第十四章細(xì)胞因子檢測(cè)

P150一.細(xì)胞因子檢測(cè)應(yīng)注意的問(wèn)題1.欲了解機(jī)體免疫功能，應(yīng)檢測(cè)多項(xiàng)細(xì)胞因子，如細(xì)胞免疫應(yīng)測(cè)IL-2、TFN-γ等2.局部取標(biāo)本：細(xì)胞因子由局部細(xì)胞產(chǎn)生，在血液中濃度極低，最好取局部體液或細(xì)胞3.動(dòng)態(tài)檢測(cè)比較，如疾病的復(fù)發(fā)期、緩解期、恢復(fù)期4.同一細(xì)胞因子選用多種方法聯(lián)合檢測(cè)，各種方法檢測(cè)結(jié)果不一定平衡二.檢測(cè)方法（P161）生物學(xué)方法免疫學(xué)方法分子生物學(xué)方法（一）生物學(xué)方法原理：根據(jù)不同細(xì)胞因子生物學(xué)活性（功能)不同而設(shè)計(jì)的方法如IL-2可促進(jìn)T淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)；TNF可殺腫瘤細(xì)胞；CSF可刺激造血細(xì)胞形成集落；IFN可保護(hù)細(xì)胞免受病毒攻擊。具體方法：細(xì)胞增殖法靶細(xì)胞殺傷法誘導(dǎo)的產(chǎn)物分析法細(xì)胞病變抑制法1.細(xì)胞增殖法原理：一些細(xì)胞因子可專(zhuān)一刺激某些細(xì)胞增殖，而且細(xì)胞增殖的程度與這些細(xì)胞因子活性呈正相關(guān)。如：IL-2——T細(xì)胞，IL-3——肥大細(xì)胞，IL-6——漿細(xì)胞。這些只依賴(lài)某種細(xì)胞因子才能生長(zhǎng)的細(xì)胞系稱(chēng)為依賴(lài)細(xì)胞株。

如人IL-2對(duì)鼠T細(xì)胞有生長(zhǎng)支持作用一定數(shù)量鼠T細(xì)胞+每孔分別加不同劑量的IL-2培養(yǎng)根據(jù)鼠T細(xì)胞生長(zhǎng)情況，制作IL-2的標(biāo)準(zhǔn)曲線（數(shù)孔）2.靶細(xì)胞殺傷法

有的細(xì)胞因子能殺傷靶細(xì)胞（腫瘤細(xì)胞），利用同位素釋放法或染色法等可判定其殺傷率3.細(xì)胞因子誘導(dǎo)的產(chǎn)物分析法某些細(xì)胞因子可刺激特定的細(xì)胞產(chǎn)生生物活性物質(zhì)，通過(guò)測(cè)定其誘生產(chǎn)物來(lái)反映細(xì)胞因子活性如IL-2、IL-3可誘導(dǎo)骨髓產(chǎn)生組胺；IL-6誘導(dǎo)肝細(xì)胞產(chǎn)生-抗糜蛋白酶；4.細(xì)胞病變抑制法干擾素可阻止病毒侵害細(xì)胞，可用相關(guān)試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)驗(yàn)干擾素含量。血凝素生成抑制試驗(yàn)：

小鼠腦脊髓心肌炎病毒可感染人肺癌A549細(xì)胞，該病毒在生長(zhǎng)過(guò)程中可產(chǎn)生血凝素，使人O型RBC凝集

試驗(yàn)管：A549細(xì)胞（已長(zhǎng)好）加一定量干擾素培養(yǎng)一定時(shí)間加病毒培養(yǎng)反復(fù)凍融稀釋不同倍數(shù)加O型血球觀察凝集情況

陽(yáng)性對(duì)照加標(biāo)準(zhǔn)IFN；陰性對(duì)照不加IFN。

在IFN標(biāo)準(zhǔn)劑量曲線上查出IFN量（二）免疫學(xué)檢測(cè)法

細(xì)胞因子為蛋白質(zhì)或多肽，具有較強(qiáng)的免疫原性，可用其特異性抗體來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。常用的檢測(cè)方法是ELISA、流式細(xì)胞分析法、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)。定量測(cè)定（三）分子生物學(xué)方法利用細(xì)胞因子基因探針檢測(cè)特定的細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的技術(shù)常用方法：斑點(diǎn)雜交、逆轉(zhuǎn)錄PCR、Northernblot、細(xì)胞或組織原位雜交等試劑：核酸探針——一段用放射性同位素或其他標(biāo)記物（生物素、地高辛等）標(biāo)記的一段DNA片段，單鏈DNA、RNA片段，它可與目的基因mRNA互補(bǔ)此法靈敏、快速三種方法優(yōu)缺點(diǎn)比較

優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)生物學(xué)敏感、測(cè)功能長(zhǎng)期培養(yǎng)依賴(lài)細(xì)胞株、費(fèi)時(shí)步驟煩瑣、影響因素多免疫學(xué)簡(jiǎn)單迅速只檢測(cè)量，不代表活性，敏感重復(fù)好度低（較生物學(xué)法低10~100倍）分子生