1、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)一、課程名稱：細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)Cell Engineering Experiment 二、實(shí)驗(yàn)課性質(zhì)：獨(dú)立設(shè)課三、適用專業(yè)：生物技術(shù)四、采用教材及參考書司徒鎮(zhèn)強(qiáng)，吳軍正. 細(xì)胞培養(yǎng). 西安：世界圖書出版社，1996李志勇. 細(xì)胞工程. 北京：科學(xué)出版社，2003馮懷亮.哺乳動(dòng)物胚胎工程. 長(zhǎng)春：吉林科學(xué)技術(shù)出版社，1994五、學(xué)時(shí)學(xué)分課程總學(xué)時(shí)：36；課程總學(xué)分：1；實(shí)驗(yàn)課總學(xué)時(shí)：36六、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱和學(xué)時(shí)分配序號(hào)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱學(xué)時(shí)分配實(shí)驗(yàn)屬性實(shí)驗(yàn)類型實(shí)驗(yàn)者類別每組人數(shù)必開/選開1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的配制及滅菌4基礎(chǔ)類驗(yàn)證性本?？?必開2動(dòng)物細(xì)胞的組織塊培養(yǎng)法4基礎(chǔ)類驗(yàn)證性本專科1必開3動(dòng)物

2、細(xì)胞的消化培養(yǎng)法4基礎(chǔ)類綜合設(shè)計(jì)性本?？?必開4動(dòng)物細(xì)胞的傳代培養(yǎng)8基礎(chǔ)類設(shè)計(jì)性本?？?選開5細(xì)胞基本參數(shù)觀察4基礎(chǔ)類驗(yàn)證性本?？?選開6細(xì)胞的超低溫凍存,復(fù)蘇4基礎(chǔ)類綜合設(shè)計(jì)性本?？?選開7動(dòng)物細(xì)胞的活性測(cè)定4基礎(chǔ)類綜合設(shè)計(jì)性本?？?選開8培養(yǎng)細(xì)胞的染色體標(biāo)本制備與分帶技術(shù)4基礎(chǔ)類驗(yàn)證性本專科1選開9小鼠的免疫試驗(yàn)和用于融合細(xì)胞飼養(yǎng)層細(xì)胞的制備4基礎(chǔ)類綜合設(shè)計(jì)性本?？?必開10骨髓瘤細(xì)胞和免疫脾細(xì)胞的制備4基礎(chǔ)類綜合性本?？?選開11細(xì)胞融合4基礎(chǔ)類綜合設(shè)計(jì)性本?？?選開12雜交瘤細(xì)胞選擇和克隆化培養(yǎng)4基礎(chǔ)類綜合設(shè)計(jì)性本專科1選開13血清制備或抗血清制備和抗體的檢測(cè)試驗(yàn)6基礎(chǔ)類綜合性本?？?

3、選開14單克隆抗體的制備與分離純化6基礎(chǔ)類綜合設(shè)計(jì)性本?？?選開15小鼠超數(shù)排卵技術(shù)小鼠和胚胎移植6基礎(chǔ)類綜合性本專科1選開16小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEF）的培養(yǎng)及胚胎干細(xì)胞滋養(yǎng)層的制備4基礎(chǔ)類驗(yàn)證性本?？?選開17小鼠胚胎干細(xì)胞（ES）的體外培養(yǎng)8基礎(chǔ)類綜合性本專科1選開18植物組織與細(xì)胞培養(yǎng)基的配制與滅菌4技術(shù)基礎(chǔ)類驗(yàn)證性本?？?選開19外植體的消毒與愈傷組織誘導(dǎo)4技術(shù)基礎(chǔ)類驗(yàn)證性本?？?選開20植物懸浮細(xì)胞系的建立4技術(shù)基礎(chǔ)類設(shè)計(jì)性本?？?選開21原生質(zhì)體的分離與培養(yǎng)6技術(shù)基礎(chǔ)類設(shè)計(jì)性本專科1選開22細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)及生化檢測(cè)6技術(shù)基礎(chǔ)類綜合性本?？?選開23流式細(xì)胞術(shù)分選血細(xì)胞試驗(yàn)動(dòng)物6

4、基礎(chǔ)類綜合性本?？?選開24動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)8技術(shù)基礎(chǔ)類綜合性本專科1選開25植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)8技術(shù)基礎(chǔ)類綜合性本?？?選開七、實(shí)驗(yàn)教學(xué)的目的和要求細(xì)胞工程是一門綜合多種學(xué)科和技術(shù)的新興學(xué)科，也是一門為多門學(xué)科提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)的學(xué)科，與生物學(xué)、化學(xué)和工程學(xué)等基礎(chǔ)學(xué)科緊密相關(guān)。既然是一門以實(shí)驗(yàn)學(xué)科為主的一門科學(xué)，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果就顯得尤其重要。實(shí)驗(yàn)的結(jié)果好壞，與實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)備和實(shí)驗(yàn)的過(guò)程有關(guān)。在實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備階段，首先要做好計(jì)劃，包括：做什么，怎樣做，用什么做，實(shí)驗(yàn)程序是什么，關(guān)鍵程序是什么，這些都要做到心中有數(shù)，然后進(jìn)行準(zhǔn)備。在實(shí)驗(yàn)的實(shí)施階段，就要根據(jù)計(jì)劃所列的程序進(jìn)行操作，盡管有一些變化，但變化以不

5、會(huì)使計(jì)劃亂套為準(zhǔn)繩。每一門科學(xué)有著科學(xué)發(fā)展的總規(guī)律，即從低級(jí)到高級(jí)逐漸發(fā)展的完善過(guò)程；每一門科學(xué)都有著自身發(fā)展的個(gè)性規(guī)律。對(duì)于細(xì)胞工程來(lái)這一實(shí)驗(yàn)為主的學(xué)科來(lái)說(shuō)，其內(nèi)容就由較低級(jí)的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)和由應(yīng)用較高價(jià)值精密儀器進(jìn)行的高級(jí)實(shí)驗(yàn)組成。也許有的同學(xué)瞧不起低級(jí)的實(shí)驗(yàn)，但請(qǐng)不要忘記這些實(shí)驗(yàn)是基礎(chǔ)。沒(méi)有這些基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的磨練，其科學(xué)素養(yǎng)難以塑造成功。有了基礎(chǔ)，有了科學(xué)素養(yǎng)，再進(jìn)行其他實(shí)驗(yàn)也就相對(duì)自由了，自如了。目的：學(xué)習(xí)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體制備、哺乳動(dòng)物早期胚胎細(xì)胞和干細(xì)胞的活體觀察與體外培養(yǎng)技術(shù)，以及細(xì)胞工程相關(guān)綜合技術(shù)。鍛煉學(xué)生的動(dòng)手驗(yàn)證能力，開拓學(xué)生的思維能力，培養(yǎng)

6、學(xué)生的科學(xué)素養(yǎng)，使自己具備能夠進(jìn)行獨(dú)立設(shè)計(jì)、實(shí)施和完成科學(xué)實(shí)驗(yàn)的能力。要求：學(xué)生應(yīng)按照先簡(jiǎn)后繁、先易后難的順序進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。 掌握實(shí)驗(yàn)室和工程化生產(chǎn)的技術(shù)要點(diǎn)，掌握動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體制備技術(shù)和小鼠胚胎工程技術(shù)，了解哺乳動(dòng)物早期胚胎細(xì)胞和干細(xì)胞的活體觀察與體外培養(yǎng)技術(shù)，以及細(xì)胞工程相關(guān)技術(shù)。八、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的內(nèi)容和要求1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的配制及過(guò)濾除菌實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1.1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的配制PBS，DMEM，1640，TCM，MEM1.2、培養(yǎng)基的過(guò)濾除菌和高壓滅菌PBS，DMEM，1640，TCM，MEM實(shí)驗(yàn)要求：掌握配制人工合成動(dòng)物培養(yǎng)液（基）；掌握過(guò)濾滅菌和

