生物顯微技術(shù)講義唐山師范學(xué)院生命科學(xué)系陳超石洪凌免200取5辨.3前言群生物顯微技?jí)蛐g(shù)是高等院鍵校生物系各需專業(yè)的基礎(chǔ)泥課,包含生弦物材料固定木技術(shù)、生物裕染色技術(shù)、悔各種顯微切戶片制作技術(shù)陡、顯微化學(xué)達(dá)技術(shù)顯微攝田影技術(shù)。悟通過這門出課的絹學(xué)習(xí)，希望乞能夠幫助大作家加強(qiáng)生物躲實(shí)驗(yàn)的技能習(xí)。照使學(xué)生掌握串制作動(dòng)、植膝物顯微切片偏的技術(shù),掌鹿握使用光學(xué)奉顯微鏡及進(jìn)懲行顯微攝影賀所必備的基垂本理論、基防本知識(shí)和基富本技術(shù)。盡本《生物顯各微技術(shù)大實(shí)取驗(yàn)》是為了艙配合這門課碼的教學(xué)，在麗參考了國(guó)內(nèi)愧一些相關(guān)教筋材的基礎(chǔ)上粱，結(jié)合本教廟研室的歷年潔實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)與姜心得而編寫舉的，僅供唐棍山師范學(xué)院售生命科學(xué)系諷學(xué)生使用。慈生物顯微技稱術(shù)的內(nèi)容在謎其他教材中賠敘述比較零由亂，沒有統(tǒng)豆一的整體性倚。本指導(dǎo)在豐結(jié)合我系教叛學(xué)安排和實(shí)見驗(yàn)的前提下德，有針對(duì)性腳的安排了生爪物顯微技術(shù)看的理論教授盛和實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)影。內(nèi)容主要拔包括石蠟切源片的制作、未顯微攝影知犁識(shí)、數(shù)碼顯著微鏡及軟件吹的使用。醒由于編者業(yè)且務(wù)水平和工慌作經(jīng)驗(yàn)所限多，雖然做了鋤大量努力，丈書中難免還規(guī)會(huì)存在缺點(diǎn)臭和不足。為白此切盼廣大腔師生在使用斥本書過程中套能提出批評(píng)蹤和建議，以遷備在以后的忠日子里改進(jìn)議和提高。編者便2005年賢1月于唐山宋師范學(xué)院目錄傻第一章嚴(yán)生物索制片阻……………承……………敞……………忠…………這..攀4挑第一節(jié)前期嘴準(zhǔn)備什……………括……………蘿……………滔………菠..脫4送第二節(jié)進(jìn)生物制片分歌類菊……………數(shù)……………包……………阻…漲..曉8渣第三節(jié)石蠟狂切片勾……………位……………嬸……………邀……脫..配10樓第二章顯微與攝影技術(shù)消……………猛……………素……………惜…慕....衣37而第三章暗室?guī)眉夹g(shù)玩……………定……………膜……………嶺…………歉48笨第一節(jié)感光滿材料橋……………赴……………速.....犯.....府.....月.....槳.....侄.....戀..槐48位附蒜彩色顯微攝翁影資和黑白顯微耐攝影的相關(guān)朽知識(shí)吧……………幕53豆第二節(jié)暗房層工藝下……………霧……………蛾……………把…………場(chǎng)57邊第四章烈數(shù)碼顯微攝劫影擾……………紫……………繁……………擇……靠64澡實(shí)驗(yàn)一勁徒手切片與幸整體制片法田………玻.扭……………襯………微..場(chǎng)66包實(shí)驗(yàn)二枯1、廈石蠟切片技沒術(shù)滿—銳固定、染色積、返藍(lán)嚇……………漆…焰70紫2、蕩石蠟切片技但術(shù)成—件脫水、透明情、浸蠟、包膠埋律…逮……疾..川72詳沫3、志石蠟切片技撿術(shù)土—達(dá)切片、粘片役、脫蠟、透卸明、封藏培74艱實(shí)驗(yàn)剛?cè)@微攝丟影巧及午暗室技術(shù)數(shù)……………榨……………跑………衣78映實(shí)驗(yàn)廚四貧數(shù)碼顯微攝稈影及研究分昨析軟件的使桃用場(chǎng)………敢…丈………盛88嗓實(shí)驗(yàn)五挪所作切片的蟲觀察照相、宅提交作業(yè)鼓……………扒…慧………凍99擁第一章鏈畏生物制片貝第一爸節(jié)擊前期準(zhǔn)備停一、違玻璃器皿的磁清洗：幟（一）膀生物學(xué)實(shí)驗(yàn)廈使用的玻璃寄器皿及玻片羨均要清洗干霞凈,渾應(yīng)顧以壁面被水艷均勻潤(rùn)濕而鴉無水珠為標(biāo)幕準(zhǔn)。留表1-1宵一般器皿的域洗滌方法宰玻璃器皿圖可選用洗滌奉液及洗滌方冒法會(huì)新購置未用版過的器皿海一般使用過痛的器皿畏沾有不溶物產(chǎn)或刷洗不易牌達(dá)到的器皿架沾有較多凡讓士林或其他完油污的器皿棟沾有油脂物擇質(zhì)的器皿嶺洗衣粉、洗竄滌劑煮洗，勤或重鉻酸鉀辭洗液浸洗3舊0分鐘盛洗衣粉、洗異滌劑刷洗沿重鉻酸鉀洗盜液浸泡貼先用二甲苯型或汽油擦洗舌，再用濃堿貞或熱洗滌劑邁刷洗體熱洗滌劑，三或30~4還0%的堿液植歐玻璃器皿經(jīng)吊洗滌液清洗飯后值→腹自來水沖洗晚→玉蒸餾水沖洗湊→束倒放于大張當(dāng)濾紙上晾干膀或玻璃儀器春烘干器烘干講。馳（二）售洗液配法：健重鉻酸鉀衰讓20g勉濃硫酸謊10僑0ml錯(cuò)清水護(hù)1榨00ml脂先將重鉻酸厭鉀溶于水中危，在一滴滴答加入濃硫酸階，邊加邊攪叼拌，顏色為壩紅褐色放于券玻璃容器內(nèi)市可反復(fù)使用勵(lì)，一直到顏囑色變?yōu)樗{(lán)黑蓋色為止。界（三）授新舊載玻片腹及蓋玻片的茫清洗：辟1．妨新的：2%乓鹽酸酒精（違95%酒精后100份加母濃鹽酸2份銜）浸泡幾個(gè)離小時(shí)昏→坦流水沖洗干播凈換→網(wǎng)95%酒精涌中待用。羨2.兆舊的：沒用小樹膠封片的器：洗衣粉煮旨沸5-10英分鐘業(yè)→澆清水沖洗通→附洗液30分箱鐘科→言流水沖洗炎→勿蒸餾水洗凈批→刪95%酒精鞏中待用。非3.絡(luò)樹膠封片的飯玻片：二甲刺苯浸泡、洗暢凈匆→慈95%酒精親中待用。避二、餅溶液的配制揀：炕（一）寶百分比濃度藍(lán):質(zhì)量百勿分比濃度。縫即騰100g僚溶液中所含小溶質(zhì)的克數(shù)豆。油1.稀溶液鐘的配置：躁例1民：梁1%的番紅輕水溶液尺—呈即將番紅學(xué)1克濫溶解于10隙0梅ml的蒸避餾水中。磨例2蝴：火0.1%固鋼綠酒精溶液漫—敲即將固綠搭0.1克智溶解于10泡0ml的9席5%酒精中彼。對(duì)2.濃溶液圾的配置：配刷置高濃度的州溶液，應(yīng)在唉100ml冤的水中減去世溶質(zhì)重量的膨水。窮例抽：蓄1撓5%NaC脈L稱取券1摔5gNaC召L,溶于棗8款5ml水中唇。哈（二）宏摩爾濃度：途1升殲溶液中所含睡溶質(zhì)的mo趁l數(shù)。用M瑞表示。革例：駐配制500模ml貴2M籮NaCO間3鳥溶液杠稱取姿2貍×碼106餓×戶0.5=剩106g桿NaCO董3第溶于500丈ml水中。舊（三）怎當(dāng)量濃度：秀1升油溶液中所含復(fù)溶質(zhì)的克當(dāng)聞量數(shù)。用N手表示。它當(dāng)量（E）技與分子量（讓MW）的關(guān)續(xù)系：E=M會(huì)W/n抱其中酸的n堂為酸分子中紐可被金屬取仍代的氫原子糞數(shù)加堿的n為堿宅分子中金屬富的原子價(jià)授鹽類的n為靜鹽分子中金朗屬的原子數(shù)纏乘金屬的原緩子價(jià)奪如：HN膽O悔3伴的當(dāng)量=6欠3/1=6運(yùn)3餡不H菌2穗SO提4逗的當(dāng)量=9山8/2=4些9敞Ca(OH雨)劇2滲的當(dāng)量=7放4/2=3春7淚Al趙2追(SO紗4尚)貸3興的當(dāng)量=3撤42/2*乘3=57姜一般溶液的船配制用燒杯校、量筒；準(zhǔn)藍(lán)確溶液的配機(jī)制用容量瓶斧。閃(四)塞酒精稀釋法區(qū)（交叉稀釋辛法）：謀95%酒精東→眠83%酒精筑先在量筒中留加入83m犁l95%酒冠精,再加水故至95ml禽即得。主95%酒精梨→密70%酒精井先在量筒中椅加入70m石l95%酒對(duì)精,再加水頂至95ml麗即得。非95%酒精璃→除50%酒精璃先在量筒中柿加入50m艙l95%酒縮精,再加水營(yíng)至95ml丈即得。泉95%酒精遵→卷35%酒精敏先在量筒中清加入35m載l95%酒謠精,再加水佳至95ml舌即得。廊（五）揚(yáng)常用液態(tài)酸塘的配置：能表1-2疼常用液態(tài)酸醋的配制遣酸名念分子量翻比重袋酸濃度（%榨）篩摩爾濃度(木mol/L淡)板配制鍵1M鄭所需溶質(zhì)的認(rèn)量（ml）穩(wěn)婆鹽酸潮硝酸嶺硫酸袋磷酸食高氯酸恩冰醋酸農(nóng)36.46季63.02殃98.08握98.0踩100.5壺0極60.03支1.19陶1.42貢1.84若1.69廢1.67醫(yī)1.06完36.0登69.5繡96.0騾85.0砌70.0任99.5后11.7民15.6箏17.95既14.7肚11.65旅17.6林85.5帽64.送1京55.7州68.0布85.8趨56.8菠三、掘制定實(shí)驗(yàn)計(jì)勒劃：碼制定計(jì)劃時(shí)嗚首先要考慮萬到制片的目青的，其次是陷選擇制片的龜標(biāo)本，最后眠才是確定具汽體的制作方悟法。例如制攻玉米莖的橫盲切面，其目恭的在于觀察被維管束的結(jié)私構(gòu)，賣那么就應(yīng)選眠擇老的莖作紋標(biāo)本。又如讀作某一種葉紡子的生態(tài)解槳剖，所選擇蹲的標(biāo)本就不收應(yīng)該再同一鵝地點(diǎn)，應(yīng)在命不同環(huán)境條轎件下多采集寇幾份，才好攀做比較。由昨此可見伸制片的目的獸與標(biāo)本選擇遞有密切聯(lián)系臨，有時(shí)甚至洲二者是需要觸同時(shí)決定的辛。帥最后可根據(jù)盤目的要求及跳所選擇的標(biāo)醒本確定具體央制片的方法駝。一般講，術(shù)制片技術(shù)的蹤方法雖然很報(bào)多，但對(duì)某云一材料來說叔可能多不是丘十全十美的質(zhì)。因此我們及在制定計(jì)劃幸時(shí)，不妨多揀采用幾種方粘法，以便比僚較。分同時(shí)也要注杯意經(jīng)濟(jì)原則因。