(xì)胞的NRP1的轉(zhuǎn)錄受到抑制HIF-2研究結(jié)果：5.缺氧巨噬細(xì)胞的NRP1的轉(zhuǎn)錄受到抑制與常氧區(qū)的BMDM或者TAM比較，缺氧區(qū)中的缺氧應(yīng)答基因Flt1（編碼VEGFR1）上調(diào)，而Nrp1的缺失并不影響這種調(diào)節(jié)作用2023/9/1421文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：5.缺氧巨噬細(xì)胞的NRP1的轉(zhuǎn)錄受到抑制與常氧區(qū)的研究結(jié)果：5.缺氧巨噬細(xì)胞的NRP1的轉(zhuǎn)錄受到抑制腫瘤的缺氧區(qū)域，Sema3a/Vegfa的表達(dá)都上調(diào)了（FigF/G）。2023/9/1422文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：5.缺氧巨噬細(xì)胞的NRP1的轉(zhuǎn)錄受到抑制腫瘤的缺氧研究結(jié)果：6.受缺氧調(diào)節(jié)的Nrp1限定了巨噬細(xì)胞對(duì)Sema3A的應(yīng)答Sema3A趨化巨噬細(xì)胞必需Nrp1，但VEGF164不是。VEGF120(不能有效綁定Nrp1)與VEGF164一樣具有趨化WT和Nrp1-KOBMDMs的作用(FA)。Nrp1的缺失導(dǎo)致對(duì)Sema3A、VEGF164對(duì)巨噬細(xì)胞趨化能力減弱，而VEGF120的能力沒有變化。2023/9/1425文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：6.受缺氧調(diào)節(jié)的Nrp1限定了巨噬細(xì)胞對(duì)Sema3研究結(jié)果：6.受缺氧調(diào)節(jié)的Nrp1限定了巨噬細(xì)胞對(duì)Sema3A的應(yīng)答聯(lián)合應(yīng)用VEGF164/Sema3A比單用VEGF164效應(yīng)低，NRP1缺失時(shí)，Sema3A拮抗VEGF的趨化效應(yīng)。2023/9/1426文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：6.受缺氧調(diào)節(jié)的Nrp1限定了巨噬細(xì)胞對(duì)Sema3研究結(jié)果：6.受缺氧調(diào)節(jié)的Nrp1限定了巨噬細(xì)胞對(duì)Sema3A的應(yīng)答通過細(xì)胞的綁定實(shí)驗(yàn)證實(shí)，顯示Sema3A可以非常明顯的綁定在Nrp1-KO細(xì)胞上。因此，Sema3A能與Nrp1-KO巨噬細(xì)胞發(fā)生相互作用。2023/9/1427文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：6.受缺氧調(diào)節(jié)的Nrp1限定了巨噬細(xì)胞對(duì)Sema3研究結(jié)果：6.受缺氧調(diào)節(jié)的Nrp1限定了巨噬細(xì)胞對(duì)Sema3A的應(yīng)答CCL21具有將巨噬細(xì)胞從缺氧區(qū)域吸引出來。Sema3A降低Nrp1-KO或者缺氧WT小鼠中巨噬細(xì)胞對(duì)CCL21的誘使活動(dòng)。2023/9/1428文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：6.受缺氧調(diào)節(jié)的Nrp1限定了巨噬細(xì)胞對(duì)Sema3研究結(jié)果：7.根據(jù)Nrp1表達(dá)與否Sema3A活化相反的信號(hào)Sema3A誘導(dǎo)VEGFR1Tyr1213磷酸化。Nrp1缺失的巨噬細(xì)胞完全廢除Sema3A依賴的VEGFR1的活化，導(dǎo)致對(duì)VEGF的應(yīng)答沒有明顯影響。2023/9/1429文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：7.根據(jù)Nrp1表達(dá)與否Sema3A活化相反的信號(hào)研究結(jié)果：7.根據(jù)Nrp1表達(dá)與否Sema3A活化相反的信號(hào)敲低VEGFR1將抑制Sema3A或者VEGF164對(duì)WT和Nrp-KO巨噬細(xì)胞的趨化活動(dòng)，提示Nrp1需要VEGFR1去轉(zhuǎn)化Sema3A介導(dǎo)的吸引性信號(hào)。2023/9/1430文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：7.根據(jù)Nrp1表達(dá)與否Sema3A活化相反的信號(hào)研究結(jié)果：7.根據(jù)Nrp1表達(dá)與否Sema3A活化相反的信號(hào)沉默PlexinA1或者A4，可停止Sema3A介導(dǎo)的VEGFR1磷酸化和遷移能力，與Nrp1基因刪失效果一致。2023/9/1431文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：7.根據(jù)Nrp1表達(dá)與否Sema3A活化相反的信號(hào)研究結(jié)果：7.根據(jù)Nrp1表達(dá)與否Sema3A活化相反的信號(hào)在Nrp1存在的情況下，Sema3A/PlexinA1/A4/信號(hào)軸通過VEGFR1激活介導(dǎo)吸引性信號(hào)，而在Nrp1缺失的情況下將變?yōu)橥Ｖ剐盘?hào)。2023/9/1432文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：7.根據(jù)Nrp1表達(dá)與否Sema3A活化相反的信號(hào)研究結(jié)果：8.Sema3A限制TAM在腫瘤組織中的位置建立Nrp1/Sema-基因敲入小鼠，特征：Sema3A-Nrp1結(jié)合位點(diǎn)破壞，而與VEGF164的結(jié)合不受影響。Nrp1/Sema-巨噬細(xì)胞不能朝向Sema3A遷移，而對(duì)VEGF164或者VEGF120都能正常遷移。2023/9/1433文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：8.Sema3A限制TAM在腫瘤組織中的位置建立N研究結(jié)果：8.Sema3A限制TAM在腫瘤組織中的位置Nrp1/Sema-基因敲入小鼠，同樣顯示腫瘤生長(zhǎng)抑制及血管生成減少，并伴有缺氧區(qū)的擴(kuò)大和TAM總數(shù)的增加2023/9/1434文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：8.Sema3A限制TAM在腫瘤組織中的位置Nrp研究結(jié)果：8.Sema3A限制TAM在腫瘤組織中的位置同樣，Nrp1/Sema-巨噬細(xì)胞不能進(jìn)入腫瘤缺氧區(qū)域，與LysM-Cre;Nrp1L/L小鼠中巨噬細(xì)胞表型類似。2023/9/1435文獻(xiàn)閱讀研究結(jié)果：8.Sema3A限制TAM在腫瘤組織中的位置同樣，研究結(jié)果：8.Sema3A限制TAM在腫瘤組織中的位置將沉默Sema3A的LLC細(xì)胞株（LLC-Sh3A）注入WT和LysM-Cre;Nrp1L/L小鼠中，觀察到相同的結(jié)果。2023/