ICS11220

B41.

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T34736—2017

綿羊肺腺瘤病毒核酸斑點(diǎn)雜交檢測(cè)技術(shù)

Detectionofjaagsiektesheepretroviruswithdotblottinghybridization

2017-11-01發(fā)布2018-05-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

中華人民共和國(guó)

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

綿羊肺腺瘤病毒核酸斑點(diǎn)雜交檢測(cè)技術(shù)

GB/T34736—2017

*

中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行

北京市朝陽(yáng)區(qū)和平里西街甲號(hào)

2(100029)

北京市西城區(qū)三里河北街號(hào)

16(100045)

網(wǎng)址

:

服務(wù)熱線(xiàn)

:400-168-0010

年月第一版

201711

*

書(shū)號(hào)

:155066·1-57846

版權(quán)專(zhuān)有侵權(quán)必究

GB/T34736—2017

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GBT1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)中華人民共和國(guó)內(nèi)蒙古出入境檢驗(yàn)檢疫局北京農(nóng)業(yè)職業(yè)

:、、

學(xué)院

。

本標(biāo)準(zhǔn)起草人劉淑英齊景偉王海艷王振玲馬學(xué)恩梁化春趙澤赟孫曉林

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T34736—2017

引言

綿羊肺腺瘤病是由綿羊肺腺瘤病毒

(ovinepulmonaryadenomatosis,OPA)(Jaagsiektesheepret-

引起的一種慢性進(jìn)行性接觸傳染性的肺臟腫瘤性疾病主要特征是患羊咳嗽呼吸

rovirus,JSRV)、、。、

困難大量漿液性鼻液消瘦型肺泡上皮細(xì)胞和無(wú)纖毛細(xì)支氣管上皮細(xì)胞腫瘤性增生[1]剖檢可見(jiàn)

、、、Ⅱ。

病羊肺臟發(fā)生實(shí)變回縮不良體積變大比正常肺臟大倍肺表面有堅(jiān)實(shí)的圓形粟粒大小的灰白

,,,2~3。

色結(jié)節(jié)即腺瘤灶小結(jié)節(jié)發(fā)生融合形成形狀不一并且不規(guī)則的大結(jié)節(jié)氣道內(nèi)充滿(mǎn)泡沫狀液體抬起

,,。,

兩條后腿可從鼻孔流出泡沫狀液體即具有證病意義的小推車(chē)試驗(yàn)[2]

。

綿羊肺腺瘤病毒是引起綿羊肺腺瘤病的病原在所有已研究過(guò)的正常綿羊基因組內(nèi)都含

(JSRV)。

有約拷貝的與密切相關(guān)的內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒序列因其基因

20JSRV(endogenousretrovirus,ERVs),

結(jié)構(gòu)與綿羊肺腺瘤病毒的極為相似也稱(chēng)為內(nèi)源性綿羊肺腺瘤病毒為了區(qū)別稱(chēng)綿羊肺腺瘤

,(enJSRV),

病毒為[3]研究表明和的基因結(jié)構(gòu)在基因長(zhǎng)末端重復(fù)序列

exJSRV。,enJSRVexJSRVgag、(LTR)、

基因處區(qū)別較大特別是基因編碼跨膜蛋白區(qū)域和長(zhǎng)末端重復(fù)序列的區(qū)是個(gè)高可

env,env(TM)U32

變區(qū)所以在檢測(cè)病原時(shí)在這個(gè)高可變區(qū)處設(shè)計(jì)特異性引物和制備特異性探針來(lái)排除

。exJSRV,2

[4][5]

enJSRV。

到目前為止全世界都沒(méi)有建立統(tǒng)一特異性診斷該病的方法[1]其原因有三個(gè)方面一是該病的潛

,。:

伏期較長(zhǎng)病程較長(zhǎng)對(duì)處于潛伏期或臨床癥狀不明顯的病羊很難發(fā)現(xiàn)二是病羊體內(nèi)檢測(cè)不到循環(huán)抗

,,。

體很難用常規(guī)的免疫學(xué)方法進(jìn)行診斷三是引起該病的病原綿羊肺腺瘤病毒仍未建立體外培

,,(JSRV)

養(yǎng)體系所以常規(guī)的病毒分離鑒定方法也無(wú)法利用目前對(duì)該病的診斷還主要依靠臨床癥狀和病理組

,。

織學(xué)檢查所以建立特異性診斷該病的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)將在國(guó)家出入境檢驗(yàn)檢疫國(guó)內(nèi)種羊安全評(píng)價(jià)羊場(chǎng)檢

。、、

疫清群等方面具有非常重要的意義

。

Ⅱ

GB/T34736—2017

綿羊肺腺瘤病毒核酸斑點(diǎn)雜交檢測(cè)技術(shù)

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定綿羊肺腺瘤病毒核酸斑點(diǎn)雜交檢測(cè)的試劑材料和設(shè)備抽樣操作方法結(jié)果判定等

、、、、。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于檢測(cè)臨床疑似病羊和進(jìn)出口種羊肺組織或外周血液樣品中綿羊肺腺瘤病毒核酸也

,

適用于羊臨床樣品中綿羊肺腺瘤病病原的快速檢測(cè)

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

3術(shù)語(yǔ)和定義縮略語(yǔ)

、

31術(shù)語(yǔ)和定義

.

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件

。

311

..

斑點(diǎn)雜交dotblottinghybridization

利用核酸探針在雜交膜上與待測(cè)樣本核酸雜交核酸探針帶有供反應(yīng)后檢測(cè)的合適標(biāo)記

,DNA,

物并與特異靶分子結(jié)合形成雜交體再用呈色反應(yīng)顯示斑點(diǎn)雜交是直接將待檢羊只的組織或血液樣

,,。

品變性后點(diǎn)樣于硝酸纖維素膜或尼龍膜上再與制備的特異性探針進(jìn)行雜交來(lái)檢測(cè)樣品中的前

DNA,,

病毒的分子雜交技術(shù)

DNA。

32縮略語(yǔ)

.

下列縮略語(yǔ)適用于本文件

。

鳥(niǎo)類(lèi)病毒反轉(zhuǎn)錄酶

AMV:RNA(AvianMyeloblastosisVirus)

溴氯吲哚磷酸鹽

BCIP:5--4--3--(5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-Phosphate)

互補(bǔ)

cDNA:DNA(ComplementaryDNA)

脫氧核糖核酸

DNA: