1、動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染答疑-用RNA或DNA直接注射動(dòng)物完成干擾和表達(dá)動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染，簡(jiǎn)單地說，就是用RNA和DNA直接打動(dòng)物完成干擾和表達(dá)。再通俗地說，用合成的(RNA)或者提取的核酸(DNA)，就可以完成以前的動(dòng)物轉(zhuǎn)基因或者基因敲除的實(shí)驗(yàn)，無需再用病毒或者基因敲除動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)周期可以縮短為幾天，花費(fèi)幾千元即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)的出現(xiàn)，讓廣大生物醫(yī)學(xué)研究者，輕松進(jìn)行動(dòng)物的基因干擾、導(dǎo)入等操作。尤其是臨床醫(yī)學(xué)工作者，可以在很少工作量較少經(jīng)費(fèi)的情況下，直接針對(duì)研究的疾病進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，發(fā)表高水平文章。比如在英格恩客戶已發(fā)表的文章中，有尾靜脈注射DNA研究治療病毒性心肌炎，有皮下腫瘤注射miRNA研究治

2、療結(jié)腸癌，有腦室注射siRNA研究腦缺血機(jī)理，有皮膚涂抹siRNA治療皮膚瘢痕等。這些研究都非常有臨床和現(xiàn)實(shí)意義。 由于動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)應(yīng)用的時(shí)間不長(zhǎng)，對(duì)這種嶄新的技術(shù)人們還不太了解。此次受丁香園邀請(qǐng)，特開此動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)答疑專帖。對(duì)站友們提出的問題給予解答，希望能夠和大家相互學(xué)習(xí)，共同進(jìn)步。任何與動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染有關(guān)的問題（包括實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、產(chǎn)品、實(shí)驗(yàn)過程、結(jié)果分析、文獻(xiàn)等問題），大家盡管提出，我們會(huì)盡力解答，也歡迎站友們參加討論。 技術(shù)資料目錄：1.體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑的原理和方法 1).動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)可以做什么？ 2).體內(nèi)轉(zhuǎn)染的原理 3).體內(nèi)轉(zhuǎn)染的過程 4).體內(nèi)轉(zhuǎn)染需要的實(shí)驗(yàn)條件 5)

3、.體內(nèi)轉(zhuǎn)染適合進(jìn)行怎樣的實(shí)驗(yàn) 6).體內(nèi)轉(zhuǎn)染可以在哪些組織器官進(jìn)行 7).應(yīng)用體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑發(fā)表的部分文獻(xiàn) 8).動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染和病毒感染的比較 9).動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染和基因敲除的比較2.體內(nèi)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì) 1).需要的材料 2).需要的時(shí)間 3).需要的費(fèi)用 4).常見的結(jié)果檢測(cè)方法3.體內(nèi)轉(zhuǎn)染過程相關(guān)問題及解答 1).體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑對(duì)動(dòng)物有什么影響？ 2).注射后，試劑是如何在體內(nèi)分布的，有靶向性嗎？ 3).轉(zhuǎn)染試劑和核酸需要使用多少？提問與解答：1、如何技術(shù)上解決（排除）RNAi的非特異性？是否需要復(fù)原實(shí)驗(yàn)（Rescue Experiment）。2、實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性/可靠性如何？需要使用多少只動(dòng)物，才

4、能實(shí)現(xiàn)90-95%可信度？3、遺傳性狀改變后能維持多久？如果性狀的改變是暫時(shí)的，那么經(jīng)過一段時(shí)間后，動(dòng)物能否恢復(fù)到原有的生理狀態(tài)（沒有后遺癥）？4、 這種siRNA的體內(nèi)注射，在不同的組織中可能轉(zhuǎn)染效率差別很大， 樓主能否告知哪些組織的轉(zhuǎn)染效率高，哪些低？5、不同的組織和注射方法，如何評(píng)估干擾效率？6、目前有沒有攜帶熒光的siRNA可以用于相關(guān)實(shí)驗(yàn)？7、我目前正在用病毒感染的方法，效果不是太好，病毒感染和體內(nèi)轉(zhuǎn)染有什么不一樣？病毒感染做不好，體內(nèi)轉(zhuǎn)染能做好嗎?8、不是太懂，動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)用來干什么，主要的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)是什么？9、很感興趣，你們的動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑有文獻(xiàn)支持嗎？10、再問一下，你們

