化學(xué)化工與生命科學(xué)系生物化學(xué)開放實(shí)驗設(shè)計方案（一）食用植物油脂酸價、碘價的測定實(shí)驗一食用植物油脂酸價、碘價的測定實(shí)驗?zāi)康模?）掌握測定食品植物油脂的主要常規(guī)指標(biāo)方法；（2）食用植物油脂的品質(zhì)可由測定其酸價、碘價等理化特性來判斷。實(shí)驗原理2.1酸價酸價（酸值）是指中和1.0g油脂所含游離脂肪酸所需氫氧化鉀的毫克數(shù)。R-COOH+KOH→R-COOK+H20酸價是反映油脂質(zhì)量的主要技術(shù)指標(biāo)之一，同一種植物油酸價越高，說明其質(zhì)量越差越不新鮮。測定酸價可以評定油脂品質(zhì)的好壞和貯藏方法是否恰當(dāng)。2.2碘價碘價是指在一定條件下與100g油脂起加成反應(yīng)所需碘的克數(shù)。測定碘價可以了解油脂脂肪酸的組成是否正常有無摻雜等。最常用的是氯化碘—乙酸溶液法（韋氏法）。其原理：在溶劑中溶解試樣并加入韋氏碘液，氯化碘則與油脂中的不飽和脂肪酸起加成反應(yīng)：CH3…CH=CH…COOH+ICl→CH3…CHI-CHCl…COOH再加入過量的碘化鉀與剩余的氯化碘作用，生成游離碘：KI+ICl→KCl+I2游離的碘可用硫代硫酸鈉溶液滴定:I2+2Na2S2O3→Na2S4O6+2NaI同時做空白試驗，空白與試樣消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液之差，從而計算出被測樣品所吸收的氯化碘（以碘計）的克數(shù)，求出碘價。碘價大的油脂，說明其組成中不飽和脂肪酸含量高或不飽和程度高。3.儀器及材料 3.1儀器碘量瓶250mL；各種分析天平；堿式滴定管；錐形瓶250mL；常用玻璃儀器。3.2試劑（1）酚酞指示劑（10g/L）：溶解1g酚酞于90mL（95%）乙醇與10mL水中。（2）氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液[C（KOH）=0.05mol/L]。（3）碘化鉀溶液（150g/L）：稱取15.0g碘化鉀,加水溶解至100mL,貯于棕色瓶中。（4）硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1mol/L）：按GB601配制與標(biāo)定。（5）韋氏碘液試劑：分別在兩個燒杯內(nèi)稱入三氯化碘7.9g和碘8.9g，加入冰醋酸，稍微加熱，使其溶解，冷卻后將兩溶液充分混合，然后加冰醋酸并定容至1000mL。（6）環(huán)己烷（分析純）。（7）冰乙酸（分析純）。（8）可溶性淀粉（分析純）。（9）氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.05mol/L）的標(biāo)定：（按GB601標(biāo)定或用標(biāo)準(zhǔn)酸標(biāo)定）。（10）中性乙醚—乙醇（2+1）混合液：按乙醚—乙醇（2+1）混合，以酚酞為指示劑，用所配的KOH溶液中和至剛呈淡紅色，且30s內(nèi)不退色為止。（11）淀粉指示劑（10g/L）配制：稱取可溶性淀粉0.50g，加少許水，調(diào)成糊狀，倒入50ml沸水中調(diào)勻，煮沸至透明，冷卻。3.3材料食用植物油3.4注意事項（1）測酸價，當(dāng)樣液顏色較深時，可減少試樣用量，或適當(dāng)增加混合溶劑的用量。（2）側(cè)碘價時，光線和水分對氯化鉀起作用，影響很大，要求所用儀器必須清潔，干燥，碘液試劑必須用棕色瓶盛裝且放于暗處。實(shí)驗步驟4.1酸價的測定1）稱取3.00g—5.00g混勻的試樣，置于錐形瓶中，加入50mL中性乙醚—乙醇混合液，振搖使油溶解，必要時可置于熱水中，溫?zé)崾蛊淙芙猓?）冷至室溫，加入酚酞指示劑2-3滴，以氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定，至初現(xiàn)微紅色，且0.5min內(nèi)部退色為終點(diǎn)；3）平行2次，空白1次，記錄實(shí)驗數(shù)據(jù)。4.2碘價的測定1）試樣的量根據(jù)估計的碘價而異（碘價高，油樣少；碘價低，油樣多），本實(shí)驗在0.120g-1.130g左右；2）將稱好的試樣放入250mL錐形瓶中，加入10mL環(huán)己烷—冰乙酸等體積混合液，溶解試樣；3）準(zhǔn)確加入12.50mL韋氏試劑，蓋好塞子，搖勻后放于暗處30min以上（碘價低于150的樣品，應(yīng)放1h；碘價高于150的樣品，應(yīng)放2h）；4）反應(yīng)時間結(jié)束后，加入10mL碘化鉀溶液(150/L)和75mL水，用0.1mol/L硫代硫酸鈉滴定至淺黃色，加幾滴淀粉指示劑繼續(xù)滴定至劇烈搖動后藍(lán)色剛好消失；5）在相同條件下，平行2次，空白1次。5.