1、文件名稱(chēng)菌種管理規(guī)程文件編號(hào)QB-WI/10-004-00版本號(hào)00頁(yè)碼制 定 人制定日期審 核 人審核日期批 準(zhǔn) 人批準(zhǔn)日期生效日期管理部門(mén)質(zhì)量部分發(fā)部門(mén)總經(jīng)理 技術(shù)部 質(zhì)量部 生產(chǎn)部 管理者代表商務(wù)部 銷(xiāo)售部 行政部 倉(cāng)庫(kù)序號(hào)修訂原因及目的修訂內(nèi)容01文件新建/ 文件名稱(chēng)菌種管理規(guī)程文件編號(hào)QB-WI/10-004-00版 本 號(hào)00頁(yè) 碼1. 目的 規(guī)范微生物學(xué)檢定用菌種的管理，最大限度降低變異率，確保菌種的溯源性與穩(wěn)定性，從而確保微生物學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。2. 適用范圍 適用于微生物實(shí)驗(yàn)用菌種管理，包括菌種的申購(gòu)、傳代、使用及銷(xiāo)毀等。3. 引用/參考文件 ChP2015 實(shí)用藥品微生

2、物檢驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)指南4. 職責(zé) 質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)菌種的申購(gòu)、傳代、使用、銷(xiāo)毀等工作，QA負(fù)責(zé)監(jiān)控和參與OOS調(diào)查。5. 程序5.1術(shù)語(yǔ)和定義5.1.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株 由中國(guó)藥品生物制品檢定所醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心或者其他經(jīng)認(rèn)可的機(jī)構(gòu)提供的冷凍干燥菌。5.1.2 傳代菌株 用標(biāo)準(zhǔn)菌種制備的采用特定保存方法長(zhǎng)期固定保存的菌種，用于傳代及制備工作用菌種，3代后的傳代菌株在需要時(shí)可以作為工作菌株使用。5.1.3 工作菌株 用標(biāo)準(zhǔn)菌種或傳代用菌種接種至普通瓊脂斜面培養(yǎng)后，作為日常工作使用的菌種。5.1.4 菌種的代 將菌種接種至一新鮮培養(yǎng)基上或培養(yǎng)基內(nèi)，每萌發(fā)一次即稱(chēng)為一代，從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥

3、菌種為第0 代。5.2 菌種來(lái)源5.2.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株由中國(guó)藥品生物制品檢定所醫(yī)學(xué)菌種保藏中心（CMCC）或者其他經(jīng)認(rèn)可的機(jī)構(gòu)提供的冷凍干燥菌種。5.2.2質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室涉及到的菌種種類(lèi)、代碼、保存方法及保存條件如下。菌種名稱(chēng)菌種代碼保存方法保存溫度保存期限金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003TSA斜面281個(gè)月冷凍干燥管-201年銅綠假單胞菌CMCC(B)10104TSA斜面281個(gè)月冷凍干燥管-201年枯草芽孢桿菌CMCC(B)63501TSA斜面281個(gè)月冷凍干燥管-201年白色念珠菌CMCC(F)98001SDA斜面283個(gè)月冷凍干燥管-201年黑曲霉菌CMCC(F)98003SDA斜

4、面283個(gè)月冷凍干燥管-201年生孢梭菌CMCC(B)64941TSA斜面281個(gè)月冷凍干燥管-201年5.3 菌種的申購(gòu)、驗(yàn)收、保存5.3.1菌種的申購(gòu)5.3.1.1 微生物室QC依據(jù)菌種的庫(kù)存及菌種的使用情況，提出采購(gòu)申請(qǐng)，申請(qǐng)需明確菌種的名稱(chēng)，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)以及申購(gòu)數(shù)量等信息。5.3.1.2 質(zhì)量部經(jīng)理對(duì)申購(gòu)計(jì)劃進(jìn)行審批，審批后由公司的商務(wù)部按要求進(jìn)行采購(gòu)，采購(gòu)過(guò)程執(zhí)行采購(gòu)控制程序。5.3.1.3 菌種的采購(gòu)需向法定的業(yè)務(wù)部門(mén)或者認(rèn)可的機(jī)構(gòu)采購(gòu)。5.3.1.4 購(gòu)買(mǎi)菌種的同時(shí)應(yīng)保留相關(guān)證明資料，說(shuō)明菌種的名稱(chēng)、代數(shù)、數(shù)量等。5.3.2 菌種的驗(yàn)收5.3.2.1 微生物室QC負(fù)責(zé)對(duì)采購(gòu)回的菌種以

