1、了解骨髓細胞學(xué)的臨床應(yīng)用了解血細胞發(fā)育過程中的形態(tài)變化規(guī)律和各系血細胞的形態(tài)學(xué)特點 常見細胞化學(xué)染色的臨床意義本章節(jié)教學(xué)目的和任務(wù) 良性白細胞疾病的實驗診斷了解骨髓細胞學(xué)的臨床應(yīng)用了解血細胞發(fā)育過程中的形態(tài)變化規(guī)律和血細胞的正常形態(tài)學(xué)特征血細胞的正常形態(tài)學(xué)特征形態(tài)學(xué)特點紅細胞淋巴細胞粒細胞單核細胞巨核細胞血細胞的形態(tài)學(xué)特點形態(tài)學(xué)特點紅細胞淋巴細胞粒細胞單核細胞巨核細胞血細胞的形態(tài)學(xué)核染色質(zhì) 胞核 胞漿核仁胞質(zhì)顆粒細胞大小 大小細致粗糙 疏松致密少多 核質(zhì)比：大小大小 圓凹陷分葉有無 無少多 小淋巴細胞無顆粒血細胞發(fā)育過程中的形態(tài)學(xué)變化規(guī)律 原始粒細胞比早幼粒小 巨核細胞：小大核染色質(zhì) 胞核 胞

2、漿核仁胞質(zhì)顆粒細胞大小 大小細致粗糙一、骨髓細胞學(xué)的臨床應(yīng)用 適應(yīng)證：1、患者多次檢查外周血象有異常。2、患者有原因未明的肝、脾、淋巴結(jié)腫大。3、查明感染的原因，如黑熱病患者通過骨髓涂片 查找黑熱病原蟲等。4、查惡性腫瘤有無骨髓轉(zhuǎn)移。5、助診類脂質(zhì)沉積病，如戈謝病及尼曼皮克病。6、血液病進行鑒別診斷和療效觀察、利用骨髓液進 行祖細胞培養(yǎng)及染色體核型檢查等。7、提高某些疾病診斷率。檢驗瘧原蟲、黑熱病原蟲等一、骨髓細胞學(xué)的臨床應(yīng)用 適應(yīng)證：禁忌證：1、血友病患者，由于凝血因子缺陷引起的出血性疾病。2、晚期妊娠的孕婦作骨穿刺術(shù)應(yīng)慎重。 禁忌證：評價1) 輔助診斷 2) 鑒別診斷 3) 判斷療效評價注

3、意事項1) 骨髓取材,涂片,染色良好時,才能進行骨髓檢查.2) 骨髓抽取0.2-0.3ml，骨髓片應(yīng)在采集后迅速涂片，避免凝固。注意事項四、骨髓細胞學(xué)檢查的內(nèi)容低倍鏡高倍鏡有核細胞分類；計算粒/紅比值；觀察有無特殊細胞和寄生蟲。血片檢查骨髓有核細胞增生程度（增生極度活躍、增生明顯活躍、增生活躍、增生減低、增生明顯減低）巨核細胞計數(shù)和分類；其它特殊細胞。 有核細胞分類；觀察有無特殊細胞和寄生蟲。四、骨髓細胞學(xué)檢查的內(nèi)容低倍鏡高倍鏡有核細胞分類；計算粒/紅五、常見細胞化學(xué)染色的臨床意義鐵染色等中性粒細胞堿性磷酸酶（NAP）糖原染色（PAS）酯酶染色（E）髓過氧化物酶染色（POX）常用的細胞化學(xué)染色

4、五、常見細胞化學(xué)染色的臨床意義鐵染色等中性粒細胞堿性磷酸酶（過氧化物酶染色（POX）原理： 血細胞中的過氧化物酶能分解試劑中的底物H2O2，釋出新生態(tài)氧，使無色聯(lián)苯胺化為藍色聯(lián)苯胺，后者與亞硝基鐵氰化鈉結(jié)合形成藍黑色的顆粒，沉著于細胞質(zhì)中。過氧化物酶染色（POX）原理：POX染色示意圖POX染色示意圖臨床意義 主要用急性白血病的鑒別急性淋巴細胞白血?。?POX3%陽性）臨床意義1.急性粒細胞白血病I型原粒細 陰性，型原粒細胞及其各階段粒細胞 均陽性， M3型最強。（POX3%陽性） 2.急性單核細胞白血病 原單、幼單細胞 弱陽性（POX3%陽性） 3.急性淋巴細胞白血病 陰性（POX3%陽性）

5、 4.巨核細胞白血病 陰性（POX3%陽性） 1.急性粒細胞白血病非特異性酯酶染色（NSE）主要存在于單核細胞和組織細胞內(nèi)。又稱單核細胞酯酶染色原理： 血細胞內(nèi)的-醋酸萘酚酯酶又稱非持異性酯酶。其能將基質(zhì)液中的-醋酸萘酚水解，產(chǎn)生-萘酚,萘酚再與重氮染料偶聯(lián)，形成不溶性的有色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)。非特異性酯酶染色（NSE）主要存在于單核細胞和組織細胞內(nèi)。又臨床意義：主要用于鑒別急性單核細胞白血病和急性粒細胞白血病。1.急性單核細胞白血病 陽性 可被氟化鈉（NaF）抑制（抑制率大于50%）2.急性粒細胞白血病陰性或弱陽性其弱陽性反應(yīng)不被NaF抑制（抑制率小于50%）臨床意義：單核細胞（a）、血小板

6、（b）、巨核細胞（c）胞漿中有彌漫性灰黑色陽性反應(yīng)產(chǎn)物，淋巴細胞（d）呈點狀陽性反應(yīng)，幼紅細胞（e）呈陰性反應(yīng)單核細胞（a）、血小板（b）、巨核細胞（c）胞漿中有彌漫性灰A：急性單核細胞白血病呈強陽性B：急性單核細胞白血病細胞NSE活性明顯受NaF抑制C：急性原粒細胞白血病呈點狀弱陽性反應(yīng)D：急性原粒細胞白血病細胞不受NaF抑制A：急性單核細胞白血病呈強陽性特異性酯酶染色（SE） 氯化醋酯AS-D萘酚酯酶主要分布于中性粒細胞中，又稱粒細胞酯酶。原理：此酶能將基質(zhì)液中的氯化醋酯AS-D萘酚水解，產(chǎn)生萘酚AS-D，進而與重氮鹽GBC偶聯(lián)，形成不溶性的紅色沉淀，定位細胞質(zhì)內(nèi)。特異性酯酶染色（SE）

7、氯化醋酯AS-D萘酚酯酶主要分臨床意義：1.急性粒細胞白血病時原粒細胞和早幼粒 細胞酶活性明顯增強 強陽性；2.急性單核細胞白血病及急性淋巴細胞白 血病時 陰性；3.急性粒-單核細胞白血病 白血病粒細胞（粒系） 陽性， 白血病細胞（單核系） 陰性。臨床意義：A+B：急性早幼粒細胞白血病細胞胞漿內(nèi)有大量藍 色陽性反應(yīng)物質(zhì)C：急性原粒細胞白血?。∕1型）呈陽性反應(yīng)D：急性淋巴細胞白血病呈陰性反應(yīng)A+B：急性早幼粒細胞白血病細胞胞漿內(nèi)有大量藍 -NBE染色主要存在與單核系細胞中，故又稱單核細胞酯酶。 臨床意義： 急性粒-單核細胞白血病 原粒細胞NAS-DCE染色陽性或弱陽性 單核系細胞-NAE和-N

8、BE染色陽性-NBE染色糖原染色（PAS）原理：又稱過碘酸-雪夫(Schiff)反應(yīng)。過碘酸能將血細胞內(nèi)的糖原氧化，生成醛基。醛基與Schiff液中的無色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于胞質(zhì)內(nèi)。糖原染色（PAS）原理：又稱過碘酸-雪夫(Schiff)反應(yīng)臨床意義：1.鑒別淋巴系統(tǒng)增生性質(zhì) 惡性增生時PAS反應(yīng) 強陽性（陽性反應(yīng)見于急、慢性淋巴細胞白血病、淋巴瘤等）。2.鑒別紅系增生性質(zhì) 惡性增生者，如紅血病、紅白血病其原幼紅細 胞 強陽性 增生性貧血和巨幼紅細胞性貧血 陰性。3.巨核細胞 強陽性（有助于巨核細胞白血病的診斷）。臨床意義：糖原染色：成熟粒細胞（a），巨核細胞（b）呈強陽性反應(yīng)，

