延胡索的活性成分提取工藝摘要】目的：探討延胡索的活性成分最佳提取工藝。方法：采用L9（34）正交試驗(yàn)，以浸膏得率和延胡索乙素質(zhì)量分?jǐn)?shù)作為考察指標(biāo)，分析提取時(shí)間、乙醇體積分?jǐn)?shù)及提取溶劑用量及對(duì)延胡索生物堿的提取效果影響，確定最佳的提取工藝。結(jié)果：延胡索生物堿提取的最佳工藝為超聲提取3次，45min/次，加入7倍量的50%（體積分?jǐn)?shù)）乙醇。結(jié)論：優(yōu)選得到的工藝合理、經(jīng)濟(jì)可行，適用于延胡索活性成分生物堿的提取?！娟P(guān)鍵詞】延胡索；活性成分；提取工藝延胡索為一種常用中草藥，具有理氣止痛、活血散瘀等功效［1-2］。延胡索具有類(lèi)似嗎啡樣鎮(zhèn)痛功效，鎮(zhèn)痛效價(jià)約為嗎啡的一半，特別對(duì)持續(xù)性的鎮(zhèn)痛效果比嗎啡優(yōu)，并且患者不存在欣快感，無(wú)成癮性?，F(xiàn)代研究表明延胡索生物堿中延胡索乙素存在腦內(nèi)多巴胺阻斷劑的作用，效價(jià)僅居于嗎啡之后，此外還能加強(qiáng)腎上腺皮質(zhì)激素分泌。延胡索主要活性成分于化學(xué)結(jié)構(gòu)上和罌粟堿同屬于苯異哇啉類(lèi)，二者的作用非常相似，但延胡索不存在成癮性，所有系理想鎮(zhèn)痛藥物［3］。提取延胡索活性成分過(guò)程中，因大部分采用水作為溶媒，使其活性成分延胡索乙素的含量極低，進(jìn)而使其止痛作用欠佳。本文筆者探討延胡索活性成分的最佳提取工藝，現(xiàn)報(bào)告如下。1儀器與試藥潔康牌數(shù)碼有限公司PS-20A超聲波清洗儀，常州澳華儀器有限公司HH-Z數(shù)顯恒溫水浴鍋，上海精天電子儀器廠(chǎng)FA2104A分析天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司721分光光度計(jì)。水為蒸餾水，其他試劑均為分析純；延胡索乙素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110726-200610）；延胡索藥材（亳州徐重道中藥飲片廠(chǎng)，批號(hào)：11035）。2方法與結(jié)果2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取延胡索乙素對(duì)照品5.0mg至25mL容量瓶中，加入70%乙醇溶解，并定容至刻度，搖勻，即為對(duì)照品溶液。2.2正交試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果顯示超聲提取延胡索藥材3次較完全，故正交試驗(yàn)采用的提取次數(shù)3次。按照延胡索乙素理化性質(zhì)⑷和預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，選取提取時(shí)間（A）、乙醇體積分?jǐn)?shù)（B）、提取溶劑用量（C）3個(gè)因素為考察因素，且每因素設(shè)定3個(gè)水平（見(jiàn)表1）。2.3供試品溶液的制備用粉碎機(jī)將延胡索藥材粉碎，過(guò)60目篩。取正交試驗(yàn)的各項(xiàng)下獲得的延胡索生物堿提取液進(jìn)行抽濾，將濾液合并，減壓回收乙醇，定容于100mL容量瓶。精密各吸取0.5mL，分別置于50mL容量瓶，加入70%乙醇并定容至刻度，搖勻，即為供試品溶液。2.4線(xiàn)性關(guān)系考察［5-6］分別取延胡索乙素對(duì)照品溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、3.0mL，分別以70%乙醇定容至10mL容量瓶中，搖勻，即得一系列質(zhì)量濃度的延胡索乙素對(duì)照品溶液。采用70%乙醇作為空白對(duì)照，在280nm波長(zhǎng)處測(cè)定一系列質(zhì)量濃度的延胡索乙素對(duì)照品溶液吸光度。橫坐標(biāo)為延胡索乙素質(zhì)量濃度(C)，縱坐標(biāo)為吸光度(A),進(jìn)行線(xiàn)性回歸。得回歸方程：A=15.286C+0.0391，r=0.9991。結(jié)果顯示延胡索乙素在濃度范圍(0.01~0.05)mg/mL之間與吸光度有好的線(xiàn)性關(guān)系。2.5浸膏得率測(cè)定精密從100mL延胡索生物堿提取液中量取25mL，置于干燥至恒重蒸發(fā)皿內(nèi)，水浴蒸干，然后再105C烘箱內(nèi)干燥3h，置于干燥器內(nèi)室溫冷卻30min，迅速測(cè)定質(zhì)量。公式為浸膏得率=(浸膏質(zhì)量x4)/每份藥材質(zhì)量X100%。2.6醇浸膏得率和延胡索乙素含量測(cè)定稱(chēng)取延胡索粉9份，30.00g/份，根據(jù)設(shè)定的時(shí)間超聲提取三次，照L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)。