第六章芳酸及其酯類藥物的分析Chemicalstructure&featureIdentificationDetectionofspecificimpuritiesinAnalysisofAromaticcarboxylicacids&estersAssayAspirin,Sodiumaminosalicylate&Clofibrate⊙Aromaticcarboxylicacids水楊酸類水楊酸SAsalicylicacid阿司匹林aspirin對氨基水楊酸鈉PAS-Na貝諾酯benorilate雙水楊酯salsalate⊙苯甲酸類羥苯乙酯ethylparoben丙磺舒probenecid苯甲酸benzoicacid甲芬那酸mefenamicacidsodiumbenzoate⊙特點均有苯環(huán)、羧酸或其酯水楊酸類和苯甲酸類結(jié)構(gòu)中的羧基直接與苯環(huán)相連除了酸性基團外，各自具有本身的官能團分子中苯環(huán)、羧酸和取代基的相互影響，使芳酸的酸性強度各有不同紫堇色赭色↓米黃色↓pH5.0~6.0T.S.FeCl3pH4~6中性溶液鑒別三氯化鐵反應(yīng)堿式苯甲酸鐵鹽（赭色沉淀）加稀HCl，沉淀分解，生成游離白色⊙重氮化偶合反應(yīng)具體方法見芳香胺類藥物的鑒別⊙氧化反應(yīng)⊙異羥肟酸鐵反應(yīng)甲芬那酸＋H2SO4深藍(lán)色△黃色并產(chǎn)生綠色熒光隨即變?yōu)樽鼐G色Fe/3紫色⊙水解產(chǎn)物的反應(yīng)⊙分解產(chǎn)物的反應(yīng)⊙UV特征吸收⊙IR吸收光譜SA溶液的澄清度

酚類和酯類其他副反應(yīng)產(chǎn)生酯類易碳化物熾灼殘渣重金屬⊙PAS-Na間氨基酚Ch.P

樣品3.0g用乙醚提取，加入H2O，用HCl滴定液（0.02mol/L)滴定，生成雜質(zhì)·HCl（轉(zhuǎn)溶入H2O相，甲基橙指示劑）。滴定液不得過0.30mlUSPHPLC法

C18NaH2PO4(0.05mol/L)-Na2HPO4(0.05mol/L)-CH3OH(含氫氧化四丁基銨1.9g)(425：425：150)254nm檢測內(nèi)標(biāo)：磺胺

a.雜質(zhì)對照品法

方法：供試品→供試品溶液雜質(zhì)對照品→對照品溶液

供試品對照品

判斷：供試品中所含雜質(zhì)斑點不得超過相應(yīng)的雜質(zhì)對照斑點。優(yōu)點：同一物質(zhì)，同一Rf值比較，準(zhǔn)確度高、直觀性強。缺點：需要雜質(zhì)對照品。

供試品對照品判斷：

②供試品溶液所顯雜質(zhì)斑點不得深于對照溶液的主斑點（或熒光強度）

①控制雜質(zhì)斑點個數(shù)，控制雜質(zhì)種類⊙氯貝丁酯對氯酚（0.0025%）揮發(fā)性雜質(zhì)（0.5%）GC法5%SE-302m160℃，N2FID

雜質(zhì)以歸一化法求得直接滴定法

pKa3~6

的藥物溶于中性醇,可直接用NaOH滴定pKa6~9

的藥物要用非水溶液滴定法中性乙醇：對指示劑(酚酞)而言為中性，可消除滴定誤差乙醇作用：溶解ASA；防止ASA在水溶液中滴定過程易水解本法特點：簡單注意點：若SA不合格，不宜采用本法Aspirin丙磺舒(Ch.P.BP.JP等)苯甲酸(Ch.P等)均采用本法水解后剩余滴定法

ResidualtitrationafterhydrolysisUSP23方法：取本品約1.5g，精密稱定，準(zhǔn)確加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，水浴上煮沸15min，放冷，以酚酞為指示劑，用H2SO4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。每1ml的NaOH液(0.5ml/L)相當(dāng)于45.04mg的C9H9O4☆滴定度計算0.5規(guī)定的硫酸濃度為0.25mol/LT毫摩爾質(zhì)量兩步滴定法

Two-steptitration用于Aspirin片測定片劑中有穩(wěn)定劑水解產(chǎn)物水楊酸SAHAc枸櫞酸Citricacid酒石酸Trataricacid為了避免這些酸類的干擾，采用兩步滴定法Ch.P.阿司匹林片

取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于阿司匹林0.3g)，置錐形瓶中，加中性乙醇(對酚酞指示劑顯中性)20ml，振搖使ASA溶解，加酚酞指示液3滴，滴加NaOH液(0.1mol/L)至顯粉紅色，再精密加NaOH液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加熱15min，并時時振搖，迅速放冷至室溫，用H2SO4液(0.05mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正每1ml的NaOH液(0.1mol/L)相當(dāng)于18.02mg的C9H8O4第一步：NaOH滴定所有的酸：ASA，CA，TA，SA，HAc第二步放冷后，用H2SO4滴定液滴定剩余的NaOHV；

空白滴定消耗H2SO4

V0；(V0-V)