5、試劑的原理是什么，使用方法麻煩嗎？11、請(qǐng)問體內(nèi)轉(zhuǎn)染可以轉(zhuǎn)染肺組織么？12、是直接通過氣管內(nèi)注射？13、轉(zhuǎn)染的基因過表達(dá)能夠維持多長(zhǎng)時(shí)間？14、可以直接用于關(guān)節(jié)內(nèi)軟骨相關(guān)基因轉(zhuǎn)染么，如何轉(zhuǎn)染？直接關(guān)節(jié)腔注射還是尾靜脈注射？15、我想請(qǐng)問一下你們這個(gè)轉(zhuǎn)染試劑多少錢？我想直接瘤內(nèi)注射是否可以？16、太好了，找到專家了！請(qǐng)教幾個(gè)問題，體內(nèi)轉(zhuǎn)染用慢病毒效果好嗎？目的組織是心肌，是尾靜脈注射好呢還是心肌局部注射好？17、可以腹膜腔注射么？18、每個(gè)目的器官用量怎么安排？每次還用同位素檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，那也不便宜啊。19、如果我做大鼠睪丸的RNA干擾，您能否建議是尾靜脈注射，還是涂抹還是其他方法呢？20、這個(gè)

6、實(shí)驗(yàn)技術(shù)很新呢，眼前一亮，我的實(shí)驗(yàn)是移植一種細(xì)胞到視網(wǎng)膜下腔，想要干擾這種細(xì)胞中的某個(gè)基因的表達(dá)，如果通過常規(guī)的體外RNAi技術(shù)比較麻煩，想直接在移植細(xì)胞的時(shí)候同時(shí)用你們的這個(gè)進(jìn)行局部體內(nèi)注射，這樣是否可以實(shí)現(xiàn)呢？21、第二個(gè)問題是，我的實(shí)驗(yàn)中是要干擾移植細(xì)胞中的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)，但是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子種類很多，包括bFGF、BDNF、NT-3、NT-4/5等，如果想抑制多種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)有可能嗎？謝謝！22、你好，請(qǐng)問想要消除小鼠腦內(nèi)海馬神經(jīng)元細(xì)胞中某種microRNA的表達(dá)，可以用你們的轉(zhuǎn)染試劑么？怎么注射，側(cè)腦室注射還是尾靜脈注射比較好？另外，你們?cè)噭┑膬r(jià)格是多少？問與答：1、如何技術(shù)上

7、解決（排除）RNAi的非特異性？是否需要復(fù)原實(shí)驗(yàn)（Rescue Experiment）。RNAi的非特異性是每個(gè)RNAi實(shí)驗(yàn)所必須考慮的，一般通過設(shè)計(jì)多條針對(duì)同一個(gè)基因的siRNA等，如果都能得到同樣的結(jié)果，一般認(rèn)為是特異性的。如果您不能確定是否有非特異性，理論上是需要Rescue Experiment的。但這些實(shí)驗(yàn)一般都在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)階段。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段，可通過合適的對(duì)照來排除非特異性。2、實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性/可靠性如何？需要使用多少只動(dòng)物，才能實(shí)現(xiàn)90-95%可信度？實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性或可靠性和整體的實(shí)驗(yàn)分不開，如果基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)（比如細(xì)胞實(shí)驗(yàn)）充分，而且又有其他的方法進(jìn)行印證，那么實(shí)驗(yàn)的可靠性就很高，這時(shí)動(dòng)物

8、體內(nèi)轉(zhuǎn)染就不需要太多動(dòng)物，幾十只動(dòng)物，能說明問題就可以。但如果其他的實(shí)驗(yàn)較少，單純用一種方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，就需要排除實(shí)驗(yàn)過程的客觀因素的影響，比如動(dòng)物本身的差異，比如實(shí)驗(yàn)過程的差異，比如檢測(cè)方法的誤差等。這時(shí)就需要?jiǎng)游飻?shù)量足夠，以達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)上的誤差要求。3、遺傳性狀改變后能維持多久？如果性狀的改變是暫時(shí)的，那么經(jīng)過一段時(shí)間后，動(dòng)物能否恢復(fù)到原有的生理狀態(tài)（沒有后遺癥）？屬于瞬時(shí)的轉(zhuǎn)染，對(duì)目標(biāo)基因的改變，一般注射1次，可以維持7-14天左右。隨后，隨著轉(zhuǎn)入的核酸的代謝，效應(yīng)減弱消失。動(dòng)物是否回復(fù)到原有的生理狀態(tài)，這與目標(biāo)基因有關(guān)系。如果希望長(zhǎng)期維持動(dòng)物的轉(zhuǎn)染狀態(tài)，可以多次注射。 4、這種siRNA的

