微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)演示文稿當(dāng)前1頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)一環(huán)境微生物的檢測(cè)（P5-8）學(xué)習(xí)檢測(cè)環(huán)境中微生物的方法；觀察不同類群微生物的菌落形態(tài)特征，比較不同環(huán)境中微生物的類型和數(shù)量；體會(huì)無菌操作的重要性。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目號(hào)：80000039101實(shí)驗(yàn)類型：驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)?zāi)康模寒?dāng)前2頁，總共76頁?；驹恚涵h(huán)境中的微生物在營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基平板中經(jīng)過培養(yǎng)即可長成肉眼可見的菌落，從而可檢測(cè)到環(huán)境中存在的微生物的類型和數(shù)量。實(shí)驗(yàn)材料：營養(yǎng)瓊脂平板、滅菌棉簽、恒溫培養(yǎng)箱等當(dāng)前3頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)方法和步驟：（P6-7）

每四個(gè)同學(xué)為一組，每個(gè)同學(xué)一個(gè)營養(yǎng)瓊脂平板，每人各選取以下其中一種處理方法（或你感興趣的其他方法），寫好標(biāo)簽：實(shí)驗(yàn)室空氣中的微生物：比較培養(yǎng)基暴露于空氣不同時(shí)間的區(qū)別：打開皿蓋，把培養(yǎng)基平板暴露于空氣中10min，蓋好皿蓋；打開皿蓋，把培養(yǎng)基平板暴露于空氣中30min，蓋好皿蓋；2.比較洗手前后手指上微生物的區(qū)別：在培養(yǎng)皿底部用記號(hào)筆分四個(gè)區(qū)（A、B、C、D區(qū)），洗手前后分別用手指在培養(yǎng)基表面輕按。（注意不要按碎培養(yǎng)基。）蓋好皿蓋。3.口氣中的微生物：打開皿蓋，對(duì)著培養(yǎng)基吹氣。4.實(shí)驗(yàn)臺(tái)面的微生物：用滅菌棉簽揩拭實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，再用此棉簽在培養(yǎng)基表面滾動(dòng)一下，也可用同樣方法檢測(cè)你所感興趣的其他地方或物品。

處理完成后，蓋好皿蓋，倒置培養(yǎng)皿，置于37℃溫箱培養(yǎng)1-2天觀察，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。當(dāng)前4頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

將實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄于下表（P8）：表1：微生物檢測(cè)的結(jié)果記錄表處理方法（1）（2）（3）（4）菌落數(shù)量菌落特征（大小、形狀、透明度、顏色等）簡要說明菌落數(shù)量可用“+”和“-”來表示，從多到少依次表示為++++，+++，++，+，-當(dāng)前5頁，總共76頁。分析及討論：思考題：通過本次實(shí)驗(yàn)，在防止微生物污染與擴(kuò)散方面，你學(xué)到了些什么？有何體會(huì)？

當(dāng)前6頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)二顯微鏡的使用和細(xì)菌基本形態(tài)的觀察（P40-47）

學(xué)習(xí)并掌握顯微鏡，特別是油鏡的工作原理和使用方法

；熟練使用顯微鏡觀察細(xì)菌的個(gè)體形態(tài)。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目號(hào)：80000039101實(shí)驗(yàn)類型：驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)?zāi)康模寒?dāng)前7頁，總共76頁。1.光學(xué)部分:接目鏡、接物鏡、照明裝置(聚光鏡、虹彩光圈、反光鏡等).它使檢視物放大,造成物象.2.機(jī)械部分:鏡座、鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺(tái)、載物臺(tái)轉(zhuǎn)移器、粗調(diào)節(jié)器、細(xì)調(diào)節(jié)器等部件.它起著支持調(diào)節(jié)固定等作用.顯微鏡的構(gòu)造基本原理：微生物的個(gè)體很小，必須要借助顯微鏡才能看清其形態(tài)。當(dāng)前8頁，總共76頁。1.放大倍數(shù)=接物鏡放大倍數(shù)×接目鏡放大倍數(shù)2.