結(jié)果與分析5.1酸價5.1.1計算公式式中：X——試樣的酸價（以氫氧化鉀計），單位為毫克每克（mg/g）；V——試樣消耗氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，單位毫升（mL）；C——?dú)溲趸洏?biāo)準(zhǔn)溶液實(shí)際濃度（mol/L）；m——試樣質(zhì)量，單位為克（g）；56.11——與1.0mL氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液[C（KOH）=1.000mol/L]相當(dāng)?shù)臍溲趸浐量藬?shù)。計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。5.1.2實(shí)驗數(shù)據(jù)及處理數(shù)據(jù)組號試樣質(zhì)量/g滴定前刻度/ml滴定后刻度/ml消耗KOH標(biāo)準(zhǔn)液體積/ml13.96800.001.101.1024.04341.102.351.253（空白）02.353.000.65由第一組與空白組數(shù)據(jù)可計算酸價如下：由第二組與空白組數(shù)據(jù)可計算酸價如下：計算X1和X2平均值得此實(shí)驗樣品的酸價為0.37mg/g。5.2碘價5.2.1計算公式式中：V1——試樣消耗的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；V2——空白試劑消耗硫代硫酸鈉的體積，mL；C——硫代硫酸鈉的實(shí)際濃度，mol/L；m——試樣的質(zhì)量，g；0.1269——1/2I2的毫摩爾質(zhì)量，g/mmol。5.2.2實(shí)驗數(shù)據(jù)及處理數(shù)據(jù)組號試樣質(zhì)量/g滴定前刻度/ml滴定后刻度/ml試樣消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液體積/ml10.161.007.956.9520.139.1016.17.003（空白）016.5038.1521.65由第一組與空白組數(shù)據(jù)可計算碘價如下：由第二組與空白組數(shù)據(jù)可計算碘價如下：計算X1和X2平均值得此實(shí)驗樣品的碘價為129.8mg/100g。5.2.3實(shí)驗圖片使油脂溶解滴加藥液6.討論與心得6.1思考題6.1.1油脂中游離的脂肪酸與酸價有何關(guān)系？答：油脂酸價的定義是中和1g油脂中的游離脂肪酸所需KOH的毫克數(shù)。油脂酸價越高，說明樣品質(zhì)量越差，越不新鮮。故酸價是反應(yīng)油脂質(zhì)量的主要指標(biāo)之一。其中，游離脂肪酸（%）=酸價×f（f：不同脂肪酸的換算系數(shù)，以食品中的主要脂肪酸計）。一般樣品以油酸計0.503棕櫚油以軟脂酸計0.456，椰子油以月桂酸計0.356菜子油以芥酸計0.602。6.1.2哪些指標(biāo)可以表明油脂的特點(diǎn)？他們表明了油脂哪些方面的特點(diǎn)？答：油脂酸價：酸價（酸值）是指中和1.0g油脂所含游離脂肪酸所需氫氧化鉀的毫克數(shù)。酸價是反映油脂質(zhì)量的主要技術(shù)指標(biāo)之一，同一種植物油酸價越高，說明其質(zhì)量越差越不新鮮。測定酸價可以評定油脂品質(zhì)的好壞和貯藏方法是否恰當(dāng)。碘價：測定碘價可以了解油脂脂肪酸的組成是否正常有無摻雜等。最常用的是氯化碘—乙酸溶液法（韋氏法）。其原理：在溶劑中溶解試樣并加入韋氏碘液，氯化碘則與油脂中的不飽和脂肪酸起加成反應(yīng)，游離的碘可用硫代硫酸鈉溶液滴定，從而計算出被測樣品所吸收的氯化碘（以碘計）的克數(shù)，求出碘價。過氧化值：檢測油脂中是否存在過氧化值，以及含量的大小，即可判斷油脂是否新鮮和酸敗的程度。常用滴定法，其原理：油脂氧化過程中產(chǎn)生過氧化物，與碘化鉀作用，生成游離碘，以硫代硫酸鈉溶液滴定，計算含量。羰基價：常用比色法測定總羰基價，其原理：羰基化合物和2，4—二硝基苯胺的反應(yīng)產(chǎn)物，在堿性溶液中形成褐紅色或酒紅色，在440nm波長下，測定吸光度，可計算出油樣中的總羰基價。中國《食用植物油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定：羰基價≤20mmol/kg。6.2實(shí)驗心得本次實(shí)驗總體來說進(jìn)行的還是比較順利的，而且我們的實(shí)驗數(shù)據(jù)與實(shí)際值也相差不大，實(shí)驗中遇到的一些問題也處理的較妥當(dāng)。指導(dǎo)教師建議：1、2、化學(xué)化工與生命科學(xué)系生物化學(xué)開放實(shí)驗設(shè)計方案（二）糖類的性質(zhì)實(shí)驗----糖類的顏色反應(yīng)和還原作用專業(yè)：xxxx班級：xxxx小組長：xx小組成員：xxxxxx實(shí)驗地點(diǎn)：實(shí)驗樓A403實(shí)驗時間：2014年9月21日指導(dǎo)老師：xx實(shí)驗二糖類的性質(zhì)實(shí)驗----糖類的顏色反應(yīng)一、目的1．了解糖類某些顏色反應(yīng)的原理。2．學(xué)習(xí)應(yīng)用糖的顏色反應(yīng)鑒別糖類的方法。