9、體內(nèi)注射，在不同的組織中可能轉(zhuǎn)染效率差別很大， 樓主能否告知哪些組織的轉(zhuǎn)染效率高，哪些低？如果通過尾靜脈注射，確實(shí)不同組織的分布有差異。一般來說，肝、肺、腎的分布最高。一般分布高的地方轉(zhuǎn)染效率也相對(duì)較高。但不是其他的組織器官效果就不好，相反，對(duì)絕大多數(shù)的器官組織來說，采用體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)，效果也很好。比如一般認(rèn)為神經(jīng)細(xì)胞難以轉(zhuǎn)染，而且尾靜脈動(dòng)物給藥，通過血腦屏障到達(dá)大腦也不容易。但實(shí)驗(yàn)表明，用體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)進(jìn)行尾靜脈轉(zhuǎn)染，能明顯轉(zhuǎn)染大腦神經(jīng)細(xì)胞。還有通常認(rèn)為難以轉(zhuǎn)染的心肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和原代細(xì)胞，用體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)也有這樣的效果。所以，采用體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)后，很多難以想象的組織器官等都可以應(yīng)用，比如，甚

10、至可以皮膚涂抹siRNA轉(zhuǎn)染到瘢痕組織，影響毛發(fā)生長(zhǎng)。5、不同的組織和注射方法，如何評(píng)估干擾效率？針對(duì)具體的組織器官，不同的注射方法會(huì)明顯影響效果。比如，大腦神經(jīng)細(xì)胞的體內(nèi)轉(zhuǎn)染，可以采用尾靜脈注射和側(cè)腦室注射，用側(cè)腦室的方法就好得多。再比如，肺部的體內(nèi)轉(zhuǎn)染，用氣管灌注就比用尾靜脈注射的方法好得多。體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑和核酸的混合物與靶器官的接觸越直接越充分，效果越好。干擾效率可以理解為干擾的細(xì)胞數(shù)量和全部細(xì)胞的數(shù)量的比例。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，這2個(gè)數(shù)字可以精確計(jì)算。但在動(dòng)物體內(nèi)無法精確統(tǒng)計(jì)。一般評(píng)估效果，我們建議在分子水平，用RT-PCR，在細(xì)胞水平，用Western-Blot，在組織水平，用病理生理等

11、方法。6、目前有沒有攜帶熒光的siRNA可以用于相關(guān)實(shí)驗(yàn)？目前攜帶熒光的siRNA，如FAM熒光基團(tuán)標(biāo)記的，熒光比GFP等弱很多，而且光點(diǎn)很小，穿透性很差。如果需要評(píng)估siRNA在動(dòng)物體內(nèi)的分布，我們建議還是用靈敏度和穿透性更好的同位素標(biāo)記。7、我目前正在用病毒感染的方法，效果不是太好，病毒感染和體內(nèi)轉(zhuǎn)染有什么不一樣？病毒感染做不好，體內(nèi)轉(zhuǎn)染能做好嗎? 1）關(guān)于病毒感染和體內(nèi)轉(zhuǎn)染的區(qū)別: 動(dòng)物轉(zhuǎn)染試劑病毒感染實(shí)驗(yàn)周期最快3天就可以出結(jié)果需要進(jìn)行克隆、病毒包裝等一系列實(shí)驗(yàn)，周期短則1個(gè)月，長(zhǎng)則達(dá)數(shù)月。靈活性更換核酸簡(jiǎn)單，利于篩選。更換核酸序列，需要重新構(gòu)建和包裝病毒，復(fù)雜而且費(fèi)工費(fèi)時(shí)。效 果方法