7、高壓滅菌應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋13CO 2培養(yǎng)箱24超凈工作臺(tái)42動(dòng)物細(xì)胞的組織塊培養(yǎng)法實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：2.1皮膚的原代培養(yǎng)（組織快法）2.2肝臟細(xì)胞培養(yǎng)（組織快法或消化法）實(shí)驗(yàn)要求：掌握動(dòng)物常見組織皮膚，胚胎成纖維細(xì)胞，肝臟，腎臟取材的要點(diǎn)，掌握組織塊培養(yǎng)法，了解實(shí)驗(yàn)初步設(shè)計(jì)。應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋13CO 2培養(yǎng)箱33倒置顯微鏡2一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置5超凈工作臺(tái)46離心機(jī)22臺(tái)高速離心機(jī)（>2000轉(zhuǎn)/分鐘），10ml轉(zhuǎn)頭，1.5ml轉(zhuǎn)頭，培養(yǎng)板轉(zhuǎn)頭7顯微鏡253動(dòng)物細(xì)胞

8、的消化培養(yǎng)法實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：3.1肝臟或胚胎成纖維細(xì)胞培養(yǎng)3.2腎臟細(xì)胞培養(yǎng)3.3表皮細(xì)胞消化培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)要求：掌握動(dòng)物皮膚，胚胎成纖維細(xì)胞，肝臟，腎臟取材的要點(diǎn)，掌握常見的化學(xué)消化法和酶消化法步驟，熟悉常用的試劑，了解實(shí)驗(yàn)初步設(shè)計(jì)。應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋13CO 2培養(yǎng)箱33倒置顯微鏡2一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置5超凈工作臺(tái)46離心機(jī)22臺(tái)高速離心機(jī)（>2000轉(zhuǎn)/分鐘），10ml轉(zhuǎn)頭，1.5ml轉(zhuǎn)頭，培養(yǎng)板轉(zhuǎn)頭7顯微鏡254動(dòng)物細(xì)胞的傳代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：4.1皮膚的傳代培養(yǎng)4.2胚胎成纖維細(xì)胞培養(yǎng)4.3肝臟細(xì)胞培養(yǎng)4.4腎臟細(xì)胞培養(yǎng)4.5細(xì)

9、胞系的傳代實(shí)驗(yàn)要求：掌握動(dòng)物皮膚，胚胎成纖維細(xì)胞，肝臟，腎臟傳代的要點(diǎn)，了解實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化。應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋13CO 2培養(yǎng)箱23倒置顯微鏡2一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置5超凈工作臺(tái)46離心機(jī)22臺(tái)高速離心機(jī)（>2000轉(zhuǎn)/分鐘），10ml轉(zhuǎn)頭，1.5ml轉(zhuǎn)頭，培養(yǎng)板轉(zhuǎn)頭5培養(yǎng)細(xì)胞基本參數(shù)觀察實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：5.1細(xì)胞的分裂指數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞每24h消化細(xì)胞染色細(xì)胞固定細(xì)胞細(xì)胞記數(shù)繪制細(xì)胞的分裂指數(shù)圖分析結(jié)果5.2生長(zhǎng)曲線測(cè)定培養(yǎng)細(xì)胞每24h消化細(xì)胞細(xì)胞記數(shù)繪制細(xì)胞的分裂指數(shù)圖分析結(jié)果實(shí)驗(yàn)要求：掌握實(shí)驗(yàn)法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線和測(cè)定細(xì)胞分裂指數(shù)，驗(yàn)

10、證細(xì)胞的不同生長(zhǎng)時(shí)相和不同細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的不同。應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋250L3CO 2培養(yǎng)箱23倒置顯微鏡2一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置5超凈工作臺(tái)46離心機(jī)22臺(tái)高速離心機(jī)（>2000轉(zhuǎn)/分鐘），10ml轉(zhuǎn)頭，1.5ml轉(zhuǎn)頭，培養(yǎng)板轉(zhuǎn)頭7顯微鏡258冰箱2-20 6細(xì)胞的超低溫凍存,復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：6.1常規(guī)超低溫凍存甘油法，DMSO法，乙二醇法6.2玻璃化超低溫凍存甘油法+DMSO法+乙二醇法實(shí)驗(yàn)要求：掌握不同的細(xì)胞冷凍方法，掌握設(shè)計(jì)冷凍程序，比較冷凍效果掌握冷凍細(xì)胞的活性測(cè)定的基本方法，掌握酶標(biāo)儀的使用以及設(shè)定對(duì)照。應(yīng)配備的主要設(shè)