二、顏色反應(yīng)（一）α-萘酚反應(yīng)（Molisch反應(yīng)）。1．原理糖在濃無機(jī)酸（硫酸、鹽酸）作用下，脫水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能與α-萘酚生成紫紅色物質(zhì)。因為糠醛及糠醛衍生物對此反應(yīng)均呈陽性，故此反應(yīng)不是糖類的特異反應(yīng)。2．器材（1）試管及試管架（2）滴管3．試劑（1）莫氏（Molisch）試劑：5％α-萘酚的酒精溶液1500mL稱取α-萘酚5g，溶于95％酒精中，總體積達(dá)100mL，貯于棕色瓶內(nèi)。用前配制。（2）1％葡萄糖溶液100mL（3）1％果糖溶液100mL（4）1％蔗糖溶液100mL（5）1％淀粉溶液100mL（6）0.1％糠醛溶液100mL（7）濃硫酸500mL4．操作取5支試管，分別加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液、1％淀粉溶液、0.1％糠醛溶液各1mL。再向5支試管中各加入2滴莫氏試劑，充分混合。斜執(zhí)試管，沿管壁慢慢加入濃硫酸約1mL，慢慢立起試管，切勿搖動。濃硫酸在試液下形成兩層。在二液分界處有紫紅色環(huán)出現(xiàn)。觀察、記錄各管顏色。（二）間苯二酚反應(yīng)（Seliwanoff反應(yīng)）1．原理在酸作用下，酮糖脫水生成羥甲基糠醛，后者再與間苯二酚作用生成紅色物質(zhì)。此反應(yīng)是酮糖的特異反應(yīng)。醛糖在同樣條件下呈色反應(yīng)緩慢，只有在糖濃度較高或煮沸時間較長時，才呈微弱的陽性反應(yīng)。在實(shí)驗條件下蔗糖有可能水解而呈陽性反應(yīng)。2．器材（1）試管及試管架（2）水浴鍋3．試劑（1）塞氏（Seliwanoff）試劑0.05％間苯二酚-鹽酸溶液1000mL稱取間苯二酚0.05g溶于30mL濃鹽酸中，再用蒸餾水稀釋至100mL（2）1％葡萄糖溶液100mL（3）1％果糖溶液100mL（4）1％蔗糖溶液100mL4．操作取3支試管，分別加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液各0.5mL。再向各管分別加入塞氏試劑5mL，混勻。將3支試管同時放入沸水浴中，注意觀察、記錄各管顏色的變化及變化時間。實(shí)驗結(jié)果：α-萘酚反應(yīng)：試劑現(xiàn)象1%葡萄糖溶液分層；無色1%果糖溶液分層；維紫紅1%蔗糖溶液分層；顏色不分明1%淀粉溶液分層0.1%糖醛溶液分層；紫紅間苯二酚反應(yīng)：試劑水浴5min；5ml塞氏試劑水浴10min；5ml塞氏試劑水浴5min；10ml塞氏試劑1%葡萄糖溶液無無無1%果糖溶液微紅磚紅無1%蔗糖溶液無無無思考題可用何種顏色反應(yīng)鑒別酮糖的存在？多羥基酮稱為酮糖，如二羥丙酮、赤蘚酮糖、木酮糖、果糖、景天庚酮糖等都是天然存在的酮糖，酮糖都是α碳上有羥基的酮。醛糖和酮糖具有醇羥基和羰基的性質(zhì)，都是還原糖，因為酮糖分子內(nèi)雖然無醛基，但其羰基受相鄰α碳原子上羥基的影響，而呈現(xiàn)出還原活性。兩者的鑒別：(1)西利萬諾夫試驗(Seliwanofstest)，間苯二酚于鹽酸中與酮糖反應(yīng)呈紅色，而醛糖呈色很淺；(2)弱氧化劑，如溴水可將醛糖氧化成相應(yīng)的糖酸，而對酮糖則無氧化作用。糖類的性質(zhì)實(shí)驗----糖類的還原作用一、目的學(xué)習(xí)幾種常用的鑒定糖類還原性的方法及其原理。二、原理許多糖類由于其分子中含有自由的或潛在的醛基或酮基，故在堿性溶液中能將銅、鉍、汞、鐵、銀等金屬離子還原，同時糖類本身被氧化成糖酸及其他產(chǎn)物。糖類這種性質(zhì)常被利用于檢測糖的還原性及還原糖的定量測定。本實(shí)驗進(jìn)行糖類的還原作用所用的試劑為斐林試劑和本尼迪克特試劑。它們都是含Cu2+的堿性溶液，能使還原糖氧化而本身被還原成紅色或黃色的Cu2O沉淀。生成Cu2O沉淀的顏色之所以不同是由于在不同條件下產(chǎn)生的沉淀顆粒大小不同引起的，顆粒越小呈黃色，越大則呈紅色。如有保護(hù)性膠體存在時，常生成黃色沉淀。三、器材1．試管及試管架2．竹試管夾3．水浴鍋4．電爐四、試劑1．斐林（Fehling）試劑1000mL甲液（硫酸酮溶液）：稱取34.5g硫酸銅（CuSO4·5H2O）溶于500mL蒸餾水中。乙液（堿性酒石酸鹽溶液）：稱取125g氫氧化鈉和137g灑石酸鉀鈉溶于500mL蒸餾水中。為了避免變質(zhì)，甲、乙二液分開保存。用前，將甲、乙二液等量混合即可。2．本尼迪克特（Benedict）試劑1000mL稱取檸檬酸鈉173g及碳酸鈉（Na2CO3·H2O）100g加入600mL蒸餾水中，加熱使其溶解，冷卻，稀釋至850mL。另稱取17.3g硫酸銅溶解于100mL熱蒸餾水中，冷卻，稀釋至150mL。最后，將硫酸銅溶液徐徐地加入檸檬酸鈉-碳酸鈉溶液中，邊加邊攪拌，混勻，如有沉淀，過濾后貯于試劑瓶中可長期使用。五、操作先取1支試管加入斐林試劑約1mL，再加入4mL蒸餾水，加熱煮沸，如有沉淀生成，說明此試劑已不能使用。