殘留溶劑GC檢查內(nèi)容提綱一、殘留溶劑簡介二、檢測器三、溶媒四、供試品溶液的配制五、頂空瓶中樣品體積六、色譜柱七、溫度八、進(jìn)樣方式九、提高靈敏度十、提高分離度十一、未知峰歸屬十二、方法驗證一、殘留溶劑簡介ICH關(guān)于殘留溶劑的定義藥物中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產(chǎn)工藝中，以及在制劑制備過程中使用過或產(chǎn)生的有機揮發(fā)物。它們在實際的生產(chǎn)工藝中未能被完全去除。由于殘留溶劑沒有療效，故所有的殘留溶劑應(yīng)盡可能除去，以符合產(chǎn)品規(guī)范、GMP或其它基本的質(zhì)量要求。一、殘留溶劑簡介分類

第一類溶劑：人體致癌物、疑為人體致癌物或環(huán)境危害物

第二類溶劑

有非遺傳致癌毒性或其他不可逆毒性、或其他嚴(yán)重的可逆毒性

第三類溶劑

對人體低毒

第四類溶劑

尚無足夠毒理學(xué)資料

由于殘留溶劑沒有療效，故所有的殘留溶劑應(yīng)盡可能除去，以符合產(chǎn)品規(guī)范、GMP或其它基本的質(zhì)量要求。一、殘留溶劑簡介相關(guān)規(guī)定

ICHQ3C—殘留溶劑指南ChP2010、USP36、BP2009、EP7.0、JP16

二、檢測器FID（火焰電離）——質(zhì)量型檢測器，適用于有機物NPD（熱表面電離）——氮/磷化合物ECD（化學(xué)電離）——半選擇性的檢測器，適用于電負(fù)性物質(zhì)（鹵代烴）。多數(shù)情況下，三氯甲烷、DMF、DMSO均用FID檢測，但需采取一些措施提高檢測靈敏度。四氯化碳則必須用ECD檢測器。三、溶媒選擇原則：溶解樣品，并對色譜柱無損壞，不干擾測定。例如：直接進(jìn)樣不能含GC不能分析的無機鹽

頂空進(jìn)樣溶媒：首選水，其次DMF、DMSO、不揮發(fā)酸堿溶液，不可使用鹽酸溶液和氨水，可選擇在80～90℃加熱能溶解樣品的試劑。頂空進(jìn)樣溶媒：如待查成分為苯、甲苯、三氯甲烷等水溶性不好的溶劑，可采用混合液，即先用少量乙醇或甲醇溶解待查溶劑再用水稀釋。頂空進(jìn)樣溶劑：當(dāng)待測溶劑在有機相中的分配系數(shù)明顯大于水相（例如三氯甲烷），對頂空進(jìn)樣來說采用有機相如DMF為溶劑不是很好的選擇；如果樣品也只能在有機相中溶解，建議采用混合液。直接進(jìn)樣溶媒：水、合適的有機溶媒或混合液。對于非極性色譜柱，水對柱有影響，會縮短柱的使用壽命。四、供試品溶液的配制不可超聲或加熱助溶，以免殘留溶劑揮發(fā)；如果頂空進(jìn)樣，樣品置頂空瓶封蓋之后可以超聲或加熱溶解。大顆粒樣品不可以研磨取樣，只能取原態(tài)樣品（或冷凍粉碎）。四、供試品溶液的配制頂空進(jìn)樣方式要求對照品配制與供試品配制方法應(yīng)絕對一致，否則頂空瓶中氣液平衡狀態(tài)有差異（基質(zhì)效應(yīng)）。對照品配制最好采用標(biāo)準(zhǔn)加入法。五、頂空瓶中樣品體積Cg＝Co/（K＋β）其中β＝Vg/Vs，K＝Cs/Cg，當(dāng)K>>β時，樣品體積改變對靈敏度影響很小。當(dāng)K<<β時，影響很大。頂空樣品瓶中的樣品體積（Vs）對分析結(jié)果影響很大，因為它直接決定了相比β。五、頂空瓶中樣品體積例如：分析水中的二氧六環(huán)和環(huán)己烷，60oC平衡，兩者的K分別為642、0.04。當(dāng)樣品體積由1ml增加至5ml，二氧六環(huán)的峰面積只提高了1.3％，而環(huán)己烷卻提高了452％。根據(jù)實際經(jīng)驗來說，20ml頂空瓶樣品裝量為5ml比較適當(dāng)。六、色譜柱殘留溶劑檢查大多需要較高的分離度和檢測靈敏度，通常采用毛細(xì)管色譜柱。填充柱口徑大，造成溶劑峰擴散，檢測靈敏度低＊實踐證明，使用非極性至中等極性色譜柱，配合適當(dāng)柱溫梯度可分離大部分有機溶劑。通常待查溶劑數(shù)目僅兩、三種時，可用極性較強的色譜柱，出峰快，分析時間短；當(dāng)溶劑數(shù)目較多時，還是優(yōu)選非極性至中等極性柱，分離較好。非極性柱弱極性柱中低極性柱中等極性柱商品名DM-1,DB-1,HP-1,SPB-1,BP-1,SE-30,Rtx-1,ZB-1,AT-1,CP-Sil5CB等DM-5,DB-5,HP-5,SPB-5,BP-5,SE-52,Rtx-5,ZB-5,PE-5,SE-54,CP-Sil8CB等DM-35,DB-35,HP-35,SPB-35,BP-35,Rtx-35,ZB-35,等DM-1701,HP-1701,SPB-7,ZB-1701,Rtx-1701,CP-Sil19CB等化學(xué)成分100％二甲基聚硅氧烷5%苯基-甲基聚硅氧烷35%苯基65%甲基聚硅氧烷14%氰苯基86%甲基聚硅氧烷六、色譜柱中等/強極性極性柱極性柱商品名DB-225,HP-225,SP-225,BP-225,DB-23，Rtx-225,AT-225,OV－225等DB-WAX,HP-INNOWAX,DB-WAXetr,CP-WAX,ZB-WAXDB-FFAP,HP-FFAP,CP-FFAP，OV-3501等化學(xué)成分50％氰丙基甲基聚硅氧烷聚乙二醇（PEG）硝基對苯二酸改性的聚乙二醇五、色譜柱七、溫度色譜柱：初溫應(yīng)接近樣品中最輕組分的沸點，而終溫則取決于最重組分的沸點，升溫速率則要依樣品的復(fù)雜程度。進(jìn)樣口：一般接近沸點最高的組分，但要低于易分解組分的分解溫度。常用的條件是200～250oC。檢測器：原則是避免流出色譜柱的組分冷凝。FID檢測器通常設(shè)置為250～300oC。頂空瓶平衡溫度：溫度越高，蒸汽壓越高，頂空氣體的濃度越高，分析靈敏度越高。待測組分的沸點越低，對溫度越敏感。但溫度的改變只影響分配系數(shù)K，并不影響相比β。Cg＝Co/（K＋β）