5、及相關(guān)的證明資料進(jìn)行驗(yàn)收；5.3.2.2 驗(yàn)收應(yīng)包括菌種外包裝的完好性、具體驗(yàn)收的依據(jù)為批準(zhǔn)后的申購(gòu)計(jì)劃。5.3.2.3 驗(yàn)收符合后簽字確認(rèn)并領(lǐng)回菌種，及時(shí)填寫(xiě)菌種驗(yàn)收、入庫(kù)記錄，并將菌種的相關(guān)證明資料貼在菌種接收登記表當(dāng)頁(yè)背面留存。如驗(yàn)收不符合則拒絕簽字領(lǐng)用，商務(wù)部負(fù)責(zé)退貨處理。5.3.3 菌種的保存5.3.3.1驗(yàn)收合格的冷凍干燥菌種，應(yīng)保存在溫度設(shè)定為-20冰箱中保存，有效期可至1年。5.3.3.2 驗(yàn)收后的菌種需在驗(yàn)收合格接收后14天內(nèi)完成轉(zhuǎn)種。5.4 菌種的傳代5.4.1菌種的傳代次數(shù)不得超過(guò)5代,從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥的菌種為第0代（G0），冷凍干燥的原始菌種開(kāi)啟后轉(zhuǎn)種，為第

6、1代（G1）；5.4.2 標(biāo)準(zhǔn)菌種的復(fù)蘇、確認(rèn)及傳代5.4.2.1 標(biāo)準(zhǔn)菌種的復(fù)蘇5.4.2.1.1 將一次性吸管數(shù)支、培養(yǎng)皿、鑷子、凍干菌種管、裝有TSB試管或SDB試管等移入生物安全柜中，開(kāi)啟生物安全柜的紫外燈滅菌30min后關(guān)閉紫外燈，備用。5.4.2.1.2 將凍干菌種管外壁用75%的乙醇棉球擦拭一遍，放入培養(yǎng)皿中，待干。點(diǎn)燃酒精燈，將標(biāo)準(zhǔn)菌種管封口的一端過(guò)火后開(kāi)啟，用一次性吸管吸取少量相應(yīng)液體培養(yǎng)基或者稀釋液，加入凍干管內(nèi)將菌種溶解。黑曲霉的菌種因?yàn)槭擎咦討乙汗懿恍枰尤胍后w培養(yǎng)基，直接擰開(kāi)即可。5.4.2.1.3 將菌種加入到相應(yīng)的液體培養(yǎng)基中，根據(jù)菌種類(lèi)型的不同將其置于不同溫度下

7、培養(yǎng)不同時(shí)間。原凍干菌種管、使用過(guò)的一次性吸管待121，30min高溫濕熱滅活后處理。不同菌種稀釋液與培養(yǎng)條件見(jiàn)下表。菌種名稱(chēng)菌種代碼稀釋液培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時(shí)間金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003TSB30-3572h銅綠假單胞菌CMCC(B)10104TSB30-3572h枯草芽孢桿菌CMCC(B)63501TSB30-3572h生孢梭菌CMCC(B)64941硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基30-3518-24h白色念珠菌CMCC(F)98001SDB20-25120h黑曲霉菌CMCC(F)98003SDB20-25120h5.4.2.1.4 取出培養(yǎng)物，觀察液體培養(yǎng)基是否渾濁，渾濁說(shuō)明菌種復(fù)蘇，若不生