經(jīng)檢驗，試劑合格后，再進(jìn)行下述實(shí)驗。取5支試管，分別加入2mL斐林試劑，再向各試管分別加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液、1％麥芽糖溶液、1％淀粉溶液各1mL。置沸水浴中加熱數(shù)分鐘，取出，冷卻。觀察各管溶液的變化。實(shí)驗結(jié)果：斐林試劑是一種弱氧化劑，如果是還原性糖就可以和斐林試劑發(fā)生氧化還原反應(yīng)，會看到磚紅色氧化亞銅沉淀生成，本尼迪克特試劑，就是班氏試劑，實(shí)驗現(xiàn)象和斐林試劑一樣，二者的主要成分都是氫氧化銅，前者不穩(wěn)定，后者穩(wěn)定性好。實(shí)驗圖片：對實(shí)驗材料進(jìn)行提取實(shí)驗顏色鑒定稱量實(shí)驗材料加入本尼迪克特試劑后顏色對照實(shí)驗三考馬斯亮藍(lán)G250法測定的蛋白質(zhì)含量一、試驗?zāi)康?.學(xué)習(xí)分光光度計的原理及操作學(xué)習(xí)利用染色方法提高蛋白質(zhì)消光系數(shù)，以提高分光光度法檢測靈敏度二、基本原理1.根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜進(jìn)行定性或定量分析的方法稱為吸收光譜法或分光光度法。該法所用的儀器稱為分光光度計或吸收光譜儀。該法所使用的光譜范圍包括可見光和紫外光，即包括波長在200-800nm之間的光。分光光度計靈敏度高，測定速度快，應(yīng)用范圍廣，其中的紫外/可見分光光度技術(shù)更是生物化學(xué)研究工作中必不可少的基本手段之一。3.紫外區(qū)可分為紫外（近紫外）和真空紫外（遠(yuǎn)紫外）。由于吸收池（又稱樣品池、比色杯等）和光學(xué)元件以及氧氣能吸收小于190nm波長的光，因此常規(guī)紫外測定集中在近紫外區(qū)，即200nm-400nm。可見光區(qū)為400nm-800nm。4.考馬斯亮藍(lán)G250法原理：考馬斯亮藍(lán)G250與蛋白質(zhì)結(jié)合后，其最大吸收波長從465nm改變?yōu)?95nm,該蛋白－染料復(fù)合物吸光系數(shù)很高，所以檢測靈敏度很高，可以測定1μg/mL的蛋白質(zhì)，染料和蛋白結(jié)合只需要2分鐘，顏色在1小時內(nèi)穩(wěn)定。操作簡便，快速，是常用的蛋白含量測定方法之一。去污劑，粘多糖等嚴(yán)重干擾該方法的測定三、試劑1.標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液：0.5mg/ml牛血清白蛋白溶液2.考馬斯亮藍(lán)G250蛋白染色劑：四、操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取6只試管，分別加入濃度為0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液0.1ml，然后加入5ml考馬斯亮藍(lán)試劑，震蕩混勻，2分鐘后于595nm測定吸光值，以蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)，光吸收值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.樣品測定：樣品液0.1mL,然后加入5ml考馬斯亮藍(lán)試劑，震蕩混勻，2分鐘后于595nm測定吸光值。從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出相應(yīng)的濃度。五、試驗結(jié)果1.數(shù)據(jù)記錄標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液濃度mg/ml00.10C吸光度A00.0210.0370.0560.0700.1070.0172.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制3.樣品的測定根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可以找出樣品對應(yīng)的點(diǎn)（0.085，0.017），所以樣品的濃度為0.085mg/ml。實(shí)驗圖片：提取實(shí)驗材料實(shí)驗材料各類實(shí)驗材料提取液對照注意事項：1.分光光度計必須放置在固定而且不受震動的儀器臺上，不能隨意搬動。嚴(yán)防震動、潮濕和強(qiáng)光直射。2.盛待測液時，必須達(dá)到比色杯2/3左右，不宜過多。若不慎使溶液流出比色杯外面，必須先用濾紙吸干，再用擦鏡紙或綢布擦凈才能放入比色杯槽內(nèi)。移動比色杯槽要輕，以防溶液濺出，腐蝕機(jī)件。3.千萬不可用手、濾紙、毛刷等物摩擦比色杯光滑面。4.用完比色杯后應(yīng)立即用自來水沖洗，再用蒸餾水洗凈。5.每套分光光度計上的比色杯及比色槽不能隨意更換。實(shí)驗四氨基酸纖維素薄層層析一、目的