七、溫度例如：水溶液中的甲醇、甲乙酮、甲苯、正己烷和四氯乙烯，80oC平衡溫度與40oC平衡溫度相比，甲醇在頂空氣體中的濃度增加5.15倍，甲乙酮濃度增加2.61倍，甲苯只增加25%，而正己烷和四氯乙烯，分別增加2.6%和10.4%。

七、溫度實際工作中往往是在滿足靈敏度的條件下，選擇較低的平衡溫度。過高的溫度可能導(dǎo)致某些組分的分解和氧化。一般采用高沸點溶劑時，樣品比較穩(wěn)定的情況下，推薦80oC左右的平衡溫度。注意：平衡溫度過高頂空瓶會爆瓶七、溫度八、進(jìn)樣方式作為殘留溶劑檢查，頂空進(jìn)樣有許多優(yōu)越性，不需要對樣品進(jìn)行特殊處理，不用擔(dān)心樣品中不揮發(fā)組分對GC分析的影響。直接進(jìn)樣對儀器要求低，由于部分實驗室不具備頂空進(jìn)樣器，該方法的應(yīng)用也具普遍性。八、進(jìn)樣方式對于待測溶劑在溶解樣品的溶劑中溶解度?。ǚ峙湎禂?shù)?。┑那闆r下，例如三氯甲烷在水溶液中，采用頂空進(jìn)樣方式測得的靈敏度將大于直接進(jìn)樣；反之，例如甲醇與水互溶性好，直接進(jìn)樣的靈敏度將大于頂空進(jìn)樣。測定二氯甲烷、三氯甲烷等鹵代烴時，如果溶劑為水，直接進(jìn)樣容易造成FID檢測器滅火，此時優(yōu)選頂空進(jìn)樣。八、進(jìn)樣方式無論是采用細(xì)口徑或粗口徑，均可選擇不分流進(jìn)樣，提高靈敏度。當(dāng)然，采用不分流進(jìn)樣也要考慮溶媒性質(zhì)，揮發(fā)性太大的溶媒對色譜柱污染較大。直接進(jìn)樣要考慮樣品性質(zhì)。頂空進(jìn)樣體積可達(dá)到1ml氣體，而直接進(jìn)樣只能1至3ul液體。八、進(jìn)樣方式甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷等一般不宜用頂空進(jìn)樣方式測定九、提高靈敏度

對于限度要求很嚴(yán)格的溶劑，或貴重樣品取樣量有限制時，或檢測器對該溶劑靈敏度低的情況下＊，采取一些措施提高靈敏度是方法成敗的關(guān)鍵。溶劑溫度不分流進(jìn)樣頂空瓶體積九、提高靈敏度利用鹽析作用，即在水溶液中加入無機鹽來改變揮發(fā)性組分的分配系數(shù)。常用高濃度，甚至用飽和濃度。鹽析作用對極性組分的影響遠(yuǎn)大于對非極性組分的影響。

例如：在水溶液樣品溶劑中加入0.01mol/L氯化鈉溶液可使甲醇、乙醇靈敏度提高5倍（這種方法不常用）。九、提高靈敏度在有機溶液中加入水，可以減少有機物在有機相中的溶解度，增大其在頂空氣體中的含量（常用）。例如：采用FID檢測器測定三氯甲烷，DMF為溶媒，頂空進(jìn)樣1ml氣體，分流比5：1，限度濃度的對照品溶液檢不出峰。

改變條件可檢出很明顯的色譜峰，靈敏度可達(dá)到限度的五十分之一。十、改善分離度程序升溫增大分流比使用不同