顯微鏡的分辨率是表示顯微鏡辨析物體（兩端）兩點(diǎn)之間距離的能力，可用公式表示為：D=λ/2n·sin(α/2)式中D：物鏡分辨出物體兩點(diǎn)間的最短距離。：可見光的波長（平均0.55m)n:物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率。：鏡口角（即入射角）。顯微鏡的放大倍數(shù)和分辨率當(dāng)前9頁，總共76頁。

1.香柏油的折射率與玻璃接近，提高了視野的照明度。

2.提高了顯微鏡的分辨率油鏡使用的原理當(dāng)前10頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)材料：玻片標(biāo)本：球狀：四聯(lián)球菌（Micrococcustetragenus

）桿狀：枯草桿菌（Bacillussubtilis

）螺旋狀：水弧菌（Vibrioaquatilis）示范片：溶血鏈球菌（Streptococcushemolyticus）其他器材：顯微鏡、香柏油、清潔劑、擦鏡紙等當(dāng)前11頁，總共76頁。用前檢查：零件是否齊全，鏡頭是否清潔。調(diào)節(jié)光亮度低倍鏡觀察：粗調(diào)、細(xì)調(diào)高倍觀察：細(xì)調(diào)油鏡觀察：高倍鏡下找到清晰的物象后，旋開高倍鏡，在標(biāo)本中央滴一滴香柏油，轉(zhuǎn)過油鏡，使油鏡鏡頭浸入香柏油中，細(xì)調(diào)至看清物象為止。換片：另換新片，必須從“3”開始操作。標(biāo)本片的清潔：用后復(fù)原：觀察完畢，上懸鏡筒，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，然后再用擦鏡紙沾取少量清潔劑擦去殘留的油，最后用擦鏡紙擦去殘留的清潔劑，后將鏡體全部復(fù)原。實(shí)驗(yàn)方法和步驟：（P44-45）主要是油鏡的使用當(dāng)前12頁，總共76頁。1.不準(zhǔn)擅自拆卸顯微鏡的任何部件,以免損壞。2.鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度3.觀察標(biāo)本時(shí)，必須依次用低、高倍鏡，最后用油鏡。當(dāng)目視接目鏡時(shí)，特別在使用油鏡時(shí)，切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。4.觀察時(shí)，兩眼睜開，養(yǎng)成兩眼能夠輪換觀察的習(xí)慣，以免眼睛疲勞，并且能夠在左眼觀察時(shí)，右眼注視繪圖。5.拿顯微鏡時(shí)，一定要右手拿鏡臂，左手托鏡座，不可單手拿，更不可傾斜拿。6.顯微鏡應(yīng)存放在陰涼干燥處，以免鏡片滋生霉菌而腐蝕鏡片。顯微鏡保養(yǎng)和使用中的注意事項(xiàng)：當(dāng)前13頁，總共76頁。四聯(lián)球菌鏈球菌水弧菌枯草桿菌細(xì)菌基本形態(tài)的觀察

利用油鏡，觀察細(xì)菌的基本形態(tài)（球狀、桿狀和螺旋狀），邊觀察邊繪圖。當(dāng)前14頁，總共76頁。觀察結(jié)果（繪圖）P46分析及討論：菌名拉丁學(xué)名放大倍數(shù)繪出在油鏡下觀察到的形態(tài)圖，注意菌體的形態(tài)、大小比例、排列，同時(shí)標(biāo)明菌名(包括拉丁學(xué)名)和放大倍數(shù)（物鏡的放大倍數(shù)×目鏡的放大倍數(shù)）當(dāng)前15頁，總共76頁。用油鏡觀察時(shí)應(yīng)注意哪些問題？在載玻片和鏡頭之間滴加香柏油有什么作用？鏡檢標(biāo)本時(shí)，為什么先用低倍鏡觀察，而不是直接用高倍鏡或油鏡觀察？影響顯微鏡分辨率的因素有哪些？思考題：（P47）當(dāng)前16頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌簡單染色及革蘭氏染色學(xué)習(xí)微生物制片、染色的基本技術(shù)；了解革蘭氏染色的原理，掌握革蘭氏染色的方法；鞏固油鏡的使用方法，熟練觀察細(xì)菌的個(gè)體形態(tài)。