方法確定堡后，在計(jì)劃編中還需將所意用的藥品、新用具等名稱婚及數(shù)量逐一拔列出，然后膏在定出具體版的工作日程頑。猛制訂企試驗(yàn)計(jì)劃需玉要比較豐富練的知識(shí)和經(jīng)緩驗(yàn)淚，所以在訂按計(jì)劃之前，瞇必須要閱讀除參考文獻(xiàn)，妻深入鉆研。彼初學(xué)者可在伶有經(jīng)驗(yàn)的老妹師指導(dǎo)下塌制訂出比較綁完善和精密依的實(shí)驗(yàn)計(jì)劃療。序（四）日程祝與記錄：派制片是一個(gè)悄連續(xù)的過程樹，從標(biāo)本的棗采集、固定宗、切片、染董色到封藏為較止，往往要降連續(xù)幾天，尚如果事前沒皂有工作日程山、就會(huì)造成類混亂。除編貨排日程表外借，還必須將灘工作過程貪中的實(shí)際情猾況連同日程朗表都詳細(xì)的趟記載在記錄心本上。這樣驢可根據(jù)結(jié)果石檢查實(shí)際工鑰作中的問題墨所在，總結(jié)雷失敗原因，率也可以總結(jié)共成功的經(jīng)驗(yàn)叉。所以日程裳表和詳實(shí)地娘記錄對(duì)制片辭工作來說，禁是一件非常寶重要而且必棗須長(zhǎng)期堅(jiān)持押的工作。這滔些記錄不僅榴要詳實(shí)，而漆且還要作為容檔案保存起慧來。屢表1-3制叫片記錄表飲材料銹固定液、固衰定時(shí)間傻沖洗波脫水犧酒精宗時(shí)間靠透明些1/2純酒售精+1/2炭二甲苯監(jiān)時(shí)間較浸蠟悄包埋偽切片厚度原染色鋼封藏世結(jié)果藝備注姓第二椒節(jié)跟生物厘制片度分類絕生物司制片的分類這:切片法:奶1.籍徒手切片:籍盡量切薄,扭切一層細(xì)胞李,此法多用燙于植物切片域的臨時(shí)觀察頭。斬2.屈石蠟切片：重4-12者μ俱m厚，用石擺蠟浸透到組微織中，并包熟埋組織，用雀旋轉(zhuǎn)切片機(jī)嚼把蠟塊切成濁薄片。板3.冒半薄切片：鴨0.5-1撞μ媽m厚，用樹始脂包埋。用壞途:在光鏡芹下觀察盡量恢薄；為超薄羨切片定位，侮因?yàn)槠渲破惣夹g(shù)和超薄抵切片一致。裙4.宰冰凍切片：踢使組織內(nèi)部動(dòng)及周圍的水港份結(jié)冰，組宵織變硬，然僚后用切片機(jī)勞切成薄片，誠(chéng)制成切片，朝此法制作步佳驟少，用時(shí)諷短，不經(jīng)脫梳水和透明，檔故對(duì)脂類無灘影響。常用僻于臨床快速徹病理分析。捕5.丸木材切片：小10-20式μ魂m厚，很硬峰，需軟化，內(nèi)用50%酒廚精：甘油敲=大1：1軟化沉幾天，滑行架切片機(jī)切。水6.櫻火棉膠切片鍛：用火棉膠盛包埋組織，購滑行切片機(jī)聞切成薄片，敲主要用于大血塊組織切片遇。改（二）艙非切片法:豎1.紙整體裝片法忽：對(duì)于小的昂動(dòng)植物體或堪較大動(dòng)植物亂體的一部分訓(xùn)，不經(jīng)切片啦而直接制成兆玻片的方法捎。如昆蟲口訴器、水螅、殿藻類、植物撈葉、莖表皮六細(xì)胞。話2.殃涂片法：對(duì)成于流動(dòng)和半瓣流動(dòng)的材料未，不能切片俯，而直接將壇材料涂成玻固片標(biāo)本污，干燥后進(jìn)壺行固定、染館色及封固。詞如血液、細(xì)鼻菌、骨髓。蝦如圖1-1爐。帽3.屠壓片法：將滿一些柔軟的澤材料置于載掉玻片上，蓋少上蓋玻片，率用一定的壓錫力將標(biāo)本壓嶺碎或壓開，櫻制成玻片的蹈方法。如洋疑蔥根尖染色鍋體觀察，果崇蠅唾腺染色屯體觀察。塊4.職伸展法：一來些成膜狀結(jié)巨構(gòu)的標(biāo)本，換使它展平放材在載玻片上弟，撕開、展明平制成鋪片營(yíng)標(biāo)本，待干圣燥后經(jīng)固定公、染色后制阻成玻片標(biāo)本海的方法。常躁用于疏松結(jié)抖締組織、神稿經(jīng)等柔軟組文織或腸系膜俯等薄層組織擱。如圖1-持2。哨5.泛磨片法：主向要用于含有氏鈣鹽等礦物身質(zhì)，成份堅(jiān)守硬的材料，桌如脊椎動(dòng)物片的牙齒、骨瘡等用磨石磨勢(shì)成薄片，再咸封固成玻片陡。如圖1-為3。紡6.傻分離法：為惜了觀察研究洞組織或器官扶里的單個(gè)細(xì)旬胞或纖維的酒形狀，必須柏設(shè)法使細(xì)胞食與細(xì)胞間質(zhì)斃分離，細(xì)胞小便各自分離每開來，再睛經(jīng)鋸染色制成玻侵片標(biāo)本的方引法叫分離法日。一般分為陣化學(xué)分離法敘和撕碎法兩叫種。如神經(jīng)憑細(xì)胞分離裝宏片，平滑肌妄細(xì)胞分離裝油片。鞋圖1-1涂白片法痛鍵利圖昏1-2展片鋒法艙愿圖洗1-3磨片訴法媽第三節(jié)寨汁石蠟切片痕石蠟切片過撕程：爪取材三→噸固定誰→劫?zèng)_洗捏→格脫水孩→帥透明凝→證浸蠟悔→世包埋業(yè)→蹦切片劑→銷貼片捷→干脫蠟日→傭染色茶→挨脫水月→壤透明宅→牲封藏一、取材：素（一）秒生物組織取心材的注意事似項(xiàng)：碼1.償取材應(yīng)遵循封準(zhǔn)確、典型啦、完整、適私時(shí)的原則。夫2.懼研究正常結(jié)遙構(gòu)應(yīng)選取健藍(lán)全而又有代株表性的部分耳取材，采取徐病理材料時(shí)簽，除取病理狂部位外，還謙應(yīng)選取正常廊部位，以利慨于寄對(duì)照觀察。喉3.撥取材前，要僵根據(jù)要求選磁擇并配制好吸固定液，取飼材后，立即鞏投入固定液稿中，以防組毯織自溶和腐完敗。南4.殿切取材料時(shí)彩，刀必須銳典利，動(dòng)作要姥快且仔細(xì)，萌切割時(shí)切勿退拉鋸式的來圣回切取，鑷胞取也應(yīng)輕拿邀輕放印，避免材料泊的損壞壺。股5.央取材要詳細(xì)包記錄日期、播采集地點(diǎn)、襲標(biāo)本名稱、應(yīng)取材部位、極斷面和所用曠固定液等。光（二）良植物材料的司取材：存1.峰固定前對(duì)材掉料要進(jìn)行切搭割：原因：遺（1）憂為了驢固定更容易猴為保證下一壇步固定材料飄能迅速的殺發(fā)生和固定，鴉務(wù)必使各細(xì)怪胞立刻停止里生命活動(dòng)，想而不使原生薄質(zhì)有崩解的某現(xiàn)象。普通皮應(yīng)用的固定愈液對(duì)于植物笛體外表面的果角質(zhì)、木栓念質(zhì)等的穿透識(shí)很慢，但對(duì)狗于被切割的析表面，則穿殺透速度快很中多。所以，久我們?cè)诠潭▽?duì)材料的時(shí)候縫，應(yīng)將所需壯要的部分分幫割到最小塊傳、段或片、見以達(dá)到立刻弦殺生與固定徑的目的。罵（2）態(tài)石蠟塊也有絨一定限制，身一般（5欣-6mm寶）獅。匯2.喊切割面一般禾分為兩類襯：命（1）隔橫切面：溜使用刀橫越攪根、莖的橫拋斷面的切面勿，橫切片可代觀察材料自曾外向內(nèi)的各輩種組織。產(chǎn)（2）亮縱切面：蠻刀的切向與竄根、莖的長(zhǎng)防軸方向平行里的切面，這微種切面又分披為兩種：橫①湖半徑切面厲：以刀穿過雄中心點(diǎn)與其俱半徑吻合的俗切面，這種快切面可觀察桶到莖中各種扭組織縱走的者情形及髓的著排列、厚度臭等。畢②涌切線切面勺：以刀沿植仔物體的表面愛與其半徑成熔直角所切的慎切面。迅3.那不同材料的擱切割方法齊（1）肌葉片：葉片倍寬小于順1cm羨,寧可沿主脈找橫切3菠-5mm室葉片寬大于叢1cm罪,可分割成昨許多片，選盲其中含主脈量和側(cè)脈的固遲定，一般5童-7mm湊2居方塊。主（2）燭圓柱形材料造：直徑小于挪2mm蜂，有角質(zhì)層輝的，切碗2mm式厚。無角質(zhì)議層的，壤固定液穿透姑容易，霜切5渠-10mm控厚。直徑大羊于等于宇5mm肉，切低5mm兔厚。直徑大虹于煎10mm甘,切2輛-5參mm參厚。直徑很翅大，取楔形闖（3）曬木質(zhì)小枝：統(tǒng)直徑小于臣5筍m芳m師，切成哭15mm托長(zhǎng)燥木條和大枝叉：直徑忠較大的讓,切成2齒-3戒c當(dāng)m鞭厚，再分割款成楔形小塊替。介（三）來動(dòng)物取材：濟(jì)活體直接取瓦材、麻醉后串取材、處死照后取材。無揉論采取那種糊處死方法，勾多應(yīng)避免由傍于痛苦引起燃掙扎，而造崖成組織結(jié)構(gòu)情發(fā)生變化，芽同時(shí)取樣必續(xù)須迅速，越知快越好。因炒為動(dòng)物一旦垂死亡，細(xì)胞武便開始自溶央。璃二、德固定（fi大xatio容n）:細(xì)胞坑生命現(xiàn)象的給突然終結(jié)，失并保持生活候狀態(tài)的形態(tài)丑和結(jié)構(gòu)。瘋（一）掠固定的目的獎(jiǎng)和作用：然1.握可以防止細(xì)溝胞自溶和腐手?jǐn)?，在整個(gè)計(jì)制片過程中瀉保存細(xì)胞內(nèi)俯的各種內(nèi)含駕物。是2.騙增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)松各種濃度滲刮透壓的抵抗員能力。俱3.敲可使細(xì)胞成咬份沉淀和凝幸固，因而產(chǎn)鵲生不同的折畏射率，造成紹光學(xué)上的差壯異，使得原漏來看不清楚趟的一些結(jié)構(gòu)椒清晰起來。凈4.眼有些固定劑乎可使細(xì)胞各閥部分容易染踩色?；迹ǘ┤鹱鳛楣潭ㄒ撼吹臈l件：剖1.階對(duì)組織細(xì)胞孩滲透能力強(qiáng)許，立即將細(xì)玉胞殺死。什2.畏細(xì)胞內(nèi)含物硬不能發(fā)生變未化。（不能籠是細(xì)胞內(nèi)某型些成份的溶付劑。）（酒辰精是脂類物閑質(zhì)的溶劑，著所以單獨(dú)使沙用時(shí)收到一麥定的限制。冒酒精不適宜索作膜結(jié)構(gòu)觀竟察的固定劑截）暫3.職盡可能避免撒組織或細(xì)胞設(shè)膨脹或收縮蠻。跡4.疏有利于增加妹細(xì)胞內(nèi)含物甘的折光程度那，增加媒染餅作用或染色冬能力。診5.滲使材料適當(dāng)杠變硬，并具這有一定的堅(jiān)廚硬性便于切拿片。乳（三）像按固定的方救式將固定液皂分為兩類：駝凝結(jié)型固定偷液：使蛋白析質(zhì)凝固，形吳成懸浮顆粒陽網(wǎng)狀混合液式。憑非凝結(jié)型固秘定液：不使莖蛋白質(zhì)凝固贏，形成透明浪的凝膠。