-PAGE6-單一免疫法與聯(lián)合免疫法檢測便隱血的臨床應(yīng)用評價蔡力力1白潔1林凱2李小霞1丁海琴21解放軍總醫(yī)院南樓檢驗科北京1008532空軍總醫(yī)院臨床檢驗中心北京100036【摘要】目的:觀察兩種便隱血實驗方法—單一免疫法（膠體金單克隆抗體血紅蛋白檢測法）和聯(lián)合免疫法（血紅蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白聯(lián)合免疫法）檢測的靈敏性、特異性和抗干擾性，以便在工作中避免假陽性和假陰性反應(yīng)。[方法]1、單一免疫法和聯(lián)合免疫法檢測人7種不同濃度血紅蛋白液對比靈敏度。2、取人和常食用的6種動物血紅蛋白檢測單一免疫法和聯(lián)合免疫法的特異性和準(zhǔn)確度。3、比較單一免疫法和聯(lián)合免疫法對107例經(jīng)內(nèi)窺鏡檢查確診消化道出血患者的陽性檢出率。[結(jié)果]單一免疫法和聯(lián)合免疫法的靈敏性和特異性相同，聯(lián)合免疫法的穩(wěn)定性和抗干擾性優(yōu)于單一免疫法，單一免疫法可出現(xiàn)假陰性和假陽性反應(yīng)。[結(jié)論]聯(lián)合免疫法穩(wěn)定性強，是目前檢測便隱血的較好的方法，將轉(zhuǎn)鐵蛋白作為補充檢測手段是臨床判斷是否存在出血的最有價值的方法?！娟P(guān)鍵詞】便隱血實驗單克隆抗體血紅蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白Thecomparisonofthemono-cloneantibodyassayandtheunitedimmunoassayforfecaloccultbloodtestsandtheirclinicalevaluationCaiLili1，BaiJie1，LinKai2，LiXiaoxia1，DingHaiqing21DepartmentofClinicalLaboratory，GeneralHospitalofPLA，Beijing1008532ClinicLaboratoryCenter，AirForceHospital，Beijing100036[Abstract]Objective:Toobservethesensitivity,specificityandabilityofanti-interferenceoftwoassaysforfecaloccultbloodinordertoavoidfalse-positivereactionandfalse-negativereaction.Onetestisthemono-cloneantibodyassay,theotherishemoglobinandtransferrinunitedimmunoassay.[Methods]1、Tocomparethesensitivityamongmono-cloneantibodyassayandunitedimmunoassaybytestinghemoglobinfromhumanbeingswithsevendifferentconcentrations.2、Thespecificityofthemono-cloneantibodyassayandtheunitedimmunoassayweredetectedwithhumanandsixdifferentkindsofanimals.3、Themono-cloneantibodyassayandtheunitedimmunoassaywereusedtodetectdungoccultbloodfrom107patientsthatwerediagnosedasdiseasesofalimentarycanalandthencomparedtheirpositiverateoftwomethods.[Results]Themono-cloneantibodyassayandtheunitedimmunoassayhavethesamesensitivityandspecificity，theunitedimmunoassayhashigherabilityanti-interferencethanthemono-cloneantibodyassay.themono-cloneantibodyassaycanappearfalse-negativereactionandfalse-positivereaction.[Conclusions]Thehemoglobinandtransferrinunitedimmunoassayhasahigherspecificity.Itisamoreappropriatemethodtodetectfecaloccultblood.Themono-cloneantibodyassayleadtofalse-negativereactionwhenhemoglobininfecalistoohighordigested.Soweshouldusetransferrinunitedimmunoassayinordertoacquiremoreaccurateresult.[Keywords]fecaloccultbloodtest（FOBT）;mono-cloneantibody;hemoglobin;