8、長(zhǎng)，應(yīng)繼續(xù)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間（細(xì)菌：至少7天，真菌和酵母菌至少15天），仍不渾濁，121，30min高溫濕熱滅菌后廢棄，需要時(shí)，啟動(dòng)偏差調(diào)查。5.4.2.2 菌種的確認(rèn) 用已經(jīng)過(guò)消毒的接種環(huán)挑取上述培養(yǎng)物接種到TSA（細(xì)菌）或SDA（真菌和酵母菌）平板上，然后在相應(yīng)溫度下培養(yǎng)相應(yīng)的時(shí)間（細(xì)菌：3035，48-72h；酵母菌：2025，72120h；黑曲霉：2025，57d），觀察菌落形態(tài)，與標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)進(jìn)行比對(duì)確認(rèn)，確認(rèn)結(jié)果應(yīng)及時(shí)記錄在菌種確認(rèn)記錄。5.4.2.3 標(biāo)準(zhǔn)菌種的傳代5.4.2.3.1 按照菌種說(shuō)明書(shū)要求復(fù)溶菌粉，轉(zhuǎn)種至適宜的液體增菌培養(yǎng)基內(nèi)復(fù)蘇后的培養(yǎng)物稱(chēng)為第1代（G1），菌種傳代應(yīng)填寫(xiě)菌

9、種傳代記錄。5.4.2.3.2 菌種確認(rèn)后，如確認(rèn)符合，則從液體培養(yǎng)物中挑取培養(yǎng)物第1代（G1）轉(zhuǎn)接至相應(yīng)瓊脂培養(yǎng)基斜面上各數(shù)支（每種菌種至少3支），經(jīng)過(guò)相應(yīng)溫度培養(yǎng)時(shí)間（細(xì)菌：3035，72h；酵母菌：2025，120h；黑曲霉：2025，57d）培養(yǎng)；同時(shí)G1在121，30min高溫濕熱滅菌后廢棄。5.4.2.3.3 取出其中2支作為傳代菌種，此為第2代（G2），保存在溫度設(shè)定為28冷藏柜中保存；另外1只G2進(jìn)行傳代，此為第3代（G3），G3根據(jù)檢測(cè)需要確定傳代數(shù)量，斜面菌株均保存在28冷藏柜中，工作菌種和傳代用菌種分別包扎后保存。5.4.2.3.4 按照上述操作， G5為最后一代，不得繼

10、續(xù)進(jìn)行傳代，需要重新申購(gòu)冷凍干燥菌種管，重復(fù)上述操作，保存和使用菌種。5.4.2.3.5 細(xì)菌每1個(gè)月傳代1次；霉菌、酵母菌及芽孢每3個(gè)月傳代一次。5.4.2.4 菌種傳代時(shí)注意無(wú)菌操作，使菌株不死亡、不污染、不丟失。同時(shí)微生物室QC也應(yīng)采取有效的預(yù)防措施進(jìn)行自我保護(hù)，如工作時(shí)須穿工作服，佩戴手套，口罩等。實(shí)驗(yàn)完成后對(duì)實(shí)驗(yàn)區(qū)域、設(shè)施設(shè)備、用具等進(jìn)行適當(dāng)方式消毒。如發(fā)生意外，如菌種泄漏或人員受傷，微生物室QC應(yīng)及時(shí)向QA報(bào)告以便及時(shí)處理。5.4.2.5 工作菌種和傳代菌種無(wú)實(shí)質(zhì)區(qū)別，必要時(shí)，可作為另一種的備用菌種使用。5.4.3 菌種的編號(hào)5.4.3.1 菌種編號(hào)原則：英文縮寫(xiě)字母-代次-順序號(hào)

11、-傳代日期；5.4.3.1.1 菌種的英文縮寫(xiě)字母：金黃色葡萄球菌（S.a）、銅綠假單胞菌、（P.a）、枯草芽孢桿菌（B.s）、白色念珠菌（C.a）、黑曲霉（A.n）。5.4.3.1.2 代數(shù)的表示用帶有下標(biāo)數(shù)字的字母表示，例如：G3表示菌種的第3代。5.4.3.1.3 每種菌種每次傳代順序號(hào)從01開(kāi)始，例如一種菌種一次性轉(zhuǎn)種到4支試管上，那么順序號(hào)一次為01，02，03，04。5.4.3.1.4 傳代日期用八位數(shù)字表示：年份四位數(shù)，月、日分別用兩位數(shù)表示。5.4.3.1.5 例如P.a-G2-03-20170306標(biāo)識(shí)2017年03月06日傳代的第2代銅綠假單胞菌的第3只。5.5 菌種的保藏