葡苦味酸、升閣汞、鉻酸、趁碘均能使胞毅質(zhì)蛋白和核巡蛋白凝固；短酒精能沉淀巷胞質(zhì)蛋白浪，而創(chuàng)核蛋白沉淀垮后溶于水；落醋淺酸不能凝固飾胞質(zhì)蛋白但坊能凝固核蛋筑白肆;勉福爾馬林、賊鋨酸、重鉻魔酸鉀對(duì)兩種豆蛋白都不凝諒固。龍1.挺凝結(jié)型固定肉液：旦（1）恢酒精:(a申lcoho爬l)70%故-75%酒墊精滲透力最情強(qiáng)。蹤特點(diǎn)：劣①杜穿透速度快瓜。革②艦可沉淀白蛋鄰白、球蛋白捧和核蛋白，丙前兩者所生彈成的沉淀不枕溶于水，核雕蛋白所生成竿的沉淀溶于昨水；所以經(jīng)草乙醇固定的墊標(biāo)本對(duì)核的還染色不良，艙不適于對(duì)染冶色體的固定陡。進(jìn)③控濃度50%攔以上的酒精鼓可溶解脂肪至和類脂體。紹不能用于膜郊結(jié)構(gòu)的研究示，溶解血色蒜素，破壞其賺他多種色素敞，所以不能亮用于脂肪、斃類脂類和色們素的固定。蠶一般用于組開織學(xué)觀察。迷④漠使糖原沉淀戚，但能溶于太水。翼⑤庸是還原劑，面在混合固定浸液中，酒精陸不能與氧化厲固定液混用者。如鉻酸、夠鋨酸、重鉻獲酸鉀等?？茛抻朗共牧嫌不?、組織收縮侄明顯。反⑦退固定材料適酒宜濃度為7消0%-10涼0%。林固定后也不需沖洗，公70%的酒名精可較長(zhǎng)時(shí)趨間保存，易若長(zhǎng)期保存隆材料與甘油垮等量混合后誘使用。70至%酒精：甘迷油引=丘1：1零（2）外醋酸（ac季etic燃acid）窮特點(diǎn)：刃①園穿透力速度災(zāi)極快。姥②筑能固定核蛋企白，對(duì)胞質(zhì)至也存在固定體作用。對(duì)核雖蛋白是凝結(jié)扒型固定液，件對(duì)胞質(zhì)是非谷凝結(jié)型固定款液。使染色授質(zhì)和染色體抱的固定和染息色均很好，萌因此所有固礙定染色體的守固定液中幾撥乎都有醋酸蒸。尸③潛對(duì)脂類和糖訂類無固定作卵用。④酸性艱⑤耽對(duì)材料不但我不硬化還有老軟化作用。棄對(duì)細(xì)胞無收斑縮作用，稍投有膨脹作用昂。著可防止其他敞藥劑其如乙醇、甲趙醛、鉻酸等由引起組織收稅縮。念⑥跳固定后遞不需沖洗，萍可弦直接哪投入70%滾的酒精中保兆存。蘆⑦銜固定材料適耗宜濃度為0嘩.3%-5選%。篇（3）燕鉻酸（ch率romic計(jì)acid膜）刷特點(diǎn)它：獎(jiǎng)①粥穿透速度緩勢(shì)慢。節(jié)②摧能沉淀所有于蛋白質(zhì)，凝崖固核酸，增理強(qiáng)核的著色報(bào)能力，慧可作為核蛋蛾白核核酸的盾固定液。扁能固定高爾幸基體及線粒桃體。常用于糞細(xì)胞學(xué)觀察詠。稻③礎(chǔ)只有鉻酸能妹真正固定肝夾糖原，使之揀不溶于水。帖對(duì)脂類無影緩響；蘋④勢(shì)氧化劑，不訓(xùn)能與酒精混殊用。執(zhí)固定后投入虹酒精前幻必須用流水聚沖洗，直至毫組織中不含疑鉻酸為止，伐如沖洗不干紛凈或直接投木入酒精中，自被還原成綠駕色的氧化鉻狹并發(fā)生沉淀節(jié)，使染色困款難。述⑤渾使組織硬化秧，細(xì)胞收縮錫。距⑥上鉻酸常配成鴨2%或10考%的水溶液冤作為儲(chǔ)備液當(dāng)，固定適宜貌濃度為0.庭5%-1%仍。盞（4）虹苦味酸（p所icric塑acid平）三硝基苯績(jī)酚，不能結(jié)斃晶保存，要厚以飽和溶液蝕存放。干燥丘時(shí)易爆炸。遇特點(diǎn)：撐①啟穿透速度中棚等。攀②告可沉淀一切亂蛋白質(zhì)。對(duì)撐脂類無影響駐，對(duì)糖類無漆固定作用。降③屆細(xì)胞收縮明膨顯，材料硬神化程度很小鍋。絨④守固定后昌不需沖洗，鄉(xiāng)可直接投入俘70%酒精翼中洗去黃色太。迷⑤之固定材料適墾宜濃度為飽猾和溶液，即藝0.9%-鍛1.2%。橫2.限非凝結(jié)型固瓦定液：（質(zhì)濕量較好）樂（1）爪鋨酸（Os慘O從4炒）濟(jì)特點(diǎn)憲：濫①夕穿透速度很態(tài)慢。材料要礙切的小一些假，約崖1mm翼3假。劫②欣不沉淀蛋白考質(zhì)，能使蛋呼白質(zhì)被均勻府固定，所以史用鋨酸固定麻的蛋白質(zhì)能眾保持生活時(shí)仁的均勻性。視③服是脂肪和類薪脂類的很好顆的固定劑稈。劇④膏強(qiáng)氧化劑，光易揮發(fā)，毒搞性大，對(duì)視盞網(wǎng)膜固定效坑果好，要保錄護(hù)好眼睛。詢價(jià)格貴。抵⑤槳不使細(xì)胞收納縮，對(duì)細(xì)胞脈質(zhì)固定好岔，裹固定物組織斧柔軟。饑⑥明固定后蹄流水沖洗1廣2～24小忘時(shí)。使其完掃全洗凈，否摘?jiǎng)t遇乙醇就批發(fā)生沉淀。祥⑦辛固定材料適唇宜濃度為0車.5-2%蕉。拾鋨酸的配制掃：用重蒸水拾配成母液2改%，使用時(shí)牢，用PH7哨.0、0悼.2M各磷酸緩沖液娛稀釋一倍到叛1%。盲（2）爪戊二醛：策特點(diǎn)喘：廈①物穿透速度很恩快。廣②憶固定微管蛋鈔白，是微管丹的很好的固舅定液。近③禁用PH6.役8-7.0渾、免0拍.2M幻磷酸緩沖液拾配成25%貨母液，固定基材料適宜濃喊度為3-6枯%。距（3）曲丙烯酸：嗓特點(diǎn)直：女①嫌固定蛋白、疫核酸和聚多彈糖。載②賄固定材料適注宜濃度為1辭0%，用P甲H6.5的點(diǎn)磷酸緩沖液付配。秤（暑4恨）劣甲醛：（不灰用于電鏡制靈片）劫特點(diǎn)允：的①搶穿透速度快貿(mào)。構(gòu)②渾可與蛋白質(zhì)董化合形成不嫁溶性的化合摸物而固定，執(zhí)固定脂肪和還類脂類化合隙物。良③反還原劑，不葉能與氧化劑抖混用。符④蹈組織硬化程蜘度顯著，收壯縮小，但僅先僅經(jīng)酒精脫瓦水后，收縮辨顯著。餓⑤消固定后功不需水洗，彩可直接投入飼70%的酒匠精。但經(jīng)長(zhǎng)天期固定的材香料，需經(jīng)流惰水沖洗1-顏2天，否則鋪影響染色。忌⑥給市售的為3兩7-40%逮甲醛，稱為叢福爾馬林，爺固定和保存域材料的適宜柿濃度是10所%福爾馬林卸。貪（四）可混合固定液轟：伙1.褲卡諾(Ca告rnoy)缸氏固定液：幫配方：純酒唐精：冰醋酸食=3：1孝此液適于固勞定一般動(dòng)物究組織和肝糖超原以及植物寸組織。（多榮用于細(xì)胞學(xué)意研究。）穿柏透速度快，憐為防止組織孤硬化，固定據(jù)時(shí)間不要超詢過24小時(shí)辦。時(shí)間以材想料的不同而君有所區(qū)別，渴根尖15m請(qǐng)in,花藥夏1小時(shí)。糖速原在3教-5臨℃勾下固定4消饒失，小白鼠做睪丸30-饑50min淘。固定后可個(gè)轉(zhuǎn)入70%但中保存，也亂可直接經(jīng)9寬5%酒精，桿純酒精脫水逗。售2.兵福爾馬林-介醋酸-酒精赤混合液：（限FAA）吩配方：50乏%或70%跡酒精9潤(rùn)0ml、冰斬醋酸5任ml、福爾肅馬林5m紅l背配方中福爾幣馬林及冰醋渣酸的含量，判經(jīng)常根據(jù)材孤料而略加改范變。一般容獸易引起收縮怒的材料應(yīng)多凱加冰醋酸而喊減少福爾馬圍林的含量；鏈堅(jiān)硬的材料溪可略減少冰子醋酸而增加獲福爾馬林。畜至于酒精的酬濃度應(yīng)用的川原則是：柔唇弱幼嫩的材滿料用低濃度噴，老年或堅(jiān)腫硬材料用7跟0%酒精。膠如用作植物翠胚胎材料則茄其配方可改竊為：征50%酒精企89m琴l、冰醋酸嶄6ml、虛福爾馬林跪5ml妹FAA是一館種良好的固崗定液和保存霧液，差不多譜一般植物組繁織和器官都質(zhì)適用。（適烤用于組織學(xué)珠觀察，不適崗于細(xì)胞學(xué)觀遭察。）固定灣時(shí)間一般2宜4小時(shí)，也綢可在此液中他長(zhǎng)期保存。抵也可通過賊峰尺泄映木質(zhì)小枝枝荒枝必須固定光1周。固定婦后粥木質(zhì)材料應(yīng)哲在流水中沖敗48小時(shí)，悶并在50%莊酒精和甘油寧溶液（1：悟1）中浸2胖-荷3天，使其偽軟化。搬3.赤鉻酸-醋酸叮中液：錯(cuò)配方刻∶妥10%鉻酸孫水溶液7體ml、1磁0%醋酸水師溶液10遷ml、蒸餾脊水加至10煤0ml。恨此液用于固淺定根尖、小唇的子房及分漁離出來的胚婆珠等植物組透織。固定時(shí)北間一般12城-24小時(shí)穴，不能長(zhǎng)期匆保存材料。儲(chǔ)固定后流水聲沖洗12-皆24小時(shí)。贊4.留納瓦興氏液貨：（適用于殿組織學(xué)和細(xì)炸胞學(xué)研究）飼甲乙液分開木配，臨用時(shí)潑再混合。撞配法為：橫表殺1潮-啄4羽納瓦興氏液守的配方濫常備液勇納瓦興氏液臥Ⅰ適Ⅱ的Ⅲ循Ⅳ孫Ⅴ臣桑弗利斯吳甲液組1%鉻酸線10%鉻酸貍10%醋酸鋼冰醋酸塵蒸餾水絕15老10蚊75哈40黎15余45茄40倉20她40域60魚40砌8櫻60娘32鞠10傘70腐20青13拉8任79旨乙液撫福爾馬林竭蒸餾水劣40練60撲10走90雖10旬90總20為80付20樓80標(biāo)30互70濟(jì)64駱36茅納瓦興氏液稅，固定時(shí)間流為24-4稀8小時(shí)，如琴固定液呈暗屬綠色時(shí)，表企示固定能力朱已經(jīng)消失，次其中鉻酸被授還原的緣故摸，僅有保存燭作用，固定疾后用70%伍酒精沖洗，謝再脫水。岡納瓦興氏液平ⅠⅡⅢⅣⅤ搬，固定時(shí)間螺為12-4拖8小時(shí)，拋ⅠⅡ航固定后用水竊沖洗，兩ⅢⅣ航可用35%犯酒精沖洗，適Ⅴ佛可用70%嘗酒精沖洗。搜桑弗利斯液耳，固定時(shí)間角為4-6小灰時(shí)，流水沖周洗6-12借小時(shí)。賽（五）讓固定時(shí)應(yīng)注栗意的問題：壽1.寇固定的材料到越新鮮越好攜，立即固定險(xiǎn)。找2.屠材料與固定奪液比例一般拒為1：20廈。鑒3.抄根據(jù)材料的熔性質(zhì)和制片做的目的選擇孔固定液。視4.濁有時(shí)要用蔗尿糖、氯化鈉梨來調(diào)節(jié)滲透憲壓。什5.煉材料外表有恢毛或其他不愛易穿透的物標(biāo)質(zhì)存在，可除先在含酒精絲的固定液中寧固定幾分鐘善，再換用含酬水的固定液抬。潑6.猛含有氣體的近材料投入固各定液后，不理下沉，須將抹氣體抽出。己方法可采用剖真空泵，或蘇用注射器的米簡(jiǎn)易方法（口將材料和固愧定液倒入1板0ml注射哪器中，插入系活塞，用手時(shí)封住出口，漏用手來回抽拘拉幾次即可?。O。秤7.掘材料固定后認(rèn)一定要做標(biāo)嘗記。三、沖洗：槳（一）早目的：所謂澤洗滌，即用械洗滌劑滲透僵到材料中，克把固定劑洗役掉，洗滌必脆須徹底，才飲能進(jìn)行下一秩步操作。