實(shí)驗(yàn)一試劑的配制第1頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^本實(shí)驗(yàn)，掌握常用LB液體/固體培養(yǎng)基和質(zhì)粒提取試劑的配制方法和技術(shù)，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備第2頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六二、實(shí)驗(yàn)儀器電子天平pH酸度計(jì)磁力攪拌器TOMYSS-325/245自動(dòng)蒸汽滅菌鍋第3頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六電子天平FA/JA系列稱量范圍：0～200g讀數(shù)精度：0.1mg（FA2004）1mg（JA2003）稱盤直徑：80mm（FA2004）110mm（JA2003）預(yù)熱時(shí)間：120min（FA2004）60min（JA2003）將天平置于穩(wěn)定的工作臺上，避免振動(dòng)、陽光照射和氣流使用前觀察水平儀，使水泡位于水平儀中心接通電源，開始通電工作（顯示器未工作），通常需預(yù)熱后方可開啟顯示器，進(jìn)行操作使用ON開啟顯示器鍵/OFF關(guān)閉顯示器鍵/TAR清零、去皮鍵第4頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六pH酸度計(jì)210A酸度計(jì)標(biāo)準(zhǔn)配置：210A主機(jī)1臺，9V電池1塊，910600pH電極1支，pH4.01緩沖液，pH7.00緩沖液，pH10.01緩沖液Mode鍵用來改變模式：MEASURE－CALIBRATE－SETUP用蒸餾水沖洗電極，用紙巾把電極附著的水分吸干，然后將電極插入第1點(diǎn)緩沖液（pH7.00），均勻攪拌緩沖液按mode鍵至屏幕上部顯示CALIBRATE，屏幕下部出現(xiàn)7－4，表示用7.00和4.01的緩沖液校正，按no鍵可以選擇7－10/SET/7/7－4當(dāng)屏幕下部顯示7－4或7－10時(shí)，壓yes鍵確認(rèn)屏幕出現(xiàn)P1，當(dāng)屏幕出現(xiàn)ready時(shí)，第1點(diǎn)校正完成，壓yes鍵確認(rèn)，儀器進(jìn)入準(zhǔn)備第2點(diǎn)校正，屏幕出現(xiàn)P2將電極從第1點(diǎn)緩沖液中取出，蒸餾水清洗并用紙巾吸干后，將電極插入第2點(diǎn)緩沖液，均勻攪拌緩沖液，當(dāng)屏幕出現(xiàn)ready時(shí)，第2點(diǎn)校正完成，壓yes鍵確認(rèn)，屏幕顯示電極2點(diǎn)校正后的斜率值，儀器自動(dòng)回到測量狀態(tài)將電極取出，蒸餾水清洗并用紙巾吸干后，即可測量樣品溶液第5頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六磁力攪拌器（配攪拌子）第6頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六TOMYSS-325/245自動(dòng)蒸汽滅菌鍋檢查排放蒸汽的水壺，使腔體內(nèi)的水位與托板齊平SET鍵設(shè)置溫度和時(shí)間（121℃，20min）關(guān)閉排氣閥，Start機(jī)器開始運(yùn)行，CheckHeat檢查設(shè)置的溫度，Stop鍵終止機(jī)器運(yùn)行程序運(yùn)行結(jié)束，旋開排氣閥或機(jī)器自行排氣至壓力為0。溫度降至80℃以下壓力為0時(shí)方可開蓋。運(yùn)行過程中勿接觸蓋子腔體內(nèi)經(jīng)常清潔第7頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六LB液體培養(yǎng)基25ml/2瓶+50mL/3瓶LB固體培養(yǎng)基（150ml/2瓶）——每150ml液體培養(yǎng)基中加2.25g瓊脂溶液Ⅰ（pH8.0，100ml）0.4mol/LNaOH（100ml）2％SDS（100ml）溶液Ⅲ（pH4.8，100ml）70％乙醇（100ml）50×TAE（200ml）溶液Ⅱ三、試劑配方及配制的操作步驟76，79頁第8頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六（1）LB液體培養(yǎng)基將胰蛋白胨（typtone）10g酵母提取物（yeastextract）5g氯化鈉10g完全溶解在950mL去離子水中，用NaOH調(diào)節(jié)pH至7.0，加入去離子水至總體積為1L，121℃濕熱滅菌20min。冷卻后4℃保存?zhèn)溆?。?）固體LB培養(yǎng)基：每升LB培養(yǎng)基中加15g瓊脂1.LB液體/固體培養(yǎng)基（76頁）2.氨芐青霉素(Amp)：用無菌水配制成100mg/mL溶液，置－20℃冰箱保存。第9頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六3溶液Ⅰ50mmol/L葡萄糖25mmol/LTris·HCl(pH8.0)10mmol/LEDTA(pH8.0)稱量→溶解→調(diào)節(jié)pH值→定容→滅菌4溶液Ⅱ0.4mol/LNaOH2%SDS用前等體積混合。稱量→溶解→定容5溶液Ⅲ(pH4.8)5mol/L乙酸鉀60mL冰乙酸11.5mL水28.5mL79頁第10頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六670%乙醇：放置于－20℃冰箱保存，用后即放回。7胰RNA酶將RNA酶溶于10mmol/LTris·HCl(pH7.5)、15mmol/LNaCl中，配成10mg/mL濃度，于100℃加熱15min，緩慢冷卻至室溫，保存于－20℃。8平衡酚(pH8.0)(購于申能博彩公司)第11頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六9.50×TAE（500mL）121gTris堿28.55mL冰乙酸50mL0.5mol/LEDTA(pH8.0)第12頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六四、試劑滅菌LB液體/固體培養(yǎng)基溶液Ⅰ50×TAE第13頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六實(shí)驗(yàn)課20人每班試劑配制時(shí)：25mLLB液體培養(yǎng)基/100mL錐形瓶，4瓶/10人溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ，1套/10人50×TAE，500mL/30人實(shí)驗(yàn)分組第14頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六五、思考題分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，為什么要對器具和耗材等進(jìn)行清洗和高溫濕熱滅菌？如果不