12、5.5.1 菌種設(shè)專(zhuān)人加鎖保管，除銅綠假單胞菌于室溫保藏外，其他斜面菌種均在2-8條件下保藏。5.5.2 菌種的定期檢查與鑒定5.5.2.1 日常檢查 菌種在保藏期間，工作日應(yīng)每天上午和下午兩次檢查保藏菌種冷藏柜的溫度是否正常、必要檢查菌種管的塞子是否松動(dòng)、是否染菌，檢查結(jié)束應(yīng)及時(shí)填寫(xiě)菌種日常檢查記錄。5.6 菌種的使用 根據(jù)工作需要，領(lǐng)取工作用菌種或者傳代用菌種，同時(shí)填寫(xiě)菌種使用記錄。菌液一般在制備完后當(dāng)天使用，制備方法參照ChP2015執(zhí)行。5.7 廢棄菌種的銷(xiāo)毀5.7.1 下列情況的菌種、培養(yǎng)物或者被污染的器具等，必須經(jīng)過(guò)121，30min高壓濕熱滅菌處理：5.7.1.1 新一代菌種制備

13、成功后的上一代菌種；5.7.1.2 使用完后的菌種和帶有標(biāo)準(zhǔn)菌種的器具和培養(yǎng)物；5.7.1.3 超過(guò)有效期的菌種；5.7.1.4 凡是被污染、變異、可疑等異常情況菌種；5.7.1.5 其他應(yīng)廢棄的菌種。5.7.2 被污染的器具在污染后，濕熱滅菌前應(yīng)放置在密閉容器中防止對(duì)外界再污染。5.7.3 廢棄菌種的銷(xiāo)毀須有兩個(gè)人以上同時(shí)在場(chǎng)進(jìn)行，并及時(shí)填寫(xiě)廢棄菌種、物品銷(xiāo)毀記錄。5.8 安全要求5.8.1 菌種、菌液的保藏需要保藏于加鎖的冷藏柜或者冰箱中；5.8.2 操作人員在操作前應(yīng)該按照規(guī)定著裝，佩戴防護(hù)設(shè)施；5.8.3 操作結(jié)束后，應(yīng)及時(shí)對(duì)工作區(qū)域、工作服及其他儀器等進(jìn)行適當(dāng)消毒；5.8.4 非微生

14、物室操作人員未經(jīng)質(zhì)量部經(jīng)理批準(zhǔn)不得進(jìn)入微生物室；6. 記錄 菌種驗(yàn)收、入庫(kù)記錄（QB-QR/10-008-00） 菌種傳代記錄（QB-QR/10-009-00） 菌種確認(rèn)記錄（QB-QR/10-010-00） 菌種日常檢查記錄（QB-QR/10-011-00） 菌種使用記錄（QB-QR/10-012-00） 廢棄菌種、物品銷(xiāo)毀記錄（QB-QR/10-013-00）醫(yī)療技術(shù)有限公司菌種驗(yàn)收、入庫(kù)記錄記錄編號(hào)： QB-QR/10-008-00 菌種名稱(chēng)： 菌種代碼： 儲(chǔ)存條件： 日 期入庫(kù)數(shù)量入庫(kù)代次入庫(kù)狀態(tài)菌種來(lái)源驗(yàn)收情況接收人醫(yī)療技術(shù)有限公司菌種傳代記錄記錄編號(hào)：QB-QR/10-009-00菌種名稱(chēng)菌種代碼傳代前菌種代次傳代前菌種狀態(tài)傳代日期傳代數(shù)量預(yù)期用途數(shù)量（支）代次菌種編號(hào)傳代用培養(yǎng)基工作用菌種傳代用菌種操作過(guò)程描述：操作人：備注：醫(yī)療技術(shù)有限公司菌種確認(rèn)記錄記錄編號(hào)：QB-QR/10-010-00 菌種名稱(chēng)： 菌種代碼： 確認(rèn)日期確認(rèn)用培養(yǎng)基確認(rèn)原因操作過(guò)程描述：確認(rèn)結(jié)論： 操作人/日期：醫(yī)療技術(shù)有限公司菌種日常檢查記錄記錄編號(hào)：QB-QR/10-011-00日期時(shí)間溫度（）塞子是否松動(dòng)是