實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目號(hào)：80000039102

實(shí)驗(yàn)類型：驗(yàn)證性

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模寒?dāng)前17頁，總共76頁?；驹恚汉唵稳旧?/p>

簡單染色法是只用一種染料使細(xì)菌著色以顯示其形態(tài)。染料主要有堿性染料、酸性染料和中性染料三大類，通常采用堿性染料進(jìn)行染色。因細(xì)菌在中性、堿性或弱酸性的溶液中時(shí)常帶負(fù)電荷，而染料電離后的染色部分帶正電荷，易與細(xì)胞結(jié)合使其著色。當(dāng)前18頁，總共76頁。根據(jù)細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和成分的不同革蘭氏染色法（細(xì)菌學(xué)上最常用的鑒別染色法）：當(dāng)前19頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)材料：菌種：枯草桿菌（Bacillussubtilis）大腸桿菌（Escherichiacoli）

染色液和試劑：革蘭氏染色液、簡單染色液等芽胞、鞭毛、莢膜的示范片其他器材：顯微鏡、香柏油、清潔劑、擦鏡紙等當(dāng)前20頁，總共76頁。簡單染色：（材料：牙垢）涂片→干燥→固定→染色（1-2min）→水洗→干燥→油鏡檢→繪圖革蘭氏染色：（材料：大腸桿菌、枯草桿菌）涂片→干燥→固定→結(jié)晶紫初染（1-2min）→水洗→碘液媒染（1min）→

水洗

→酒精脫色（30s內(nèi)）→水洗

→番紅復(fù)染（2min）→水洗→干燥→油鏡檢，判斷菌體的革蘭氏染色結(jié)果→繪圖實(shí)驗(yàn)方法和步驟：當(dāng)前21頁，總共76頁。觀察標(biāo)本片細(xì)胞結(jié)構(gòu)菌名染色方法圖例芽胞枯草桿菌（Bacillussubtilis）芽胞染色法鞭毛變形桿菌(Proteusvulgaris)鞭毛染色法莢膜圓褐固氮菌（褐球固氮菌）（Azotobacterchroococcum）負(fù)染色法當(dāng)前22頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:繪圖革蘭氏染色的結(jié)果牙垢中的細(xì)菌100×10枯草桿菌（示芽胞）拉丁學(xué)名放大倍數(shù)變形桿菌（示鞭毛）拉丁學(xué)名放大倍數(shù)圓褐固氮菌（示莢膜）拉丁學(xué)名放大倍數(shù)菌名形狀簡圖顏色革蘭氏染色結(jié)果大腸桿菌枯草桿菌當(dāng)前23頁，總共76頁。在進(jìn)行細(xì)菌涂片時(shí)應(yīng)注意哪些環(huán)節(jié)？P75—(1)進(jìn)行細(xì)菌制片時(shí)為什么要進(jìn)行加熱固定？在加熱固定時(shí)應(yīng)注意什么？P76—(2)你的革蘭氏染色是否成功？有哪些問題需要注意，為什么？P84—(1)現(xiàn)有一株未知桿菌，個(gè)體明顯大于大腸桿菌，請(qǐng)你鑒定桿菌是G+還是G-，如何確定你的染色結(jié)果的正確性？P84—(2)思考題：（P47）分析及討論：當(dāng)前24頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)四放線菌、酵母菌、霉菌個(gè)體形態(tài)的觀察

四大類微生物菌落形態(tài)的觀察學(xué)習(xí)放線菌、酵母菌、霉菌的制片方法，觀察其個(gè)體形態(tài)了解四大類微生物的菌落特點(diǎn)，學(xué)會(huì)從菌落形態(tài)區(qū)分四大類微生物。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目號(hào)：80000039103