11、備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋13程序冷凍儀14CO 2培養(yǎng)箱25倒置顯微鏡3一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置6熒光顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置7超凈工作臺(tái)48酶標(biāo)儀1進(jìn)口，連續(xù)波長(zhǎng)9離心機(jī)22臺(tái)高速離心機(jī)（>2000轉(zhuǎn)/分鐘），10ml轉(zhuǎn)頭，1.5ml轉(zhuǎn)頭，培養(yǎng)板轉(zhuǎn)頭10雙目顯微鏡257細(xì)胞的活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：7.1臺(tái)盤蘭染色7.2伊紅Y染色7.3熒光染色消化細(xì)胞（或解凍細(xì)胞）調(diào)整細(xì)胞濃度熒光素處理孵化離心觀察或測(cè)定7.4 MTT染色消化細(xì)胞調(diào)整細(xì)胞濃度MTT處理孵化離心DMSO處理測(cè)定冷凍細(xì)胞解凍細(xì)胞調(diào)整細(xì)胞濃度MTT處理孵化離心DMSO處理測(cè)定實(shí)驗(yàn)要

12、求：掌握冷凍細(xì)胞的活性測(cè)定的基本方法，熟悉常用試劑和常用的液體配制方法，掌握酶標(biāo)儀的使用以及設(shè)定對(duì)照。應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋13程序冷凍儀14CO 2培養(yǎng)箱25倒置顯微鏡3一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置6熒光顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置7超凈工作臺(tái)48酶標(biāo)儀1進(jìn)口，連續(xù)波長(zhǎng)9離心機(jī)22臺(tái)高速離心機(jī)（>2000轉(zhuǎn)/分鐘），10ml轉(zhuǎn)頭，1.5ml轉(zhuǎn)頭，培養(yǎng)板轉(zhuǎn)頭10雙目顯微鏡258、培養(yǎng)細(xì)胞的染色體標(biāo)本制備與分帶技術(shù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：8.1培養(yǎng)細(xì)胞的染色體標(biāo)本制備對(duì)數(shù)期細(xì)胞秋水仙素處理收集細(xì)胞低滲處理固定滴片染色鏡檢結(jié)果分析8.2G帶技術(shù)對(duì)數(shù)

13、期細(xì)胞秋水仙素處理收集細(xì)胞低滲處理固定滴片胰蛋白酶-EDTA處理甲醇處理染色鏡檢結(jié)果分析8.3不同傳代數(shù)細(xì)胞染色體的檢驗(yàn)不同傳代數(shù)細(xì)胞秋水仙素處理收集細(xì)胞低滲處理固定滴片胰蛋白酶-EDTA處理甲醇處理染色鏡檢結(jié)果分析實(shí)驗(yàn)要求：掌握培養(yǎng)細(xì)胞的染色體標(biāo)本制備和G帶技術(shù)，了解動(dòng)物染色體的數(shù)目和特點(diǎn)。檢查傳代細(xì)胞染色體的變化應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱22高壓滅菌鍋13顯微鏡254CO 2培養(yǎng)箱25倒置顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置6超凈工作臺(tái)47離心機(jī)22臺(tái)高速離心機(jī)（>2000轉(zhuǎn)/分鐘），10ml轉(zhuǎn)頭，1.5ml轉(zhuǎn)頭，培養(yǎng)板轉(zhuǎn)頭9、小鼠的免疫試驗(yàn)和飼養(yǎng)

