本文格式為Word版，下載可任意編輯——純化水微生物限度方法適應(yīng)性試驗方案

XXXXXXXXX有限公司

純化水微生物限度檢查方法適用性試驗方案

文件編號：YZF-QC-001-01

起草人：（QC）年月日

審核人：（QA）年月日

批準人：（質(zhì)量負責(zé)人）年月日

目錄

１.驗證目的２.驗證原理３.驗證人員４.相關(guān)文件５.驗證內(nèi)容６.驗證周期7.驗證綜合結(jié)論

1.驗證目的

建立微生物限度檢查方法適用性試驗驗證，通過驗證確認檢測所采用的方法適合于本公司所用純化水的微生物限度的測定。2.驗證原理

通過試驗數(shù)據(jù)結(jié)果，比較試驗組中試驗菌的恢復(fù)生長結(jié)果來評價整個驗證方法的確鑿性、有效性和重現(xiàn)性。3.驗證人員職位姓名負責(zé)內(nèi)容負責(zé)驗證方案的起草和實施，并對所測數(shù)據(jù)確鑿性負責(zé)。負責(zé)驗證方案的審核及依照規(guī)定的取樣計劃對標準檢驗操作程序的確鑿執(zhí)行，負責(zé)組織實施。QA負責(zé)人審核人4.相關(guān)文件

《中國藥典》2023版四部《通則1105、通則1106》5.驗證內(nèi)容

通過驗證以確認所采用的方法適合于純化水需氧菌總數(shù)的測定。根據(jù)樣品特性制訂檢驗方法和檢驗條件，按制定的方法進行試驗，根據(jù)驗證結(jié)果判斷是否符合驗證標準。若符合，就按驗證的方法和條件進行藥品的微生物限度檢查；若不符合，重新建立制訂檢驗方法和檢驗條件，再進行驗證，直至驗證結(jié)果符合設(shè)立的驗證標準。5.1微生物計數(shù)法驗證

當(dāng)建立產(chǎn)品的微生物限度檢查時，應(yīng)進行需氧菌總數(shù)計數(shù)的驗證，以確認所采用的方法適合于產(chǎn)品的需氧菌總數(shù)的測定。驗證試驗可與供試品的需氧菌總數(shù)計數(shù)同時進行。5.1.1驗證用菌種

枯草芽孢桿菌CMCC（B）63501（第一代）金黃色葡萄球菌CMCC（B）26003（第一代）銅綠假單胞菌CMCC（B）44102（第一代）白色念珠菌CMCC（F）98001（第一代）黑曲霉CMCC（F）98003（第一代）5.1.2驗證依據(jù)：中國藥典2023版四部5.1.3驗證步驟5.1.3.1菌液制備

負責(zé)驗證明施過程中的監(jiān)視檢查，取樣，確保結(jié)果的可靠性。負責(zé)驗證方案及報告的審核和批準。QC檢驗員QC負責(zé)人5.1.3.1.1分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物

至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，經(jīng)30~35℃培養(yǎng)18~24小時后，分別取金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的肉湯培養(yǎng)物0.9%無菌氯化鈉溶液1ml+9ml0.9%無菌氯化鈉溶液，10倍稀釋至10-6~10-7，細菌數(shù)為不大于100cuf/ml，做活菌計數(shù)備用。

5.1.3.1.2接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中，經(jīng)20~25℃

培養(yǎng)2到3天后，取1~2環(huán)白色念珠菌斜面培養(yǎng)物參與9ml0.9%無菌氯化鈉溶液，10倍稀釋至10-4~10-7，菌液為不大于100cfu/ml，做活菌計數(shù)備用。

5.1.3.1.3接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中，經(jīng)20~25℃培養(yǎng)

5~7天后，取黑曲霉斜面培養(yǎng)物，加3~5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液將孢子洗脫，吸出孢子懸液1ml+9ml0.9%無菌氯化鈉溶液，10倍稀釋至10-4，菌液為不大于100cuf/ml，做活菌計數(shù)備用。5.1.3.2陰性對照

為確認試驗條件是否符合要求，應(yīng)進行陰性對照試驗。5.1.3.3計數(shù)方法適用性試驗5.1.3.3.1供試液制備

取供試品10ml，加45℃PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，振

搖，放置45℃水浴保溫使其完全溶解，搖勻，作為1:10供試液，備用。5.1.3.3.2試驗組：

取1:10的供試液參與試驗菌，使1ml供試液中含菌量不大于100cfu。

經(jīng)薄膜過濾處理，取出濾膜，菌面朝上貼于瓊脂培養(yǎng)基平板上，每株試驗菌平行制備2個平皿，按平皿法測定其菌數(shù)。5.1.3.3.3菌液組：

取不含中和劑及滅活劑的相應(yīng)稀釋液替代供試液同試驗組操作。測定

所加的試驗菌數(shù)。5.1.3.3.4供試品對照組：

取制備好的供試液。以稀釋液替代菌液同試驗組操作。按菌落計數(shù)方法測定供試品本底菌數(shù)。5.1.3.3.4陰性對照組：

取0.9%無菌氯化鈉溶液，空白對照。5.1.4結(jié)果

至少應(yīng)進行3次獨立試驗。若試驗組的菌回收率均0.5～2，則照該供試液制備方法和計數(shù)法測定供試品的需氧菌總數(shù)；若任一次試驗中試驗組的菌回收率不在范

圍內(nèi)，應(yīng)采用自然沉降法、培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新進行方法驗證，使試驗組菌回收率在規(guī)定范圍內(nèi)。

5.1.4.1試驗組的菌回收率=[(試驗組平均菌落數(shù)-供試品對照組平均菌落數(shù))/菌液組平均菌落數(shù)]

5.1.4.2連續(xù)3批驗證的菌落計數(shù)結(jié)果5.1.4.2.1取樣口：總出水口

驗證試驗結(jié)果（常規(guī)法）單位（cuf/ml）技術(shù)方法試驗菌株菌濃度試驗次（ml）數(shù)菌液組供試品對照組大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌10-610-610-610-610-610-610-610-610-610-510-510-510-5黑曲霉10-510-5霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)黑曲霉白色念珠菌10-510-510-510-510-510-51231231231231231231230.5～20.5～20.5～20.5～20.5～20.5～20.5～20.5～20.5～20.5～20.5～20.5～20.5～20.5～20.5～20.5～20