學(xué)習(xí)纖維素薄層層析的操作方法，掌握分配層析的原理。

二、原理

以纖維素作為支持物，把它均勻地涂布在玻璃板上成一薄層，然后在此薄層上進(jìn)行層析即為纖維素薄層層析。纖維素是一種惰性支持物，它與水有較強(qiáng)的親和力而與有機(jī)溶劑親和力較弱。層析時吸著在纖維素上的水是固定相，而展層溶劑是流動相。當(dāng)欲被分離的各種物質(zhì)在固定相和流動相中的分配系數(shù)不同時，它們就能被分離開。

三、實(shí)驗材料、儀器和試劑

1．實(shí)驗材料

綠豆芽或萌發(fā)小麥種子

2．儀器

燒杯50mL×1；玻璃板5cm×20cm×1；層析缸；毛細(xì)管；噴霧器；研缽。

3．試劑

標(biāo)準(zhǔn)氨基酸溶液：絲氨酸、色氨酸、亮氨酸，分別以0.01mol/L鹽酸配成4mg/mL的溶液。

纖維素粉（層析用）或微晶型纖維素（層析用）；羧甲基纖維素鈉（CMC）。層析溶劑系統(tǒng)：正丁醇（分析純）﹕冰醋酸（分析純）﹕水＝4﹕1﹕1（V/V）。顯色劑：0.1％茚三酮-丙酮溶液。

四、操作步驟

1．氨基酸的提取

取已萌發(fā)好的小麥種子2g（或綠豆芽下胚軸2g），放入研缽中，加95％乙醇4mL及少量的石英砂，研成勻漿后，倒入離心管中離心3000r/min、15min，上清液即為氨基酸提取液，用滴管小心吸入點(diǎn)樣瓶中備用。

2．制板

取少量羧甲基纖維素鈉（約12mg），置研缽中充分研磨，再稱取纖維素粉3g于研缽中研磨，再加入14mL水研磨勻漿，把纖維素勻漿倒在洗凈烘干的玻璃板上，輕輕震動，使纖維素均勻分布在玻璃板上，水平放置風(fēng)干，用前放入100～110℃烘箱中活化30min。此處羧甲基纖維素鈉是起粘合劑作用，它使纖維素粉能較牢固地粘附于玻璃板上，加入量過多會破壞纖維素薄層的毛細(xì)作用而使層析速度延緩，加的量過少則粘合不牢固，因此需要注意加量控制。