14、層細(xì)胞的制備實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：9.1、腹腔免疫9.2、皮下免疫9.3、細(xì)胞飼養(yǎng)層免疫激活小鼠解剖小鼠取腹腔液離心接種細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)要求：掌握免疫常用方法，并設(shè)計(jì)免疫程序掌握；制備用于雜交細(xì)胞的飼養(yǎng)層，為制備雜交瘤細(xì)胞做準(zhǔn)備，深化對(duì)飼養(yǎng)層作用的理解。應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋13顯微鏡254CO 2培養(yǎng)箱25倒置顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置6熒光顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置7超凈工作臺(tái)48水浴箱310、骨髓瘤細(xì)胞和免疫脾細(xì)胞的制備實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：10.1骨髓瘤細(xì)胞的解凍離心接種10.2免疫脾細(xì)胞的制備免疫小鼠解剖取脾臟獲取脾臟細(xì)胞過(guò)濾細(xì)胞離心實(shí)驗(yàn)

15、要求：保證解凍細(xì)胞成活率>70，保證單細(xì)胞率>90，細(xì)胞融合處理后不要有過(guò)大的細(xì)胞團(tuán)快。掌握雜交瘤細(xì)胞的基本方法。應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋13顯微鏡254CO 2培養(yǎng)箱25倒置顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置6熒光顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置7超凈工作臺(tái)48水浴箱39離心機(jī)22臺(tái)高速離心機(jī)（>2000轉(zhuǎn)/分鐘），10ml轉(zhuǎn)頭，1.5ml轉(zhuǎn)頭，培養(yǎng)板轉(zhuǎn)頭11、細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：11.1細(xì)胞的解凍離心接種11.2免疫脾細(xì)胞的制備免疫小鼠解剖取脾臟獲取脾臟細(xì)胞過(guò)濾細(xì)胞離心11.3細(xì)胞的融合調(diào)整細(xì)胞濃度融合細(xì)胞（PEG融合）

16、離心接種換液實(shí)驗(yàn)要求：保證解凍細(xì)胞成活率>70，保證單細(xì)胞率>90，細(xì)胞融合處理后不要有過(guò)大的細(xì)胞團(tuán)快。掌握雜交瘤細(xì)胞的基本方法。應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋13顯微鏡254CO 2培養(yǎng)箱25倒置顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置6熒光顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置7超凈工作臺(tái)48水浴箱39離心機(jī)22臺(tái)高速離心機(jī)（>2000轉(zhuǎn)/分鐘），10ml轉(zhuǎn)頭，1.5ml轉(zhuǎn)頭，培養(yǎng)板轉(zhuǎn)頭12雜交瘤細(xì)胞選擇和克隆化培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：12.1HAT篩選12.2HT篩選12.3克隆培養(yǎng)（有限稀釋法）12.4融合細(xì)胞檢測(cè)（以下方法可選） A 增長(zhǎng)法

17、 B 標(biāo)記法（熒光標(biāo)記）實(shí)驗(yàn)要求：掌握雜交瘤細(xì)胞選擇的基本方法掌握克隆培養(yǎng)（有限稀釋法）掌握融合細(xì)胞檢測(cè)的基本方法應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋13顯微鏡254CO 2培養(yǎng)箱25倒置顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置6熒光顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置7超凈工作臺(tái)48水浴箱39離心機(jī)22臺(tái)高速離心機(jī)（>2000轉(zhuǎn)/分鐘），10ml轉(zhuǎn)頭，1.5ml轉(zhuǎn)頭，培養(yǎng)板轉(zhuǎn)頭13血清制備或抗血清制備和抗體的檢測(cè)試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：13.1取血血清析出血清分離血清稀釋血清冷凍13.2普通血清的滅活13.3抗原包被抗原洗滌孵化一抗洗滌二抗洗滌酶標(biāo)物洗滌酶底物檢測(cè)

18、實(shí)驗(yàn)要求：掌握血清制備的方法掌握血清滅活的方法學(xué)習(xí)ELISA法的基本技術(shù)，了解影響其效果的關(guān)鍵因素應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋13顯微鏡254CO 2培養(yǎng)箱25倒置顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置6熒光顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置7超凈工作臺(tái)48水浴箱39離心機(jī)22臺(tái)高速離心機(jī)（>2000轉(zhuǎn)/分鐘），10ml轉(zhuǎn)頭，1.5ml轉(zhuǎn)頭，培養(yǎng)板轉(zhuǎn)頭14單克隆抗體的制備與分離純化實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：14.1單克隆抗體的制備雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)收集上清液14.2單克隆抗體的分離純化A 硫酸銨法 抗體樣品稀釋硫酸銨沉淀離心重復(fù)以上步驟提取或球蛋白透析處理（水透析

