1、來源網(wǎng)絡(luò)英文全稱：Phenylmethanesulfonylfluoride中文名稱：苯甲基磺酰氟分子式：C7H7FO2S分子量：174.19CAS 號：329-98-6PubChem號：4784結(jié)構(gòu)示意圖：分類：OrganicChemicalsSulfurCompoundsSulfonesPhenylmethylsulfonylFluoride使川介紹：1）抑制絲氨酸蛋白酶（如胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，凝血酶）和筑基蛋白酶（如木瓜蛋白酶）；2） 10mg/ml溶丁異丙醇（或無水乙醇）中；3）在室溫可保存一年，一般保存在-20度或4度.；4）工作濃度：17174ug/ml （0.11mM），儲存

2、液濃度為100或200mM;5）在水液體溶液中不穩(wěn)定，30分鐘就會降解一半，必須在每一分離和純化步驟中加入新鮮的PMSF,樣品處理超過1h,補(bǔ)加一次。（見水分解，使用前加入）【注意事項(xiàng)】j '' j1. PMSF劇蠹，嚴(yán)重?fù)p害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚，吸入、吞進(jìn)或通過皮膚吸收后有致命危險(xiǎn)。為 了安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF,應(yīng)立即用大量水沖洗之。凡被PMSF污染的衣物應(yīng)予丟棄。2. PMSF在水溶液中不穩(wěn)定。應(yīng)在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加丁裂解緩沖液中。3. PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨 pH值的升高而加快，且25C的失活速率高丁 4

3、C。pH值為 8.0時(shí)，20 mmol/lPMSF水溶液的半壽期大約為85min,這表明將PMSF溶液調(diào)節(jié) 為堿性（pH>8.6） 并在室溫放置數(shù)小時(shí)后，可安全地予以丟棄。PMSF的儲存：2-8C可以存放數(shù)月之久。欲長期保存，可凍存在 -20C例:100mMPMSF稱量0.174gPMSF（針狀結(jié)晶固體）溶于10ml異丙醇，震蕩混勻，保存在-20度或4度.1h,補(bǔ)加一次.PMSFT重?fù)p害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚，吸入、PMSF應(yīng)立即用大量水沖洗之。）25C的失活速率高于 4C。pH值為8.0時(shí)，工作濃度我一般用 1mM,1:100（V/V）加入即可樣品處理超過（PMSFlU毒,為了安全和健

4、康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作.吞進(jìn)或通過皮膚吸收后有致命危險(xiǎn)。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF水溶液中的活性喪失速率隨pH值的升高而加快，且20 mmol/lPMSF水溶液的半壽期大約為 85min,這表明將 PMS略液調(diào)節(jié) 為堿性（pH>8.6）并在室溫放置 數(shù)小時(shí)后，可安全地予以丟棄。用異丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml （10mmol/L），分裝成小份貯存丁 -20C。如有必要可配成濃度高達(dá) 17.4mg/ml 的貯存液（100mmol/L）。常用試劑的配制：1、30%丙烯酰胺配制方法：將29G丙烯酰胺和1gN, N'-業(yè)甲雙丙烯酰胺溶丁總體積為 60ml的水中，加熱至

5、37 C 溶解之，補(bǔ)加水至終體積為100ml，用Nalgene濾器（0.45um孔徑）過濾除菌，查證該溶液的 pH 值應(yīng)不大丁 7.0,置之不理棕色瓶中保存丁室溫。(2)說明：小心丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)蠹性并可通過皮膚吸收，其作用具螺積性。稱量丙烯酰 胺和業(yè)甲雙丙烯酰胺時(shí)應(yīng)戴手套和面具。可認(rèn)為聚丙烯酰胺無蠹，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作，因?yàn)樗€可能會含有少量未聚合材料。一些價(jià)格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屆離子，在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹脂(MB-1Mallinckrodt )，攪拌過夜，然后用 Whatmanl號濾紙以純化之。在貯 存期問，丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會緩慢轉(zhuǎn)化

6、成丙烯酸和雙丙烯酸。2、10%過濾酸鉉(1)配制方法：把1g過硫酸鉉溶解丁終量為10ml的水溶液中，該溶液可在4C保存數(shù)周。3、1mol/L氯化鈣(1) 配制方法：在 20ml純水中(Milli-Ce水或相當(dāng)級別的水)溶解 54gCacl2?6H2。用0.22um濾器過濾除菌，分裝成10ml小份貯存丁-20C。(2) 說明：制備感受態(tài)細(xì)胞時(shí)，取出一小份解凍并用純水稀釋至100ml，用Nalgene濾器(0.45um孔徑)過濾除菌，然后聚冷至 0C。4、1mol/L 二硫蘇糖醇(DTT)(1)配制方法：用20ml0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解3.09gDTT，過濾除菌后分裝成1m

7、l小份貯存丁 -20Co(2)說明：DTT或含有DTT的溶液不能進(jìn)行高壓處理。5、0.5mol/LEDTA (pH8.0)(1)配制方法：在800ml水中加入186.1g#乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na?2H2O ),在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.0 (約需20gNaoh顆粒)然后定容至1L,分裝后高壓滅菌備用。(2)說明：EDTA二鈉鹽需加入NaoH將溶液的pH值調(diào)至接近8.0時(shí)，才能完全溶解。 回到貞首""j'6、10mg/ml漠化乙錠(1) 配制方法：在100ml水中加入1g漠化乙錠，磁力攪拌數(shù)小時(shí)以確保其完全溶解，然后用鋁箔包裹容