3．點(diǎn)樣

用刀片將薄層板上薄層的左右各邊刮削掉0.5cm，以防止“邊緣效應(yīng)”。在纖維素薄板上距一端15mm處，用鉛筆輕輕劃出點(diǎn)樣記號。樣點(diǎn)之間距離1.3cm。用毛細(xì)管吸取樣品，在記號處點(diǎn)樣，樣品斑點(diǎn)直徑控制在2mm左右。

4．展層

將薄板有樣品的一端浸入已存放展層溶劑的層析缸中，層析溶劑液面不能高于樣品線。待展層溶劑走到距薄板頂端0.5～1cm時取出此薄板（約1～2h），用鉛筆在前沿處作一記號后用電吹風(fēng)吹干。

5．顯色

將茚三酮顯色劑噴霧在板上，用熱吹風(fēng)吹數(shù)分鐘，（或置于70～80℃烘箱中烘干）即可觀察到紫紅色的氨基酸斑點(diǎn)，脯氨酸例外，為黃色斑點(diǎn)。用鉛筆圈出氨基酸斑點(diǎn)，量出溶劑前沿的距離及各斑點(diǎn)中心與起點(diǎn)之間的距離，并計算各氨基酸的Rf值。Rf值為遷移率（rateofflow,Rf），在恒定條件下，每種氨基酸有其一定的Rf值。

根據(jù)已知標(biāo)準(zhǔn)氨基酸和Rf值，與小麥（或綠豆芽）提取液中氨基酸的Rf值比較，確定提取液中含有哪些種氨基酸。

五、附注

1．在操作過程中，手必須洗凈，只能接觸薄板上層邊角；不能對著薄板說話，以防唾液掉在板上。

2．配制展層劑時，要用純?nèi)軇瑧?yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，以免放置過久其成分發(fā)生變化（酯化）。

六、思考題

1．什么是分配系數(shù)？分配系數(shù)是指一種溶質(zhì)在兩種互不相溶的溶劑中溶解達(dá)到平衡時，該溶質(zhì)在兩相溶劑中的濃度比值。在層析條件確定后分配系數(shù)是一常數(shù)，以K表示

分配系數(shù)與溶劑和溶質(zhì)的性質(zhì)有關(guān)，同時受溫度、壓力的影響。所以不同物質(zhì)的分配系數(shù)不同。而在恒溫恒壓條件下，某物質(zhì)在確定的層析系統(tǒng)中的分配系數(shù)為一常數(shù)。

2．薄層層析中極性氨基酸與非極性氨基酸展層的速度哪個快一些？層析的分離是基于氨基酸的非極性性質(zhì)。物質(zhì)的極性越?。捶菢O性越大），在有機(jī)溶劑中分配就越多，遷移率就越大；反之物質(zhì)的極性越大，遷移率越小。所以非極性氨基酸在有機(jī)溶劑中展層的速度快于極性氨基酸