實(shí)驗(yàn)類型：驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)?zāi)康模寒?dāng)前25頁，總共76頁?；驹恚?.放線菌（P72-73）：印片法：用于觀察氣生菌絲、孢子絲的形態(tài)、孢子的排列方式及形態(tài)。2.酵母菌（P73）：用呂氏堿性美蘭染色做水浸片，可區(qū)分死活細(xì)胞：

死細(xì)胞→→→藍(lán)色活細(xì)胞→→→無色3.霉菌（根霉）（P74）：挑菌做水浸片直接觀察。當(dāng)前26頁，總共76頁。青霉根霉曲霉細(xì)黃鏈霉菌（放線菌）酵母菌當(dāng)前27頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)材料：菌種：細(xì)黃鏈霉菌（平板）、釀酒酵母（試管斜面）、黑根霉（平板）玻片標(biāo)本：青霉、黑曲霉菌落標(biāo)本：

細(xì)菌（大腸桿菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌）放線菌（細(xì)黃鏈霉菌）酵母菌（釀酒酵母）霉菌（黑曲霉、黑根霉）染料：石碳酸復(fù)紅、呂氏堿性美蘭、乳酸酚其他器材：當(dāng)前28頁，總共76頁。放線菌（菌種：細(xì)黃鏈霉菌平板）印片法：用接種鏟取一小塊菌苔（連同培養(yǎng)基）放在一塊載玻片上→取另一塊載玻片稍加熱并在其上輕壓→固定→用石碳酸復(fù)紅做簡單染色片→油鏡檢→繪圖實(shí)驗(yàn)方法和步驟：當(dāng)前29頁，總共76頁。酵母菌（菌種：釀酒酵母）

在載玻片上滴一滴美蘭→用接種環(huán)取少量酵母菌與染料混勻→蓋上蓋玻片（注意防止氣泡的產(chǎn)生）→鏡檢（高倍鏡）→繪圖霉菌（菌種：根霉）

在載玻片上滴一滴乳酸酚→用解剖針小心挑取少許根霉的菌絲放在染料中→蓋上蓋玻片（注意防止氣泡的產(chǎn)生）→鏡檢（低倍鏡或高倍鏡）→繪圖標(biāo)本片的觀察：（青霉、曲霉）菌落形態(tài)的觀察：當(dāng)前30頁，總共76頁。當(dāng)前31頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:繪出所觀察微生物的個(gè)體形態(tài)圖（細(xì)黃鏈霉菌、釀酒酵母、根霉、青霉、曲霉，注意標(biāo)注清楚各部分結(jié)構(gòu)的名稱）菌名拉丁學(xué)名放大倍數(shù)當(dāng)前32頁，總共76頁。列表比較四大類微生物的菌落特征類群菌名菌落大小干濕顏色表面邊緣厚薄致密度氣味細(xì)菌放線菌酵母菌霉菌四大類微生物的菌落特征當(dāng)前33頁，總共76頁。根據(jù)你的觀察結(jié)果，呂氏堿性美蘭染色的作用時(shí)間與酵母菌死活細(xì)胞的比例的變化是否有關(guān)系？試分析原因。P76-（10）黑曲霉和黑根霉在個(gè)體形態(tài)和菌落形態(tài)上有何區(qū)別？P76-（12）思考題：分析及討論：當(dāng)前34頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)五顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

及微生物大小的測(cè)定（P47-56)了解血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造和使用方法，學(xué)會(huì)用血球計(jì)數(shù)板對(duì)酵母菌懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)。學(xué)習(xí)并掌握用測(cè)微尺測(cè)定微生物細(xì)胞大小的方法。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目號(hào)：80000039104

實(shí)驗(yàn)類型：驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)?zāi)康模寒?dāng)前35頁，總共76頁?；驹恚?/p>

每一個(gè)大方格邊長為1mm，則每一大方格的面積為1mm2，蓋上蓋玻片后，載玻片與蓋玻片之間的高度為0.1mm，所以計(jì)數(shù)室的容積為0.1mm3。

設(shè)五個(gè)中方格中總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B，

1.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法:(P52)

