動(dòng)物冠狀病毒的研究進(jìn)展,動(dòng)物學(xué)論文內(nèi)容摘要：冠狀病毒(Coronavirus)在自然界中普遍存在,其宿主廣泛,可感染哺乳動(dòng)物和鳥(niǎo)類(lèi),是一種嚴(yán)重危害人類(lèi)健康和畜牧業(yè)發(fā)展的病原微生物。本文主要介紹了已經(jīng)知道動(dòng)物冠狀病毒的分類(lèi)、基因組構(gòu)造、常見(jiàn)的幾種動(dòng)物冠狀病毒及其診斷與防治技術(shù),并對(duì)動(dòng)物冠狀病毒與最新發(fā)現(xiàn)的新型冠狀病毒SARS-CoV-2進(jìn)行了比擬,旨在更好的了解和認(rèn)識(shí)冠狀病毒及其危害,為防控冠狀病毒引起的相關(guān)感染提供借鑒。本文關(guān)鍵詞語(yǔ)：動(dòng)物冠狀病毒,SARS-CoV-2,動(dòng)物學(xué),防治冠狀病毒在分類(lèi)上屬于冠狀病毒科，冠狀病毒屬，是一種有囊膜的單股正鏈RNA病毒，因其囊膜外表纖突規(guī)則地排列成皇冠狀，故被命名為冠狀病毒。冠狀病毒〔Coronavirus〕在自然界中廣泛存在，且極易發(fā)生基因重組和變異，導(dǎo)致新亞型或新的冠狀病毒不斷出現(xiàn)，危害極大。2022年底我們國(guó)家武漢多人出現(xiàn)不明原因肺炎，2020年1月疫情大規(guī)模爆發(fā)，當(dāng)前肺炎疫情已蔓延至全球多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，引起各界廣泛關(guān)注。經(jīng)測(cè)序鑒定發(fā)現(xiàn)引起肺炎的病原是一種新型的能感染人的冠狀病毒，WHO在2020年2月11日將本次新型冠狀病毒感染引起的肺炎命名為COVID-19(CoronaVirusDisease2022〕；同時(shí)，國(guó)際病毒分類(lèi)委員會(huì)將新型冠狀病毒命名為SARS-CoV-2(SevereAcuteRespiratorySyndromeCoronavirus2〕。縱觀整個(gè)冠狀病毒家族，其宿主廣泛，主要感染哺乳動(dòng)物和鳥(niǎo)類(lèi)，動(dòng)物為冠狀病毒及其重組提供了持久的源泉；對(duì)病毒起源進(jìn)行分析不難發(fā)現(xiàn)，很多新病毒其實(shí)是舊病毒打破了物種屏障，從一種動(dòng)物感染到另一種動(dòng)物，擁有了跨物種傳播的能力。針對(duì)當(dāng)前SARS-CoV-2流行的形勢(shì)，本文主要對(duì)動(dòng)物冠狀病毒的分類(lèi)、基因組構(gòu)造、常見(jiàn)的動(dòng)物冠狀病毒及其診斷與防治方面進(jìn)行綜述，并對(duì)人與動(dòng)物冠狀病毒的特征進(jìn)行扼要比擬，旨在更好的認(rèn)識(shí)和了解動(dòng)物冠狀病毒與新型SARS-CoV-2。1冠狀病毒的分類(lèi)根據(jù)遺傳特性和血清學(xué)的差異，可將冠狀病毒進(jìn)一步分成四類(lèi)：冠狀病毒〔-CoVs〕、冠狀病毒〔-CoVs〕、冠狀病毒〔-CoVs〕和冠狀病毒〔-CoVs〕。和冠狀病毒主要宿主為哺乳動(dòng)物，華而不實(shí)，-CoVs主要包括人冠狀病毒229E(HCoV-229E〕、人冠狀病毒NL63(HCoV-NL63〕、豬傳染性胃腸炎病毒〔TGEV〕、豬流行性腹瀉冠狀病毒〔PEDV〕、犬冠狀病毒〔Caninecoronavirus,CCoV〕和貓冠狀病毒〔FeCoV〕等。冠狀病毒主要包括人冠狀病毒HKU1(HCoV-HKU1〕、人冠狀病毒OC43(HCoV-OC43〕、嚴(yán)重急性呼吸綜合征病毒〔SARS-CoV〕、中東呼吸綜合征相關(guān)冠狀病毒〔MERS-CoV〕、鼠肝炎病毒〔MHV〕、豬血凝性腦脊髓炎病毒〔PHEV〕等。冠狀病毒主要宿主是鳥(niǎo)類(lèi)，主要包括禽傳染性支氣管炎病毒〔IBV〕和火雞藍(lán)冠病病毒〔TCoV〕等。冠狀病毒主要感染哺乳動(dòng)物和鳥(niǎo)類(lèi)，主要包括豬冠狀病毒〔PDCoV〕、亞洲豹貓冠狀病毒〔ALCCoV〕、野鴨冠狀病毒〔WiCoV〕、鵝口瘡冠狀病毒〔ThCoV〕和麻雀冠狀病毒〔SPCoV〕等。大部分冠狀病毒只對(duì)禽畜有致病性，能感染人的冠狀病毒主要集中在和屬，華而不實(shí)又以屬對(duì)人的危害最大，最近爆發(fā)的SARS-CoV-2也屬于屬冠狀病毒。2基因組構(gòu)造冠狀病毒是當(dāng)前發(fā)現(xiàn)的所有RNA病毒中基因組最大的病毒，大小在27-32kb之間。整個(gè)冠狀病毒家族的構(gòu)造類(lèi)似，其基因組5端含有一個(gè)甲基化帽構(gòu)造，3端含有一個(gè)polyA尾。