transferrin便隱血試驗是診斷各種原因引起的消化道出血及篩選診斷胃腸道惡性腫瘤的重要手段。目前，臨床上應(yīng)用的便隱血檢測的各種方法中，不外乎兩大類：化學(xué)方法和免疫方法。在臨床應(yīng)用中我們發(fā)現(xiàn)每種方法各有其優(yōu)勢，同時也存在著測定方法上的局限性。我們比較單一免疫法（膠體金血紅蛋白單克隆抗體檢測法）和聯(lián)合免疫法（聯(lián)合血紅蛋白/轉(zhuǎn)鐵蛋白單克隆抗體檢測法）的靈敏性，特異性和抗干擾性，并比較單一免疫法和聯(lián)合免疫法對107例經(jīng)內(nèi)窺鏡檢查確診消化道出血患者的陽性檢出率。通過觀察分析，提出將轉(zhuǎn)鐵蛋白檢測作為對消化道出血的補充手段的重要性。1．材料和方法1.1試劑：①單克隆血紅蛋白檢測法：萬華普曼公司“消康?！北汶[血檢測試紙（膠體金法）②單克隆轉(zhuǎn)鐵蛋白檢測法：萬華公司“消康保”轉(zhuǎn)鐵蛋白診斷試紙（膠體金法）③聯(lián)合免疫檢測法：萬華普曼公司“消康?！彪[血免疫雙聯(lián)法檢測試劑盒（血紅蛋白/轉(zhuǎn)鐵蛋白法）。1.2方法原理：標(biāo)本中的人血紅蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白與包被在膠體金涂層部上的抗人血紅蛋白抗體或抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體的膠體金顆粒結(jié)合，形成抗人血紅蛋白抗體膠體金與血紅蛋白或抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體膠體金與轉(zhuǎn)鐵蛋白的復(fù)合物。根據(jù)液相色譜的原理，這一復(fù)合物被固相化于檢測線（T）上的抗人血紅蛋白抗體或抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體所捕獲，形成抗人血紅蛋白抗體結(jié)合膠體金－人血紅蛋白－固相化抗人血紅蛋白抗體或抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體結(jié)合膠體金－人轉(zhuǎn)鐵蛋白－固相化抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體的三明治型復(fù)合物，其結(jié)果在檢測線可見到由于金顆粒而出現(xiàn)的紫紅色線。1.3標(biāo)本來源：107例均來自解放軍總醫(yī)院和空軍總醫(yī)院的門診和住院患者糞便標(biāo)本，經(jīng)內(nèi)窺鏡檢查確認為消化道出血。2．結(jié)果2.1兩種方法的靈敏度對比試驗表一單一免疫法和聯(lián)合免疫法檢測人7種不同濃度血紅蛋白液結(jié)果檢測方法血紅蛋白Hb濃度（μg/ml）0.2205010050020005000單一免疫法血紅蛋白+++++±-聯(lián)合免疫法血紅蛋白+++++±-轉(zhuǎn)鐵蛋白--+++++2.2兩種方法的特異性及準(zhǔn)確性對比試驗取人血紅蛋白和常食用的6種動物的肉各3例，分別用其血紅蛋白及肌肉組織制成500μg/ml血紅蛋白及肌紅蛋白懸液，然后按規(guī)定方法分別用單一免疫法和聯(lián)合免疫法做隱血試驗。結(jié)果見表二。表二單一免疫法和聯(lián)合免疫法檢測人和6種動物的血紅蛋白液試驗結(jié)果檢測方法血紅蛋白Hb濃度（500μg/ml）人豬牛雞羊魚兔單一免疫法血紅蛋白+聯(lián)合免疫法血紅蛋白+轉(zhuǎn)鐵蛋白+2.3兩種方法在臨床中的應(yīng)用結(jié)果107例經(jīng)內(nèi)窺鏡檢查確診消化道出血患者的便隱血，結(jié)果見表三。表三單一免疫法和聯(lián)合免疫法檢測健康人及消化道出血患者便隱血結(jié)果比較出血部位例數(shù)血紅蛋白法轉(zhuǎn)鐵蛋白法聯(lián)合免疫法上消化道出血7151/71(71.8%)61/71(85.9%)67/71(94.4%)下消化道出血3630/36(83.3%)28/36(77.8%)31/36(86.1%)注：聯(lián)合免疫法指任何一種免疫法檢測結(jié)果為陽性即記為陽性。3．討論胃腸道出血可由多種疾病引起，便隱血試驗是消化道疾病輔助診斷的篩選試驗。Greegar認為[1]，如果每年常規(guī)體檢中都做便隱血試驗，再加上一定數(shù)量的內(nèi)窺鏡檢查，那么許多結(jié)腸癌和直腸癌在可治愈階段就可以被檢出。不僅與治療后5年生存率相關(guān)，且與能否保留具有生理功能的肛門密切相關(guān)。所以對糞便中微量血紅蛋白的檢出具有十分重要的意義。自1864年Vandeen發(fā)明了愈創(chuàng)木脂法[2]檢測便潛血以來，人們不斷探索，分別用過聯(lián)苯胺法，匹拉米洞法，孔雀綠法，鄰-聯(lián)甲苯胺法等，它們都是基于血紅蛋白中的亞鐵血紅素有過氧化物酶的活性，催化過氧化氫釋放新生態(tài)的氧，使上述色原顯色這一原理基礎(chǔ)上，因此方法學(xué)上缺乏特異性，此方法受飲食影響很大。