病毒轉(zhuǎn)基因技術(shù)原理概述問題社會公眾對健康需求的增加生命科學和醫(yī)學研究的推動對轉(zhuǎn)基因技術(shù)的安全和倫理關(guān)注持續(xù)增加。2021/3/102課程內(nèi)容分為理論課與實踐課轉(zhuǎn)基因技術(shù)概述病毒轉(zhuǎn)基因技術(shù)原理、純化制備技術(shù)和醫(yī)學應用生物安全醫(yī)學倫理問題表達外源基因的復制缺陷型重組腺病毒的構(gòu)建和鑒定DNA病毒RNA病毒雜合病毒2021/3/103第一章轉(zhuǎn)基因技術(shù)概述

范雄林86-27-83650639xlfan@華中科技大學同濟醫(yī)學院病原生物學系研究生高水平課程——《病毒轉(zhuǎn)基因技術(shù)原理》2021/3/104主要內(nèi)容基因轉(zhuǎn)移方式真核細胞的轉(zhuǎn)基因技術(shù)外源基因表達讀框的構(gòu)建原理2021/3/1051.定義基因轉(zhuǎn)移（genetransfer）:

自然發(fā)生轉(zhuǎn)基因技術(shù)(transgenetechnology):

人工利用2021/3/1062.常見的基因轉(zhuǎn)移方式轉(zhuǎn)化(transformation)轉(zhuǎn)導(transduction)轉(zhuǎn)染(transfection)現(xiàn)象定義分類用途2021/3/107轉(zhuǎn)化（transformation）現(xiàn)象:

肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化試驗定義:分類和應用:自然轉(zhuǎn)化:感受態(tài),宿主菌種類人工轉(zhuǎn)化:低溫CaCl2、電穿孔2021/3/108小鼠的肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化試驗2021/3/109轉(zhuǎn)導(transduction)現(xiàn)象:“U”型管實驗

定義:分類和應用:普遍性轉(zhuǎn)導局限性轉(zhuǎn)導2021/3/1010局限性轉(zhuǎn)導2021/3/1011轉(zhuǎn)染(transfection)現(xiàn)象:

感染(infection)、病毒感染定義:廣義和狹義分類和應用:物理化學方法生物學方法(病毒載體)2021/3/1012

野生型病毒的自然感染、病毒載體轉(zhuǎn)染和質(zhì)粒經(jīng)化學法介導的轉(zhuǎn)染2021/3/10133.基因轉(zhuǎn)移入真核細胞的方法基因轉(zhuǎn)移入真核細胞的影響因素外源基因轉(zhuǎn)移入真核細胞的類型和方法構(gòu)建外源基因的基本要素

2021/3/1014轉(zhuǎn)移入原核細胞的影響因素:限制-修飾系統(tǒng)質(zhì)粒宿主范圍和相容性同源重組與非同源重組基因轉(zhuǎn)移入真核細胞的影響因素真核與原核細胞具有顯著區(qū)別;外源基因要進入真核細胞，要突破三大障礙;理想的轉(zhuǎn)基因技術(shù)方法2021/3/1015質(zhì)粒型載體:物理方法化學方法外源基因轉(zhuǎn)移入真核細胞的類型和方法傳統(tǒng)的針頭注射顯微注射粒子轟擊電穿孔流體動力學包裹微球超聲磷酸鈣法脂質(zhì)體法DEAE-Dxtran法2021/3/1016常用的物理方法介導基因轉(zhuǎn)移2021/3/1017外源基因轉(zhuǎn)移入真核細胞的類型和方法病毒顆粒型載體(病毒介導的轉(zhuǎn)基因技術(shù))

假型病毒載體（復制缺陷性病毒載體）：具有感染性重組型病毒載體：具有感染性DNA病毒載體：AdV,AAV,HSV-1,etc.RNA病毒載體:HIV,etc.雜合型病毒載體

2021/3/10182021/3/1019不同類型轉(zhuǎn)基因技術(shù)方法的優(yōu)缺點比較2021/3/1020構(gòu)建外源基因的基本要素

轉(zhuǎn)錄控制元件翻譯控制元件病毒復制包裝信號

2021/3/1021復習思考題影響外源基因進入真核細胞的因素。物理、化學和病毒載體轉(zhuǎn)基因技術(shù)的優(yōu)缺點比較