在基因組5端包含一個(gè)復(fù)制酶基因ORF1ab，約占整個(gè)基因組的2/3，主要編碼病毒的非構(gòu)造蛋白〔nsp〕；其余1/3靠近3端的基因主要編碼病毒的構(gòu)造蛋白。冠狀病毒基因組被包裹在由核衣殼蛋白〔nucleocapsidprotein,N〕構(gòu)成的螺旋衣殼內(nèi)，其外進(jìn)一步被囊膜包裝呈球狀，外表有規(guī)則排列的纖突。囊膜由至少3種構(gòu)造蛋白組成：纖突蛋白〔Spike,S〕、膜蛋白〔Membrane,M〕和包膜蛋白〔Envelop,E〕。S、M、E和N蛋白是產(chǎn)生一個(gè)完好病毒粒子構(gòu)造所必須的四個(gè)病毒蛋白。另外還有一些屬冠狀病毒編碼一種與包膜相關(guān)的構(gòu)造蛋白血凝素酯酶蛋白〔hemagglutinin-esteraseprotein,HE〕。基因組構(gòu)造的差異是冠狀病毒分成不同類(lèi)群的根據(jù)，針對(duì)差異的基因構(gòu)造設(shè)計(jì)檢測(cè)試劑盒能夠有效的鑒別不同的冠狀病毒，例如當(dāng)前獲批的SARS-CoV-2檢測(cè)試劑盒是針對(duì)特異性較高的ORF1ab、N蛋白和E蛋白區(qū)域設(shè)計(jì)的。2.1纖突蛋白〔S)S蛋白是冠狀病毒構(gòu)造蛋白中最大的蛋白，是一種伸出病毒囊膜16-21nm的球棒狀跨膜糖蛋白[1]，主要作用是介導(dǎo)冠狀病毒附著在宿主細(xì)胞外表受體上，使病毒和宿主細(xì)胞膜發(fā)生融合，促進(jìn)病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞。S蛋白構(gòu)造主要包括S1和S2兩個(gè)亞基，S1主要介入病毒對(duì)宿主細(xì)胞的辨別，S2主要負(fù)責(zé)介導(dǎo)膜融合。固然S2亞基不主要介入與宿主細(xì)胞受體的結(jié)合，但S1和S2之間的互相作用可能協(xié)同決定病毒對(duì)宿主的嗜性[2,3]。蝙蝠冠狀病毒HKU4與MERS-CoV的S蛋白能與人的細(xì)胞外表受體DPP4結(jié)合，但由于HKU4不能被人的相關(guān)蛋白酶激活，因而不能進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)內(nèi)；而MERS-CoV的S蛋白相對(duì)于HKU4包含兩個(gè)突變，使其能被人的蛋白酶酶切，進(jìn)而進(jìn)入細(xì)胞；這種差異被以為可能是導(dǎo)致MERS-CoV成為人畜共患病的原因之一[4]。另外有人發(fā)現(xiàn)PEDV、TGEV、IBV、CCoV等多種冠狀病毒S1蛋白的表示出能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡信號(hào)，導(dǎo)致細(xì)胞死亡[5]。這表示清楚S1蛋白是阻斷冠狀病毒釋放和傳播的一個(gè)潛在靶點(diǎn)。2.2膜蛋白〔M)M蛋白是一種跨膜蛋白，在病毒粒子中含量最豐富，決定了病毒包膜的形狀。它在CoV組裝中扮演著的中心組織者的角色，與其它主要的構(gòu)造蛋白互相作用。M蛋白之間的互相作用是構(gòu)成包膜的主要驅(qū)動(dòng)力，但僅靠M-M的作用力缺乏以構(gòu)成病毒粒子[6];M蛋白與S蛋白之間的互相作用對(duì)于病毒粒子的組裝并不是必須的，但對(duì)S蛋白運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體中間體〔ERGIC〕并摻入到新病毒中非常關(guān)鍵[7];M蛋白與N蛋白互相作用使核衣殼以及病毒粒子內(nèi)部構(gòu)造穩(wěn)定，并促進(jìn)了病毒的組裝[7,8];M蛋白和E蛋白共同構(gòu)成病毒包膜，它們的互相作用促進(jìn)了病毒樣顆?！睼LPs〕的產(chǎn)生和釋放[9]。一般以為，病毒與細(xì)胞的互相作用是由S蛋白介導(dǎo)的，但最近的一項(xiàng)研究顯示，M蛋白在病毒早期感染入侵細(xì)胞階段也發(fā)揮著重要作用：HCoV-NL63可通過(guò)M蛋白介導(dǎo)與粘附因子硫酸乙酰肝素蛋白多糖的互相作用入侵細(xì)胞，并且這種作用不依靠S蛋白[10]。2.3核衣殼蛋白〔N)N蛋白是一種磷酸化蛋白，主要作用是與病毒基因組結(jié)合構(gòu)成核衣殼，保衛(wèi)基因組以確保病毒及時(shí)進(jìn)行復(fù)制和擴(kuò)散。在病毒組裝經(jīng)過(guò)中，N蛋白與M膜蛋白互相作用，對(duì)提高病毒在宿主中的轉(zhuǎn)錄和組裝效率有重要作用。除此之外，N蛋白還通過(guò)病毒基因組5和3末端互相作用介入基因組環(huán)化和負(fù)鏈RNA的合成經(jīng)過(guò)[11]。氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)，N蛋白具有三個(gè)不同的高度保守的構(gòu)造域：N末端構(gòu)造域〔NTD/domain1〕、C末端構(gòu)造域〔CTD/domain3〕以及一個(gè)無(wú)序的連接區(qū)域〔linkerregion,LKR〕。有研究對(duì)IBV的N蛋白進(jìn)行定點(diǎn)突變，發(fā)現(xiàn)NTD在RNA結(jié)合和病毒感染細(xì)胞經(jīng)過(guò)中至關(guān)重要[12];CTD在、和屬冠狀病毒中的序列都較保守，這講明該構(gòu)造域在不同冠狀病毒的構(gòu)造和功能上存在共性[13]。LKR將NTD和CTD分隔開(kāi)，因其富含絲氨酸和精氨酸殘基所以又被稱(chēng)為SR構(gòu)造域〔SR-domain〕，該構(gòu)造域主要介入了細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以及RNA結(jié)合經(jīng)過(guò)[14]。2.4包膜蛋白〔E)E蛋白是病毒包膜的組成成分，在病毒粒子中含量較少，在復(fù)制周期中，E蛋白在宿主細(xì)胞內(nèi)大量表示出，但最終只要小部分被整合到病毒包膜中[15]。E蛋白在細(xì)胞內(nèi)主要定位到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和ERGIC，介入CoV組裝和出芽[16]。有研究表示清楚，缺乏E蛋白的重組冠狀病毒病毒滴度顯著降低、病毒成熟經(jīng)過(guò)遭到阻礙，這講明E蛋白在病毒構(gòu)成和成熟經(jīng)過(guò)中起著重要作用[17,18]。2.5血凝素酯酶蛋白〔HE)在一些冠狀病毒中還存在著另一種構(gòu)造蛋白血凝素酯酶蛋白，分子量大小為120kD-140kD。氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)，冠狀病毒HE蛋白與丙型流感同源，因而揣測(cè)冠狀病毒的HE蛋白是由基因組與丙型流感重組產(chǎn)生。當(dāng)前對(duì)HE蛋白的研究較少，主要以為其在病毒吸附宿主細(xì)胞經(jīng)過(guò)中起作用。HE蛋白作為血凝素能結(jié)合細(xì)胞外表的唾液酸，且具有乙酰酯酶活性，被以為能夠促進(jìn)S蛋白介導(dǎo)的病毒入侵和傳播經(jīng)過(guò)[19]。3幾種重要的動(dòng)物冠狀病毒動(dòng)物冠狀病毒的主要宿主是與人類(lèi)生活息息相關(guān)的經(jīng)濟(jì)動(dòng)物，包括豬、雞、鴨、牛等，以及常見(jiàn)的寵物品種貓、狗等，因而了解動(dòng)物冠狀病毒的流行情況和基本特性有助于相關(guān)防控工作的開(kāi)展，對(duì)人類(lèi)生活健康發(fā)展有著積極意義。當(dāng)前發(fā)現(xiàn)的動(dòng)物冠狀病毒存在較多重組變異，但一般都只對(duì)本自然宿主有致病性，對(duì)人不致病，且較少出現(xiàn)跨物種傳播情況。3.1傳染性支氣管炎病毒〔IBV)冠狀病毒最早于1937年由Beaudetie和Hadson在雞身上分離出來(lái)，他們成功在雞胚中培養(yǎng)了IBV。隨后在加拿大、英國(guó)、意大利、比利時(shí)日本和印度等國(guó)家和地區(qū)都出現(xiàn)了IBV感染病例，對(duì)養(yǎng)雞業(yè)造成了很大的損失；我們國(guó)家最早于1972年初次報(bào)道在廣東分離出IBV毒株。在20世紀(jì)80年代前，由于使用了Mass型疫苗，我們國(guó)家對(duì)于IBV的防控效果比擬理想，但在90年代后新基因型的IBV毒株不斷出現(xiàn)，華而不實(shí)QX型毒株流行較為廣泛。對(duì)我們國(guó)家西南地區(qū)8株QX型IBV進(jìn)行序列分析發(fā)現(xiàn)，8株IBV存在抗原變異和致病性差異[20]。IBV只感染禽類(lèi)，雞是IBV的主要自然宿主。感染IBV后會(huì)導(dǎo)致雞傳染性支氣管炎〔IB),1～4周齡的幼雞極易感染且死亡高，感染IBV的雛雞死亡率一般在25%到30%之間，但由于宿主、病毒或環(huán)境等因素的影響，死亡率可能會(huì)增加到80%；隨著雞年齡的增長(zhǎng)，對(duì)IBV的抵抗力會(huì)逐步加強(qiáng)。IB一年四季流行，在冬春季節(jié)感染較為嚴(yán)重；有研究表示清楚，大部分IBV毒株在56℃、15分鐘或45℃、90分鐘條件下會(huì)失去感染力，在-30℃環(huán)境下可保持多年活性。