動(dòng)物細(xì)胞融合與動(dòng)物細(xì)胞融合

目標(biāo)：1、舉例說出動(dòng)物細(xì)胞融合的原理和應(yīng)用2、單克隆抗體的制備和應(yīng)用細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法仙臺(tái)病毒

一、動(dòng)物細(xì)胞融合

2、過程：1、概念：用

誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過程細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核思考討論：1、滅活的病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理是：2、為什么細(xì)胞融合過程中使用的病毒需要滅活？滅活的病毒用途誘導(dǎo)方法融合前處理方法原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理法（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)法（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合融合前的處理方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較單克隆抗體二、單克隆抗體1、什么是抗體？其本質(zhì)是什么？

2、傳統(tǒng)的抗體生產(chǎn)方法及缺陷是什么？抗體是從何來的？B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體。

抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。3、B淋巴細(xì)胞有什么特點(diǎn)？

（１）．B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。（２）．動(dòng)物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對(duì)特定的抗原具有特異性免疫作用。（３）．每一個(gè)淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。3、B淋巴細(xì)胞有什么特點(diǎn)？單克隆抗體及特點(diǎn)：?jiǎn)慰寺】贵w及特點(diǎn)：

由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。?，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。

特異性強(qiáng)、靈敏度高

遺憾的是……單克隆抗體制備過程？1、單克隆抗體：2、特點(diǎn)：?jiǎn)慰寺】贵w制備過程單克隆抗體制備過程

注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體視頻\單克隆抗體的制備.flv思考：1、本過程利用了哪些技術(shù)？細(xì)胞融合技術(shù)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體3、整個(gè)制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選?第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種），第二次需先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開始培養(yǎng)，然后再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群。由于該細(xì)胞群是單個(gè)雜交瘤細(xì)胞克隆得來的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強(qiáng)的單克隆抗體。這里的單克隆的確有單個(gè)細(xì)胞克隆的含義，只不過克隆的不是B淋巴細(xì)胞，而是雜交瘤細(xì)胞。

BBBB瘤瘤瘤瘤4、細(xì)胞融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞單克隆抗體的應(yīng)用小結(jié)動(dòng)物細(xì)胞融合的原理和誘導(dǎo)方法單克隆抗體制備過程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法－－一個(gè)新細(xì)胞－－一個(gè)優(yōu)勢(shì)－－滅活的病毒雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體：特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)1.動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（）

A．動(dòng)物細(xì)胞融合

B．胚胎移植

C．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

D．核移植教學(xué)目標(biāo)鞏固Ｃ２．在動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）A．結(jié)果是相同的

B．雜種細(xì)胞的形成過程基本相同C．操作過程中酶的作用相同D．誘導(dǎo)融合的手段相同教學(xué)目標(biāo)鞏固Ｂ３.單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（）①淋巴細(xì)胞②小鼠骨髓瘤細(xì)胞③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞A．②④B．①③⑤C．①②③④D．②③C教學(xué)目標(biāo)鞏固已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷，人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤細(xì)胞盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增殖，將這兩種細(xì)胞在試管中混合，加聚乙二醇促融，獲得雜交瘤細(xì)胞，請(qǐng)回答：

（1）試管中除融合的雜交瘤細(xì)胞外，還有_____________種融合細(xì)胞。

（2）設(shè)計(jì)一方法（不考慮機(jī)械方法），從培養(yǎng)液中分離出雜交瘤細(xì)胞，并說明原理。

方法：原理：解析：

（1）試管中有人的淋巴細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞，在促溶劑的作用下，可能出現(xiàn)以下3種細(xì)胞的融合情況，人的淋巴細(xì)胞和淋巴細(xì)胞融合，小鼠的骨髓瘤細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，人的淋巴細(xì)胞和小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合，實(shí)驗(yàn)需要的是第3種細(xì)胞，即雜交瘤細(xì)胞；

（2）要將雜交瘤細(xì)胞分離出來，可以在培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細(xì)胞；加入氨基嘌呤后，使D合成途徑阻斷，僅有D合成途徑的骨髓瘤細(xì)胞及其彼此融合的細(xì)胞就不能增殖，但人淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后的雜種細(xì)胞中可以利用淋巴細(xì)胞中的S途徑合成DNA而增殖。變式訓(xùn)練生產(chǎn)單克隆抗體時(shí)，要在培養(yǎng)液中加入某種