否賢則留在組織奉中的固定液危有的防礙染蒼色，有的會(huì)慮發(fā)生沉淀物格或結(jié)晶而影苗響觀察，有浴的可以繼續(xù)戀發(fā)生作用，呆破壞材料或支影響以后的探處理。喝（二）付洗滌的原則江與方法：鋒常用的洗滌帖劑是水和低辛濃度的乙醇鄙。逃1.排固定液用水編配的，就用屯水或流水來攻沖洗；不需別流水沖洗的崇材料，放在難小瓶?jī)?nèi)，換基數(shù)次水，每捕次1-2小矛時(shí)。席2.滿用各種濃度巧的酒精配的躺，就要用與虛固定液相近臨濃度的酒精土沖洗；材料索：酒精=1肅：10?？?.文用福爾馬林鴉固定的不用系水洗，但長(zhǎng)巖期固定的，勝應(yīng)充分水洗妄，否則影響面染色。朋4.第用鉻酸、重狼鉻酸鉀等固勇定的材料就燥用流水沖洗湯。將材料放序在廣口瓶?jī)?nèi)徑，瓶口用紗楊布扎起，橡治皮管一端接專在水龍頭上滾，一端插入預(yù)瓶底，調(diào)節(jié)艦水的流量，喚是瓶?jī)?nèi)的水民不斷更新。殖水流不要太護(hù)猛，以免損丹壞材料。沖棒洗時(shí)間應(yīng)和湖固定時(shí)間相竹同或再長(zhǎng)。予5.竭沖洗時(shí)間要礦根據(jù)固定液腳及材料的性采質(zhì)、大小而鋤定，一般1憤-6小時(shí)。也四跪、的脫水：就是奸用一種藥劑呆把材料中的閘水份全部代幸替干凈。墻（一）弟脫水原因：多在制作永久芹制片時(shí)，組喂織沖洗完畢蘇后必須進(jìn)行志脫水，因組暗織固定和水偽洗后含大量汽水分，而水占不能和石蠟礙包埋劑混合腹，組織內(nèi)只景要有極少量防水份，就會(huì)枯防礙包埋劑溪的滲入。瓣第一步脫水趨：是為了引托入包埋劑作詳準(zhǔn)備。擠第二步脫水段：是為了引祥入封藏劑作蹄準(zhǔn)備。君（二）憲脫水的結(jié)果壯：駁使材料變硬瑞，形狀更加粒穩(wěn)定，利于婚組織永久保悲存。除盡材館料的水份，徑才能使透明羅劑、包埋劑易、封藏劑滲貝透到組織中腔，有利于組涌織的透明和言透蠟。勝（三）部脫水的方法晝：拘脫水應(yīng)逐步移進(jìn)行，而不些能驟然進(jìn)行堂，否則會(huì)引確起組織的強(qiáng)算烈收縮，或開使材料變形議。一般把脫我水劑配成各葡種濃度，材莖料自低濃度發(fā)到高濃度依則次經(jīng)各級(jí)脫濕水劑，其中百所含水份逐奴漸被脫水劑俊取代。丹（四）逃脫水劑應(yīng)具久備的兩個(gè)特葡性：豈1.秋必須是親水挺性，能與水隙以任何比例封混合，代替鄙細(xì)胞中的水忙份。挑2.查必須能和其龜他有機(jī)溶劑捧混溶取代。鐮（五）伐脫水劑分為苗兩類：串1.辜非石蠟溶劑父的脫水劑：拘如乙醇、丙價(jià)酮等，組織同脫水后必須略經(jīng)二甲苯透仍明才可浸蠟茄。相2.灰石蠟溶劑的舉脫水劑：如灑正丁醇、二前氧六圜等，五組織脫水后油即可直接透丘蠟，不需經(jīng)熊過中間溶劑榮二甲苯之類事的藥品。夢(mèng)（六）來常用的脫水責(zé)劑：1.乙醇：與（1）問按濃度梯度登依次進(jìn)行1貍5%透→劇35%飛→患50%脆→轎70%熱→浙83%繳→冬95%問→倍100%略→霞100%；犯（2）徒脫水時(shí)的注沾意事項(xiàng)：謹(jǐn)①穩(wěn)脫水必須要淹在有瓶蓋內(nèi)涂進(jìn)行，尤其淋是高濃度乙沫醇很容易吸儉收空氣中的飼水份。覺②封組織由低濃得度向高濃度斬的乙醇轉(zhuǎn)移乎時(shí)，要用吸絹水紙吸干余雀液，以免將盡水份帶入。墓③琴純乙醇中如監(jiān)有水，可加遇無水硫酸銅趟以吸去水份至。旺（3）周在各級(jí)停留往的時(shí)間武：貢第一步脫水戒，須看材料逐的性質(zhì)大小柴而定，體積笑為縫2mm茶3霉的一般每級(jí)菌為1-4小濾時(shí)截；批第二步切片五脫水，每級(jí)曾只需3-1層0min；旺在低濃度酒支精中，每級(jí)燈停留的時(shí)間派不易過長(zhǎng)，莖否則易使組支織變軟，助特長(zhǎng)材料解體巴。從95%化到100%驅(qū)乙醇后，時(shí)設(shè)間不能太長(zhǎng)解，否則材料抵變硬變脆，賺影響切片?；槭挂掖济撍闼畯氐祝瑧?yīng)放更換兩次1屑00%乙醇悉。如需過夜連應(yīng)停留在7指0%酒精中項(xiàng)。泉注：在每級(jí)輛中停留的時(shí)抱間，依照材勞料的大小、權(quán)性質(zhì)以及留慣在固定液中虹的時(shí)間長(zhǎng)短堤和固定液的吹溶解性而定盯。截①采如洋蔥、蠶晚豆等根尖和叉小片葉子一巨樣大小的材耐料，每級(jí)停壟留約30m肥in-1h欄。若用苦味仔酸固定則可睬延長(zhǎng)為1h盈。沿②嚇由FAA固叫定的草本莖字，每級(jí)停留專2小時(shí)，木丑本莖停留4位小時(shí)，較大翅的木材每級(jí)譯延長(zhǎng)為8-飼12小時(shí)。綠③捎一般動(dòng)物組擠織如小白鼠位的腎臟2能-4mm休厚，每級(jí)停柳留1-2h爽。尊④坦脫水至純酒筐精時(shí)，需更鄰換兩次，每躲次30mi理n-1h；喇材料大者，平可多換一次盯。由95%朱-100%六時(shí)，瓶子上盈的塞子也應(yīng)畫換干燥的，繳以免水份滲躺入。添2.亂丙酮：為很柿好的脫水劑習(xí)，可以代替由乙醇，其作銅用和用法和張乙醇相似，餓不過其脫水旨力和收縮力吸都比乙醇強(qiáng)昌。能使蛋白筍沉淀，組織而硬化，不能巡溶解石蠟，術(shù)所以仍需經(jīng)卸過二甲苯或傻其他透明劑削，然后才能攤進(jìn)行浸蠟和其包埋。隨3.萍正丁醇：此號(hào)劑易揮發(fā)，柔可與水和乙紫醇混合，亦儲(chǔ)是石蠟溶劑童，可不經(jīng)透頌明劑直接浸徑蠟。但一般致在應(yīng)用上還跨未能完全替陣代乙醇。多獅與乙醇按一花定比例混合避作脫水之用井，但最后需幫經(jīng)純正定醇園方可浸蠟。滋很少引起組捏織塊的收縮盲，變脆。鐵表辯1謹(jǐn)-好5斜各級(jí)濃度的編正丁醇：記級(jí)別喉Ⅰ前（ml）攝Ⅱ菌（ml）害Ⅲ國(guó)（ml）摘Ⅳ立（ml）親Ⅴ雹（ml）左Ⅵ吐（ml）修蒸餾水孕50妨30坡15潮5虎0湯0柳乙醇鳳40痰50勾50搏40暗25弱0拿正丁醇局10曉20竿35競(jìng)55革75鈴100除Ⅰ品-誕Ⅳ徒中的乙醇可磨用95%，四僅鴉Ⅴ茶級(jí)的用純乙劫醇配。豐Ⅱ隨中可過夜。細(xì)材料經(jīng)兩次換正丁醇后，盈進(jìn)入1/2毯正丁醇1/雹2石蠟，經(jīng)致1-3小時(shí)央后，轉(zhuǎn)入純裁石蠟。術(shù)4.異叔丁醇:可賠與水，乙醇升及二甲苯等正劑混合，(招可套用上表聚)也可單獨(dú)塵使用，是一撫種應(yīng)用很廣怖的脫水劑?？荽艘翰粫?huì)使畫組織收縮或席變硬，不必絮經(jīng)過透明，退可直接浸蠟藏。應(yīng)用此劑絕可以簡(jiǎn)化脫的水、透明等咸步驟。因此完已逐漸代替痰乙醇顯，萬但價(jià)格較貴賞。董表圓1透-它6素各級(jí)濃度的踐叔丁醇：腔級(jí)別閥Ⅰ硬（ml）拍Ⅱ點(diǎn)（ml）飯Ⅲ鼓（ml）度Ⅳ仆（ml）菠Ⅴ陽（ml）主Ⅵ枝（ml）巨蒸餾水演40森30洲15骨0堵0轉(zhuǎn)0匯乙醇尺50皺50悼50慌50籃25推0切正丁醇蜓10紐20偵35蛾50梅75砌100簡(jiǎn)Ⅰ念-璃Ⅳ鍵中的乙醇可辱用95%，蹲僅終Ⅴ泡級(jí)的用純乙妙醇配。材料講經(jīng)兩次叔丁即醇后，進(jìn)入哨1/2叔丁池醇1/2石虜蠟，經(jīng)1-偷3小時(shí)后，阻轉(zhuǎn)入純石蠟劫。摧舉例：植物稍骨架光鏡觀含察的實(shí)驗(yàn)中螺，若遇到效模果好的片子穿，可通過以抵下步驟做成麥永久切片：踏50%乙醇繩→果70%鴿→甩95%炒→毯1/295贏%：1/2急叔丁醇憐→他叔丁醇唱→溉中性樹膠（跳每級(jí)5-1為0min）壤。敞5.收甘油，也是慨一種良好的妖脫水劑，尤壞其對(duì)細(xì)小柔獎(jiǎng)軟的材料更察適合。用甘猜油脫水可以驕避免原生質(zhì)永收縮，但脫堵水前必須洗性凈固定劑，傷以免影響包紐埋和染色。批利用甘油脫反水，可以從餓50%濃度歌開始至純甘鈴油，再換純橡乙醇。吸6.特二氧六環(huán)：茂為無色液體鋤，易揮發(fā)燃返燒，且有毒芬，應(yīng)盡力避戲免吸入它的園蒸氣。能與反水和乙醇在掩任何比例下呈混合，為石便蠟溶劑，脫期水至純二氧戰(zhàn)六環(huán)后，即朝可進(jìn)行包埋名。濃度梯度市設(shè)計(jì)為：3愁0%艘→縣50%脖→煌70%戰(zhàn)→制90%結(jié)→爸100%?！鷦?00%為→獲100%每甩級(jí)時(shí)間為1數(shù)-6小時(shí)。五、透明：浴材料經(jīng)脫水訴劑去水分后隸，還要經(jīng)過季一種既能與姜脫水劑，又牛能與包埋劑怪相混合的溶戶劑斑—規(guī)透明劑來處爸理，以便于植包埋劑的深慧入或封藏。晴在制片過程窯中有兩次透道明：第一次口是組織塊的篇透明，為了榆引入包埋劑犬。第二次是搞染色以后切弓片的透明。女為了引入封術(shù)藏劑。劫（一）浸常用透明劑慚：透明劑都鵲是石蠟的溶貝劑，絕大多寄數(shù)不能與水臺(tái)混合，最常鵝用的透明劑點(diǎn)有二甲苯，智苯，甲苯，洲氯仿，冬青性油等。備1.運(yùn)二甲苯：目厘前應(yīng)用最廣愁。易溶于乙禁醇，又能夠你溶解石蠟，竟加拿大樹膠按，透明力強(qiáng)清，作用較快縮。其最大缺歪點(diǎn)是容易變集硬變脆.材紛料必須脫盡布水分再透明區(qū)，否則發(fā)生鞋乳狀渾濁。們?cè)诓ＦM(jìn)入領(lǐng)二甲苯前，切為了減少材叨料收縮，材隱料先經(jīng)過1于/2二甲苯犁+1/2無孫水乙醇秋→為二甲苯（I牲）挺→詠二甲苯（I售I）煩→葛1/2二甲兄苯+1/2良石蠟轟材料在二甲株苯中時(shí)間不撐宜過長(zhǎng)，否卵則材料收縮預(yù)變硬，變脆弄。一般組織姥塊透明總時(shí)界間1-3小縫時(shí)，（每級(jí)距30分鐘左領(lǐng)右）染色后事的切片透明區(qū)每級(jí)5-1筋0分鐘。近2.拘甲苯：性質(zhì)秀同二甲苯，框可作為二甲格苯的替代品速，但甲苯的須透明較慢，山一般需12薯-24小時(shí)攪，材料不變剪脆，故此點(diǎn)鳴優(yōu)于二甲苯障。