3.2豬傳染性胃腸炎病毒〔TGEV)TGEV最早于1946年在美國(guó)被報(bào)道并分離，隨后歐亞多國(guó)都相繼報(bào)道了TGEV的流行情況，而我們國(guó)家則是在1958年初次發(fā)現(xiàn)該病。當(dāng)前TGEV已經(jīng)成為全球性的豬群傳染疾病，因其對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成極大危害，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織列入了B類(lèi)傳染病。1999年許井君等[21]人對(duì)大慶地區(qū)某豬場(chǎng)的TGEV流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該病呈流行性發(fā)生，且?guī)缀跛胸i都發(fā)病，10日齡以?xún)?nèi)的仔豬死亡率極高，可達(dá)100%。賀會(huì)利等[22]人調(diào)查了2021-2021年廣西地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)主要病毒性傳染病的流行情況，發(fā)現(xiàn)TGEV的陽(yáng)性率為10.87%，且近三年感染率呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。TGEV主要感染不同日齡和品種的豬，患病豬主要異常感覺(jué)和狀態(tài)為嘔吐、腹瀉和脫水，2周齡以?xún)?nèi)的仔豬發(fā)病率和死亡率較高，同時(shí)也能感染貓、狗、狐貍等動(dòng)物但不致??；感染后存活超過(guò)6至8天的仔豬能夠恢復(fù)，但經(jīng)常出現(xiàn)發(fā)育不良的情況，且這些恢復(fù)的豬能夠?qū)GE傳播到未感染的豬身上數(shù)周[23]。豬傳染性胃炎〔TGE〕的發(fā)生和流行有明顯的季節(jié)性特征，每年11月至次年4月發(fā)病率最高，夏季發(fā)病較少，這可能與TGEV不耐熱但低溫條件下較穩(wěn)定的理化特性有關(guān)。3.3豬流行性腹瀉病毒〔PEDV)當(dāng)前對(duì)養(yǎng)豬業(yè)影響較大的冠狀病毒病主要是PEDV和TGEV，十分是PEDV近年來(lái)在亞洲和歐美都造成了宏大的經(jīng)濟(jì)損失，2020-2021年美國(guó)每年因PEDV造成的損失為9-18億美元。事實(shí)上，PEDV早在1978年就已經(jīng)被鑒定出來(lái)，但之后幾十年相關(guān)的病情逐步減少。然而2018年P(guān)EDV又卷土重來(lái)，我們國(guó)家出現(xiàn)了PEDV的變異株并迅速在全國(guó)流行，所有年齡段的豬都遭到PEDV的損害，80%-100%的仔豬發(fā)病并造成了50%-90%的死亡率，對(duì)我們國(guó)家養(yǎng)豬業(yè)造成了宏大打擊[24]。近年來(lái)的數(shù)據(jù)顯示，PEDV也是我們國(guó)家豬腹瀉病的主要病因。當(dāng)前，PEDV基因II型中的高致病性流行變異株是我們國(guó)家優(yōu)勢(shì)毒株，而基因I型，如SD-M、AH-M、SQ2020和SC1402毒株出現(xiàn)較少[25]。感染PEDV的豬群可導(dǎo)致豬流行性腹瀉〔PED〕，其臨床異常感覺(jué)和狀態(tài)與TGE類(lèi)似，但PED在豬群中的傳播速度較慢，一般在4-5周內(nèi)傳遍整個(gè)豬場(chǎng)?；疾∽胸i異常感覺(jué)和狀態(tài)較嚴(yán)重且死亡率高，而成年豬大多無(wú)異常感覺(jué)和狀態(tài)。PED的流行也有一定的季節(jié)性特征，其多發(fā)生在冬季，夏季也有一些報(bào)道。3.4豬冠狀病毒〔PDCoV)PDCoV是2020年發(fā)現(xiàn)的一種新型動(dòng)物冠狀病毒，由Woo等人在香港發(fā)現(xiàn)。后續(xù)有研究收集了2007-2018年的豬臨床樣品，發(fā)現(xiàn)PDCoV的陽(yáng)性率為10.1%[26]。在2004年的一份豬腹瀉樣品中檢測(cè)到了PDCoV的病毒RNA[27]，這些證據(jù)講明PDCoV在我們發(fā)現(xiàn)之前就已經(jīng)在豬群中存在了很長(zhǎng)一段時(shí)間。2020年，美國(guó)俄亥俄州爆發(fā)了大規(guī)模的仔豬腹瀉，造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失，經(jīng)鑒定發(fā)現(xiàn)主要是由PDCoV引起；同年，韓國(guó)和加拿大也初次在豬群中檢測(cè)到了PDCoV。當(dāng)前，PDCoV已經(jīng)蔓延至世界多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)造成了極大的危害。