1、用酶聯(lián)法檢測(cè)腫瘤病人紅細(xì)胞免疫功能及其臨床意義【摘要】介紹用酶聯(lián)法檢測(cè)紅細(xì)胞免疫粘附redelliuneadhereneria活性及紅細(xì)胞膜免疫復(fù)合物iulatingiuneplei程度的測(cè)定方法。并測(cè)定42例正常人和28例病癥患者。結(jié)果正常對(duì)照組ria活性為4.560.35ngah/10rb。實(shí)驗(yàn)組為2.740.40，p0.001，對(duì)照組i程度為4.280.23ngahg/10rb，實(shí)驗(yàn)組為3.120.22，p0.001.本研究初步證實(shí)用酶聯(lián)法測(cè)定腫瘤患者紅細(xì)胞免疫功能，方法可靠，定量準(zhǔn)確，合適臨床推廣應(yīng)用。【關(guān)鍵詞】酶聯(lián)法；ria活性；rb膜i自1981年美國(guó)學(xué)者siegel等提出紅細(xì)胞不

2、經(jīng)具有呼吸功能，而且與白細(xì)胞一樣具有免疫功能1982年郭峰等用酵母菌花環(huán)法進(jìn)展紅細(xì)胞免疫功能測(cè)定，并在臨床免疫上獲得很大成效，完善了對(duì)紅細(xì)胞免疫功能的認(rèn)識(shí)。但由于酵母菌花環(huán)法影響因素多，手工操作，要求純熟，僅為半定量。筆者根據(jù)曹東3用elisa法檢查白血病患者紅細(xì)胞免疫功能的研究及iyakaa4應(yīng)用放射碘標(biāo)記抗人igg抗體法，檢測(cè)了正常人42例及腫瘤病人28例的ria活性及rb膜i程度變化情況，現(xiàn)將檢測(cè)方法及結(jié)果報(bào)道如下。1材料與方法1.1受檢對(duì)象:1.1.1正常人42例，男24例，女18例，年齡2445歲，均安康獻(xiàn)血員。1.1.2腫瘤病人28例，其中肝癌7例，肺癌8例，膀胱癌1例，腸癌1例，

3、淋巴瘤3例，宮頸癌4例，鼻咽癌3例，胃癌1例。年齡2163歲。均為病檢確診的病例。1.2材料:0.05ph9.6碳酸鹽緩沖液的包被液。gvb+紅細(xì)胞洗滌液。0.02tris-teen-20酶反響洗滌液。豚鼠混合血清。人igg：采用bath技術(shù)5提齲熱凝聚igg根據(jù)林森報(bào)道的方法6。羊抗人igghrp武蒲生物制品研究所提供，批號(hào)930401。1.3方法:1.3.1紅細(xì)胞結(jié)合物懸液的制備:抗凝血用ph7.4的gvb+緩沖液洗滌3次，然后調(diào)整紅細(xì)胞濃度為108l細(xì)胞懸液，取稀釋2倍的新穎豚鼠混合血清0.2l及3.5g100lahg0.2l加紅細(xì)胞懸液0.2l混勻置37水浴45分鐘，用gvb+液洗3次

4、，最后用pbs-tee20恢復(fù)為0.2l。1.3.2紅細(xì)胞酶聯(lián)免疫，以人igg20gl200l包被酶標(biāo)反響板各孔，放4過(guò)夜，然后用1%bsapbs0.05%teen20洗滌3次，37溫育30分鐘，再加倍比稀釋ahg350.068gl作競(jìng)爭(zhēng)抑制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其他各孔加待檢查，每位兩孔。一孔參加未結(jié)合物懸液100l，然后37溫育2小時(shí)后洗滌3次，加底物200l置3730分鐘，再加終止液50l，用dg322a型南京產(chǎn)酶標(biāo)光度計(jì)按波長(zhǎng)492n讀取d值，作競(jìng)爭(zhēng)法標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出待檢樣品ria活性含量及rb膜i含量。2結(jié)果對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組的ria活性含量和rb膜i含量比擬見(jiàn)附表。附表實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組紅細(xì)胞免疫指標(biāo)測(cè)

5、定結(jié)果(ngahg/107rb)3討論據(jù)已報(bào)道的大量實(shí)驗(yàn)研究資料說(shuō)明，紅細(xì)胞免疫參與腫瘤發(fā)生、開(kāi)展全過(guò)程。1981年siegel等4采用紅細(xì)胞一紅細(xì)胞花結(jié)法檢測(cè)23名宮頸癌、胃癌、直腸癌病人，發(fā)現(xiàn)這些病人紅細(xì)胞免疫粘附活性均有不同程度下降。郭峰等7創(chuàng)用酵母花環(huán)法檢測(cè)腫瘤病人紅細(xì)胞r1活性，發(fā)現(xiàn)癌癥病人r1活性降低。與本研究所測(cè)定的28例癌癥病人紅細(xì)胞免疫功能下降相似。說(shuō)明腫瘤病人在疾病發(fā)生、開(kāi)展過(guò)程中與紅細(xì)胞免疫活性關(guān)系親密，并造成機(jī)體損傷和功能下降。同時(shí)，由于紅細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的調(diào)整及其對(duì)吞噬作用功能降低和紅細(xì)胞對(duì)i粘附性減弱，紅細(xì)胞r1空位減少或腫瘤紅細(xì)胞r1功能缺陷，以導(dǎo)致i去除障礙，故造

6、成腫瘤病人rb膜i明顯低于正常人。腫瘤病人紅細(xì)胞免疫功能低下原因據(jù)有關(guān)報(bào)道可能與以下因素有關(guān)：癌細(xì)胞分泌大量抗原物質(zhì)如afp、ea等，使紅細(xì)胞免疫復(fù)合物增加，紅細(xì)胞r1(r1)被占據(jù)8；腫瘤病人血清存在抑制因子，抑制紅細(xì)胞r1活性9；腫瘤病人可能存在著抗r1的自身抗體。但是腫瘤病人紅細(xì)胞免疫粘附(ria)活性減少其影響因素是多方面的，其機(jī)制有待深化討論。紅細(xì)胞免疫及紅細(xì)胞免疫檢測(cè)技術(shù)，國(guó)內(nèi)是近幾年來(lái)開(kāi)展日趨活潑的研究課題，并已建立了有效檢測(cè)方法，酶聯(lián)免疫法檢測(cè)紅細(xì)胞免疫活性,具有靈敏度高,重復(fù)性好，定量準(zhǔn)確，操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，是適宜檢測(cè)紅細(xì)胞免疫與疾病關(guān)系的技術(shù)方法。參考文獻(xiàn)1siegeliet

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