當(dāng)前36頁，總共76頁。

采用目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺測(cè)量微生物細(xì)胞的大小。鏡臺(tái)測(cè)微尺一般是將1mm等分為100格，因此每格長10μm，而目鏡測(cè)微尺在不同放大倍數(shù)下的每格所代表的長度是不同的，使用前須用鏡臺(tái)測(cè)微尺校正，以求得在一定放大倍數(shù)下的實(shí)際長度。2.微生物大小的測(cè)定：(P48)當(dāng)前37頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)材料：菌種：釀酒酵母菌懸液，枯草桿菌斜面其他器材：血球計(jì)數(shù)板，目鏡測(cè)微尺，鏡臺(tái)測(cè)微尺，顯微鏡，蓋玻片，載玻片，染色液等當(dāng)前38頁，總共76頁。1.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：（菌種：釀酒酵母）

鏡檢計(jì)數(shù)室→加樣品→靜止5分鐘→顯微鏡計(jì)數(shù)（每個(gè)計(jì)數(shù)室選5個(gè)中格）→記錄結(jié)果→清洗血球計(jì)數(shù)板2.微生物大小的測(cè)定：（菌種：枯草桿菌）做枯草桿菌的簡單染色片安裝目鏡測(cè)微尺（已安裝好）并用鏡臺(tái)測(cè)微尺在各物鏡下校正目鏡測(cè)微尺在油鏡下測(cè)定菌體大?。悍謩e測(cè)10個(gè)菌的寬和長，求平均值，再將所測(cè)格數(shù)乘以目鏡測(cè)微尺（油鏡）下每格代表的長度，即得該菌的實(shí)際大小。實(shí)驗(yàn)方法和步驟：當(dāng)前39頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.顯微鏡直接計(jì)數(shù)：

計(jì)算并報(bào)告該菌懸液的濃度：（寫成科學(xué)記數(shù)法，保留2位有效數(shù)字）表1：顯微鏡直接計(jì)數(shù)的結(jié)果A表示五個(gè)中方格中的總菌數(shù)；

B表示菌液稀釋倍數(shù)。各中格菌數(shù)A兩室平均A值B菌液濃度（菌數(shù)/ml）12345第一室第二室當(dāng)前40頁，總共76頁。2.微生物大小的測(cè)定：接物鏡物鏡放大倍數(shù)目鏡測(cè)微尺格數(shù)物鏡測(cè)微尺格數(shù)目尺每格的長度（

μm）

低倍鏡高倍鏡油鏡表2：用鏡臺(tái)測(cè)微尺校正目鏡測(cè)微尺的結(jié)果12345678910平均寬（格）長（格）表3：枯草桿菌細(xì)胞大小測(cè)定的結(jié)果計(jì)算出枯草桿菌的大小：寬=μm

長=μm

表示為：寬×長（保留小數(shù)點(diǎn)后1位）當(dāng)前41頁，總共76頁。

根據(jù)你實(shí)驗(yàn)的體會(huì)，說明用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的誤差主要來自哪些方面？應(yīng)如何盡量減少誤差，力求準(zhǔn)確？2.為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時(shí)，必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺重新對(duì)目鏡測(cè)微尺進(jìn)行校正？思考題：分析及討論：當(dāng)前42頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)六微生物的分離純化及生理生化試驗(yàn)了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過程；了解干熱滅菌法和高壓蒸汽滅菌法的原理，掌握其滅菌方法。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目號(hào)：80000039105

實(shí)驗(yàn)類型：

綜合性

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模孩?、培養(yǎng)基的配制及滅菌（P15-28）

當(dāng)前43頁，總共76頁?；驹恚?/p>

培養(yǎng)基是人工配制的適合微生物生長繁殖和積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)，包括碳源、氮源、能源、礦物元素、生長因子和水等生長要素。不同微生物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)和pH的要求是不同的。培養(yǎng)基在使用之前必須要處于無菌狀態(tài)，故要先滅菌。滅菌方法：高壓蒸汽滅菌法（121℃/20min