PDCoV主要感染各年齡段的豬，但在體外具有感染廣泛物種來(lái)源細(xì)胞系的能力，可在雞和小牛中增殖，另外在自然條件下，Egberink等人檢測(cè)了137份貓血清，發(fā)現(xiàn)有2份樣品呈PDCoV陽(yáng)性[28]。與PEDV感染類(lèi)似，PDCoV感染也會(huì)引起嚴(yán)重急性萎縮性腸炎，并伴有短時(shí)的病毒血癥，導(dǎo)致豬群嚴(yán)重腹瀉或嘔吐，由此引起的脫水是哺乳仔豬的潛在死亡原因。宋亞兵等[29]人對(duì)春夏秋冬四季共420份豬腹瀉樣品進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)冬春兩季PDCoV的陽(yáng)性檢出率較高，由此揣測(cè)這兩個(gè)季節(jié)是這一傳染病的高發(fā)季節(jié)。3.5豬腸道a冠狀病毒〔PEAV)近年來(lái)，新型動(dòng)物冠狀病毒不斷出如今人們的視野中，2021年在我們國(guó)家廣東某豬場(chǎng)又發(fā)現(xiàn)了一種新的冠狀病毒豬腸道冠狀病毒〔PEAV)[30]，感染該病毒的新生仔豬出現(xiàn)水樣腹瀉、嘔吐、脫水等異常感覺(jué)和狀態(tài)，5日齡下面仔豬死亡率高達(dá)90%，但8日齡以上仔豬死亡率降至5%[31]。張帆帆等[25]人收集了廣東、福建、江西、湖南、浙江2020-2021年的豬腹瀉樣本，發(fā)現(xiàn)僅在福建省2021年的樣本中檢測(cè)到了PEAV，陽(yáng)性率為10.29%。對(duì)PEAV的序列進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)這種新型病毒與蝙蝠腸道冠狀病毒HKU2的核苷酸同源性約為95%，但不與TGEV、PEDV和PDCoV產(chǎn)生抗體穿插反響。有研究通過(guò)Bayesian分析了PEAV的起源和進(jìn)化歷史，揣測(cè)PEAV出如今約90年前，可能在豬群中已經(jīng)存在了幾十年[32]。PEAV與PEDV類(lèi)似，兩者都能引起新生仔豬腹瀉異常感覺(jué)和狀態(tài)并導(dǎo)致死亡，但PEAV臨床發(fā)病時(shí)間較PEDV晚，死亡率稍低。3.6犬冠狀病毒〔CCoV)CCoV是引起犬冠狀病毒病的主要病原，犬作為人類(lèi)最普遍的寵物種類(lèi)之一，與人密切接觸，因而研究CCoV對(duì)公共衛(wèi)生健康有著重要的意義。CCoV最早由Binn等人于1974年初次報(bào)道，隨后多個(gè)國(guó)家和地區(qū)都相繼報(bào)道了該病毒的流行，我們國(guó)家則是在1985年由徐漢坤等人初次報(bào)道了CCoV的流行。根據(jù)S蛋白的氨基酸序列以及能否存在特異的ORF-3基因，CCoV分進(jìn)一步為Ⅰ型〔CCoV-Ⅰ〕和Ⅱ型〔CCoV-Ⅱ〕，不同地區(qū)兩種血清型的流行情況不同，當(dāng)前CCoV-Ⅱ是大部分地區(qū)的主要流行基因型，少部分地區(qū)流行CCoV-Ⅰ。Tomomi等人收集了日本2018年至2020年間101只犬的直腸拭子樣本，發(fā)現(xiàn)CCoV感染犬標(biāo)本中CCoV-Ⅰ和CCoV-Ⅱ的檢出率分別為88.9%和7.4%[33]。在我們國(guó)家，CCoV-Ⅱ是主要流行基因型，王玉燕等人采集了2003至2004年81份健康犬的糞便樣本，沒(méi)有檢測(cè)出CCoV-Ⅰ，CCoV-Ⅱ的檢出率為86.4%[34];wang等人對(duì)東北地區(qū)2020至2021年的201份犬腹瀉糞便進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示CCoV的陽(yáng)性率為28.36%，陽(yáng)性樣本中CCoV-Ⅰ和CCoV-Ⅱ分別占15.79%和84.21%[35]。CCoV的宿主范圍較廣，除了能夠感染不同年齡品種的犬以外，還能感染豬、貓、大熊貓等動(dòng)物。研究表示清楚，在遺傳學(xué)上CCoV-Ⅰ與FeCoV聯(lián)絡(luò)密切，而CCoV-Ⅱ則與TGEV的序列類(lèi)似度高。感染CCoV的犬主要異常感覺(jué)和狀態(tài)為急性胃腸炎，臨床表現(xiàn)主要是嘔吐、腹瀉、厭食等，對(duì)我們國(guó)家養(yǎng)犬業(yè)危害較大。CCoV一年四季均可發(fā)生和流行，夏季相對(duì)少發(fā)。