雹3.的苯：性質(zhì)近頑似二甲苯，勻揮發(fā)較快，妄且易爆炸，兼人吸入苯能晴引起中毒。奪使組織收縮蘆較小，久浸遞也不像二甲職苯使組織產(chǎn)獸生脆硬現(xiàn)象克。隱4.擋氯仿：也是芹一種很好的格透明劑，組償織透明時(shí)收予縮不太厲害驢，不變脆，也易揮發(fā)，浸離透力比二甲銹苯，苯慢，緩?fù)该鲿r(shí)間比碧二甲苯應(yīng)延讓長(zhǎng)2-3倍折。氯仿適用搭透明大塊組丟織，火棉膠舟切片和植物創(chuàng)石蠟切片。男六部、貪浸蠟與包埋覽：立組織經(jīng)過透隸明后要讓石宗蠟支持劑透怕入內(nèi)部使它嶼變硬，并將販組織包埋進(jìn)奧去，把軟組紹織變?yōu)檫m當(dāng)述硬度的蠟塊滋，以便切成立薄片。以利劑于切片和觀名察，這個(gè)過納程將為悉“聾浸蠟雄”程和介“廳包埋跡”稅。構(gòu)（一）常用展包埋劑鐮1.冊(cè)石蠟的熔點(diǎn)究多為50率-60該℃戒。選用不同宜熔點(diǎn)的石蠟殺的原則：飼（1）躬石蠟硬度與敞組織硬度相足近似，組織錦較硬時(shí)，用鎮(zhèn)硬的石蠟，蔑反之用軟的裕石蠟。一般若動(dòng)物材料石田蠟的熔點(diǎn)為歲52動(dòng)-56社℃雜，植物材料著石蠟的熔點(diǎn)高為54果-58蠅℃芽。京（2）跪切片較薄時(shí)基（4um以隔下），石蠟患的熔點(diǎn)為5猾8芹-60慰℃拐.或（3）役最重要的要啟看室內(nèi)溫度搏，通常在夏設(shè)天用熔點(diǎn)高目的石蠟-硬跌蠟，冬天用繳熔點(diǎn)低的石摘蠟-軟蠟。照石蠟太硬，炎切片時(shí)容易業(yè)破碎，不易衛(wèi)切成臘帶，霜太軟時(shí)，蠟庫帶容易皺縮晉。只2.狡火棉膠為款固體膠片，奉市售的有的句是膠片，有齡的是已配成恢6%或4%溜的溶液，即補(bǔ)取丹6g確或閱4g外火棉膠片溶蠢于100m天l乙醚和乙散醇的等量混漠合液中。配圣制時(shí)，先將愛火棉膠浸于箱乙醇中，1派2-24小戒時(shí)后在加入錄等量乙醚，闊這樣溶解較搜快。）尤（二）勺浸蠟：材料枕經(jīng)透明后，答倒入二甲苯跪，再在上面命倒入尾60幼℃輸?shù)氖?，使?jié)呈灒憾拙惚?3：2蓬；放在35誰-37余℃刃的恒溫箱中滴浸蠟1-2罰天。將溫箱稼升至能60輕℃好，將石蠟和竊二甲苯倒出蹲，換純石蠟位兩次，每次懂1小時(shí)。查（三）助包埋：準(zhǔn)備享燙板、紙盒逮、成冰水的飄盆、酒精燈煤和解剖針。蝕步驟：紙盒戴放于燙板上賺，將石蠟和舌材料一起倒麥出，用加溫權(quán)后的解剖針面將材料調(diào)到導(dǎo)合適的位置劫，標(biāo)簽有文拋?zhàn)值囊幻嫦蜥勏?。再補(bǔ)足仆石蠟。輕輕爹提起紙盒的棵兩側(cè)的把手揭，慢慢平放野于盆的水面租上，待紙盒牛內(nèi)石蠟表面妻已凝固，即綱可將紙盒向票一側(cè)傾斜，埋使其立即進(jìn)留入冷水中，戚迅速凝固，泰經(jīng)30mi掃n-1h后撇，取出晾干玉。七、切片：緊石蠟切片，低用旋轉(zhuǎn)切片衛(wèi)機(jī)。爭(zhēng)如圖1溉-4撇所示。腸一個(gè)旋轉(zhuǎn)切曠片機(jī)，可分連三個(gè)部分，留一個(gè)是安裝羽切片刀的部愉分，有調(diào)節(jié)岡刀片斜度和臂固著刀片的誕螺旋。一個(gè)譯是安裝材料刃的部分，也需有螺旋可以補(bǔ)調(diào)節(jié)材料的竊位置。另一昆個(gè)是操縱在暴旋轉(zhuǎn)中向前罵推進(jìn)的部分時(shí)，控制著切蠶片的厚薄，愿是比較重要餃而復(fù)雜的部忌分。泥圖1-4榨旋轉(zhuǎn)切葵片機(jī)夜（一）引修塊、粘塊煩、整修的步揉驟：液1.史選取所要切姐片的材料，筒從包埋的石把蠟塊上用單季面刀片切割省下來，注意降不可損傷包最埋的組織。比2.鄰確定切面的渠方位，用刀宋片將石蠟塊飄的四面作初物步的整修。令保證材料四啞周都有石蠟欺包圍。但不魄可太多。切她面的上、下魔邊平行。均3.報(bào)點(diǎn)燃酒精燈忽，并準(zhǔn)備一由把舊的解剖啊刀。貼4.丘左手大拇指嘴與食指間持愧整修好的石血蠟塊，材料池向上用其余堡三指夾住臺(tái)孟木。此時(shí)將油解剖刀在酒焰精燈上加溫物后，即放在鈴臺(tái)木與石蠟異塊之間，因云解剖刀已加步溫，遇上兩和面的石蠟都曲會(huì)融化，可稠立即將解剖途刀抽出，石哲蠟塊迅速壓暢在臺(tái)木上。查5.上再將解剖刀吐蘸取少許石且蠟碎屑，放碼在剛才固定軍的石蠟四周嶺。此時(shí)，解雁剖刀再加溫塞，并迅速將咬石蠟塊四周柏的碎屑燙平墾。使石蠟塊接牢固地粘在掃臺(tái)木上。貼6.況修石蠟塊上慣下面平行，掘是切成的蠟道帶呈一直線攝，不彎曲。獻(xiàn)每個(gè)切片中棟組織的距離搏接近。鋸（二）寺切片的方法露：持1.謙準(zhǔn)備下列用繭具：毛筆、擔(dān)黑色亮光紙業(yè)2.傻將已固著和村整修好的石毫蠟塊和臺(tái)木達(dá)裝在切片機(jī)誠(chéng)的夾物部分園.鬧3.尖安裝切片刀霜，將刀片夾際在刀夾上，獵并調(diào)整好刀僻的角度。刀糊的斜度，非卷常重要，最控好先切除的懷蠟塊試刀，近以確定刀的與斜度，一經(jīng)寬調(diào)度適合后繭，就不要隨耍便變動(dòng)，以容免每次試刀陜的麻煩。賓4.處移動(dòng)刀片固慣定器，使夾瘡刀部與夾物松部之間的距格離調(diào)整好，曉以石蠟塊的構(gòu)表面剛貼近墾刀口為度，好在旋緊切片粥固定器的螺廊旋。島5.體調(diào)整石蠟塊灰與刀口之間邊的角度與位鋼置。齒修整蠟塊，罵將刀片移近駐蠟塊，使小唯蠟塊的下邊坑與刀鋒平行刪，如不平行白，可調(diào)夾物麗部上的螺旋圖。然后把它宅固定，再轉(zhuǎn)奏下蠟塊．呈彼矩形才行。膝只有平整的報(bào)蠟塊，才能刪切出平整的乞蠟帶。帳6.此最后根據(jù)需邊要，調(diào)整控罪制切片厚度幻的機(jī)制。調(diào)禾度后，把它總固定下來。探上述四步驟肢完成后，就魔可進(jìn)行切片盜，朋7.寒開始切片。筆右手握旋轉(zhuǎn)爐輪的手柄，緞?chuàng)u動(dòng)一轉(zhuǎn)就楊可切下一片絲，切下的蠟謹(jǐn)片粘在刀口愧上，待第二凝片切下時(shí)粘捆在一起，所競(jìng)以連續(xù)搖動(dòng)偽就可將切下惹的蠟片連成晶一條蠟帶。碰這時(shí)左手就叔可持毛筆將魔蠟帶提起，清邊搖邊移動(dòng)機(jī)蠟帶。轉(zhuǎn)速繼為每分鐘4愛0-50為行宜。謊8.由切成的蠟帶斗到20鄉(xiāng)-30厘米橫時(shí)，即以右托手用另一只賤毛筆輕輕將芒蠟帶挑起，轟平放在黑電瑞光紙上?？繘r刀的一面較愉光滑，應(yīng)向島下，較皺的猶一面向上。含9.琴切下的蠟片缸是否良好，鉛此時(shí)應(yīng)先行虜檢查。筑10.昆切片工作結(jié)捏束后，仍將貸刀片用具擦研拭干凈。癥八章、徹貼片：貼附拳牢固，在染騾色時(shí)不易脫羊落；是皺褶黃的蠟片伸展躍平整。疤（一）儉用具：載玻售片、粘片劑慎、解剖刀、鼓蒸餾水、展泄片機(jī)及銬片步機(jī)。幸宋（二）貼片諒的方法搭1.歲將展片機(jī)溫謎度調(diào)整到鍬35院℃萄，保持恒定仇。懸2.修在載玻片上斬涂蛋白甘油裕粘片劑。其象法是用細(xì)玻爸璃棒蘸取一扯小滴粘片劑塘，加在載玻寒片的中央，闖然后用洗凈偽的手指（無任名指）加以載涂抹，范圍五不要太廣，釀也不要太多盛，以能貼足遙夠的蠟片為質(zhì)度。蛋白甘妻油粘片劑的唐配方：（不咐適宜用作蛋般白觀察）群3.豐將涂粘片劑慶的載玻片放止在展片機(jī)上竭，滴加蒸餾椅水?dāng)?shù)滴，此伸時(shí)若發(fā)現(xiàn)水案不均勻分散炮而聚成滴狀巡，即表示玻敞片不清潔，情有殘留油脂皂等物在上面提。州4.草用解剖刀將貼蠟帶切成小昌段，每段的述長(zhǎng)度應(yīng)以蓋回玻片的長(zhǎng)度跟為準(zhǔn)，一般端應(yīng)比蓋玻片野短約1/5叔-2/5。增分片應(yīng)從蠟完帶交界處分樂。橋5.緊將蠟帶輕輕依移到涂有水夏的載玻片上磁，蠟片光面谷應(yīng)向下貼在喂載玻片上，境依次排列整孫齊。留出右創(chuàng)端貼標(biāo)簽處蝦。競(jìng)6.適材料展平后蔥，從展片機(jī)白上取下，稍幼稍傾斜留出槽多余的水分街，用吸水紙與吸干背面及臣周圍多余水劫分，放于烤逼片機(jī)（堪35利℃創(chuàng)）上烤干水推分。舞九傾、痛染料與染色絞：根（一）付染料：在組燈織切片染色奔中使用的最謊廣的染色劑努是有機(jī)染色備劑。楊1.貍?cè)旧珓┑男匝寿|(zhì)：具備兩劫個(gè)性質(zhì)，一奴要具有顏色嶺，二要與被出染組織間有理親和力。這洽兩個(gè)性質(zhì)都袍是由分子結(jié)嶺構(gòu)決定的，菊主要有兩種偶特殊的基團(tuán)環(huán)所產(chǎn)生，即饑產(chǎn)生顏色的璃發(fā)色團(tuán)和產(chǎn)杜生親和力的開助色團(tuán)。畝發(fā)色團(tuán)：能巡使染色劑分帶子產(chǎn)生顏色融的原子團(tuán)稱仔發(fā)色團(tuán)，也眼就是能吸收優(yōu)一定波長(zhǎng)的詳光線，并因宜之而呈現(xiàn)顏且色的化學(xué)結(jié)呼構(gòu)。禮助色團(tuán)：能猴使染色劑對(duì)宗組織產(chǎn)生親盲和力的原子凈團(tuán)。它的作準(zhǔn)用是使化合偶物具有鹽類甩的性質(zhì)，即滿它是不能染級(jí)色的有色物如質(zhì)變?yōu)橐环N難電解質(zhì)，使本它能和酸或裝堿生成鹽類膜。釘2.笛染色劑的分鋸類然（1）后根據(jù)染色劑等的來源分：鉛天然染色劑略：是從動(dòng)植族物體中提取另出來的，為骨天然產(chǎn)物，含產(chǎn)量少。目事前常用的是乞洋紅、地衣級(jí)紅、靛青、厲蘇木精，其晃中最常用的傘是洋紅勺、胭脂紅，猾地衣紅，番永紅花鞏和蘇木精。監(jiān)人工合成染誓色劑：使用肺化學(xué)方法合坡成的芳香環(huán)疊或具有芳香偽環(huán)的雜環(huán)化貫合物。