8、光煥發(fā)器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，保存丁室溫。(2) 說明：小心：漠化乙錠是強(qiáng)誘變劑并有中度蠹性，使用含有這種染料的溶液時(shí)務(wù)必戴上手套，稱量染料時(shí)要戴面罩。這些溶液使用后應(yīng)按附錄E提供的方法之一進(jìn)行凈化處理。X 1/. K|. IX -7、100mmol/LIPTG配制方法：IPTG為異丙基硫式-6-D-半乳糖苜(分子量為238.3D),在8ml蒸僻水中溶解2gIPTG 后，用蒸僻水定容至10ml，用0.22um濾器過濾除菌，分裝成1ml小份貯存丁-20C。8、1mol/L硫酸酶(1)配制方法：在800ml水中溶解214.46g四水乙酸鎂，用水定容至1L,過濾殺菌。9、6筑基乙醇(BME)(1)配制方

9、法：一般得到的是14.4mol/L溶液，應(yīng)裝在棕色瓶中保存丁 4C；(2)說明：BME或含有BME的溶液不能高壓處理10、酚/氯仿(1) 配制方法：一般得到的是14.4mol/LTris?Cl (pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆蓋等體積的 0.01mol/LTris?Cl (pH7.6)液層，保存丁 4C。(2) 說明：小心，酚腐蝕性很強(qiáng)，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時(shí)應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡，穿防護(hù)服。所 有操作均應(yīng)在化學(xué)通風(fēng)櫥中進(jìn)行。與酚接觸過的皮膚部位應(yīng)用大量的水活洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。11、10mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)(1)配制方法：用異丙醇溶解 P

10、MSF成1.74mg/ml (10mmol/L)，分裝成小份貯存丁 -20C,如有 必要可配成濃度高達(dá)17.4mg/ml的貯存液(100mmol/L)。(2)說明：小心：PMSF嚴(yán)重?fù)p害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚，吸和，吞進(jìn)或通過皮膚吸收后有致 命危險(xiǎn)。一旦眼睛或皮膚接觸3PMSF,應(yīng)立即用大量水沖洗之。凡被 PMSF污染的衣服應(yīng)予丟棄。 PMSF在水溶液中不穩(wěn)定，應(yīng)在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加入裂解緩沖液中。PMSF在水溶液中的活性喪失速率高丁 4C。pH值為8.0時(shí)，20umol/L的PMSF溶液的半壽期大約為35分鐘(James 1978)，這表明將PMSF溶液調(diào)節(jié)為堿性(pH>8.6)

11、并在室溫放置數(shù)小時(shí)后，可安全地予以丟棄。回到貞首12、磷酸鹽緩沖溶液(PBS)(1)配制方法：在 800ml 蒸僻水中溶解 8gNacl、0.2gKcl、1.44gNa2HPO4和 0.24gKH2PO4,用HCL調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4加水定容至IL,在1516f/in2 (1.034 X 105P®高壓下蒸汽滅菌20分鐘，保存丁室溫。13、乙酸鉀溶液(用丁堿裂解)(1)配制方法：在60ml5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成鉀濃度為3mol/L , 而乙酸根濃度為5mol/L的溶液。14、3mol/L乙酸鈉(1)配制方法：在800ml水中溶解408

12、.1g三水乙酸鈉，用冰乙酸調(diào)節(jié) pH值至5.2或同稀乙烯調(diào) 節(jié)pH值至7.0,加水定容到1L,分裝后高壓滅菌。15、5mol/L氯化鈉(1)配制方法：在800ml水中溶解292.2gNacl加水定容至1L,分裝后高壓滅菌。16、10%十二烷基硫酸鈉(SDS)(1) 配制方法：在900ml水中溶解100g電泳級SDS,加熱至68 C助溶，加入幾滴濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.2,加水定容至1L,分裝備用。(2) 說明：SDS的微細(xì)晶粒易丁擴(kuò)散，因此稱量時(shí)要戴口罩，稱量完畢后要活除殘留在稱量工作區(qū)和天平上的SDS, 10%SDS溶液無須滅菌。回到貞首17、20X SSC(1)配制方法：在800ml水

13、中溶解175.3gNacl和88.2g檸檬酸鈉，加入數(shù)滴10mol/LNach溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0加水定量至1L,分裝后高壓滅菌。18、100%三氯乙酸pHHCL7.470ml7.6?60ml8.0?42ml(1)配制方法：在裝有(1)配制方法：在500gTCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100% (W/V ) TCA。19、1mol/LTris800ml水中溶解121.1gTris堿，加入濃HCL調(diào)節(jié)pH值至所需值。應(yīng)使溶液冷至室溫后方可最后調(diào)定 pH值，加水定容至1L,分裝后高壓滅菌。(2)說明：如1mol/L溶液呈現(xiàn)黃色，應(yīng)予丟棄，并置備質(zhì)量更好的Tris。盡管多種類型的電級均不能準(zhǔn)確測量Tris溶液的pH值，但仍可向大多數(shù)廠商購得適合的電極。Tris溶液的pH值因溫度而異，溫度每升高1C, pH值大約降低.03個(gè)單位。例如：0.05mol/L的溶液在5C、25C和37C時(shí)的pH值分別為9.5、8.9和8.620、Tris緩沖液溶液(1)配制方法：在800ml蒸僻水中溶解8gNacl、0.2Kcl和3gTris堿，加入0.015g酚