4診斷與防治動(dòng)物冠狀病毒對(duì)我們國(guó)家畜禽業(yè)發(fā)展危害極大，動(dòng)物感染病毒后主要引起不同嚴(yán)重程度的呼吸道、胃腸道、肝臟和神經(jīng)系統(tǒng)等疾病[36]，嚴(yán)重?fù)p害經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的生產(chǎn)效率；且由于易重組變異以及常潛伏于動(dòng)物體的特點(diǎn)，動(dòng)物冠狀病毒在一定程度上威脅著人類(lèi)的健康發(fā)展，因而，做好對(duì)動(dòng)物冠狀病毒的診斷和防控是非常必要的。在診斷病原方面，一般先根據(jù)疾病的流行特點(diǎn)以及患病動(dòng)物的臨床異常感覺(jué)和狀態(tài)進(jìn)行初步診斷，但部分冠狀病毒，如TGEV、PEDV和PDCoV等豬腸道冠狀病毒感染引起的臨床異常感覺(jué)和狀態(tài)非常類(lèi)似且存在混合感染，因而需要進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)對(duì)病毒進(jìn)行鑒定。動(dòng)物冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方式方法主要采用抗原檢測(cè)和抗體檢測(cè)相結(jié)合的方式方法。傳統(tǒng)抗原檢測(cè)方式方法是將待檢病毒分離出來(lái)后在細(xì)胞中進(jìn)行培養(yǎng)，通過(guò)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況判定病毒種類(lèi)，診斷疾??；但是這種方式方法耗時(shí)長(zhǎng)效率不高，加上部分冠狀病毒分離困難，可能會(huì)延誤疾病的防控，因而還需要結(jié)合其他方式方法進(jìn)行檢測(cè)。有條件的實(shí)驗(yàn)室能夠使用電鏡直接觀察病毒粒子形態(tài)進(jìn)行判定，這種方式方法較為便捷快速，但由于待檢樣品中可能存在和冠狀病毒類(lèi)似的粒子，因而需要進(jìn)一步進(jìn)行免疫電鏡檢測(cè)；另外若樣品中的病毒粒子含量較少也會(huì)影響電鏡觀察的檢出率。血清學(xué)檢測(cè)主要包括病毒中和試驗(yàn)和間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)〔ELISA〕方式方法。前者主要利用已經(jīng)知道特異性抗體檢測(cè)未知病毒，能較快速檢出病原體且能區(qū)分病毒的血清型，但缺點(diǎn)是抗體較昂貴，不利于較大規(guī)模的診斷工作；而ELISA方式方法相對(duì)經(jīng)濟(jì)成本低，且操作簡(jiǎn)便，反響更靈敏，更適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)以及疫苗接種或接觸后監(jiān)測(cè)抗體反響。另外，近年來(lái)分子生物學(xué)發(fā)展迅速，分子檢測(cè)技術(shù)也在動(dòng)物冠狀病毒診斷中得到應(yīng)用。常用分子檢測(cè)方式方法有RT-PCR、巢式RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性〔RFLP〕和基因組測(cè)序等，由于該技術(shù)高靈敏度和高時(shí)效的特點(diǎn)，這種方式方法幾乎取代了傳統(tǒng)血清學(xué)和病毒培養(yǎng)方式方法。但是若病毒RNA難以提取或已經(jīng)降解時(shí)，就需要使用血清學(xué)檢測(cè)進(jìn)行診斷。在動(dòng)物冠狀病毒病的治療方面，當(dāng)前市面上的藥物療效有限。新的藥物開(kāi)發(fā)主要基于下面幾個(gè)方向：阻斷病毒入侵宿主細(xì)胞、抑制病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)的增殖以及提高宿主的抗病毒能力等。Sirin等人針對(duì)FIPV的3CL蛋白酶研發(fā)了幾種化合物，發(fā)現(xiàn)化合物毛殼色菌素，粘酸和stubomycin具有抗病毒活性，抑制了FIPV的復(fù)制[37]。干擾素是機(jī)體抵抗病毒產(chǎn)生天然免疫反響中重要的調(diào)節(jié)因子，具有廣譜抗病毒和免疫調(diào)節(jié)的作用。趙永旭等人在初生仔豬臨床防治的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，口服rIFN-對(duì)PED有較好的防治效果，仔豬存活率達(dá)50%-70%，母豬和仔豬聯(lián)合使用優(yōu)于單獨(dú)使用，但是對(duì)嚴(yán)重病例的治療效果不佳[38]。另外還有一些RNA干擾劑、蛋白抑制劑、自噬誘導(dǎo)劑等也是抗冠狀病毒藥物研究的熱門(mén)，將來(lái)相信會(huì)有更多的作用靶點(diǎn)被發(fā)現(xiàn)。