19、，PBS透析）冷凍保存B DAE52離子交換柱的裝柱平衡柱樣品上柱連續(xù)洗脫檢測(cè)蛋白收集蛋白透析處理（水透析，PBS透析）冷凍保存實(shí)驗(yàn)要求：設(shè)計(jì)不同方法制備,分離單克隆抗體應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋13酶標(biāo)儀1連續(xù)波長(zhǎng)4CO 2培養(yǎng)箱25倒置顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置6熒光顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置7超凈工作臺(tái)48水浴箱39離心機(jī)22臺(tái)高速離心機(jī)（>2000轉(zhuǎn)/分鐘），10ml轉(zhuǎn)頭，1.5ml轉(zhuǎn)頭，培養(yǎng)板轉(zhuǎn)頭10蛋白檢測(cè)儀111梯度混和器115小鼠超數(shù)排卵技術(shù)和胚胎移植實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：小鼠PMSG,HCG,FSH,LH的超數(shù)排卵，

20、沖卵（或胚胎）撿卵（或胚胎）小鼠的手術(shù)法胚胎移植胚胎的質(zhì)量檢查實(shí)驗(yàn)要求：掌握小鼠PMSG,HCG,FSH,LH的超數(shù)排卵技術(shù)，掌握沖卵（或胚胎）技術(shù)掌握撿卵（或胚胎）技術(shù)掌握小鼠的手術(shù)法胚胎移植掌握胚胎的質(zhì)量檢查的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋33解剖顯微鏡64CO 2培養(yǎng)箱25倒置顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置6熒光顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置7超凈工作臺(tái)48水浴箱216小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEF）的培養(yǎng)及胚胎干細(xì)胞滋養(yǎng)層的制備實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：16.1小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEF）的培養(yǎng)小鼠配種小鼠解剖取胚沖洗剪碎過(guò)濾離心接種換液16.2小

21、鼠胚胎干細(xì)胞滋養(yǎng)層的制備絲裂霉素C處理成纖維細(xì)胞洗滌消化調(diào)整濃度接種實(shí)驗(yàn)要求：掌握小鼠胎成纖維細(xì)胞（MEF）的原代培養(yǎng)方法掌握小鼠胚胎干細(xì)胞滋養(yǎng)層的制備方法分析影響小鼠胚胎干細(xì)胞滋養(yǎng)層的因素應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋33解剖立體顯微鏡64CO 2培養(yǎng)箱25倒置顯微鏡3一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置6熒光顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置7超凈工作臺(tái)48水浴箱29離心機(jī)22臺(tái)高速離心機(jī)（>2000轉(zhuǎn)/分鐘），10ml轉(zhuǎn)頭，1.5ml轉(zhuǎn)頭，培養(yǎng)板轉(zhuǎn)頭17小鼠胚胎干細(xì)胞（ES）的體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：小鼠超數(shù)排卵小鼠沖胚小鼠干細(xì)胞飼養(yǎng)層制備小鼠胚胎干細(xì)

22、胞（ES）的體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)要求：小鼠超數(shù)排卵小鼠充胚小鼠干細(xì)胞飼養(yǎng)層制備小鼠胚胎干細(xì)胞（ES）的原代培養(yǎng)小鼠胚胎干細(xì)胞（ES）傳代培養(yǎng)掌握實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋33針頭濾器1204CO 2培養(yǎng)箱55倒置顯微鏡3一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置6熒光顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置7超凈工作臺(tái)48水浴箱29離心機(jī)22臺(tái)高速離心機(jī)（>2000轉(zhuǎn)/分鐘），10ml轉(zhuǎn)頭，1.5ml轉(zhuǎn)頭，培養(yǎng)板轉(zhuǎn)頭18植物組織與細(xì)胞培養(yǎng)基的配制實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：18.1MS培養(yǎng)基貯備液配制18.2MS培養(yǎng)基配制18.3培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌實(shí)驗(yàn)要求：掌握MS培養(yǎng)基配制掌

