火炬果樹(shù)粗提物抗氧化活性的研究

0基于過(guò)剩自由基造成的不確定反應(yīng)自由基是生物氧化過(guò)程中產(chǎn)生的中間代謝產(chǎn)物。水體繼續(xù)產(chǎn)生自由基，并立即去除自由基。當(dāng)機(jī)體清除自由基的能力下降或體內(nèi)自由基生成過(guò)多時(shí),過(guò)剩的自由基在體內(nèi)堆積,作用于生物膜多不飽和脂肪酸,使之發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化而引起膜結(jié)構(gòu)和功能的紊亂;攻擊蛋白質(zhì)引起蛋白質(zhì)交聯(lián)、酶活性改變;損傷DNA引起突變等等火炬樹(shù)(RhusTyphinaLinn)系漆樹(shù)科(Anacardiaceae)植物,其樹(shù)皮、葉含有單寧,是制取鞣酸的原料。果實(shí)含有檸檬酸和Vc,可作飲料1材料和方法1.1試劑與儀器火炬果穗:采于青島大學(xué)校園,室溫下自然干燥,粉碎過(guò)40目篩備用;亞油酸:上海來(lái)澤精細(xì)化學(xué)品公司;茶多酚:福建松溪生化工廠,純度>95%;乙醇、乙酸乙酯、三氯醋酸等其他試驗(yàn)所用試劑:均為分析純;豬油:市售新鮮板油文火熬制,過(guò)濾后備用。721型分光光度計(jì):上海第三分析儀器廠產(chǎn)品;7530G型紫外分光光度計(jì):上?；萜?SHA-C水浴恒溫振蕩器;ZFQ-8HA型真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1水浸率的測(cè)定稱取粉碎干燥的火炬果穗各5g,按固液比1∶10的比例分別加入95%乙醇、60%乙醇、水、氯仿-95%乙醇(1∶1)溶液,于40℃恒溫水浴振蕩浸提6h,過(guò)濾。濾渣再分別加等量溶劑用同法提取,過(guò)濾。合并濾液,混勻,減壓濃縮蒸至粘稠,然后轉(zhuǎn)移到真空干燥器,干燥,稱重,計(jì)算浸出率。用無(wú)水乙醇溶解定容,于冰箱存放,用時(shí)逐級(jí)稀釋。1.2.2火果提取物的抗氧化性測(cè)定1.2.2.硫代巴比妥酸法檢測(cè)脂肪酸氧化產(chǎn)物丙二醛生成量配制0.5%的亞油酸磷酸緩沖液作為底物,分別加入底物質(zhì)量0.05%、0.1%的火炬果穗95%乙醇提取物、BHT及茶多酚,用力攪勻,同時(shí)以底物作為空白。將上述各樣置于(40±1)℃恒溫培養(yǎng)箱中,定期取樣用硫代巴比妥酸法測(cè)定亞油酸氧化產(chǎn)物丙二醛的生成量。丙二醛生成量以反應(yīng)液吸光度值表示,吸光度越小,丙二醛的生成量越少,即抗氧化劑的抗氧化能力越強(qiáng)。1.2.2.抗氧化活性的測(cè)定各稱取一定量的火炬果穗95%乙醇提取物,用少量乙醇溶解,加入100g溫?zé)嶝i油,用力攪拌均勻。使其在豬油中的含量分別為0.2%和0.02%。另稱取0.02g茶多酚和BHT各一份,用少量乙醇溶解,加入100g同樣豬油,用力攪勻。同時(shí)做樣品空白。將所有樣品放入(65±1)℃恒溫箱中,定時(shí)攪拌、并交換在恒溫箱中的位置。定期取樣測(cè)定豬油的過(guò)氧化值(POV),并以此來(lái)表示油脂的氧化速度,進(jìn)而衡量提取物的抗氧化活性。POV值測(cè)定:取雙份平行樣,按照GB5009.37-85方法測(cè)定。1.2.2.%紅細(xì)胞懸液的制備雞斷頸取血,制成抗凝血,3000×g離心得紅細(xì)胞,冷生理鹽水洗3次,制成2%的紅細(xì)胞懸液。取2%的紅細(xì)胞懸液1.5mL于各管中,分別加入不同濃度火炬果穗提取物,再分別加入終濃度為0.078mol/L的H1.2.2.火炬果穗提取物對(duì)tda含量的影響雞斷頸取血,迅速取出肝臟,在0～4℃下用生理鹽水制成2%的肝勻漿。實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組和3個(gè)劑量組。