另一方面，考慮到動(dòng)物冠狀病毒感染情況和致病性的特點(diǎn)以及經(jīng)濟(jì)動(dòng)物效益的因素，當(dāng)前對(duì)這種病毒的控制是以防為主，防大于治。疫苗接種是預(yù)防和控制動(dòng)物冠狀病毒病最為有效的手段。當(dāng)前的疫苗主要包括滅活疫苗、弱毒疫苗和基因工程疫苗等，前兩者是當(dāng)下應(yīng)用最廣泛的兩種。滅活苗相對(duì)安全但免疫效果較差；而弱毒苗免疫原性好，免疫時(shí)期長(zhǎng)，一般以為弱毒疫苗是針對(duì)冠狀病毒最有效的疫苗。然而弱毒苗也存在一些安全問(wèn)題，比方毒力返強(qiáng)和散毒的風(fēng)險(xiǎn)。有研究表示清楚，針對(duì)FIPV接種S蛋白疫苗會(huì)使病情加重[39]。另外，基因重組的傾向性可能使病毒在野外的進(jìn)化和多樣性增加。為了減少重組的可能性，疫苗研發(fā)策略在不斷改良。有人提出對(duì)病毒非構(gòu)造蛋白nsp1和E蛋白進(jìn)行大量突變，重新排列基因組的3端，修改轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列，或者使用突變率高的突變毒株來(lái)顯著降低病毒毒力[7]。除此之外，加強(qiáng)動(dòng)物飼養(yǎng)管理也是做好冠狀病毒防控工作的重要一環(huán)。例如對(duì)畜禽進(jìn)行合理密度養(yǎng)殖，及時(shí)清理糞便或其他污染物，對(duì)使用的器械水源等進(jìn)行規(guī)律性殺菌或消毒，保持養(yǎng)殖環(huán)境的干凈、通風(fēng)、整潔，對(duì)出現(xiàn)患病或死亡的動(dòng)物及時(shí)隔離或撲滅；這些措施都能有效降低病毒感染率。5SARS-CoV-2與動(dòng)物冠狀病毒2020年1月30日，WHO公布將新型冠狀病毒肺炎疫情列入國(guó)際關(guān)注的突發(fā)公共衛(wèi)生事件。截止2020年2月26日，本次SARS-CoV-2疫情已經(jīng)在全球范圍內(nèi)造成7萬(wàn)多人感染，超過(guò)2700人死亡〔編者注：截止2020年3月28日，全球確診感染累計(jì)超過(guò)65萬(wàn)人，死亡人數(shù)超過(guò)3萬(wàn)，約一個(gè)月時(shí)間增加了將近10倍〕，嚴(yán)重威脅全球公共衛(wèi)生健康。對(duì)于SARS-CoV-2的來(lái)源，由于其引起的肺炎異常感覺(jué)和狀態(tài)與SARS-CoV類(lèi)似，因而最初人們將兩者進(jìn)行了比擬。當(dāng)前的相關(guān)研究結(jié)果顯示，SARS-CoV-2與SARS-CoV的基因組類(lèi)似度約為79.5%[40]，兩者都屬于SARS相關(guān)冠狀病毒，但SARS-CoV-2與SARS-CoV是兩個(gè)不同的病毒，SARS-CoV-2不是由SARS-CoV的進(jìn)化或者變異而來(lái)，他們是屬于平行的關(guān)系；在病毒的傳播能力上SARS-CoV-2比SARS-CoV強(qiáng)，但毒力與SARS-CoV相比擬弱。除了研究與SARS-CoV的類(lèi)似度，科研人員在SARS-CoV-2與其他動(dòng)物冠狀病毒的親緣關(guān)系上也做了一些研究：王楷宬等人基于冠狀病毒的1ab基因保守區(qū)域?qū)ARS-CoV-2與已經(jīng)知道的禽源冠狀病毒的親緣關(guān)系進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)兩者的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，可初步排除SARS-CoV-2來(lái)源于家禽冠狀病毒的可能[41]；中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心對(duì)SARS-CoV-2與同為冠狀病毒屬的豬源冠狀病毒PHEV進(jìn)行了基于全基因組的遺傳進(jìn)化分析，結(jié)果表示清楚兩者的核苷酸同源性?xún)H為54%[42]；另外，本實(shí)驗(yàn)室對(duì)SARS-CoV-2與PEDV＿CV777、PEAV＿GDS04＿P12、PDCoV/CHGD/2021、TGEV＿M(jìn)iller＿M(jìn)6等豬源冠狀病毒的序列進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)兩者的基因組類(lèi)似度在66.6%-68.6%，與CCoV＿CB/05的序列進(jìn)行比對(duì)，類(lèi)似度為68.5%，講明這些冠狀病毒與SARS-CoV-2的親緣關(guān)系都較遠(yuǎn)，因而可以初步排除SARS-CoV-2來(lái)源于豬或犬冠狀病毒的可能。