1、實(shí) 驗(yàn) 七 果蠅唾腺染色體標(biāo)本的制作和觀察 一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?觀察果蠅的唾腺染色體，練習(xí)果蠅幼蟲唾腺分離技術(shù)及唾腺染色體的制片方法。 二、 實(shí)驗(yàn)原理 果蠅幼蟲唾腺的染色體比其他細(xì)胞染色體大200多倍。 核內(nèi)重復(fù)有絲分裂后的眾多染色線沒有分開形成的多線染色體，一條染色體內(nèi)含有染色體線多達(dá)千條以上。 多線染色體永久性處于前期體細(xì)胞染色體配對(duì)形式。普遍存在于雙翅目昆蟲某些物種的幼蟲唾腺細(xì)胞內(nèi)，是研究唾腺染色體常用的材料。三、 實(shí)驗(yàn)材料果蠅三齡幼蟲解剖鏡 顯微鏡 鑷子 解剖針 載玻片 蓋玻片 吸水紙 生理鹽水 醋酸洋紅培養(yǎng)果蠅3齡幼蟲的培養(yǎng)基配方： 瓊脂粉 6.5g 玉米粉 55g 白砂糖 40g 酵母

2、粉 7g 丙酸 1.6ml 15%苯甲酸乙醇液 1.6ml 水 1000ml2、幼蟲的解剖 將載玻片置于解剖鏡下，滴一滴生理鹽水。將幼蟲置于生理鹽水內(nèi)，一手持解剖針按住幼蟲前端的1/3處，固定幼蟲。另一手持針撳住幼蟲頭部正中，用力向前拉，把頭部從身體拉開，腺體即隨之而出。 唾腺為半透明小囊狀，其上附有脂肪帶，食道兩側(cè)各一個(gè)。找到唾腺后盡可能把腺體上的脂肪剔除。3、染色前處理清除殘?bào)w，使載片上只留下唾腺。4、酸解：把腺體放入1N HCl中浸泡2-3分鐘，dH2O洗3次。5、染色滴上幾滴醋酸洋紅于唾腺上，染色30分鐘。6、壓片在載片上加蓋玻片，蓋片上覆蓋一吸水紙，然后以拇指適當(dāng)用力壓片，要求將唾腺

3、細(xì)胞核壓破，染色體伸展開來而不破碎為好。7、顯微鏡下觀察壓好的玻片標(biāo)本，用顯微鏡可以看到四對(duì)染色體，第一對(duì)染色體（X-）組成一個(gè)長(zhǎng)條，第二和第三對(duì)各自組成了具有左右兩臂的染色體對(duì)，它們都以中部的著絲區(qū)聚集，而第四對(duì)染色體很小，分布在著絲區(qū)呈點(diǎn)狀或盤狀。這樣，從壓好的較為模式的片子中便可看到五條彎曲展開的染色體臂（X-、L、R、L、R），和一個(gè)點(diǎn)狀的第四染色體對(duì)，它們?cè)谥z區(qū)構(gòu)成染色中心并向四周伸開。 8、永久片的制作 使蓋片向下放入盛有45%醋酸+95%酒精（1：1） 的培養(yǎng)皿中。一端墊上一玻棒，使玻片稍為傾 斜，約過510分鐘，可見蓋片與載片分離。用 鑷子輕輕取出蓋片于吸水紙上。 有材料的一面向上，放入盛有95%酒精+叔丁醇 （1：1）的培養(yǎng)皿中三分鐘。 換入純叔丁醇中三分鐘 用中性樹膠封片 冷凍脫片封片法： 將制片直接冰凍于-20冰箱冷凍； 用刀片將凍硬的蓋玻片與載玻片分離； 將蓋片和載片置約37左右的溫箱中烘干； 二甲苯中浸