1、PCR 基因擴增實驗室的規(guī)矩化設置為避免污染，必需嚴格遵循臨床基因擴增試驗實驗室設置標準設置臨床基因擴增試驗實驗室。 臨床基因擴增試驗實驗室四個隔開的工作區(qū)域中每一區(qū)域都須有專用的儀器設備。各區(qū)域都必需有明確的標記，以避免設備物品如加樣器或試劑等從其各自的區(qū)域內移出從而造成不同的工作區(qū)域間設備物品發(fā)生混淆。進入各個工作區(qū)域必需嚴格遵循單一方向順序，即只能從試劑貯存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增反映混合物配制和擴增區(qū)（簡稱擴增區(qū)）至產物分析區(qū)，避免發(fā)生交叉污染。在不同的工作區(qū)域應使用不同顏色或有鮮明區(qū)別標志的工作服，以便于辨別。此外，當工作者離開工作區(qū)時，不得將各區(qū)特定的工作服帶出。 清潔方法不當也

2、是污染發(fā)生的一個主要原因，因此實驗室的清潔應按試劑貯存和準備區(qū)至擴增產物分析區(qū)的方向進行。不同的實驗區(qū)域應有其各自的清潔用具以防止交叉污染。（一）試劑貯存和準備區(qū)下述操作在該區(qū)進行：貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反映混合液的制備。貯存試劑和用于標本制備的材料應直接運送至試劑貯存和準備區(qū)，不能經過產物分析區(qū)。在打開含有反映混合液的離心管或試管前，應將其快速離心數秒。試劑原材料必需貯存在本區(qū)內，并且在本區(qū)內制備成所需的貯存試劑。當貯存試劑溶液經檢查可用后，應將其分裝貯存?zhèn)溆茫苊庥捎诮洺４蜷_反映管吸液而造成污染。含反映混合液的離心管或試管在冰凍前都應快速離心數秒。大多數用于擴增的試劑都應冰凍貯存。

3、為避免因單次反映取液而頻繁的凍融主貯存試劑，應分裝冰凍貯存試劑溶液。貯存試劑的分裝體積根據通常在實驗室內一次測定所需的擴增反映數來決定。主反映混合液的組成成份尤其是聚合酶的適用性和穩(wěn)定性經過預試驗來檢查，評判結果必需有書面報告。關于于熱啟動技術（在第一個高溫變性步驟后加入酶），聚合酶也可不包含在主反映混合液中。在整個本區(qū)的實驗操作進程中，操作者必需戴手套，并且經常更換。此外， 操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施。 嚴禁用嘴吸取液體， 加樣器和吸頭等必需經高壓處理。工作結束后必需立即關于工作區(qū)進行清潔。本工作區(qū)的實驗臺表面應可耐受 由于紫外照射的距離和能量關于去污染的效果非常關鍵，

4、因此可使用可移動紫外 燈（254nm），6090cmbp，關于紫外線損傷不敏感，因此紫外照射擴增片段必需延長照射時間，最好是照射過夜。實驗室及其設備的使用必需有日常記錄。（二）標本制備區(qū)下述操作在該區(qū)進行：臨床標本的保存，核酸（RNA、NA）提取、貯存RNAcNA）線管燈可用來確保工作后關于實驗臺面的充分照射。 樣本處理關于核酸擴增有很大影響，必需使用有效的核酸提取方法，可在開展臨床標本檢測前關于提取方法進RNAcNARNAcNANAcNARNAcNA制備區(qū)，不得在本區(qū)關于樣本進行 PCR 擴增。（三）擴增區(qū)下述工作在本區(qū)內進行：NAcNANAcNA（來自樣本制備區(qū)）的加入和主反映混合液（來自

5、試劑貯存和制備區(qū)）PCR但必需注意的是，礦物油本身也可能成為一種持續(xù)性的污染源。用過的加樣器 必需注意清潔消毒。 完成操作及每天工作后都必需關于實驗室臺面進行清潔和消毒，紫外照射方法與前面區(qū)域相同。如有溶液濺出，必需處理并且作出記錄。（四）擴增產物分析區(qū)下述操作在本區(qū)內進行：擴增片段的測定。 核酸擴增后產物的分析方法多種多樣，如膜上或微孔板上探針雜交方法（同位素標記或非同位素標記）、瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、SouthernPCR-ELISAHC1PCR掉。用過的吸頭也必需放至 1mol/L HCl如焚燒。由于本區(qū)有可能會用到某些可致基因突變和有毒物質如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或同位素等，故