3．何為“邊緣效應(yīng)”？如何減輕或消除？。

在用多元系統(tǒng)進(jìn)行展層時，其中極性較弱的和沸點(diǎn)較低的溶劑（例如氯仿-甲醇系統(tǒng)中的氯仿）在薄層板的兩邊易揮發(fā)，因此，它們在薄層兩邊的濃度比在中部的濃度小，也就是說在薄層的兩邊比中部含有更多的極性較大或沸點(diǎn)較高的溶劑，于是位于薄層兩邊的Rf值要比中間的高，即所謂“邊緣效應(yīng)”。為減輕或消除邊緣效應(yīng)，可在層析缸的內(nèi)壁貼上浸濕了展開劑的濾紙，使層析缸內(nèi)溶劑蒸汽的飽和程度增加。七、實(shí)驗結(jié)果（圖片）：樣本薄板層析標(biāo)準(zhǔn)氨基酸薄板層析（對照）實(shí)驗五過氧化物酶活性的測定POD一、原理：過氧化物酶催化過氧化氫氧化酚類的反應(yīng)，產(chǎn)物為醌類化合物，此化合物進(jìn)一步縮合或與其他分子縮合，產(chǎn)生顏色較深的化合物。本實(shí)驗以鄰甲氧基苯酚（即愈創(chuàng)木酚）為過氧化物酶的底物，在此酶存在下，H2O2可將鄰甲氧基苯酚氧化成紅棕色的4-鄰甲氧基苯酚紅棕色的物質(zhì)可用分光光度計在470nm處測定其消光值，即可求出該酶的活性。，二、實(shí)驗準(zhǔn)備儀器：分光光度計、離心機(jī)、秒表、天平、研缽、磁力攪拌器試劑：愈創(chuàng)木酚、30%H2O2、0.2mol/L磷酸緩沖液（7.8）、0.1mol/L磷酸緩沖溶液（PH6.0，見附錄）反應(yīng)混合液[100mmol/L磷酸緩沖溶液（PH6.0）50ml，加入愈創(chuàng)木酚28μl，于磁力攪拌器上加熱攪拌，直至愈創(chuàng)木酚溶解、待溶液冷卻后，加入（待溶液冷卻后再加入，否則引起分解）30%H2O219μl，混合均勻，保存于冰箱中。]三、步驟：1、粗酶液的提?。悍Q取植物材料0.4-0.5g，加磷酸緩沖液（7.8）5ml（分幾次加入），于研缽中研磨成勻漿，以8000r/min離心10min，收集上清液于冷處（冰箱4度保存）。2、酶活性的測定：一個試管入反應(yīng)混合液3ml，磷酸緩沖液（7.8）1ml，作為校零對照，另外加入反應(yīng)混合液3ml，上述酶液1ml（龍麥26酶液稀釋10倍，克旱16酶液稀釋15倍），立即開啟秒表計時，于470nm測OD值，每隔15秒讀1次值，讀45秒，以為每15秒鐘OD變化值測酶活性的大小，以△OD/min.mg蛋白質(zhì)表示。四、計算公式ΔA470：反應(yīng)時間內(nèi)吸光值的變化W：樣品重量V：提取液總體積，即5mlVt：測定時所用體積,即1mlt：反應(yīng)時間注意：一般來說，都需要稀釋，如果酶液稀釋了，應(yīng)在計算時乘上相應(yīng)的倍數(shù)。磷酸緩沖液配置A0.2mol/lNaH2PO427.8gNaH2PO4?H2O1000mlB0.2mol/lNa2HPO471.7gNa2HPO4?12H2O1000mlA(ml)B(ml)PH7.88.591.5200mlPH6.087.712.3五、實(shí)驗結(jié)果：A470nm=0.003/0.01=0.3植物葉過氧化物酶活力=6.0六、實(shí)驗圖片：對植物組織進(jìn)行碾磨將碾磨后組織裝進(jìn)離心管中離心操作紫外分光光度值測定基于C8051F單片機(jī)直流電動機(jī)反饋控制系統(tǒng)的設(shè)計與研究基于單片機(jī)的嵌入式Web服務(wù)器的研究MOTOROLA單片機(jī)MC68HC（8）05PV8/A內(nèi)嵌EEPROM的工藝和制程方法及對良率的影響研究基于模糊控制的電阻釬焊單片機(jī)溫度控制系統(tǒng)的研制基于MCS-51系列單片機(jī)的通用控制模塊的研究基于單片機(jī)實(shí)現(xiàn)的供暖系統(tǒng)最佳啟停自校正（STR）調(diào)節(jié)器單片機(jī)控制的二級倒立擺系統(tǒng)的研究基于增強(qiáng)型51系列單片機(jī)的TCP/IP協(xié)議棧的實(shí)現(xiàn)基于單片機(jī)的蓄電池自動監(jiān)測系統(tǒng)基于32位嵌入式單片機(jī)系統(tǒng)的圖像采集與處理技術(shù)的研究基于單片機(jī)的作物營養(yǎng)診斷專家系統(tǒng)的研究基于單片機(jī)的交流伺服電機(jī)運(yùn)動控制系統(tǒng)研究與開發(fā)基于單片機(jī)的泵管內(nèi)壁硬度測試儀的研制基于單片機(jī)的自動找平控制系統(tǒng)研究基于C8051F040單片機(jī)的嵌入式系統(tǒng)開發(fā)基于單片機(jī)的液壓動力系統(tǒng)狀態(tài)監(jiān)測儀開發(fā)模糊Smith智能控制方法的研究及其單片機(jī)實(shí)現(xiàn)一種基于單片機(jī)的軸快流CO〈,2〉激光器的手持控制面板的研制基于雙單片機(jī)沖床數(shù)控系統(tǒng)的研究基于CYGNAL單片機(jī)的在線間歇式濁度儀的研制基于單片機(jī)的噴油泵試驗臺控制器的研制基于單片機(jī)的軟起動器的研究和設(shè)計基于單片