12、簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)少，尤其在轉(zhuǎn)染小片斷RNA方面，如：siRNA, miRNA, mimic, inhibitor等，有非常明確的效果，而且普通的用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的RNA就可以，效果非?？隙ā＠碚撋闲Ч诲e(cuò)，但由于病毒實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)較多，任何一個(gè)環(huán)節(jié)出問題都容易導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗，而且失敗后，不易查找原因。實(shí)際上很多實(shí)驗(yàn)室失敗后，往往暫停或終止了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，導(dǎo)致課題研究質(zhì)量的降低。持續(xù)時(shí)間屬于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，單次轉(zhuǎn)染效果持續(xù)7-14天，但可以通過多次注射維持轉(zhuǎn)染效果可以通過整合到基因組內(nèi)長(zhǎng)期發(fā)揮作用費(fèi)用只花費(fèi)幾千元即可立即進(jìn)行小規(guī)模預(yù)實(shí)驗(yàn)來確定動(dòng)物實(shí)驗(yàn)效果。進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)也需要花費(fèi)數(shù)萬元和數(shù)月包裝病毒，環(huán)節(jié)多，易出錯(cuò)，不易成

13、功。2）關(guān)于病毒感染如果效果不好，體內(nèi)轉(zhuǎn)染是否可以病毒感染和體內(nèi)轉(zhuǎn)染屬2種實(shí)驗(yàn)手段，單從方法看，病毒感染和體內(nèi)轉(zhuǎn)染不相關(guān)，所以病毒感染如果不好，體內(nèi)轉(zhuǎn)染并不受影響，反之，也一樣。當(dāng)然如果實(shí)驗(yàn)本質(zhì)上就不會(huì)有效果，比如錯(cuò)誤的干擾序列，那么采用任何方法都不會(huì)成功。 一般來說，如果細(xì)胞實(shí)驗(yàn)是成功的，基本可以排除實(shí)驗(yàn)的不可行性，那么就主要是方法有問題，這時(shí)，如果病毒感染不好，可以采用體內(nèi)轉(zhuǎn)染。 另外，現(xiàn)在英格恩有病毒感染體內(nèi)增強(qiáng)試劑，可以大大提高病毒的感染效果。您也可以試一下這個(gè)。8、不是太懂，動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)用來干什么，主要的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)是什么？1）簡(jiǎn)單地說，如果你希望影響動(dòng)物某部位基因的功能，增強(qiáng)、減

14、弱，以及引入外源基因。就可以用動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)。 2）主要特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：比較以前的病毒感染、基因敲除、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等方法，要簡(jiǎn)單得多，用合成的小RNA與體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑混合注射動(dòng)物，就可以進(jìn)行類似基因敲除的實(shí)驗(yàn)。同樣，用質(zhì)粒DNA與體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑混合注射動(dòng)物就可以進(jìn)行類似轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)。 非常方便，注射幾天后就可以觀察結(jié)果，而且可以隨時(shí)更換核酸，完成更多基因，更深入的實(shí)驗(yàn)。 而且，省時(shí)間和經(jīng)費(fèi)。病毒感染需要?jiǎng)虞m上萬的經(jīng)費(fèi)和數(shù)月包裝病毒的時(shí)間?；蚯贸鲜蠛娃D(zhuǎn)基因動(dòng)物也很麻煩。9、很感興趣， 你們的動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑有文獻(xiàn)支持嗎？這是部分的文獻(xiàn)，附件有部分全文。1.CNS Neurosci Ther. 20

15、13 May 3.The Involvement of Programmed Cell Death 5 (PDCD5) in the Regulation of Apoptosis in Cerebral Ischemia/Reperfusion Injury.(腦室注射siRNA研究腦缺血的凋亡機(jī)理)2.Matrix Biol. 2013 Mar 5.Transdermal siRNA-TGF1-337 patch for hypertrophic scar treatment.(皮膚涂抹siRNA研究治療皮膚瘢痕)3.J Cereb Blood Flow Metab. 2013 Jan 9

16、.SirT1 mediates hyperbaric oxygen preconditioning-induced ischemic tolerance in rat brain.腦室注射siRNA研究腦缺血機(jī)理)4.Cancer Lett. 2012 Jan 28;314(2):223-31. Epub 2011 Oct 5.NIRF is frequently upregulated in colorectal cancer and its oncogenicity can be suppressed by let-7a microRNA.(皮下腫瘤注射miRNA研究治療結(jié)腸癌),.5.B

17、MC Infect Dis. 2012 Aug 6;12(1):177.Short hairpin RNA targeting 2B gene of coxsackievirus B3 exhibits potential antiviral effects both in vitro and in vivo.(尾靜脈注射DNA研究治療病毒性心肌炎)6.Curr Pharm Des. 2012 Sep 25.MicroRNAs (miRNAs) in colorectal cancer: From aberrant expression towards therapy.7.Progress i