9、單核細胞（c）呈弱陽性反應(yīng)，正常幼紅細胞（d）呈陰性反應(yīng)糖原染色：成熟粒細胞（a），巨核細胞（b）呈強陽性反應(yīng)，單核A：慢性淋巴細胞白血病細胞呈紅色粗顆粒狀陽性反應(yīng)B：急性淋巴細胞白血病細胞呈紅色顆粒狀陽性反應(yīng)，幼紅細胞呈陰性反應(yīng)A：慢性淋巴細胞白血病細胞呈紅色粗顆粒狀陽性反應(yīng)A：急性紅白血病幼紅細胞呈紅色陽性反應(yīng)B：巨幼細胞性貧血時巨幼紅細胞呈陰性反應(yīng)A：急性紅白血病幼紅細胞呈紅色陽性反應(yīng)中性粒細胞堿性磷酸酶染色（NAP）原理：堿性磷酸酶在堿性條件下將基質(zhì)液中的-甘油磷酸鈉水 解產(chǎn)生磷酸鈉。磷酸鈉依次與硝酸鈣、硝酸鈷、硫化胺 發(fā)生 一系列反應(yīng)形成不溶性棕黑色的硫化鈷，定位于酶活性之處。中性粒

10、細胞堿性磷酸酶染色（NAP）原理：臨床意義：1.鑒別慢性粒細胞白血病及中性粒細胞型類白血病反應(yīng) 前者陽性率及積分值均極低，甚至為“0”， 后者強陽性，陽性率可達100%，積分值可達400。2.初步鑒別感染的類型 在急性細菌性感染時NAP陽反應(yīng)強，而病毒和寄生蟲及結(jié)核菌感染時NAP染色結(jié)果多在正常范圍。3.再生障礙性貧血（AA)和陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿（PNH） AA NAP染色常增高，PNH NAP染色常減低4.惡性組織細胞病與反應(yīng)性組織細胞增生癥的鑒別 前者常降低，后者常增高。5.真性紅細胞增多癥與繼發(fā)性紅細胞增多癥的鑒別 前者常增高，后者無明顯變化。臨床意義：1.鑒別慢性粒細胞白血病及中性

11、粒細胞型類白血病反應(yīng)NAP染色：中性粒細胞呈不同程度陽性a：+ c：+ e：陰性反應(yīng)b：+ d：+ f：嗜酸細胞呈陰性NAP染色：中性粒細胞呈不同程度陽性慢性粒細胞白血病（CML）中性粒細胞堿性磷酸酶（NAP）染色：未見陽性反應(yīng)慢性粒細胞白血?。–ML）中性粒細胞堿性磷酸酶（NAP）染色急性化膿性感染NAP染色：NAP反應(yīng)陽性率及積分均增高，片中4個細胞均為+陽性反應(yīng)急性化膿性感染NAP染色：鐵染色原理： 細胞外含鐵血黃素和幼紅細胞內(nèi)的鐵與酸性亞鐵氰化鉀發(fā)生普普魯士藍反應(yīng)，形成藍色的亞鐵氰化鐵沉淀普魯士藍），定位于含鐵的部位。故此法又稱為普魯士藍反應(yīng)。鐵染色原理：應(yīng)用：鑒別缺鐵性貧血與非缺鐵性

12、貧血 前者細胞外鐵減少甚至陰性，（為“-、+-”），細胞內(nèi)鐵平均為5.9%,經(jīng)有效鐵劑治療后,外鐵增多.因此骨髓鐵染色為診斷缺鐵性貧血及指導(dǎo)鐵劑治療的重要方法。診斷鐵粒幼細胞性貧血 鐵粒幼細胞增多, 可達30-90%. MDS的RAS型也可見環(huán)形鐵粒幼細胞增多(占全部幼紅細胞的15%或更多),借此可與再生障礙性貧血鑒別,此貧血不會出現(xiàn)環(huán)形鐵粒幼細胞。應(yīng)用：細胞外鐵染色：A：+陽性反應(yīng) B：+陽性反應(yīng) C：+陽性反應(yīng) D：+反應(yīng) E：+陽性反應(yīng) F：陰性反應(yīng)細胞外鐵染色：細胞內(nèi)鐵染色：A：環(huán)形鐵粒幼紅細胞（）和鐵粒紅細胞（ ）B：含2-5個顆粒的鐵粒紅細胞C：含兩個小顆粒的巨幼紅細胞D：細胞內(nèi)無