分別測(cè)定延胡索提取液的浸膏得率與延胡索乙素含量，結(jié)果見(jiàn)表2-4。表2結(jié)果顯示，評(píng)價(jià)指標(biāo)為浸膏得率時(shí)，三個(gè)因素對(duì)延胡索提取的影響程度依次為B>A>C；表3結(jié)果顯示，提取時(shí)間與乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)浸膏得率的影響均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而提取溶劑用量對(duì)浸膏得率的影響則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，故最佳的提取工藝為A3B3C2。表2結(jié)果顯示，評(píng)價(jià)指標(biāo)為延胡索乙素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)時(shí)，三個(gè)因素對(duì)延胡索提取的影響程度依次為B>A>C，與三個(gè)因素對(duì)延胡索浸膏得率影響結(jié)果一致；表4結(jié)果顯示，提取時(shí)間、乙醇體積分?jǐn)?shù)和提取溶劑用量對(duì)延胡索乙素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)影響均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，故最佳的提取工藝為A3B3C2。因此優(yōu)選的最佳提取工藝為A3B3C2,即超聲提取3次，45min/次，加入7倍量的50%(體積分?jǐn)?shù))乙醇。3討論延胡索的主要活性成分為生物堿類(lèi)化合物，其中延胡索乙素的活性最強(qiáng)、質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，其能夠顯著地鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛［7-9］，其含量多少跟延胡索的功能主治有著密切關(guān)系，可直接地影響著臨床療效。目前常見(jiàn)的延胡索乙素提取方法有索氏提取法、乙醇回流法、CO2超臨界流體萃取法、微波提取法及超聲提取法等［10-11］，其中超聲提取法簡(jiǎn)便、迅速，也可降低高溫水煮對(duì)延胡索乙素破壞，能夠增加延胡索乙素利用率，所以本研究采用超聲提取法作提取延胡索乙素。此外，由于水提的效果較差，因此本研究應(yīng)用乙醇提取。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，延胡索生物堿提取的最佳工藝為超聲提取3次，45min/次，加入7倍量的50%(體積分?jǐn)?shù))乙醇。優(yōu)選得到的工藝合理、經(jīng)濟(jì)可行，適用于延胡索活性成分生物堿的提取。參考文獻(xiàn)：［1］ 賀凱，高建莉,趙光樹(shù).延胡索化學(xué)成分、藥理作用及質(zhì)量控制研究進(jìn)展［J］.中草藥，2007,38(12):1909-1911.［2］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:2010年版一部［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:130.［3］ 謝秀瓊.中藥新制劑開(kāi)發(fā)與應(yīng)用［M］.2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:158.［4］ 馬愛(ài)瑛.生物堿的提取與分離［J］.固原師專(zhuān)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版,2006,27(3):25-30.［5］ 樸惠善，沈光海,鄭云花，等.紫外分光光度法測(cè)定關(guān)蒼術(shù)復(fù)方制劑中延胡索乙素含量［J］.延邊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1996,19(1):11-13.［6］ 薛育梅.元胡止痛片提取工藝的探討［J］.海峽藥學(xué),2004,16(6):27-28.［7］ LINMT,CHUEHFY,HSICHMT.Thehypothermiceffectsofdl-tetrahydropalmatineinrats[J].NeurosciLett,2001,315(1/2):53-56.張曉麗，曲揚(yáng).延胡索的化學(xué)成分[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2008,25⑺：534-540.王光寧，孟江，廖華衛(wèi).延胡索炮制歷史沿革研究[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2007,23(3):349