干（2）堵按主要用途稼分為癥胞核染色劑償：蘇木素，佩胭脂紅，甲舒苯胺藍(lán)，美鳳藍(lán)，孔雀綠較等。袍胞漿染色劑圍：伊紅，淡符綠，橘黃G鏈,酸性品紅茶,苦味酸等仁。截脂質(zhì)染色劑過：蘇丹補(bǔ)Ⅲ崖，蘇丹腰Ⅳ然，蘇丹黑，喚硫酸尼羅藍(lán)友及油紅等。令（3）誘根據(jù)染色劑消的化學(xué)反應(yīng)食分：懇染色劑的干超粉是穩(wěn)定的焰鹽類，它們忌在溶液中則媽電離成酸性復(fù)或堿性染色泉?jiǎng)?。如酸性阻染色劑，能而夠產(chǎn)生氫離提子（H+)幟或其它陽離覆子(Na+敲),而其本餓身成為帶負(fù)拼電荷的陰離膠子者。這類臭染色劑一般留用于染細(xì)胞采漿，如伊紅王Y，苦味酸上，橘黃G等眾。堿性染色取劑，能產(chǎn)生槐氫氧根離子狠（OH-壇)或其它負(fù)垮離子(如C愧l-),而謹(jǐn)本身成為帶仙正電荷的陽辛離子者。這卵類染色劑常盲用于染細(xì)胞失核,如堿性取品紅等。恢①灣酸性染色劑物：色原促——保助色團(tuán)給——牙Na違→個(gè)[色原-助慧色團(tuán)]+N松a+。曉酸性染色劑影在水中電離貿(mào)后，其發(fā)色撇團(tuán)帶負(fù)電荷沾。一般溶于偉乙醇和水，檢常用高濃度耍的乙醇和丁促香油作溶劑陵。一般用于舊細(xì)胞質(zhì)染色膽。鋪常用的如伊慮紅，酸性品蓬紅，苦味酸板，橘黃G，爸剛果紅，水級(jí)溶性苯胺藍(lán)轎，淡綠等酸么性染料常用媽以染細(xì)胞漿麻等堿性成份翁。屑②玻堿性染色劑冬：色原呢——期助色團(tuán)齒——顫Cl桃→扒[色原-助概色團(tuán)]++有Cl。堿性弱染色劑在水真中電離后，座其發(fā)色團(tuán)帶圍正電荷。一肯般能溶于水贈(zèng)和乙醇，常忌用水和低濃直度的乙醇作胸溶劑。一般圾用于胞核染蹈色。著色能梳力差，染色晚時(shí)間長(zhǎng)。常島用的如蘇木駛素,卡紅,糕次甲基藍(lán),廚甲苯胺藍(lán),松硫堇,美藍(lán)倦等堿性染料曠常用以染細(xì)慈胞核等酸性攀成份。倡儲(chǔ)龍墳?zāi)旧钨|(zhì)化細(xì)胞壁繼：堿性染色惱劑蹤唐解細(xì)胞壁：域纖維素細(xì)胞甲壁：酸性染膀色劑體著色部位副細(xì)胞質(zhì)莫：酸性染色簡(jiǎn)劑陰老吃細(xì)胞核：閥堿性染色劑航嚴(yán)格地說，灑酸性染色劑溪的溶液并不號(hào)一定呈酸性湊。同樣，堿橫性染色劑的株溶液也未必武呈堿性。所但謂酸性和堿鐵性染色劑僅摘指它們電離漲后其分子的胸主要染色部紫分是陽離子寇還是陰離子姥。因此稱為所陽離子型染斑色劑或陰離者子型染色劑踏更為適當(dāng)。熟常規(guī)H.E胸染色中蘇木張素染液的P競(jìng)H值約為7金，此時(shí)胞核燦的化學(xué)成份超電離產(chǎn)生H屈+，而其本尿身成為帶電就荷的陰離子撲，所以被陽疫離子型的堿割性染料劑所溉著色。伊紅明染液為弱酸桂性。細(xì)胞的啞化學(xué)成份從環(huán)溶液中獲取槽H+而成為惰帶正電荷的哀陽離子，因浩此與陰離子學(xué)型的酸性染爽色劑（伊紅永）相結(jié)合，扭染作紅色，連這就是H.翼E染色分別皇顯示核和胞晚漿的機(jī)制。底③輕中性染色劑裕：這是酸性暴染色劑和堿殼性染色劑的業(yè)復(fù)合物，又沾可稱為復(fù)合踐染料。是由耐堿性染料（舍色堿的鹽）時(shí)和酸性染料韻（色酸的鹽逐）配制而成干。其中染色竄劑的分子很慧大，所以往漲往水中溶解滅度較低，需邁用酒精做溶贊劑。血液學(xué)迫中的血液涂方片經(jīng)常使用拾的瑞氏染色乒劑及姬姆薩養(yǎng)染色劑就是苦這種混合染藥色劑。其中牲的各種不同倆成分可分剔笑使核、胞漿臭和顆粒著色沖。枝(3)貢按染色劑分畫子中的發(fā)色控團(tuán)可分為九棕類掉①驢亞硝基類：不發(fā)色團(tuán)為亞芝硝基（-N激O)如萘酚集緣-B。菠②悶硝基染料：拘發(fā)色團(tuán)是硝薦基（-NO門2）如苦味東酸。質(zhì)③兄偶氮類：發(fā)票色團(tuán)為偶氮豈基（-N=盯N-）屬于瘦這一類的染可色劑的橘黃水G,剛果紅遲,俾士麥棕喘和許多蘇丹珍類的脂質(zhì)染翁色劑。結(jié)④框醌亞胺類：班這類染料含愚有兩個(gè)發(fā)色鵲團(tuán)，一個(gè)是芒印胺基（-者N=），一藍(lán)個(gè)是醌型苯蛙環(huán)，如硫堇懷，美藍(lán)，甲破苯胺藍(lán)O,浸硫酸尼羅藍(lán)邀,中性紅,武堿性藏紅花振O，焦油紫讓等。樂⑤扇苯甲烷染料法：發(fā)色團(tuán)是招醌型苯環(huán)，炮如孔雀緣，掌淺綠，堿性史品紅，酸性轉(zhuǎn)品紅，結(jié)晶繭紫，甲基緣妙等。動(dòng)⑥關(guān)山叮染料：蹄發(fā)色團(tuán)是醌泄型苯環(huán)，如笑派羅寧，伊惜紅Y等。明⑦外蒽醌染料：牧此類染色劑淋含有色原蒽愿醌，如茜素悼和胭脂蟲酸煤。⑧噻唑類。⑨喹啉類。努⑧渴，咳⑨日類染色劑使鵲用極少。妹3.熊媒染劑與促納染劑鄉(xiāng)（1）梅媒染劑：某駁些染色劑若勿不用媒染劑拜則染色能力令弱，經(jīng)過媒弄染劑的作用許后，染色劑愉便易與組織拳染色，因?yàn)殪柸旧珓┘饶芾枧c染色劑相山結(jié)合，又能死與組織相結(jié)稠合，所以凡變是本身能與陶染色劑和組裕織發(fā)生結(jié)合繞，促進(jìn)染色紡和生成色淀纏的含金屬離吳子的鹽稱為壺媒染劑；凡桐是能與金屬干離子作用生非成色淀的染爽色劑稱為媒精染染色劑。偵天然染料往卸往需用媒染豎劑。共常見的媒染庫染色劑有氧冤化蘇木精、得茜素、卡紅句等。柿媒染劑的種信類很多，一雨般是一種二后價(jià)或三價(jià)金煎屬鹽或氫氧博化物，常用峽的是鋁鹽、毛鐵鹽及明礬比。激（2）改促染劑：它兆能使染料對(duì)蕉組織著色容代易，而本身鳴不參與染色己反應(yīng)。常用遇的有硼砂、惠石炭酸。煙（二）魯染色的方法阿：護(hù)1.錘整體染色法條：一般微小橡的生物體經(jīng)蓄固定，沖洗罷后，其整體夠直接入染液閉染色。強(qiáng)2.岸組織塊染色祝法：是將固耕定的組織塊腹沖洗后直接辱投入到染液稅內(nèi)染色。建3.減蠟帶染色法杰：組織經(jīng)石陸蠟切片后，踩進(jìn)一步染色示時(shí)多用此法否。此法又可涉分為三種：漁（1）投單染色法:職用一種染色冒劑染色的方診法。觸（2）縮復(fù)染色法(纏對(duì)比染色法罪)：是用兩納種不同性質(zhì)編的染色劑進(jìn)胃行染色的方胡法。如蘇木販精伊紅染色蓋（HE染色暑）、番紅固瑞綠染色。繭復(fù)染時(shí)注意殿事項(xiàng)：酸堿異對(duì)染、先堿益后酸、堿性況染料的分色要。薦（3）紙多重染色法親：選用兩種壟以上染色劑酷染色的方法刊。如Mal哀lory氏頭三色染色法象染結(jié)締組織策。佳4.達(dá)根據(jù)所用染火料的濃淡程伴度和是否用肢媒染劑，染雞色方法有可雞分為：刃（1）艇漸進(jìn)法與后餡退法：漸進(jìn)林法是將組織涼放入稀染色選液中，使組暗織某部分由天淺入深，漸狐漸著色，其報(bào)它組織并不叼著色，染至辦所需程度即褲行停止染色未。后退法是刑將組織先行其濃染后再褪援色，而嗜強(qiáng)洋染性的某一狠構(gòu)造不受影節(jié)響，其它部記分則褪至近送無色。一般騙染色都采用女后退法。痕（2）渠直接法與間匪接法：不需攻媒染劑的作淋用稱為直接棗法，某些染彼料染色能力態(tài)弱。不能與胸組織直接作嫌用，必須經(jīng)拘過媒染劑的愧作用，是染域色劑固著于聞媒染劑，媒埋染劑又能固士著于組織，刻既能染色，向此為間接法遮。竿（三）駱常用染色劑肥：生物制片幟應(yīng)用的染色榴劑約200田種，下面分?jǐn)e介紹一些吼常用的染色驗(yàn)劑的性能、棄配方和染色跑方法。沙1.水天然染料摔（1）我蘇木精竟:夫蘇木精是躁從南美的蘇辱木（熱帶豆石科植物）干飯枝中用乙醚西浸制出來的堵一種色素，及是最常用的置染料之一。標(biāo)蘇木精：（年hemat瘡oxyli劫n）生物制型片中最重要鋤的染色劑。婦它它是一種派淡黃色和淺奶褐色粉末狀福結(jié)晶，易溶沖于乙醇，微膽溶于水和甘尤油。掉蘇木精不能福直接染色，歡必須經(jīng)過氧纏化，成為氧處化蘇木精或優(yōu)蘇木素后（訂hemat詠ein）才僚能應(yīng)用。這冠個(gè)氧化過程瓦叫成熟。氧匯化方法有兩愧種：一種是似暴露于空氣睡中自然氧化表（需時(shí)間較礦長(zhǎng)）但此液督時(shí)間越久染童色能力越強(qiáng)言，另一種是災(zāi)栽配制時(shí)加優(yōu)入氧化劑，潤(rùn)使其急速氧酸化，但此也岡不宜久置。水蘇木精為弱畏酸性，對(duì)組懼織親和力小符，不能單獨(dú)耳使用，必須答經(jīng)媒染劑一樂起使用才能掩達(dá)到染色目宵的。常用的世媒染劑有硫今酸鋁按、鉀仁明礬和鐵明肌礬等蘇木精災(zāi)不僅是很好餅的核染劑，軌還有明顯的絞多色性，統(tǒng)奶一標(biāo)本只要冶經(jīng)過適宜的萌分色作用就蕉能得到集中吐又藍(lán)到紅的兼色調(diào)。若經(jīng)冠酸性溶液（筆如用鹽酸酒業(yè)精）分色后翼則呈現(xiàn)紅色裳，但經(jīng)水洗插后，仍可恢巾復(fù)青藍(lán)色；懷堿性溶液（擠如氨水）分錄色后為藍(lán)色汽，水洗后成秀藍(lán)黑色。弦常用的埃利泄希氏蘇木精糠配方如下：傲蘇木精：背1克它；95%乙貢醇：50毫冷升；冰乙酸三：5毫升；襯甘油：50廳毫升；鉀礬隔（硫酸鋁鉀呆）：立1.5克納；蒸餾水：火50毫升鎮(zhèn)配法：將蘇議木精放入乙肌醇中溶解后掌，再加蒸餾漠水、甘油、槽鉀礬和冰醋沖酸，攪拌均猴勻，倒入廣丘口瓶中，混歐合呈淡紅色投。瓶口覆蓋育四層紗布放命置兩個(gè)月，孕使其氧化，躺顏色變?yōu)樯顨⒆丶t色時(shí)即塔為成熟就可效使用?？砷L(zhǎng)喇期使用。指此染料需氧殖化過程，氧從化越徹底，臭染色效果越吐好。若想快掙速使用肚，加午0.2克針磺酸鈉可立丑即成熟，但勤使用時(shí)間不判長(zhǎng)。廣此染料可用躺于整體染色溫，使用前需云稀釋10倍扎后使用歇—厲即埃利希氏雞蘇木精稀釋繳液。用埃利占希氏蘇木精取染色后，水魔沖洗或用按愛水沖洗，直換至變藍(lán)。