13、鐵顆粒的幼紅細胞細胞內(nèi)鐵染色：白細胞免疫表型分析概念： 細胞免疫分型細胞免疫標(biāo)記檢測 用單克隆抗體及免疫學(xué)技術(shù)對細胞膜表面和細胞質(zhì)存在的特異性抗原進行檢測。 用來分析細胞所屬系列，分化程度和功能狀態(tài)的一種方法。白細胞免疫表型分析概念：（一）檢測方法12免疫熒光法免疫酶染色法（一）檢測方法12免疫熒光法免疫酶染色法巨核細胞和血小板淋巴細胞系列紅細胞系列造血干細胞B淋巴細胞系髓系細胞CD41,CD42,CD61等血型糖蛋白A或BCD1,CD2,CD3,CD4,CD5,CD7,CD8，CD9，CD19，CD20等CD34+、CD90+、Lin+CD34+、CD19+(二)細胞免疫分型的臨床應(yīng)用CD1

14、3,CD14,CD15,CD32,CD33等有助于識別不同系列的細胞巨核細胞和血小板淋巴細胞系列紅細胞系列造血干細胞B淋巴細胞系（三）急性白血病細胞免疫表型特點（三）急性白血病細胞免疫表型特點白血病疾病的常用實驗檢測培訓(xùn)課件白血病疾病的常用實驗檢測培訓(xùn)課件臨床意義：急性白血病淋巴瘤： 1）免疫表型分析是形態(tài)學(xué)與細胞化學(xué)分型基礎(chǔ)上的補充和深化 2）識別生物學(xué)和預(yù)后相關(guān)的白血病亞型并達到診斷與治療標(biāo)準(zhǔn)化 3）檢測白血病細胞表達的某些與細胞黏附、增殖、分化、凋亡、耐藥等相關(guān)的蛋白成分 4）微量殘留白血病的檢查、判斷療效或預(yù)后。臨床意義：血細胞染色體分析臨床意義：（1）惡性白細胞疾病的診斷與分型（2）

15、監(jiān)測惡性白細胞疾病的環(huán)節(jié)、預(yù)后及復(fù)發(fā)血細胞染色體分析基因診斷 已經(jīng)證實部分造血與淋巴組織腫瘤染色體異常形成融合基因在白血病的發(fā)病中起重要作用?；蛟\斷第三節(jié) 常見良性白細胞疾病的實驗診斷一、白細胞減少癥白細胞減少癥主要指中性粒細胞減少癥外周血中性粒細胞數(shù)量輕度減少1.5109L中度減少（0.51.0）109L重度減少0.5109L （又稱粒細胞缺乏癥）第三節(jié) 二、傳染性單核細胞增多癥傳染性單核細胞增多癥患者多有高熱、淋巴結(jié)腫大和咽喉腫痛等癥狀，主要見于青少年發(fā)病。WBC增高，可高達（3050）109L，單個核細胞（淋巴細胞、單核細胞和異型淋巴細胞）可高達60%以上。嗜異性凝集試驗陽性是EBV-

16、IM的診斷性試驗。二、傳染性單核細胞增多癥三、類白血病反應(yīng)分為五種主要類型：1）中性粒細胞型；2）淋巴細胞型；3）單核細胞型；4) 嗜酸性粒細胞型；5）紅白血病型。 中性粒細胞的類白血病血象胞質(zhì)中有中毒顆粒、空泡變性、固縮及碎裂等中毒現(xiàn)象。核左移甚至出現(xiàn)幼稚粒細胞等感染中毒性形態(tài)學(xué)表現(xiàn)。三、類白血病反應(yīng)常見血液病的血液學(xué)特征白血病1骨髓增生異常綜合征（MDS）2多發(fā)性骨髓瘤3原發(fā)性血小板減少性紫癜（ITP）4常見血液病的血液學(xué)特征白血病1骨髓增生異常綜合征（MDS）2一、白血病概念：是造血系統(tǒng)的一種惡性腫瘤。特征： 是骨髓或其他造血器官中白血病細胞（常為某系例原始或幼稚細胞）無控制地增生，并浸