H2SO4則為用于中和水解ASA所需的NaOH☆計算：稱取10片重1.8240gCNaOH0.1032mol/L片粉重0.5312gC0.05120mol/L標(biāo)示量0.1g

V3.02ml

V020.18ml

直接水解后兩步

滴定法剩余滴定法滴定法

優(yōu)點

操作簡便水楊酸干擾少

結(jié)果準(zhǔn)確，避免了游離SA以及片劑中穩(wěn)定劑的干擾缺點游離水楊酸不能完全不合格時結(jié)排除干擾果偏高Ch.P氯貝丁酯的Assay采用兩步滴定法⊙雙相滴定法Titrimetryintwophases

Ch.P2005用于苯甲酸鈉的測定

苯甲酸鈉為芳酸堿金屬鹽，易溶于水；苯甲酸不溶于水，不利于終點的正確判斷因此，利用苯甲酸能溶于有機溶劑的性質(zhì)，采用雙相滴定法HCl乙醚(苯甲酸)H2O(苯甲酸鈉)0.5mol/L25ml1.5g50ml2d甲基橙

橙紅色分出H2O層，置具塞錐形瓶，乙醚層用H2O5ml洗滌，洗液并入錐形瓶，加乙醚20ml，繼續(xù)用HCl滴定，至水層顯持續(xù)的橙紅色⊙柱分配色譜-紫外分光光度法

ColumnPartitionChromatogr.

ASAcapsule

等制劑除用上述兩步滴定法外，最好用色譜法，可以分離酸性雜質(zhì)和輔料以及穩(wěn)定劑等，經(jīng)分離后同時測定ASA與SA如USP用柱分配色譜-UV測定ASACapsuleColumnPartitionChromatography,CPC擔(dān)體：硅藻土(Celite545)固定相：一定pH的緩沖水溶液流動相：與水不相混溶的有機溶劑(洗脫前必須先用水飽和)200~300mm60mm4mm22mm層析柱玻棉壓榨棒350mm21mmCPC-UV法測定ASACapsule

SA測定供試液制備用CHCl350ml洗滌，棄去(洗去ASA)10ml冰HAc-水飽和乙醚液(1→10)(使紫色配位化合物被分解，SA析出)洗脫液收集于已盛有10ml甲醇和2滴HCl的50ml量瓶中，繼用30mlCHCl3洗，并稀釋至刻度SA對照品溶液：75μg/ml，取10ml

50ml量瓶中盛有：10ml甲醇，2滴HCl和10ml冰HAc-水飽和乙醚液(1→10)，CHCl3至刻度測定：306nm測定供試液和SA對照品液﹡SA與試劑生成紫色水楊酸鐵配位化合物，在柱上移動慢，帶窄，色澤較深﹡﹡若有Fe3+洗下，黃色影響測定結(jié)果

消除干擾方法：迂底部拌有磷酸的硅藻土，生成不溶解的FePO4↓A供試液＜A對照品液L=75(μg/ml)×10m100mg×1000×100%＝0.75%ASA+SA測定供試液制備洗脫5,25mlCHCl3，棄去CHCl3洗脫10ml冰HAc-CHCl3(1→10)**；85ml冰HAc-CHCl3(1→100)，并稀釋至100ml對照品溶液50μg/ml

冰HAc-CHCl3(1→100)CPC-UV法測定ASACapsule

測定：280nm空白：CHCl3

﹡NaHCO3使ASA和SA成鹽保留于柱上

用CHCl3洗脫的目的：

去除中性或堿性雜質(zhì)﹡﹡冰HAc酸化的目的：

使ASA游離，易被

CHCl3洗脫含量測定計算公式所取膠囊細(xì)粉中ASA(mg)供試品溶液吸收度對照品溶液吸收度CPC技術(shù)的類型利用固定相酸堿性的不同進(jìn)行分離利用藥物和固定相起化學(xué)反應(yīng)而進(jìn)行分離利用生成離子對進(jìn)行層析分離單純靠選擇流動相進(jìn)行分離阿司匹林栓Aspirinsuppositories測定法咖啡因乙醇溶液4mg/ml對照品溶液：ASA對照品(約0.15g)50.0ml內(nèi)標(biāo)5.0ml供試品溶液：取本品5粒，精密稱定()，40~50℃微溫熔融，不斷攪拌下冷卻至室溫，精密稱取適量(ASA約0.15g)(W)內(nèi)標(biāo)5.0ml50.0ml乙醇50.0ml2.0ml↓2.0ml乙醇50.0ml⊙HPLC血清中ASA&SA的測定

色譜條件C18

5μm150×4.6mm

甲醇-水-正丁醇(30:20:1)經(jīng)0.5μm濾膜減壓過濾后5μlH3PO4超聲脫氣237nm內(nèi)標(biāo)：苯甲酸血清樣品的處理血清樣品100μl→加入HClO4(30%)50μl、不同濃度ASA&SA對照品稀釋液、內(nèi)標(biāo)(各濃度均為10μg/ml→混合2min→離心→進(jìn)樣血清ASA，SA和內(nèi)標(biāo)物對照品色譜圖1032