毯（2）番洋紅倦:慶洋紅又叫階胭脂紅或卡怨紅。一種熱溪帶產(chǎn)的雌性線胭脂蟲干燥旺后，磨成粉嬸末，提取出劈蟲紅，再用度明礬處理，慈除去其中雜猜質(zhì)，就制成肺洋紅。單純旋的洋紅不能蝴染色，要經(jīng)并酸性或堿性曲溶液溶解后讓才能染色。議常用的酸性壽溶液有冰醋瘡酸或苦味酸軋，堿性溶液剝有氨水、硼視砂等。括洋紅使細(xì)胞艱核的優(yōu)良染構(gòu)料，染色的堵標(biāo)本不易褪慨色。用作切汁片或組織塊世染都適宜，斯尤其適宜于肆小型材料的扎整體染色。憂用洋紅配成聲的溶液染色濕后能保持幾伸年。洋紅溶叼液出現(xiàn)渾濁水時(shí)要過濾后槐再用。礎(chǔ)2.什人工染料允人工染料，術(shù)即苯胺染料圍或煤焦油染劑料，種類很桶多，應(yīng)用極榮廣。它的缺香點(diǎn)是經(jīng)日光抗照射容易褪儉色，苯胺藍(lán)幻、亮綠、甲炊基綠等更易誼褪色。在制近片中注意掌塞握酸堿度，姨并避免日光泳直射，也能我經(jīng)幾年不褪蘿色。伙（1）顫酸性品紅決:嘩酸性品紅茫是酸性染料姨，呈紅色粉西末狀，能容車于水，略溶死于酒精（0謀.3%）。由他是良好的絞細(xì)胞制染色懼劑，在動(dòng)物餅制片上應(yīng)用浸很廣，在植溪物制片上用添來染皮層、從髓部等薄壁瞇細(xì)胞和纖維樂素壁。他跟饒甲基綠同染地，能顯示線賺粒體。刮組織切片在余染色前先浸經(jīng)在帶酸性的趙水中，可增泄強(qiáng)它的染色筆力。酸性品冶紅容易跟堿膠起作用，所美以染色過度花，易在自來循水中褪色。醋（2）抖剛果紅求:甜剛果紅是社酸性染料，責(zé)呈棗紅色粉厲末狀，能溶吩于水喝酒精汪，遇酸呈藍(lán)要色。他能作怪染料，也用衣作指示劑。零他在植物制萍片中常作為稿蘇木精或其膜他細(xì)胞染料罪的襯墊劑。栗他用來染細(xì)輝胞質(zhì)時(shí)，能裕把膠制或纖班維素染成紅刷色。在動(dòng)物味組織制片中殃用來染神經(jīng)宜軸、彈性纖儉維、胚胎材浩料等。剛果竹紅可以跟蘇鉛木靜作二重才染色，也可稀用作類淀粉敗染色，由于屋他能溶于水轎和酒精，所業(yè)以洗滌和脫蔑水處理要迅瘋速。蕉（3）和甲基藍(lán)彩:念甲基藍(lán)是瞞弱酸性染料唇，能溶于水卸和酒精。甲繡基藍(lán)在動(dòng)植剖物的制片技曉術(shù)方面應(yīng)用富極廣。他跟許伊紅合用能籮染神經(jīng)細(xì)胞自，也是細(xì)菌訓(xùn)制片中不可臉缺少的染料殺。它的水溶乞液是原生動(dòng)肢物的活體染慶色劑。甲基誼藍(lán)極易氧化禾，因此用他丈染色后不能洲長(zhǎng)久保存。叢（4）活固綠吩:厲固綠是酸貞性染料，能姜溶于水（溶醉解度為4%穿）和酒精（虛溶解度為9釀%）。固綠睜是一種染含慌有漿質(zhì)的纖尤維素細(xì)胞組削織的染色劑百，在染細(xì)胞杜和植物組織常上應(yīng)用極廣買。他和蘇木槍精、番紅并號(hào)列為植物組典織學(xué)上三中敏最常用的染肯料。差（5）糞蘇丹穩(wěn)Ⅲ太:要蘇丹坦Ⅲ夾是弱酸性染漿料，呈紅色稍粉末狀，易匪溶于脂肪和坐酒精（溶解畜度為0.1聲5%）。蘇傾丹陶Ⅲ眨是脂肪染色注劑。搶（6）灘伊紅礙:索這類染料蝦種類很多。格常用的伊紅朗Y，是酸性缺染料，呈紅鞋色帶藍(lán)的小躬結(jié)晶或棕色傅粉末狀，溶聾于水（診15攝氏度橋是溶解度達(dá)幕44%）和虧酒精（溶于公無水酒精的廚溶解度為2婚%）。伊紅漆在動(dòng)物制片繩中廣泛應(yīng)用程，是很好的售細(xì)胞質(zhì)染料敞，常用作蘇膏木精的襯染爐劑。澆（7）襖堿性品（復(fù)伐）紅供:綁堿性品紅逐是堿性染料堡，呈暗紅色管粉末或結(jié)晶態(tài)狀，能溶于穩(wěn)水（溶解度漫1%）和酒行精（溶解度表8%）。堿帥性品紅在生憤物學(xué)制片中追用途很廣，封可用來染色槍膠原纖維、芽彈性纖維、略嗜復(fù)紅性顆返粒和中樞神柴經(jīng)組織的核毒質(zhì)。在生物墓學(xué)制片中用鹿來染維管束崖植物的木質(zhì)監(jiān)化壁，又作侄為原球藻、斷輪藻的整體攏染色。在細(xì)課菌學(xué)制片中倚，長(zhǎng)用來鑒夢(mèng)別結(jié)核桿菌不。在爾根彎氏反應(yīng)中用盯作組織化學(xué)眠試劑，已核班查脫氧核糖歡核酸。射（8）坡結(jié)晶紫味:愁結(jié)晶紫是拒堿性染料，勵(lì)能溶于水（襯溶解度9%領(lǐng)）和酒精（哥溶解度8.妹75%）。認(rèn)結(jié)晶紫在細(xì)距胞學(xué)、組織伸學(xué)和細(xì)菌學(xué)竊等方面應(yīng)用牢極廣，是一未種優(yōu)良的染騰色劑。他是聾細(xì)胞核染色嶺常用的，用肉來顯示染色丈體的中心體架，并可染淀篩粉、纖維蛋薪白、神經(jīng)膠剪質(zhì)等。凡是球用番紅和蘇總木精或其他唯染料染細(xì)胞毒核不能成功炎時(shí)，用它能匆得到良好的芒結(jié)果。用番感紅和結(jié)晶紫覆作染色體的迅二重染色，曉染色體染成燥紅色，紡錘仆絲染成紫色彩，所以也是魄一種顯示細(xì)滿胞分裂的優(yōu)些良染色劑。聽用結(jié)晶紫染軋纖毛，效果斧也很好。用胸結(jié)晶紫染色摩的切片，缺血點(diǎn)是不易長(zhǎng)嘴久保存。舞（9）嶼龍膽紫廳:艷龍膽紫是液混合的堿性妻染料，主要營(yíng)是結(jié)晶紫和伶甲基紫的混泳合物。在必催要是，龍膽泛紫能跟結(jié)晶準(zhǔn)紫互相替用身。醫(yī)藥上用用的紫藥水，貞主要成分是幻甲基紫，需園要時(shí)能代替萍龍膽紫和結(jié)晃晶紫。庸（10）污中性紅陵:劇中性紅是彼弱堿性染料廉，呈紅色粉后末狀，能溶粉于水（溶解懲度4%）和薄酒精（溶解嫌度1.8%犬）。它的堿慰性溶液中呈懼現(xiàn)黃色，在準(zhǔn)強(qiáng)堿性溶液式中呈藍(lán)色，柿而在弱酸性炎溶液中呈紅腐色，所以能鈔用作指示劑債。中性紅無攤毒，常做活殘?bào)w染色的染快料，用來染窮原生動(dòng)物和崖顯示動(dòng)植物傲組織中活細(xì)諒胞的內(nèi)含物本等。陳久的休中性紅水溶減液，用作顯澇示尼爾體的驅(qū)常用染料?；瑁?1）掙番紅沃:翠番紅是堿頸性染料，能攪溶于水和酒掌精。番紅是巨細(xì)胞學(xué)和動(dòng)艇植物組織學(xué)歐生常用的染燕料，能染細(xì)乳胞核、染色拉體和植物蛋飽白質(zhì)，示維名管束植物木洽質(zhì)化、木栓雷化和角質(zhì)化燕的組織，還習(xí)能染孢子囊參?？s（12）賺亞甲藍(lán)或美染藍(lán)箭:皆亞甲藍(lán)或江美藍(lán)是堿性考染料，呈藍(lán)冷色粉末狀，值能溶于水（倍溶解度9.蘋5%）和酒嗽精（溶解度盾6%）。亞屈甲藍(lán)是動(dòng)物構(gòu)學(xué)和細(xì)胞學(xué)績(jī)?nèi)旧鲜譂u重要的細(xì)胞冷核染料，其瞎優(yōu)點(diǎn)是染色放不會(huì)過深。懼（13）陽甲基綠必:芽甲基綠是率堿性染料。啞它是綠色粉柜末狀，能溶喇于水（溶解芹度8%）和念酒精（溶解玻度3%）。存甲基綠是最狗有價(jià)值的細(xì)摸胞和染色劑殖，細(xì)胞學(xué)上回常用來染染繪色質(zhì)，跟酸心性品紅一起核可作植物木承質(zhì)部的染色縣。洗（14）夫苯胺藍(lán)：是尚一種混合性尋的酸性染料腳，為深藍(lán)色妹粉末，是一鹿類染色劑的猜混合物，而鏟不是一個(gè)簡(jiǎn)棕單的染色劑咳，有水溶性昏和醇溶性兩兩種。水溶性廉苯胺藍(lán)用于確動(dòng)物組織的出對(duì)比染色，捎能顯示細(xì)胞誦質(zhì)，對(duì)神經(jīng)氧細(xì)胞和軟骨羊染色特別好殼。水溶性苯稈胺藍(lán)常配成嘴1%的溶液團(tuán)。醇溶性苯皇胺藍(lán)羅在植物制片淚技術(shù)上，常景與番紅做對(duì)妖比染色。可錢染植物細(xì)胞纏壁，也可顯宣示鞭毛及非夠木質(zhì)化組織非，常用95文%乙醇配成炒1%的酒精愈溶液使用。氧（四）組織港化學(xué)染色法晚：辨由于顯微鏡書的改進(jìn)，生熱物制片技術(shù)廉和染料化學(xué)鞏的迅速發(fā)展尺，使細(xì)胞構(gòu)述造的研究日召趨細(xì)致和深伍入。使用優(yōu)稱良的固定劑葛、切片機(jī)和齊由煤焦油提燒取出的多種保生物染料能僅在普通顯微將鏡下顯示組漢織、細(xì)胞的岸結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)，遞組織學(xué)研究彩技術(shù)的發(fā)展開和完善，提匹供了辨認(rèn)組柜織和細(xì)胞微另細(xì)結(jié)構(gòu)的多圍種標(biāo)準(zhǔn)方法錯(cuò)。輝1.組織化勁學(xué)和細(xì)胞化席學(xué)塊組織化學(xué)（娛histo漠chemi證stry)價(jià)和胞化學(xué)（寇cytoc填hemis糕try）技保術(shù)的基本原萄理是在組織露切片上或被含檢材料上，注加一定試劑蒜，使它與組視織或細(xì)胞中膚待檢物質(zhì)發(fā)欠生化學(xué)反應(yīng)條成為有色沉胖淀物，以用些光鏡觀察，彈若為重金屬孩沉淀，可以種用電鏡觀察逐，稱電鏡組僑織化學(xué)（e油lectr換onmi弓crosc舊opeh膜istoc菊hemis找try)。鐵這種方法可屈用于檢測(cè)細(xì)濕胞內(nèi)的酶類請(qǐng)、糖類、脂走類、核酸與概某些多屬元荒素等。如進(jìn)五一步應(yīng)用顯攔微分光光度課計(jì)等測(cè)定標(biāo)三本中沉淀物齒的強(qiáng)度，則獎(jiǎng)能較精確地渡進(jìn)行定量研飄究。壘(1)顯示勻多糖（淀粉和粒及細(xì)胞壁嶺纖維素等）沙的高碘酸-爽希夫反應(yīng)善最常用于顯筒示細(xì)胞、組齊織內(nèi)的多糖哀和蛋白多糖嘴的方法是墻高碘酸-希挪夫反應(yīng)蒜（peri蠟odic要acid語Schif赤f，PAS究反應(yīng))。賴①資基本原理是共：糖被強(qiáng)氧蠻化劑蠢高譽(yù)碘酸（HI嚇O4)氧化擊后，丑使多糖分子披中的C-C傍鍵營(yíng)形成2-醛?；?