pcr上崗證考試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.PCR技術(shù)的中文全稱是（）A.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)B.核酸雜交反應(yīng)C.基因測(cè)序反應(yīng)D.蛋白質(zhì)印跡反應(yīng)答案：A2.Taq酶的特點(diǎn)是（）A.耐高溫B.耐低溫C.耐高壓D.耐高鹽答案：A3.PCR反應(yīng)體系中不包括以下哪種成分（）A.模板DNAB.引物C.限制性內(nèi)切酶D.dNTP答案：C4.引物設(shè)計(jì)時(shí)，其長(zhǎng)度一般為（）A.5-10bpB.15-30bpC.35-50bpD.50-100bp答案：B5.PCR反應(yīng)的變性溫度一般為（）A.55℃B.72℃C.94-95℃D.4℃答案：C6.PCR技術(shù)的發(fā)明人是（）A.克里克B.穆利斯C.沃森D.桑格答案：B7.以下哪種物質(zhì)可作為PCR反應(yīng)的模板（）A.蛋白質(zhì)B.多糖C.DNAD.脂肪答案：C8.PCR反應(yīng)中延伸時(shí)間主要取決于（）A.模板DNA的長(zhǎng)度B.引物的長(zhǎng)度C.Taq酶的活性D.dNTP的濃度答案：A9.進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，防止污染的關(guān)鍵環(huán)節(jié)不包括（）A.實(shí)驗(yàn)環(huán)境清潔B.試劑質(zhì)量C.樣本采集D.操作人員規(guī)范答案：C10.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)不能用于（）A.基因表達(dá)水平分析B.病原體核酸定量C.基因序列測(cè)定D.腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)答案：C二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.PCR反應(yīng)的基本步驟包括（）A.變性B.退火C.延伸D.復(fù)性答案：ABC2.引物設(shè)計(jì)的原則包括（）A.避免引物自身互補(bǔ)B.引物之間避免互補(bǔ)C.引物長(zhǎng)度合適D.GC含量合理答案：ABCD3.PCR實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)的問題有（）A.假陽(yáng)性B.假陰性C.非特異性擴(kuò)增D.擴(kuò)增效率低答案：ABCD4.以下哪些屬于PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域（）A.疾病診斷B.法醫(yī)鑒定C.基因克隆D.物種進(jìn)化研究答案：ABCD5.Taq酶的活性受哪些因素影響（）A.溫度B.pH值C.離子強(qiáng)度D.引物濃度答案：ABC6.實(shí)時(shí)熒光定量PCR的熒光信號(hào)檢測(cè)方法有（）A.染料法B.探針法C.化學(xué)發(fā)光法D.比色法答案：AB7.用于PCR的模板DNA可以從以下哪些樣本中獲取（）A.血液B.組織C.唾液D.糞便答案：ABCD8.PCR反應(yīng)體系中Mg2?的作用有（）A.激活Taq酶B.穩(wěn)定引物與模板結(jié)合C.參與dNTP聚合反應(yīng)D.抑制非特異性擴(kuò)增答案：ABC9.防止PCR實(shí)驗(yàn)室污染的措施有（）A.分區(qū)操作B.嚴(yán)格消毒C.規(guī)范操作流程D.定期更換實(shí)驗(yàn)人員答案：ABC10.巢式PCR的優(yōu)點(diǎn)包括（）A.提高特異性B.提高靈敏度C.減少非特異性擴(kuò)增D.降低成本答案：ABC三、判斷題（每題2分，共20分）1.PCR技術(shù)可以擴(kuò)增任意長(zhǎng)度的DNA片段。（×）2.引物的GC含量越高，其退火溫度越低。（×）3.Taq酶具有3'→5'外切酶活性。（×）4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR能夠?qū)怂徇M(jìn)行絕對(duì)定量和相對(duì)定量。（√）5.PCR實(shí)驗(yàn)中，模板DNA的濃度越高越好。（×）6.只要引物設(shè)計(jì)正確，PCR反應(yīng)就一定能成功。（×）7.紫外燈照射可以有效消除PCR實(shí)驗(yàn)室的核酸污染。（√）8.普通PCR可以對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行定量分析。（×）9.不同來(lái)源的模板DNA進(jìn)行PCR時(shí)，反應(yīng)條件可能需要調(diào)整。（√）10.PCR技術(shù)只能用于檢測(cè)已知序列的DNA。（×）四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共20分）1.簡(jiǎn)述PCR技術(shù)原理。答案：PCR技術(shù)是在體外模擬體內(nèi)DNA復(fù)制過程。通過高溫變性使模板DNA雙鏈解開，低溫退火讓引物與模板結(jié)合，適溫延伸由Taq酶催化dNTP合成新的DNA鏈，經(jīng)多次循環(huán)實(shí)現(xiàn)特定DNA片段的大量擴(kuò)增。2.引物設(shè)計(jì)時(shí)需要考慮哪些重要因素？答案：需考慮引物長(zhǎng)度，一般15-30bp；GC含量，在40%-60%為宜；避免引物自身及引物間互補(bǔ)；引物3'端不能有連續(xù)的G或C；引物與模板結(jié)合的特異性等。3.簡(jiǎn)述實(shí)時(shí)熒光定量PCR相對(duì)定量的原理。答案：相對(duì)定量是通過比較目的基因與內(nèi)參基因的表達(dá)量來(lái)分析基因表達(dá)變化。以已知內(nèi)參基因作對(duì)照，利用熒光信號(hào)在指數(shù)期與模板量的線性關(guān)系，計(jì)算目的基因相對(duì)于內(nèi)參基因的表達(dá)水平。4.如何避免PCR實(shí)驗(yàn)中的假陽(yáng)性結(jié)果？答案：實(shí)驗(yàn)要分區(qū)操作，防止交叉污染；試劑要嚴(yán)格保存、定期更換；規(guī)范操作，避免樣本間污染；實(shí)驗(yàn)前對(duì)儀器設(shè)備充分清潔消毒；合理設(shè)計(jì)引物，減少非特異性結(jié)合。五、討論題（每題5分，共20分）1.討論P(yáng)CR技術(shù)在新冠病毒檢測(cè)中的應(yīng)用及意義。答案：應(yīng)用是通過RT-PCR檢測(cè)病毒核酸。意義重大，能快速準(zhǔn)確診斷感染情況，為疫情防控提供關(guān)鍵依據(jù)，助力早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早治療，有效控制病毒傳播，對(duì)疫情監(jiān)測(cè)和防控策略制定有重要作用。2.結(jié)合實(shí)際，談?wù)凱CR實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的要點(diǎn)。答案：要點(diǎn)包括人員培訓(xùn)，確保熟練操作；儀器定期校準(zhǔn)維護(hù)；試劑選擇和管理要嚴(yán)格；實(shí)驗(yàn)環(huán)境清潔消毒；規(guī)范樣本采集、運(yùn)輸和處理；嚴(yán)格執(zhí)行分區(qū)操作流程；設(shè)置陽(yáng)性、陰性等對(duì)照，及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題并改進(jìn)。3.討論P(yáng)CR技術(shù)在基因診斷遺傳病方面的優(yōu)勢(shì)與局限性。答案：優(yōu)勢(shì)是靈敏度高、特異性強(qiáng)、快速，能檢測(cè)微量基因變異。局限性在于對(duì)未知突變檢測(cè)受限，易出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性，實(shí)驗(yàn)條件要求高，且檢測(cè)范圍受引物設(shè)計(jì)制約，可能漏檢復(fù)雜突變。4.