）

烘箱干熱滅菌法（160-170℃/1-2h

）原理及適用物品？

當(dāng)前44頁，總共76頁。根據(jù)來源可分為:

天然培養(yǎng)基(complex/undefinedmedium):

合成培養(yǎng)基(definedmedium):

半合成培養(yǎng)基(semi-definedmedium)：根據(jù)使用目的可分為:

（生物）鑒別培養(yǎng)基(differentialmedium)

選擇培養(yǎng)基(selectedmedium)：根據(jù)形狀可分為:

固體培養(yǎng)基（solidmedium）：

半固體培養(yǎng)基（semi-solidmedium）：

液體培養(yǎng)基（liquidmedium）：

培養(yǎng)基的類型和用途

當(dāng)前45頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)材料：藥品試劑：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基設(shè)備材料：高壓蒸汽滅菌鍋、恒壓干熱滅菌箱、天平、藥匙、電爐、燒杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、試管、棉塞、培養(yǎng)基、吸管、線繩、標(biāo)簽等。當(dāng)前46頁，總共76頁。配制培養(yǎng)基的一般程序：按使用目的選擇培養(yǎng)基----按培養(yǎng)基配方稱量各種藥品----加熱溶化----調(diào)pH（用1mol/L的HCl或NaOH)----趁熱分裝----加棉塞----包扎、標(biāo)注-----滅菌-----試管擺斜面實(shí)驗(yàn)方法和步驟：當(dāng)前47頁，總共76頁。每組配制的量：項(xiàng)目培養(yǎng)基名稱配制量及分裝做法滅菌培養(yǎng)基的配制（每一實(shí)驗(yàn)桌分成三組，每4人一組，分別配制培養(yǎng)基）1.營養(yǎng)瓊脂：（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、細(xì)菌培養(yǎng)基）(2人）三角瓶：2瓶（150ml/瓶）/2人一組試管斜面：16支（約5ml/支）/2人一組三角瓶：直接稱取相應(yīng)的干粉培養(yǎng)基置于三角瓶內(nèi)，另加0.5%的瓊脂，加水加塞、滅菌試管斜面：每2人一組，稱取100ml量的干粉培養(yǎng)基置于燒杯內(nèi)，另加0.5%的瓊脂，加水煮溶，分裝高壓蒸汽滅菌法（121℃/20min）2.馬鈴薯培養(yǎng)基（2人）無菌水試管：10支/4人（4.5ml/支）大三角瓶：1瓶（100ml）/4人自來水分裝、加塞、滅菌即得無菌培養(yǎng)皿每人10套皿（5套/包）包扎滅菌高壓蒸汽滅菌法或干熱滅菌法（160-170℃/1-2小時(shí)）無菌吸管每人5支1ml的吸管加過濾棉花、包扎滅菌即得當(dāng)前48頁，總共76頁。P20---（2）

P20---（8）

P27---（2）

P27---（3）六.思考題：五.分析及討論：當(dāng)前49頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)六微生物的分離純化及生理生化試驗(yàn)掌握稀釋平板法、平板劃線法分離純化微生物的原理及方法；學(xué)習(xí)平板菌落計(jì)數(shù)法的基本原理和方法，并掌握其基本技能。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目號(hào)：80000039105

實(shí)驗(yàn)類型：

綜合性

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模孩?、微生物的分離純化及活菌計(jì)數(shù)（P28-34）

當(dāng)前50頁，總共76頁。基本原理：

從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物分離與純化。微生物在固體培養(yǎng)基上生長形成單個(gè)菌落，通過挑取單菌落而獲得一種純培養(yǎng)。常用方法：稀釋平板法、平板劃線法基本原理：1.選擇合適的培養(yǎng)基配方；2.提供合適的生長環(huán)境，如酸堿度、溫度和氧氣；3.加入某種抑制劑，從而淘汰一些不需要的微生物。

當(dāng)前51頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)材料：培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、細(xì)菌培養(yǎng)基）、馬鈴薯培養(yǎng)基土壤樣品：從校園采集溶液和試劑：盛4.5ml無菌水試管、盛99ml無菌水三角瓶等。其他用品：無菌培養(yǎng)皿、無菌吸管、接種環(huán)、酒精燈等當(dāng)前52頁，總共76頁。