取2%肝勻漿各2.0mL加入各管中,分別加入不同濃度的火炬果穗提取物,最后用生理鹽水補(bǔ)充體積至3.0mL。置于37℃恒溫水浴加熱1.5h,取出加2.0mL10%TCA終止反應(yīng),再加入2.0mL0.67%TBA,置于沸水浴中顯色15min,冷卻后離心,取上清液測(cè)532nm處吸光值,以吸光值表示MDA含量多少。吸光值越大,MDA含量越高。抑制率(%)=(MDA對(duì)照-MDA處理)/MDA對(duì)照×100%1.2.2.半胱氨酸和硫酸亞鐵對(duì)mda含量測(cè)定的影響實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組和3個(gè)劑量組。各管中先分別加入肝勻漿2mL,3個(gè)劑量組分別加入不同濃度的提取物,對(duì)照組加入1.0mL生理鹽水,再向各管分別加入半胱氨酸和硫酸亞鐵(終濃度分別為0.16mmol/L和0.032mmol/L),以硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA含量,計(jì)算抑制率。1.2.2.6、進(jìn)口實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組(加相應(yīng)的組織勻漿)和6個(gè)劑量組(分別加入不同濃度的提取物和相應(yīng)組織勻漿1.0mL),加入FeSO2結(jié)果2.1提取物對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的阻斷作用以95%乙醇粗提物為試樣,用硫代巴比妥酸比色法測(cè)定火炬果穗粗提物對(duì)亞油酸脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制作用。由圖1可見(jiàn),火炬果穗粗提物對(duì)亞油酸的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)有阻斷作用,其阻斷作用隨提取物濃度增加而增加,呈量效關(guān)系。與常用抗氧化劑相比,0.1%的火炬果穗粗提物對(duì)亞油酸自動(dòng)氧化反應(yīng)的抑制能力強(qiáng)于0.05%的茶多酚,但弱于同濃度的茶多酚和BHT。值得注意的是本實(shí)驗(yàn)所用茶多酚、BHT基本上為純品,而火炬果穗試樣為粗提物,其有效成分含量較低,純化后是否有助于提高其抗氧化作用,有待于進(jìn)一步研究。2.2抗氧化能力的測(cè)定火炬果穗乙醇提取物對(duì)豬油的抗氧化效果如表1所示?；鹁婀胍掖继崛∥飳?duì)豬油的自動(dòng)氧化有一定的抑制作用,且隨著提取物濃度的增加,其抗氧化能力逐漸增強(qiáng),這與硫代巴比妥酸比色法測(cè)定的結(jié)果相符。當(dāng)火炬樹(shù)果穗提取物在豬油中的添加量為0.2%時(shí),在測(cè)定時(shí)間內(nèi)其抗氧化性優(yōu)于0.02%茶多酚和0.02%BHT,但添加量為0.02%時(shí)其抗氧化作用不如同濃度的茶多酚和BHT。2.3火果提取物與h由表2可見(jiàn),火炬果穗提取物對(duì)H2.4火煮食品對(duì)雞肝臟自發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化的影響由表3可見(jiàn),火炬果穗提取物對(duì)雞肝臟自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA的生成有抑制作用,隨提取物濃度增加,抑制率相應(yīng)增加。2.5fe公司由表4可見(jiàn),試驗(yàn)組雞肝中的MDA吸光度值均低于由Fe2.6入量：由入量的變化而增加出入量加入火炬樹(shù)果穗提取物后,對(duì)雞肝MDA生成的抑制率隨