18、n Modern Biomedicine 2010 Sep.Anti-Virus Research on Short Double-Stranded RNA in Mouse Models with Viral Myocarditis. 10、再問一下，你們?cè)噭┑脑硎鞘裁?，使用方法麻煩嗎?）體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑Entranster-in vivo是采用納米技術(shù)合成的高分子化合物，通過物理作用與核酸結(jié)合，濃縮包裹核酸，從而保護(hù)核酸免受免疫系統(tǒng)破壞，同時(shí)將核酸富集在細(xì)胞表面，保護(hù)促進(jìn)核酸進(jìn)入細(xì)胞組織發(fā)揮作用。不含任何動(dòng)物來源成分，由于處于納米尺度，粒徑小，不易引起免疫反應(yīng)，不影響動(dòng)物和器官組織的功能，

19、可以多次在同一動(dòng)物注射。 2）使用方法非常簡(jiǎn)單，幾天就可以出結(jié)果。 第1天：將RNA或DNA與轉(zhuǎn)染試劑混合，注射動(dòng)物。 第2天或稍長(zhǎng)：動(dòng)物常規(guī)生長(zhǎng)。 第3天或稍長(zhǎng)：效果檢測(cè)(PCR，Western Blot，病理，生理等)。 如此說來，從學(xué)術(shù)研究看，動(dòng)物RNAi的工作量還是蠻大的，并不比KO少。 還是傳統(tǒng)的KO結(jié)果清楚，也容易解釋。 例如，一些基因?qū)儆贖aploid Insufficiency， 動(dòng)物RNAi可能就無法弄明白。 不過在應(yīng)用研究上，尤其是在小鼠以外的動(dòng)物身上，動(dòng)物RNAi還是可以試一試。 關(guān)于動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染和KO(基因敲除)比較，基因敲除確實(shí)有其優(yōu)勢(shì)，可以在動(dòng)物中長(zhǎng)期存在某基因的缺

20、失。但基因敲除，也有這樣的問題，就是敲除的基因會(huì)在動(dòng)物的全身存在，不利于局部的研究。即使針對(duì)同一個(gè)基因，各個(gè)實(shí)驗(yàn)室基因敲除產(chǎn)生的動(dòng)物也可能有差異，不利于實(shí)驗(yàn)的重復(fù)。動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染對(duì)動(dòng)物的依賴很少，很容易重復(fù)?；蚯贸臅r(shí)間周期也很長(zhǎng)，而且由于其不可替代性，飼養(yǎng)要求高?；蚯贸齽?dòng)物的數(shù)量有限，費(fèi)用高，不利于大規(guī)模的篩選和評(píng)估。動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染可以做大量動(dòng)物，避免了個(gè)體差異，飼養(yǎng)操作等誤差，實(shí)驗(yàn)容易重復(fù)，而且可以隨時(shí)更換基因，進(jìn)行上下游研究，非常靈活。由于KO動(dòng)物的相對(duì)來之不易，所以實(shí)驗(yàn)數(shù)量少一些，可能從這個(gè)角度看，工作量少。實(shí)際KO的工作量一點(diǎn)都不少，包括前期的準(zhǔn)備，KO動(dòng)物的構(gòu)建，KO動(dòng)物的鑒定等等

21、。關(guān)于Haploid Insufficiency(單倍體功能不全)，一般指等位基因的2個(gè)拷貝中，其中一個(gè)拷貝由于突變等導(dǎo)致產(chǎn)生的蛋白數(shù)量減少或功能不全，實(shí)際就是該基因功能的部分失活(不全)。KO動(dòng)物往往可能存在這樣的問題。Haploid Insufficiency(單倍體功能不全)和RNAi在效果上是類似的。研究Haploid Insufficiency(單倍體功能不全)，多不需要再采用動(dòng)物的RNAi，而是需要采用動(dòng)物的基因表達(dá)，也就是轉(zhuǎn)DNA到動(dòng)物，以增強(qiáng)該基因的功能，這個(gè)也是動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染的一部分。動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染目前在小鼠上應(yīng)用較多，主要是小鼠成本低，而且容易獲得和操作。KO動(dòng)物主要是鼠，也是