制備土壤稀釋液---加樣----倒平板--倒置培養(yǎng)----挑菌劃線純化----鏡檢----得到純種----接種到試管培養(yǎng)----保藏實(shí)驗(yàn)方法和步驟：流程：當(dāng)前53頁，總共76頁。1.制備土壤稀釋液：每管各4.5ml無菌水吸取1ml吸取1ml15-20ml融化并冷卻至45℃的培養(yǎng)基當(dāng)前54頁，總共76頁。2.按下表，根據(jù)所要分離的微生物種類，選擇適當(dāng)?shù)南♂屢簼舛?，吸?ml稀釋液加到滅菌培養(yǎng)皿中，每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)；分離的微生物所用培養(yǎng)基稀釋液的濃度培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時(shí)間細(xì)菌營養(yǎng)瓊脂10-5、10-6、10-737℃1-2天霉菌馬鈴薯培養(yǎng)基10-2、10-3、10-428℃2-3天當(dāng)前55頁，總共76頁。3.倒入溶化并冷卻到45℃的相應(yīng)的培養(yǎng)基，迅速混勻，待冷凝后倒置于相應(yīng)溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4.培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間后觀察平板上菌落的生長情況，區(qū)分細(xì)菌、霉菌的菌落，記錄相應(yīng)的菌落數(shù)；

5.挑取單菌落劃線（霉菌的要求點(diǎn)接）純化(每個(gè)純種一個(gè)編號(hào)，編號(hào)原則：菌別-班別-座位號(hào)-菌號(hào)），鏡檢，純種移接到試管培養(yǎng)。幾種劃線方法當(dāng)前56頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.記錄培養(yǎng)后平板上相應(yīng)微生物的的菌落

注：CFU/g土樣=每個(gè)平板上的菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)稀釋度10-510-610-7每個(gè)平板上細(xì)菌的菌落數(shù)123平均123平均123平均細(xì)菌CFU/g土樣稀釋度10-210-310-4每個(gè)平板上霉菌的菌落數(shù)123平均123平均123平均霉菌CFU/g土樣當(dāng)前57頁，總共76頁。按照P33和P207-208的方法，分析上面的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，報(bào)告每克土樣中所含的細(xì)菌、霉菌的CFU數(shù)。描述你所純化得到的菌種的菌落形態(tài)和個(gè)體形態(tài)。當(dāng)前58頁，總共76頁。1.怎樣判斷稀釋平板計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)是否可靠？需要掌握哪幾個(gè)關(guān)鍵？P34---（3）

2.當(dāng)你的平板上長出的菌落不是均勻分散的，而是集中在一起時(shí)，你認(rèn)為問題出現(xiàn)在哪里？P34---（6）

3.一個(gè)酵母菌的懸液樣品，分別用血球計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)法和平板菌落計(jì)數(shù)法進(jìn)行計(jì)數(shù)，其結(jié)果會(huì)有什么不同？原因是什么。試比較這兩種計(jì)數(shù)法的優(yōu)缺點(diǎn)。七.思考題：六.分析及討論：當(dāng)前59頁，總共76頁。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目號(hào)：80000039105

