標準解讀

GB/T 17999.9-1999是一項中華人民共和國國家標準，全稱為《SPF雞間接免疫熒光試驗》。該標準詳細規(guī)定了使用SPF（無特定病原體）雞進行間接免疫熒光試驗的方法、要求及判定準則，旨在為獸醫(yī)學研究、禽類疾病診斷以及疫苗效果評估提供統(tǒng)一的操作規(guī)范和技術(shù)指導。

標準內(nèi)容概覽：

  1. 范圍：明確了本標準適用的范圍，即適用于利用SPF雞作為模型，通過間接免疫熒光技術(shù)來檢測抗原或抗體的存在，特別是在研究禽類傳染病及其免疫反應(yīng)時的應(yīng)用。

  2. 規(guī)范性引用文件：列出了實施本標準時需要參考的其他相關(guān)國家標準或國際標準文獻，確保試驗方法的準確性和可比性。

  3. 術(shù)語和定義：對標準中涉及的專業(yè)術(shù)語進行了明確界定，如SPF雞、間接免疫熒光試驗等，幫助讀者理解基礎(chǔ)概念。

  4. 試劑與材料：詳細描述了進行試驗所需的各種試劑、抗體標記物、細胞培養(yǎng)基質(zhì)及其他實驗器材的具體要求和質(zhì)量標準，確保試驗的一致性和可靠性。

  5. 試驗動物與樣本處理：規(guī)定了SPF雞的選擇標準、飼養(yǎng)條件以及樣本（如血清、組織切片）的采集、保存和預處理方法，確保樣本質(zhì)量符合試驗要求。

  6. 試驗步驟：詳述了從樣本固定、抗體孵育、熒光標記次抗體應(yīng)用到熒光觀察的全過程操作步驟，每一步都配有具體的操作指導和注意事項，以保證試驗的準確執(zhí)行。

  7. 結(jié)果判定：提供了判斷試驗結(jié)果陽性和陰性的標準，包括熒光信號的強度、分布模式等判讀依據(jù)，以及如何區(qū)分非特異性反應(yīng)。

  8. 試驗報告：規(guī)定了試驗結(jié)束后應(yīng)記錄和報告的信息內(nèi)容，如試驗條件、所用試劑批號、觀察結(jié)果及結(jié)論等，確保試驗結(jié)果的可追溯性和透明度。

  9. 安全與防護：強調(diào)了在進行間接免疫熒光試驗過程中應(yīng)采取的安全措施和生物防護要求，以保護操作人員和實驗室環(huán)境的安全。

注意事項：

  • 本標準著重于標準化操作流程，確保不同實驗室間結(jié)果的可比性。
  • 實驗操作需嚴格遵守生物安全規(guī)范，防止病原體泄露和交叉污染。
  • 試驗結(jié)果的解釋需結(jié)合臨床癥狀和其他實驗室檢測結(jié)果綜合判斷。

此標準為SPF雞間接免疫熒光試驗提供了全面的技術(shù)框架，對于提升我國在禽病防控和研究領(lǐng)域的技術(shù)水平具有重要意義。


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  • 被代替
  • 已被新標準代替，建議下載現(xiàn)行標準GB/T 17999.10-2008
  • 1999-11-10 頒布
  • 2000-04-01 實施
?正版授權(quán)
GB/T 17999.9-1999SPF雞間接免疫熒光試驗_第1頁
GB/T 17999.9-1999SPF雞間接免疫熒光試驗_第2頁
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GB/T 17999.9-1999SPF雞間接免疫熒光試驗-免費下載試讀頁

文檔簡介

TCS.65.020.30B41中華人民共和國國家標準GB/T17999.9-1999SPF雞間接免疫熒光試驗SPFchicken-Indirectimmunofluorescentassay1999-11-10發(fā)布2000-04-01實施國家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

GB/T17999.9-1-1999雞傳染性貧血(CIA).是近年來新發(fā)生的雞病，國外均對其進行監(jiān)測。CIA在我國雞群中也有流行，因此·SPF雞微生物學質(zhì)量控制國家標準將其列入監(jiān)測項目。目前國內(nèi)已建立了SPF雞監(jiān)測CIA的通用方法一-間接免疫熒光試驗(IFA)該方法已得到應(yīng)用和驗證，在此基礎(chǔ)上制定本標準。SPF雞微生物學質(zhì)量控制國家系列標準.包括SPF雞微生物學監(jiān)測總則和9種SPF雞微生物學檢測方法。本標準為《SPF雞間接免疫熒光試驗》。SPF雞微生學檢測方法還包括以下部分：GB/T17999.1—1999SPF雞紅細胞凝集抑制試驗;GB/T17999.2-1999SPF雞血清中和試驗；GB/T17999.3—1999SPF雞血清平板凝集試驗；GB/T17999.4—1999SPF雞瓊脂擴散試驗；GB/T17999.5—1999SPF雞酶聯(lián)免疫吸附試驗;GB/T17999.6—1999SPF雞胚敏感試驗：GB/T17999.7—1999SPF雞雞白沙門氏菌檢驗；GB/T17999.8-1999SPF雞試管凝集試驗。本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部、國家科學技術(shù)部提出本標準由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)司歸口，本標準起草單位：北京市農(nóng)林科學院畜牧獸醫(yī)研究所、農(nóng)業(yè)部實驗動物研究中心本標準主要起草人：周文平、趙立紅、陳德威

中華人民共和國國家標準SPF雞間接免疫熒光試驗GB/T17999.9-1999SPrchicken-indirectimmunofluorescentassay1范圍本標準規(guī)定了間接免疫熒光試驗試劑、材料、操作程序及結(jié)果判定等本標準適用于SPF雞感染雞傳染性貧血病毒(ChickenInfectiousAnaemiaVirus.CIAV)后的抗體監(jiān)測2原理間接免疫熒光試驗，以病毒感染細胞作抗原，與待檢血清中的特異抗體結(jié)合，再與熒光色素標記的抗抗體結(jié)合.形成抗原-抗體-抗抗體復合物。熒光色素在紫外光或藍紫光的作用下，激發(fā)出可見的熒光因此出現(xiàn)熒光就說明標記物的存在，同時也反映了特異性抗體的存在。常采用已知抗原及熒光色素標記的抗抗體檢測相應(yīng)的抗體。3試驗和器材3.1試劑3.1.1陰性、陽性血清。3.1.2被檢血清。3.1.3PBS(O.01M、pH7.2)。3.1.4FITC-免抗雞IgG(按說明稀釋使用)3.1.5緩沖廿油。3.2材料3.2.1濕盒。3.2.2培養(yǎng)箱。3.2.3炎光顯微鏡。操作程序4.1感染細胞的制備用MDCC-MSB-1細胞制備雞傳染性貧血病毒感染細胞及未感染細胞(病毒培養(yǎng)技術(shù)參見有關(guān)文獻）4.2抗原片的制備4.2.1收集培養(yǎng)48h的細胞培養(yǎng)物,1500r/min離心10min,棄上清液.用PBS洗滌細胞沉淀物三歡，以少量PBS重懸細胞。4.2.2取10“L細胞懸液

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