22、這個(gè)原因。 11、請(qǐng)問體內(nèi)轉(zhuǎn)染可以轉(zhuǎn)染肺組織么？轉(zhuǎn)染肺組織是沒有問題的。12、是直接通過氣管內(nèi)注射？轉(zhuǎn)染肺有2種方式，1.是通過氣管灌注，需要做氣管切開。2.通過靜脈注射。這2種方法都可以，區(qū)別是：氣管直接灌注效果更好，而且用量較少，可以做較大動(dòng)物，比如兔。但需要麻醉動(dòng)物進(jìn)行氣管切開，放置氣管導(dǎo)管，方便給藥。通過靜脈給藥，相對(duì)用量較大，一般做小動(dòng)物，比如鼠。13、轉(zhuǎn)染的基因過表達(dá)能夠維持多長(zhǎng)時(shí)間？如果進(jìn)行基因的過表達(dá)，一般可以維持2周。如果需要長(zhǎng)時(shí)間維持，可以進(jìn)行多次給藥。14、可以直接用于關(guān)節(jié)內(nèi)軟骨相關(guān)基因轉(zhuǎn)染么，如何轉(zhuǎn)染？直接關(guān)節(jié)腔注射還是尾靜脈注射？關(guān)節(jié)內(nèi)軟骨相關(guān)基因的轉(zhuǎn)染相對(duì)難一些，尤

23、其是轉(zhuǎn)DNA，但可以使用。一般采用關(guān)節(jié)腔注射的方法。15、我想請(qǐng)問一下你們這個(gè)轉(zhuǎn)染試劑多少錢？我想直接瘤內(nèi)注射是否可以？瘤內(nèi)注射不管是DNA還是RNA效果都不錯(cuò)，而且用量花費(fèi)很少。這里只技術(shù)答疑，關(guān)于價(jià)格，已發(fā)站內(nèi)信息。16、太好了，找到專家了！請(qǐng)教幾個(gè)問題，體內(nèi)轉(zhuǎn)染用慢病毒效果好嗎？目的組織是心肌，是尾靜脈注射好呢還是心肌局部注射好？科研實(shí)驗(yàn)，有很多方法可以選擇，各種方法都有其成功的應(yīng)用者，各種方法殊途同歸，從這個(gè)角度看，各種方法都可以采用，各種方法都可能失敗，效果的好壞和很多因素有關(guān)。單純從方法看，之所以不同的研究者采用不同的方法，多從以下因素考慮：.實(shí)驗(yàn)方法是否成熟（是否有文獻(xiàn)支持）；.

24、方法是否易于操作，如同解數(shù)學(xué)題，有的方法需要10步，有的需要2步，多種方法都可以成功，如果10步的方法，每步都很熟，都能保證不錯(cuò)，結(jié)果也會(huì)成功，當(dāng)然，2步的方法，由于過程少，更易操作和成功。.方法是否節(jié)省時(shí)間和經(jīng)費(fèi)。相信很多研究者都是在考慮平衡到上述因素后，評(píng)估當(dāng)時(shí)能采用和利用的最佳方法后進(jìn)行的研究。還需要說明一點(diǎn)的是，單一一種方法，有時(shí)會(huì)有其系統(tǒng)誤差，所以很多高質(zhì)量的文獻(xiàn)重要的實(shí)驗(yàn)采用的方法都不只一種，就是為了避免“孤證”的產(chǎn)生。 關(guān)于心肌的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的注射途徑的問題，尾靜脈注射和心肌直接注射的文獻(xiàn)都有報(bào)道，說明這2種方法對(duì)應(yīng)用者來說都不錯(cuò)，這和前面的問題類似，2種方法涉及不同的技術(shù)。心肌局部注射，一般注射到心包，直接作用到心肌，試劑用量少，缺點(diǎn)是需要掌握心臟注射的技術(shù)，老鼠易死亡。尾靜脈注射，技術(shù)簡(jiǎn)單，但試劑用量大，花費(fèi)可能高?？傊?，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)室和課題的具體情況，平衡各種因素，一般在有成熟的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)（文獻(xiàn)支持）基礎(chǔ)上，首先采用方法簡(jiǎn)單的，過程少的，實(shí)驗(yàn)成功概率大的，在成功的基礎(chǔ)上，可以再才用其它方法進(jìn)行驗(yàn)證，這樣得出的實(shí)驗(yàn)結(jié)論才更可靠，更有說服力，文章也更容易