23、握MS培養(yǎng)基滅菌應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋33針頭濾器1203電子分析天平44天平419外植體的消毒與愈傷組織誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：19.1外植體的消毒19.2外植體的取材培養(yǎng)與愈傷組織誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)要求：掌握外植體的取材、滅菌、培養(yǎng)與愈傷組織誘導(dǎo)應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1超凈工作臺(tái)420植物懸浮細(xì)胞系的建立實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：懸浮細(xì)胞的取材懸浮細(xì)胞的制備懸浮細(xì)胞的原代培養(yǎng)懸浮細(xì)胞的傳代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)要求：掌握植物懸浮細(xì)胞的取材掌握植物懸浮細(xì)胞的制備掌握植物懸浮細(xì)胞的原代培養(yǎng)掌握植物懸浮細(xì)胞的傳代培養(yǎng)掌握實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)

24、件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋33針頭濾器1204冰箱15恒溫光照旋轉(zhuǎn)搖床221原生質(zhì)體的分離與培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：原生質(zhì)體的取材原生質(zhì)體原代培養(yǎng)原生質(zhì)體觀察實(shí)驗(yàn)要求：掌握原生質(zhì)體的取材掌握原生質(zhì)體的培養(yǎng)掌握實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1光照培養(yǎng)箱32高壓滅菌鍋33超凈工作臺(tái)422流式細(xì)胞術(shù)分選血細(xì)胞試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞采集細(xì)胞處理細(xì)胞電泳分析流式細(xì)胞儀分析實(shí)驗(yàn)要求：掌握細(xì)胞采集方法掌握細(xì)胞處理方法掌握細(xì)胞分析的關(guān)鍵步驟掌握細(xì)胞分選的關(guān)鍵步驟分析結(jié)果的影響因素了解儀器的主要結(jié)構(gòu)，用途和熟練基本使用方法應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序

25、號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋33針頭濾器1204CO 2培養(yǎng)箱25倒置顯微鏡3一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置6熒光顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置7超凈工作臺(tái)48水浴箱29離心機(jī)22臺(tái)高速離心機(jī)（>2000轉(zhuǎn)/分鐘），10ml轉(zhuǎn)頭，1.5ml轉(zhuǎn)頭，培養(yǎng)板轉(zhuǎn)頭10流式細(xì)胞儀1進(jìn)口（包括分析和分選）11電泳儀323細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)及生化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞采集細(xì)胞處理細(xì)胞電泳分析流式細(xì)胞儀分析結(jié)果分析實(shí)驗(yàn)要求：掌握細(xì)胞采集方法掌握細(xì)胞處理方法掌握細(xì)胞分析的關(guān)鍵步驟掌握細(xì)胞分選的關(guān)鍵步驟分析結(jié)果的影響因素了解儀器的主要結(jié)構(gòu)，用途和熟練基本使用方法應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱每組應(yīng)配臺(tái)件數(shù)備注1干燥箱32高壓滅菌鍋33針頭濾器1204CO 2培養(yǎng)箱25倒置顯微鏡3一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置6熒光顯微鏡1一臺(tái)進(jìn)口，配自動(dòng)攝像裝置7超凈工作臺(tái)48水浴箱29離心機(jī)22臺(tái)高速離心機(jī)（>2000轉(zhuǎn)/分鐘），10ml轉(zhuǎn)頭，1.5ml轉(zhuǎn)頭，培養(yǎng)板轉(zhuǎn)頭10流式細(xì)胞儀1進(jìn)口（包括分析和分選）11電泳儀324動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：細(xì)胞采集細(xì)胞處理細(xì)胞分析物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果分析實(shí)驗(yàn)要求：掌握細(xì)胞采集掌握細(xì)胞處理掌握細(xì)胞分析掌握物質(zhì)檢測(cè)的方法掌握結(jié)果分析掌握實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了解儀器的主要結(jié)構(gòu)，用途和熟練基本使用方法應(yīng)配備的主要設(shè)備名稱和臺(tái)件數(shù)序號(hào)設(shè)備名稱