17、潤其他組織和器官。骨髓和外周中常有血細胞質(zhì)和量的異常。表現(xiàn)： 臨床上常有貧血，發(fā)熱，出血和肝脾淋巴結(jié)腫大等表現(xiàn)。一、白血病概念：是造血系統(tǒng)的一種惡性腫瘤。白血病疾病的常用實驗檢測培訓(xùn)課件急性白血病分類FAB分類法：1976年法（F），美（A），英（B）三國：7位血液學(xué)專家組成的協(xié)作組通過研究提出了急性白血病的分類和診斷標(biāo)準(zhǔn)的方案。（以后又?jǐn)?shù)次修訂）我國分型1980年以FAB分型標(biāo)準(zhǔn)為模板，結(jié)合我國特點制定了我國急性白血病的分類標(biāo)準(zhǔn)。1986年天津會議上又進行修改。急性白血病分類FAB分類法：急性白血病分類急性髓系白血?。ˋML）急性淋巴細胞白血（ALL）急性白血病分類急性髓系白血?。ˋML）急

18、性淋巴細胞白血（AL急性淋巴細胞白血病 ALL為單克隆淋巴細胞惡性增殖所致，好發(fā)于兒童及青狀年，患者多有全身淋巴結(jié)腫大，半數(shù)病例肝，脾腫大，骨關(guān)節(jié)痛較多見，易伴發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病。急性淋巴細胞白血病 ALL為單克隆淋巴細胞惡性增殖所致ALL分型L1型以小細胞為主（細胞直徑12m），細胞大小不均。核形不規(guī)則，常見凹陷或折疊，核染色質(zhì)疏松，有1個或多個較大而清楚的核仁。胞質(zhì)量豐富，著色深淺不定L3型以大細胞為主，細胞大小一致。核形規(guī)則，核染色質(zhì)均勻致密細點狀。，有1個或多個明顯核仁。胞質(zhì)豐富，呈深藍色，內(nèi)含明顯小空泡而呈峰窩狀A(yù)LL分型L1型以小細胞為主（細胞直徑12m），大小一致1. 急性粒細

19、胞白血病部分分化型，原粒細胞30%-89%早幼粒細胞以下階段細胞10%，單核細胞20%急性早幼粒細胞白血?。w粒增多的早幼粒細胞白血?。?，骨髓中以多顆粒的異常早幼粒細胞為主，此類細胞30% NEC,胞質(zhì)中有大量密集的粗大顆粒,常有成束的棒狀小體(Auer小體)急性單核細胞白血病，骨髓中原單核、幼單核及單核細胞大于等于80%（NEC）急性紅白血病，骨髓中紅系細胞大于50%，NEC中原始細胞大于30%急性巨核細胞白血病，骨髓中原幼巨核細胞大于等于30%。急性粒細胞白血病未分化型M7型M6型M5型M4型M3型M2型M1型急性粒-單核細胞白血病，骨髓及外周血中粒系和單核系兩系均增生。骨髓中原始細胞30

20、%NEC，各階段粒細胞20%，各階段單核細胞20%急性髓細胞性白血病（AML）分類1. 急性粒細胞白血病部分分化型，原粒細胞3慢性白血病慢性粒細胞性白血病（CML） 造血干細胞的克隆性增殖性疾病臨床表現(xiàn)：脾明顯腫大和粒細胞顯著增多。細胞遺傳學(xué)特征：ph染色體和ab1/bcr融合基因。病程：1-4年，自然臨床過程式，慢性期加速期急變期 血象，骨髓象特征見書上描述。 白細胞顯著增高，多數(shù)在100-300109/L，高者可500109/L以上。 分類計數(shù)粒細胞比例增高，可見各階段粒細胞，以中性中幼粒細胞以下階段為主，尤以中性晚幼粒細胞為多見，原粒細胞和早幼細胞 10%。嗜堿性粒細胞增高為慢粒的特征之一，嗜酸性粒細胞也可增高,血小板早期增多或正常,疾病加速期及急變期,血小板可進行性下降。慢性白血病慢性粒細胞性白血病（CML）白血病疾病的常用實驗檢測培訓(xùn)課件慢性淋巴細胞白血?。–LL）多見于60歲以上的