機(jī)控制的高速快走絲電火花線切割機(jī)床短循環(huán)走絲方式研究基于單片機(jī)的機(jī)電產(chǎn)品控制系統(tǒng)開發(fā)基于PIC單片機(jī)的智能手機(jī)充電器基于單片機(jī)的實(shí)時內(nèi)核設(shè)計及其應(yīng)用研究基于單片機(jī)的遠(yuǎn)程抄表系統(tǒng)的設(shè)計與研究基于單片機(jī)的煙氣二氧化硫濃度檢測儀的研制基于微型光譜儀的單片機(jī)系統(tǒng)單片機(jī)系統(tǒng)軟件構(gòu)件開發(fā)的技術(shù)研究基于單片機(jī)的液體點(diǎn)滴速度自動檢測儀的研制基于單片機(jī)系統(tǒng)的多功能溫度測量儀的研制基于PIC單片機(jī)的電能采集終端的設(shè)計和應(yīng)用基于單片機(jī)的光纖光柵解調(diào)儀的研制氣壓式線性摩擦焊機(jī)單片機(jī)控制系統(tǒng)的研制基于單片機(jī)的數(shù)字磁通門傳感器基于單片機(jī)的旋轉(zhuǎn)變壓器-數(shù)字轉(zhuǎn)換器的研究基于單片機(jī)的光纖Bragg光柵解調(diào)系統(tǒng)的研究單片機(jī)控制的便攜式多功能乳腺治療儀的研制基于C8051F020單片機(jī)的多生理信號檢測儀基于單片機(jī)的電機(jī)運(yùn)動控制系統(tǒng)設(shè)計Pico專用單片機(jī)核的可測性設(shè)計研究基于MCS-51單片機(jī)的熱量計基于雙單片機(jī)的智能遙測微型氣象站MCS-51單片機(jī)構(gòu)建機(jī)器人的實(shí)踐研究基于單片機(jī)的輪軌力檢測基于單片機(jī)的GPS定位儀的研究與實(shí)現(xiàn)基于單片機(jī)的電液伺服控制系統(tǒng)用于單片機(jī)系統(tǒng)的MMC卡文件系統(tǒng)研制基于單片機(jī)的時控和計數(shù)系統(tǒng)性能優(yōu)化的研究基于單片機(jī)和CPLD的粗光柵位移測量系統(tǒng)研究單片機(jī)控制的后備式方波UPS提升高職學(xué)生單片機(jī)應(yīng)用能力的探究基于單片機(jī)控制的自動低頻減載裝置研究基于單片機(jī)控制的水下焊接電源的研究基于單片機(jī)的多通道數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)基于uPSD3234單片機(jī)的氚表面污染測量儀的研制基于單片機(jī)的紅外測油儀的研究96系列單片機(jī)仿真器研究與設(shè)計基于單片機(jī)的單晶金剛石刀具刃磨設(shè)備的數(shù)控改造基于單片機(jī)的溫度智能控制系統(tǒng)的設(shè)計與實(shí)現(xiàn)基于MSP430單片機(jī)的電梯門機(jī)控制器的研制基于單片機(jī)的氣體測漏儀的研究基于三菱M16C/6N系列單片機(jī)的CAN/USB協(xié)議轉(zhuǎn)換器基于單片機(jī)和DSP的變壓器油色譜在線監(jiān)測技術(shù)研究基于單片機(jī)的膛壁溫度報警系統(tǒng)設(shè)計基于AVR單片機(jī)的低壓無功補(bǔ)償控制器的設(shè)計基于單片機(jī)船舶電力推進(jìn)電機(jī)監(jiān)測系統(tǒng)基于單片機(jī)網(wǎng)絡(luò)的振動信號的采集系統(tǒng)基于單片機(jī)的大容量數(shù)據(jù)存儲技術(shù)的應(yīng)用研究基于單片機(jī)的疊圖機(jī)研究與教學(xué)方法實(shí)踐基于單片機(jī)嵌入式Web服務(wù)器技術(shù)的研究及實(shí)現(xiàn)基于AT89S52單片機(jī)的通用數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)基于單片機(jī)的多道脈沖幅度分析儀研究機(jī)器人旋轉(zhuǎn)電弧傳感角焊縫跟蹤單片機(jī)控制系統(tǒng)基于單片機(jī)的控制系統(tǒng)在PLC虛擬教學(xué)實(shí)驗中的應(yīng)用研究基于單片機(jī)系統(tǒng)的網(wǎng)絡(luò)通信研究與應(yīng)用基于PIC16F877單片機(jī)的莫爾斯碼自動譯碼系統(tǒng)設(shè)計與研究基于單片機(jī)的模糊控制器在工業(yè)電阻爐上的應(yīng)用研究基于雙單片機(jī)沖床數(shù)控系統(tǒng)的研究與開發(fā)基于Cygnal單片機(jī)的μC/OS-Ⅱ的研究基于單片機(jī)的一體化智能差示掃描量熱儀系統(tǒng)研究基于TCP/IP協(xié)議的單片機(jī)與Internet互聯(lián)的研究與實(shí)現(xiàn)變頻調(diào)速液壓電梯單片機(jī)控制器的研究基于單片機(jī)γ-免疫計數(shù)器自動換樣功能的研究與實(shí)現(xiàn)基于單片機(jī)的倒立擺控制系統(tǒng)設(shè)計與實(shí)現(xiàn)單片機(jī)嵌入式以太網(wǎng)防盜報警系統(tǒng)\t