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文檔簡介
抗酸染色一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆湛顾崛旧脑砗头椒顾崛旧种U菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì),主要是分枝菌酸,它包圍在肽聚糖的外面,所以分枝桿菌一般不易著色,要經(jīng)過加熱和延長染色時(shí)間來促使其著色。但分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結(jié)合后,就很難被酸性脫色劑脫色,故名抗酸染色。齊-尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物,用鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后,分枝桿菌仍然為紅色,而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為蘭色。二、實(shí)驗(yàn)原理:四、實(shí)驗(yàn)方法:1、細(xì)菌涂片標(biāo)本的制備涂片
干燥
固定2、染色3、油鏡觀察1)初染:用玻片夾夾持涂片標(biāo)本,滴加石炭酸復(fù)紅2-3滴,在火焰高處徐徐加熱,切勿沸騰,出現(xiàn)蒸汽即暫時(shí)離開,若染液蒸發(fā)減少,應(yīng)再加染液,以免干涸,加熱3-5分鐘,待標(biāo)本冷卻后用水沖洗。2)脫色:3%鹽酸酒精脫色30’’~1’;用水沖洗。3)復(fù)染:用堿性美蘭溶液復(fù)染1’,用水沖洗后用吸水紙吸干。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果:結(jié)核桿菌呈紅色,常堆積成團(tuán),排列無序,偶呈分枝狀生長。背景及非抗酸性細(xì)菌呈蘭色。六、注意事項(xiàng):1、無菌操作2、涂片厚度要適中3、固定4、沖洗5、染色時(shí)間6、初染加熱的溫度,勿沸騰生長特點(diǎn):緩慢;2-4周可見菌落;呈乳白色或米黃色,不透明,粗糙型顆粒狀,結(jié)節(jié)狀,菜花狀菌落。
液體培養(yǎng)基中呈膜樣生長。溶菌酶的溶菌作用原理溶菌酶是正常體液和分泌液中所含的一種低分子量堿性蛋白,能水解G+菌細(xì)胞壁中的肽聚糖成分,致使細(xì)菌崩解。G-菌細(xì)胞壁肽聚糖層外面還有一層外膜,故一般情況下不受溶菌酶的影響。溶菌酶是非特異性免疫中一種重要的體液殺菌成分。材料混有溶壁微球菌的1%瓊脂平板人的唾液(含有溶菌酶)、PBS、溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品打孔器、針頭、吸管、量尺方法菌液的準(zhǔn)備:溶壁微球菌在使用前于普通瓊脂斜面?zhèn)鞔淮危缓蠼臃N于普通瓊脂斜面37℃培養(yǎng)24h。加pH6.4的1/15mol/L磷酸緩沖液,將菌苔洗下,用比濁法使每ml菌液含相當(dāng)于2000億菌體濃度,再以70℃水浴加熱1h殺菌。稱取1g優(yōu)
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