；后者與呀Schif臘f試劑中的份無色品紅亞句硫酸復(fù)合物練結(jié)合，形成三紫紅色反應(yīng)找產(chǎn)物,PA枕S反應(yīng)陽性之部位即表示默多糖的存在曠。渴②占試劑的配制銳：術(shù)高碘酸溶液風(fēng):懶高碘酸束嗓2g吵蒸餾水參節(jié)200m思l倡Schif稈f試劑回（配制撐20m授1）：膀稱取堿性品噴紅絮0.1g參，燒杯內(nèi)放素入20ml男蒸餾水，煮壤沸，將0.敗lg堿性品爬紅慢慢到人派沸水中，邊蹲放邊攪，至幼完全溶解。侄待溫度降至旦60～70脅℃徒時(shí)過濾至錐蚊形瓶中，加位2ml1N哥HCl于瓶閑中，搖勻。木加入NaH所SO3似0.2g灰于瓶中，塞剃緊瓶口，搖帆蕩至完全溶枝解，用黑紙式將瓶包嚴(yán)置工陰暗處過夜筋。次日加1迎00mg活侍性炭于瓶中纏，搖勻后迅攝速過濾于棕寺色瓶?jī)?nèi)。保氣存于嚴(yán)4往℃君冰箱中備用飽（出現(xiàn)粉紅臣色時(shí)失效）研。距1NHC樓l配制（按慰1000m孝l用量）：摔HCl（比紛重1.8）扔89朗ml紅蒸餾水之宜9洽11ml珍注意將酸加殲入水內(nèi)!鋪偏重亞硫酸隙鹽溶液：片10％偏重燭亞硫酸鉀（峰鈉）5ml散（現(xiàn)用現(xiàn)岡配）脊1NHCl幫粗的暫5ml蝦沈蒸餾水主檔四90老ml帶亞硫酸氫鹽和溶液嬌10％偏重船亞硫酸鈉(紐鉀)鋤5ml愧1mol／后L鹽酸帥架5漂ml魄蒸餾水邁若辯輛90ml③步驟洪A擋切片脫蠟到嗎水躲B流水沖曲洗15-3吳0min消芬C0.5毅-0.8%鐘高碘酸溶液交處理10粘min橡D流水洗饞滌5-10興min線蒸餾水漂洗胸E確希夫試劑，濕室溫，彩20-30責(zé)min離F歇亞硫酸氫鹽鹽溶液氏或偏重亞硫愉酸鉀（鈉）螞溶液洗三次叮，每次活2min畜G醒流水沖蛇10-1識(shí)5min，瀉蒸餾水漂洗底5付min速H按常規(guī)各兩級(jí)存乙醇脫水撲，駱二甲苯透明塊，從樹挪膠勾封片詠④透結(jié)果君：些淀粉粒、纖貸維素細(xì)胞壁釘及細(xì)胞內(nèi)的肢糖原、毀糖蛋白喪呈紫紅色(愈PAS陽性揚(yáng)反應(yīng))患。訪圖1-5篩PAS染色烏結(jié)果之⑤哲注意事項(xiàng)裹A怠Schif仙f液的配制仙是本方法的務(wù)關(guān)鍵。蜘B樸SO2充分騰時(shí)，能使堿屬性品紅變成閘無色品紅，絕此時(shí)配出來劫的溶液呈淡氧黃色清亮液捧體，可以省碰去少于性炭濾吸色這一步閉驟，在使用抄中染液逐漸偏變無色。槳C干反應(yīng)的強(qiáng)弱間與氧化的時(shí)典間及氧化強(qiáng)泥度有關(guān)。過慧碘酸的濃度境不宜過高，塵氧化時(shí)間不堂能太短，也窯不能太長(zhǎng)，洽要適當(dāng)掌握掩。說D燒一定要做好攝對(duì)照。巨（2）顯示蟲總蛋白質(zhì)的斤汞-溴酚蘭毅法炕①葡試劑的配制址汞-溴酚蘭盜染色液：2揚(yáng)%的醋酸水鼠溶液100都毫升，溶解瘡氯化汞瞧1克乓，溴酚蘭5娛0毫克。②試驗(yàn)程序歐A思材料用卡諾醬、乙醇、甲岔醛、掏FAA伐等固定液進(jìn)將行固定瞧B閱石蠟切片，撤脫蠟到蒸餾朋水村C漠放入汞-溴滿酚蘭染色液塘中，室溫2紛小時(shí)暢D頓用驗(yàn)0.5%的稻醋酸水溶液就漂洗5分鐘質(zhì)F切片直口接入叔丁醇疫，或?qū)⒁讶镜角衅湃胫姓粜跃彌_液中聾呈現(xiàn)鮮藍(lán)色奧G按常規(guī)木各級(jí)乙醇脫撈水，二甲苯并透明，樹膠越封片③結(jié)果當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)被染娛成深藍(lán)色。聰圖1-6汞窩-溴酚蘭法趁染色結(jié)果甘3.顯示逮DNA的框孚爾根反應(yīng)肺①收Feulg浪en反應(yīng)原倍理汽自Feul活gen等發(fā)例明該顯示D冬NA的Fe艇ulgen慈反應(yīng)法以來球，其作用機(jī)式制也久經(jīng)研宇究和討論，妹現(xiàn)已取得一怠致意見。其昨具體反應(yīng)原泉理是，標(biāo)本輔經(jīng)稀鹽酸水蹄解后，DN氧A分子中的級(jí)嘌呤堿基被園解離，從而悶在核糖的一尺端出現(xiàn)了醛西基。Sch鏟iff試劑準(zhǔn)中的無色品全紅可與醛基俱反應(yīng)，形成徑含有醌基的紅化合物分子恭,因醌基市為發(fā)色團(tuán)，毀故可呈現(xiàn)出悼紫紅色。也柜就是說,譯DNA經(jīng)稀傅酸水解后產(chǎn)蒜生的醛基，畢具有還原作拼用，可與無籮色品紅結(jié)合淡形成紫紅色沙化合物，從生而顯示出D體NA的分布集。其反應(yīng)機(jī)斥制如下所示紫。仇2HCl+毅Na2S2霧O5湖→秧2NaCl竊+SO2+槽H2SO3堡②茶試劑配制亞ASc寧hiff氏枯試劑的配制艦同PAS染搭色中的配方溉B亞硫假酸水(洗滌泉?jiǎng)?配制工同PAS染車色中的配方番C1m武ol/L傳HCl(水似解用)晴取82.5姿ml比重為綁1.19的妨鹽酸加蒸餾濾水1000懶ml即成(救應(yīng)將鹽酸緩拆緩加入水中葛)。③染色程序衣A陜常規(guī)切片脫閃蠟到水。剝B蝕蒸餾水稍洗掀C冷串1mol膏/LHC競(jìng)l杯中1-2澤min濟(jì)D的溫浴至押60韻℃燒的1mo翼l/LH史Cl溶液中燕水解遮15累min殲E沸取出標(biāo)本，嗚放入室溫1鞭mol/稱LHCl些溶液（注意屬:這個(gè)步奴驟非常重要臟，必須用1疊mol/村L稀鹽酸沖那洗，因?yàn)樗[可以洗去貼仗在切片上的苗試劑的痕跡獎(jiǎng)。如用蒸餾撐水沖洗，則球試劑本身也尚可以水解，糞所釋放出的圍堿性品紅，體可以使切片曲內(nèi)一切嗜堿師性物質(zhì)皆染戴色從而引起朵嚴(yán)重的錯(cuò)誤狹。若切片較灣厚，可延長(zhǎng)停其水解時(shí)間席，而且每次臣均需更換洗乖滌劑）社F癢蒸餾水沖洗體3次（使水當(dāng)解停止）悄G偽Schif滾f試劑中染灣色賞1-2小時(shí)客（暗處）爐H借用亞硫酸水蘭洗3~5次砌(以洗去多孤余的非特異蘭性色素及擴(kuò)雅散的染料)克I統(tǒng)流水沖洗有15-30爪min奪J刺蒸餾水洗片糠刻伏K按常規(guī)各燥級(jí)乙醇脫水鐵，二甲苯透上明，樹膠封護(hù)片鐮④怠實(shí)驗(yàn)結(jié)果幼細(xì)胞核中的播DNA呈鮮違亮的紫紅色廊反應(yīng)，它不獸但反應(yīng)出D燒NA存在的約部位及其分鋪布情況，而赴且還可從顏濟(jì)色反應(yīng)的深殼淺，來判斷湯DNA的相便對(duì)含量。細(xì)盤胞質(zhì)被亮綠炒復(fù)染成綠色采，核仁通常候?yàn)樨?fù)反應(yīng)；捏但在有些材立料的細(xì)胞質(zhì)馬中，DNA康也會(huì)出現(xiàn)陽腹性反應(yīng)。燈恒布慮榜先圖1億-7孚爾根絮染色結(jié)果淋⑤謙注意事項(xiàng)賴A納對(duì)照切片的無制做流撤進(jìn)行Fe凡ulgen鼠反應(yīng)時(shí),擱一般要做一父對(duì)照切片以斬便驗(yàn)證反應(yīng)屈結(jié)果。對(duì)照吵切片應(yīng)不經(jīng)囑水解直接放喝在schi誠(chéng)ff劑內(nèi)，械且應(yīng)為負(fù)反鏈應(yīng)。但需要趁注意的是，幣對(duì)照切片在扒schif瀉f試劑中最資多不要超過開1h(耀0.5h剃即可)，時(shí)巖間過長(zhǎng)，試法劑本身的酸牧性也會(huì)使D濾NA水解，襪從而出現(xiàn)假賊的正反應(yīng)。踢B宗固定劑的選吩擇典地以前很多訂人認(rèn)為，選紙用的固定劑芝不應(yīng)含有醛消基或含有氧動(dòng)化劑。后來冠發(fā)現(xiàn)含醛基駱或氧化劑的爪固定劑對(duì)反寫應(yīng)的專一性擊并沒有影響率。實(shí)踐證明任，一切好的接組織學(xué)固定水劑均適用于劇Feulg士en反應(yīng)。辯如Bham則py固定劑旗、Hell豈y固定劑、緊Flemm寶ing固定睡劑、OsO聯(lián)4固定劑、銅Carno餐y固定劑、暗z(mì)enke怕r固定劑和店Bouin咽-Alle共r固定劑。候但在上述固兵定劑中，以坦OsO4和致Carno劫y效果較好商，OsO4浸(1%或0慎.5%)是民Feulg肢en反應(yīng)的摩理想固定劑朝，只是因O躍sO4價(jià)錢努較貴，故一湯般多采用C族arnoy壞固定液。在沃Feulg跑en反應(yīng)中玻，不能單獨(dú)憲使用Bou輸in定液，債因?yàn)樗荈拾eulge澇n反應(yīng)的最津壞固定劑。紫C哄水解時(shí)間呼繪Feul煩gen反應(yīng)隊(duì)通常用稀酸塌進(jìn)行水解，茂但水解的時(shí)肆間一定要適肯當(dāng)。如水解偵時(shí)間不夠,勸反應(yīng)就會(huì)鑼變?nèi)?；如水匆解時(shí)間過長(zhǎng)留?；蛩獾亟Y(jié)過于劇烈，姨則脫氧核糖鹿也易掉下來能，反應(yīng)也會(huì)慘減弱。適當(dāng)色的水解時(shí)間更一般為8~物12min敗。但是水解渡時(shí)間長(zhǎng)短也爛要視標(biāo)本的星類型(如厚琴薄等)、固板定劑的性質(zhì)鄙以及酸的濃炎度而定。意D大Schif迎f試劑的作鑼用寶璃Feul萬gen反應(yīng)王成功與否的六一個(gè)非常關(guān)真鍵的因素，旺就是sch乖iff試劑傭的質(zhì)量。有適一大類試劑竿均稱為堿性屠品紅，它們狗實(shí)際上是由贊幾種產(chǎn)品分物別組成的。物因此只能選招用注明通“獸DNA染色蘆反應(yīng)用戒”掠的堿性品紅嗽才行。此外襲，Schi跑ff試劑的慮配制方法也云可影響DN盜A的染色反掏應(yīng)?？矗?）酶挺類顯示械細(xì)胞內(nèi)含有葛多種酶,每冠一種酶可催赴化一定的化命學(xué)反應(yīng)。酶規(guī)的顯示法是剃通過顯示酶糖的活性來表賴明酶的存在賠，而不是酶秀的本身。將田具有酶活性賤的組織放人箭含有一定底姜物的溶液中娘孵育，底物狼經(jīng)酶的作用焰形成初級(jí)反弱應(yīng)產(chǎn)物，它波再與某種捕唯捉劑相反應(yīng)蓬,形成