近年來，免疫學(xué)的發(fā)展對便隱血檢驗方法改進產(chǎn)生了很大影響。膠體金單克隆抗體免疫法利用金標(biāo)Hb-抗體與Hb結(jié)合后，向上擴散分別與檢測區(qū)的抗-Hb抗體及質(zhì)控區(qū)的Hb結(jié)合，此時膠體金的顆粒聚集呈現(xiàn)顏色反應(yīng)，它只針對人Hb抗原表位，基本排除了飲食及藥物因素的干擾，被世界衛(wèi)生組織（WHO）和世界胃腸鏡檢查協(xié)會推薦作為糞便隱血試驗的一種較為確認的方法[3]。但血紅蛋白由于受到腸內(nèi)細菌作用及大腸黏液成分影響而容易變性，出現(xiàn)假陰性結(jié)果。轉(zhuǎn)鐵蛋白在腸道內(nèi)抗菌能力強、性質(zhì)穩(wěn)定，且其活性持續(xù)時間較長。所以測定糞便中的轉(zhuǎn)鐵蛋白成為目前的研究熱點[4]。在靈敏度方面，從表一中可看出單一免疫法和聯(lián)合免疫法都能檢測到0.2μg/ul的血紅蛋白，具有很好的靈敏性，能檢測出消化道的微量出血，對下消化道的腫瘤篩查具有很好的實用性。正常人24小時胃腸道生理性出血量為0.6ml[5]，折合血紅蛋白含量為0.2μg/ml。如果每日消化道出血量大于2ml，屬于病理性出血。如果靈敏度高于0.2μg/ml，這樣會導(dǎo)致部分假陽性的出現(xiàn)，在臨床檢測時會將部分正常人生理性出血情況判斷為陽性，容易導(dǎo)致臨床醫(yī)生將患者誤判為病理性疾病，給患者增加心理和經(jīng)濟負擔(dān)。但是值得注意的是，單一免疫法在血紅蛋白大于5000μg/ml時會出現(xiàn)假陰性反應(yīng)，這是由于抗原過量而導(dǎo)致的前滯反應(yīng)[6]。因此在便隱血檢測中要注意大便的性狀，若明顯的柏油便或鮮血便而試驗為陰性應(yīng)將糞便稀釋再作或同時用轉(zhuǎn)鐵蛋白方法檢測。另外，本文用人與6種飲食中常見動物的血紅蛋白，對單一免疫法和聯(lián)合免疫法作了比較，從表二中可看出，兩種方法都只與人血紅蛋白或轉(zhuǎn)鐵蛋白反應(yīng)，特異性好。在上消化道出血的71例病人中，血紅蛋白法陽性為51例，陽性率為71.8%，約有30%的假陰性，原因是：1.血紅蛋白或紅細胞經(jīng)過消化酶降解或消化殆盡，已不具有原來的免疫原性。2.大量出血而導(dǎo)致反應(yīng)體系中抗原過剩出現(xiàn)前滯現(xiàn)象，這部分糞便一般為柏油樣黑便，稀釋后11例出現(xiàn)陽性。3.病人的血紅蛋白的抗原與單克隆抗體不配[7]。而另1例稀釋后仍為陰性，結(jié)合臨床病歷證明的確為上消化道出血，出現(xiàn)假陰性可能為出血在胃腸道停留時間過長，血紅蛋白抗原性被消化的結(jié)果[8]，因此提示我們用血紅蛋白法評價上消化道出血時應(yīng)慎重。轉(zhuǎn)鐵蛋白法陽性為61例，陽性率為85.9%，聯(lián)合免疫法檢測陽性67例，陽性率是94.4%。能大大減少假陰性反應(yīng)的出現(xiàn)，提高臨床診斷準(zhǔn)確率。在下消化道出血的36例病人中，血紅蛋白法陽性為30例，陽性率為83.3%，高于上消化道出血的檢出率，轉(zhuǎn)鐵蛋白法陽性為28例，陽性率為77.8%，低于血紅蛋白法的檢出率。研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)鐵蛋白在健康人糞便中幾乎不存在[9]，而在消化道出血中大量存在，血液中血紅蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白的比值是51.1:1，而糞便中血紅蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白的比值是5.4:1。血紅蛋白在腸道中受到細菌的作用易變性，轉(zhuǎn)鐵蛋白的抗菌能力強，穩(wěn)定性強，且其活性持續(xù)時間長。在分別對患者糞便進行血紅蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白檢測時發(fā)現(xiàn)約10%的病例呈現(xiàn)轉(zhuǎn)鐵蛋白值較低的現(xiàn)象[10]，已知遺傳性無轉(zhuǎn)鐵蛋白癥，各種惡性疾病，炎癥為主的多種疾病均可導(dǎo)致轉(zhuǎn)鐵蛋白值低下。聯(lián)合免疫法檢測法陽性為31例，陽性率是86.1%。綜上所述，聯(lián)合免疫法既可消除化學(xué)法的假陽性的問題，又可篩出血紅蛋白法由于前滯反應(yīng)和血紅蛋白被消化而出現(xiàn)的假陰性反應(yīng)，提高對消化道出血的檢出率，并結(jié)合臨床還可對消化道出血作大致的定位。聯(lián)合免疫法是將來的發(fā)展方向，雖然目前價格較貴，還沒有在臨床普及，但是轉(zhuǎn)鐵蛋白法檢測作為對消化道出血的補充手段是十分必要和重要的。參考文獻:1．馬炳云，叢玉隆等。金標(biāo)法單克隆抗體法便潛血檢測方法的探討。中華醫(yī)學(xué)檢驗雜志，1998，21（48）2．馬曉露,李艷蓮等