中科院武漢病毒研究所等團(tuán)隊(duì)對(duì)SARS-CoV-2與其他蝙蝠冠狀病毒的序列進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)SARS-CoV-2與蝙蝠冠狀病毒RaTG13的全基因組序列高度類(lèi)似，其一致性為96.2%[40]；而在另一項(xiàng)溯源研究中也顯示SARS-CoV-2與蝙蝠SARS-likeCoV平行進(jìn)化，且相比于SARS-CoV,SARS-CoV-2與蝙蝠冠狀病毒存在著更密切的親緣關(guān)系[43]。當(dāng)前的溯源工作還在進(jìn)行中。由于武漢早期的肺炎患者大部分有華南海鮮市場(chǎng)接觸史，相關(guān)人員對(duì)該地區(qū)的585份樣本進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有33份樣品是SARS-CoV-2核酸陽(yáng)性，且93.9%的陽(yáng)性樣本來(lái)自存在野生動(dòng)物交易的綜合市場(chǎng)區(qū)，因而起初揣測(cè)本次SARS-CoV-2很可能來(lái)源于野生動(dòng)物。然而，中國(guó)科學(xué)院西雙版納熱帶植物園在ChinaXiv預(yù)發(fā)布平臺(tái)發(fā)表了一篇題為Decodingevolutionandtransmissionsofnovelpneumoniacoronavirususingthewholegenomicdata的研究論文〔http：///abs/202002.00033〕，其結(jié)果顯示華南海鮮市場(chǎng)并非病毒的起源地，SARS-CoV-2可能是其它地方傳入，這一結(jié)果為尋找病毒的來(lái)源以及其可能的中間宿主提供了新的思路。6瞻望近年來(lái)，不斷有新亞型或新的冠狀病毒出如今公眾視野中，并且常伴隨較大范圍的病情危害。當(dāng)下SARS-COV-2肺炎疫情已經(jīng)嚴(yán)重危害到中國(guó)乃至世界的發(fā)展，造成了宏大的損失。相關(guān)的溯源研究顯示該病毒可能來(lái)源于動(dòng)物或潛伏在動(dòng)物體內(nèi)，這使人們開(kāi)場(chǎng)重新評(píng)估其他動(dòng)物冠狀病毒對(duì)人類(lèi)的潛在危害性。事實(shí)上，當(dāng)前的研究顯示人類(lèi)生活中常見(jiàn)動(dòng)物冠狀病毒對(duì)人類(lèi)健康的危害不大，不必過(guò)于擔(dān)憂(yōu)；而對(duì)于極有可能是SARS-CoV-2宿主的野生動(dòng)物，人們則應(yīng)該避免接觸。另一方面，由于動(dòng)物在冠狀病毒傳播經(jīng)過(guò)中是華而不實(shí)一個(gè)極其重要的生物條件，因而在相關(guān)疾病防控中動(dòng)物是重點(diǎn)措施對(duì)象。做好動(dòng)物冠狀病毒的防控工作不僅僅是畜禽業(yè)正常發(fā)展的保證，也是維護(hù)人類(lèi)健康的需要。隨著各種生物技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用，我們對(duì)冠狀病毒各方面的情況都有了更深一步的認(rèn)識(shí)，這讓我們能夠更好的了解其致病機(jī)理并制定出有效的治療方案，也為今后處理相關(guān)的疾病事件提供了理論支持。以下為參考文獻(xiàn)[1]WICKRAMASINGHEIN,VANBEURDENSJ,WEERTSEA,etal.Theaviancoronavirusspikeprotein[J].VirusResearch,2020,194:37-48.[2]PROMKUNTODN,WICKRAMASINGHEIN,DEVRIEZEG,etal.ContributionsoftheS2spikeectodomaintoattachmentandhostrangeofinfectiousbronchitisvirus[J].VirusResearch,2020,177(2):127-137.[3]DEHAANCA,TELE,LIZ,etal.CooperativeinvolvementoftheS1andS2subunitsofthemurinecoronavirusspikeproteininreceptorbindingandextendedhostrange[J].JournalofVirology,2006,80(22):10909-10918.[4]YANGY,LIUC,DUL,etal.TwoMutationsWereCriticalforBat-to-HumanTransmissionofMiddleEastRespiratorySyndr