實(shí)驗(yàn)類型：

綜合性

（一）、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模孩蟆⑽⑸锏纳砩囼?yàn)1.掌握進(jìn)行微生物大分子物質(zhì)水解試驗(yàn)的原理和方法；2.掌握進(jìn)行抗生素的抗菌試驗(yàn)的原理和方法。實(shí)驗(yàn)六微生物的分離純化及生理生化試驗(yàn)大分子物質(zhì)的水解試驗(yàn)及抗生素的抗菌試驗(yàn)（P111）當(dāng)前60頁，總共76頁。（二）、基本原理：1.大分子物質(zhì)的水解試驗(yàn)：微生物對(duì)大分子物質(zhì)如淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪不能直接利用，必須依靠產(chǎn)生的胞外酶將大分子物質(zhì)分解后，才能被微生物吸收利用。胞外酶主要為水解酶，通過加水裂解大分子物質(zhì)為較小化合物，使其能被運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞內(nèi)。如淀粉酶將淀粉水解為小分子的糊精、雙糖、單糖。蛋白酶水解蛋白質(zhì)為小肽、氨基酸等，這些過程均可通過觀察微生物菌落周圍的物質(zhì)變化來證實(shí)，如在淀粉平板上淀粉被水解后滴加碘液時(shí)會(huì)出現(xiàn)不呈藍(lán)色的透明圈，在酪蛋白平板（牛奶平板）上蛋白質(zhì)被分解會(huì)出現(xiàn)透明圈。2.抗生素的抗菌試驗(yàn)：

抗生素為某些微生物的次生代謝產(chǎn)物，會(huì)積累在培養(yǎng)基質(zhì)中。把待試驗(yàn)的微生物連同培養(yǎng)基塊置于加有供試菌株的平板表面，經(jīng)培養(yǎng)，觀察菌塊周圍是否有抑菌圈出現(xiàn)，就可知道該菌株是否產(chǎn)生相應(yīng)的抗生素。當(dāng)前61頁，總共76頁。（三）、實(shí)驗(yàn)材料：培養(yǎng)基：酪蛋白平板（牛奶平板）、淀粉平板、營養(yǎng)瓊脂平板菌株：前個(gè)實(shí)驗(yàn)分離到的各種菌株（寫明編號(hào)）、大腸桿菌（Escherichiacoli）

、青霉(Penicilliumsp.)、細(xì)黃鏈霉菌（Stretomycesgriseus）、枯草桿菌溶液和試劑：路哥氏碘液其他用品：無菌培養(yǎng)皿、無菌吸管、接種環(huán)、酒精燈等當(dāng)前62頁，總共76頁。點(diǎn)接微生物菌種30℃培養(yǎng)2天觀察透明圈大小酪蛋白平板1.蛋白質(zhì)水解試驗(yàn)：（自己分離的細(xì)菌、霉菌和枯草桿菌對(duì)照）

2.淀粉水解試驗(yàn)：（自己分離的細(xì)菌、霉菌和枯草桿菌對(duì)照）

30℃培養(yǎng)2天加碘液，觀察透明圈大?。ㄋ模?、實(shí)驗(yàn)方法和步驟：點(diǎn)接微生物菌種當(dāng)前63頁，總共76頁。3.抗生素的抗菌試驗(yàn)：（自己分離的霉菌和青霉、細(xì)黃鏈霉菌對(duì)照）

加0.2ml大腸桿菌懸液涂布均勻挑取菌塊置于培養(yǎng)基表面營養(yǎng)瓊脂平板37℃培養(yǎng)2天觀察抑菌圈大小當(dāng)前64頁，總共76頁。（五）、實(shí)驗(yàn)結(jié)果:表1大分子物質(zhì)水解結(jié)果記錄表微生物類型菌株名或編號(hào)蛋白質(zhì)水解試驗(yàn)淀粉水解試驗(yàn)抗生素的抑菌試驗(yàn)細(xì)菌------枯草桿菌------放線菌細(xì)黃鏈霉菌-----------霉菌青霉----------將實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入表1，“+”或“++”表示陽性，“-”表示陰性當(dāng)前65頁，總共76頁。

在選擇平板上形成的透明圈的大小是否就能作為產(chǎn)酶能力的直接證據(jù)？透明圈的大小還受什么因素的影響？（七）、思考題：（六）、

分析及討論：當(dāng)前66頁，總共76頁。（一）、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模憾?、糖發(fā)酵試驗(yàn)、檸檬酸鹽試驗(yàn)和半固體穿刺法（P115-121）

了解糖發(fā)酵試驗(yàn)、檸檬酸鹽試驗(yàn)的原理，掌握通過這些試驗(yàn)鑒別不同微生物的方法。學(xué)習(xí)半固體穿刺法觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性及細(xì)菌的生長與氧的關(guān)