1、 基因工程藥物促紅細(xì)胞生成素EPO第一頁，共十八頁。EPO的概念EPO的用途及其療效EPO的純化歷史及工藝流程EPO的銷售情情況及其前景第二頁，共十八頁。什么是EPO？EPO：是促紅細(xì)胞生成素Erythropoietin的英文簡稱。 促紅細(xì)胞生成素：最初是從腎臟中別離出來能刺激前體紅細(xì)胞增生、分化的一種細(xì)胞因子。人體血液中的促紅細(xì)胞生成素：是由腎臟和肝臟分泌的一種激素樣物質(zhì)，能夠促進紅細(xì)胞生成。它與其受體(EPO-R)結(jié)合后共同介導(dǎo)缺氧的生理反響。第三頁，共十八頁。EPO的用途醫(yī)療用途：增加紅血球的數(shù)目，用于貧血、組織斷離、早產(chǎn)兒，用在癌學(xué)和血液學(xué)方面。體育用途(興奮劑)：增加訓(xùn)練耐力和訓(xùn)練負(fù)

2、荷，屬于國際奧委會規(guī)定的違禁藥物。在2022年北京奧運會中第一例的興奮劑。第四頁，共十八頁。EPO的 療效1、腎性貧血患者EPO水平較低，在進行治療過程中，往往通過注射EPO來提高體內(nèi)EPO水平進行治療，從而幫助病人增加紅細(xì)胞數(shù)量，此時EPO水平有所上升。2、其他貧血如缺鐵性貧血、巨細(xì)胞性貧血患者EPO水平不降低，但也可以使用EPO治療，此時濃度也會有所升高。3、再生障礙性貧血和骨髓造血功能不全患者EPO水平升高。第五頁，共十八頁。EPO的純化歷史1、Miyake的七步法：純化步驟太多，對設(shè)備及操作要求也較高，不適合工業(yè)生產(chǎn)的特點。2、Spivik利用凝集素親和層析純化EPO：由于凝集素親和層

3、析凝膠易被雜蛋白不可逆吸附，使得別離效果降低，本錢增高，也不利于大規(guī)模生產(chǎn)。3、近年來那么利用三步層析法三步純化根本流程 等。第六頁，共十八頁。EPO的工藝流程三步層析法1、 染料配基親和層析反相疏水層析離子交換層析;2、 染料配基親和層析反相疏水層析分子篩層析;3、 反相疏水層析離子交換層析分子篩層析。第七頁，共十八頁。EPO的工藝流程三步純化根本流程第一步：反相柱色譜 樣品濃縮約96.7%透析第二步： DEAE-離子交換色譜第三步： 分子篩色譜 總回收率 30% 比活 1.5*108U/g蛋白第八頁，共十八頁。第一步：反相色譜C6 反相柱2cm*2cm 創(chuàng)新生物技術(shù)公司流程： 上樣 50m

4、l/min柱結(jié)合量約5mg蛋白/ml介質(zhì)) 去離子水平衡至檢測基線 10%80%乙醇胍線性梯度洗脫 檢測并收集含EPO主峰 ELISA測定結(jié)果：60%乙醇-1mol/L鹽酸胍洗出EPO第九頁，共十八頁。透析透析液：10倍體積的10mmol/L Tris.HCl (pH 7.5)-2%蔗糖緩沖液透析次數(shù)：2時間：56h第十頁，共十八頁。第二步：離子交換柱DEAE型離子交換柱流程： 10mmol/L Tris.HCl(pH7.5)緩沖液平 上樣 20ml/min柱結(jié)合量20mg/ml 10mmol/L Tris.HCl(pH7.5)緩沖液平衡至基線 添加NaCl入緩沖液，進行截狀梯度洗脫NaCl濃

5、度分別為：50，70，125mmol/L結(jié)果： ELISA檢測盒說明75mmol/L洗脫峰中含EPO第十一頁，共十八頁。第三步：分子篩色譜Sephacryl S-200 色譜分析流程： 上樣體積 80ml 流速 2ml/min 流動相 20mmol/L 檸檬酸鈉- 100mmol/L NaCl 緩沖液結(jié)果：收集的rHuEPO保存時間約為45min 比活性約為1.5*108U/g蛋白；純度 98%SDS檢測 免疫原性檢測：Western blot第十二頁，共十八頁。EPO的銷售情況重組促紅細(xì)胞生成素，也稱超級“重磅炸彈基因藥物 。1985年科學(xué)家應(yīng)用基因重組技術(shù)，在實驗室獲得重組人EPOrhEP

6、O，1989年安進Amgen公司的第一個基因重組藥物Epogen獲得FDA的批準(zhǔn)，適應(yīng)癥為慢性腎功能衰竭導(dǎo)致的貧血、惡性腫瘤或化療導(dǎo)致的貧血、失血后貧血等，其市場表現(xiàn)不俗，1999年銷售值到達17.6億美元，2000年19.6億美元，2002年22.6億美元，2003年24.4億美元，成為名副其實的“重磅炸彈基因藥物。 第十三頁，共十八頁。安進Amgen開發(fā)的用于治療惡性貧血癥的第二代促紅細(xì)胞生成素新產(chǎn)品Arnesp2001年得到FDA的批準(zhǔn)，Arnesp2002年初正式上市。Arnesp：是一種“高糖基化促紅素產(chǎn)品。其促進紅細(xì)胞生成的能力大大優(yōu)于第一代EPO促紅細(xì)胞生成素產(chǎn)品。第一年上市即大

7、獲全勝，贏得開們紅，Arnesp2002年全年銷售額為4.2億美元，2003年全年銷售額為15.4億美元。估計在今后3年內(nèi)，Arnesp將創(chuàng)造10億15億美元的市場銷售額并奪取現(xiàn)有EPO生產(chǎn)商的局部市場，其市場前景不可估量。第十四頁，共十八頁。2001年，EPO包括Arnesp的全球銷售額達21.1億美元，2002年達26.8億美元，2003年全世界EPO的年銷售額超過50億美元。創(chuàng)下生物工程藥品單個品種之最，是當(dāng)今最成功的基因工程藥物。 強生Johnson&Johnson公司的促紅細(xì)胞生成素Procrit/Eprex更是表現(xiàn)不俗，2001年銷售額34.42億美元，2002年銷售額42.69億美元， 2003年銷售收入到達39.84億美元。 第十五頁，共十八頁。目前，國內(nèi)已有10多家單位獲準(zhǔn)生產(chǎn)紅細(xì)胞生成素。沈陽三生和上海麒麟鯤鵬中國生物藥業(yè)的產(chǎn)品在國內(nèi)醫(yī)院的銷售額獨領(lǐng)風(fēng)騷，2001年EPO的國內(nèi)醫(yī)院銷售總額約為47449萬元，2002年為49508萬元，2003年上半年為28606萬元。估計國內(nèi)的年市場容量在20到30億元左右，但目前年銷售額只有區(qū)區(qū)5億元左右。綜上所述，EPO的市場前景非?？捎^。 EPO的市場前景第十六頁，共十八頁。THANK YOU !第十七頁，共十八頁。內(nèi)容總結(jié)基因工程藥物