考點(diǎn)58動(dòng)物細(xì)胞工程

【命題趨勢(shì)】

高考主要考察動(dòng)物體細(xì)胞克隆及單克隆抗體的制備等內(nèi)容。試題通常以獲得細(xì)胞工程產(chǎn)

品的操作過(guò)程為背景，借助具體的技術(shù)流程，對(duì)操作過(guò)程中的特定要求、產(chǎn)品特點(diǎn)等進(jìn)

行綜合考查。題型為非逃擇題，難度適中。

預(yù)計(jì)2022年仍可能依托某種新型產(chǎn)品的培育為線索，維續(xù)對(duì)細(xì)胞工程的核心知識(shí)進(jìn)行

考查。

【重要考向】

一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與動(dòng)物體細(xì)胞核移植的過(guò)程分析

二、單克隆抗體的制備過(guò)程分析

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與動(dòng)物體細(xì)胞核移植的過(guò)

程分析

1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

（1）動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程

（2）培養(yǎng)條件

①無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無(wú)菌處理,添加抗生素,

定期更換培養(yǎng)液以清除代謝產(chǎn)物。

②營(yíng)養(yǎng)：除正常的有機(jī)和無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)外，需加入血面」J逑等一些天然成分。

③適宜的溫度和pH：溫度為36.5±0.5℃（哺軋動(dòng)物）,DH為7.2?7.4。

④氣體環(huán)境：含95%空氣加5%CO2的混合氣體,其中后者的作用是維持培養(yǎng)

液的pH。

（3）應(yīng)用：生物制品的生產(chǎn)、檢測(cè)有毒物質(zhì)、醫(yī)學(xué)研究。

2.動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物

（1）動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)的過(guò)程

（2）原理：動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性。

（3）結(jié)果：產(chǎn)生新個(gè)體。

（4）應(yīng)用：①加速家畜逡隹改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育；②保護(hù)瀕危物種:

③生產(chǎn)醫(yī)用蛋白；④作為異種移植的隨：⑤用于組織器官的整擅。

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與動(dòng)物體細(xì)胞核移植的比較

項(xiàng)目動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物體細(xì)胞核移植

原理細(xì)胞增殖動(dòng)物細(xì)胞核的全能性

動(dòng)物組織塊。

1剪碎、1夷蛋白酶處理￥

斑胞懸液〃

1轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中“

原代培養(yǎng)〃

過(guò)程

1胰蛋白酶處理4

細(xì)胞懸液，

1分瓶、轉(zhuǎn)入培養(yǎng)港中，

傳代培養(yǎng)/

獲得細(xì)胞群

結(jié)果獲得與供體遺傳物質(zhì)基本相同的個(gè)體

【典例】

1.為了初步檢測(cè)藥物X和Y的抗癌活性，在細(xì)胞培養(yǎng)板的每個(gè)孔中加入相同數(shù)量的肝

癌細(xì)胞，使其貼壁生長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)組加入等體積相同濃度的溶于二甲基亞碉（溶劑）的藥物

X或Y,對(duì)照組中也加入了一定的溶液，培養(yǎng)過(guò)程及結(jié)果如圖所示。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤

的是（）

韁電培

葬72小時(shí)

蛔卷計(jì)效,并

?O?i鐐平均值

00

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

組別細(xì)胞個(gè)數(shù)（個(gè)/孔）

對(duì)照7.8x106

藥物X6.7x104

藥物Y5.3x105

A.對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組均設(shè)置了三個(gè)孔，可以減少實(shí)驗(yàn)誤差

B.可用胰蛋白酶處理使肝癌細(xì)胞脫落下來(lái)并進(jìn)行計(jì)數(shù)

C.對(duì)照組中加入的溶液是和實(shí)驗(yàn)組等體積的無(wú)菌蒸儲(chǔ)水

D.根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以初步判斷藥物X的抗癌效果較好

【答案】C

【分析】

1、分析題意可知：該實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菣z測(cè)藥物X和Y的抗癌活性，自變量是藥物X或Y,

因變量是細(xì)胞數(shù)量。

2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：

（1）無(wú)菌、無(wú)毒環(huán)境：①消毒和滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，

以清除代謝廢物。

（2）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、微量元素和促生長(zhǎng)因子等，還需添加血清、血

漿一些天然成分。

（3）溫度和pH：哺乳動(dòng)物一般為36.5℃±0.5℃；適宜的一定的pH：7.2~7.4。

（4）氣體環(huán)境：95%的空氣（細(xì)胞代謝所必需）和5%的CO?（維持培養(yǎng)液的pH）。

【詳解】

A、對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組均設(shè)置了三個(gè)孔，符合平行重復(fù)原則，最終求每個(gè)組的均值，可以

減少實(shí)驗(yàn)誤差，降低偶然因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，A正確；

B、胰蛋白酶處理可以使肝癌細(xì)胞間的蛋白質(zhì)被分解，破壞細(xì)胞間的連接，可以獲得游

離的肝癌細(xì)胞并計(jì)數(shù)，B正確；

C、根據(jù)單一變量原則可知，對(duì)照組中加入的溶液是和實(shí)驗(yàn)組等體積的無(wú)菌二甲基亞麗，

以排除溶劑對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾，C錯(cuò)誤；

D、根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，最終細(xì)胞的數(shù)量：對(duì)照組（7.8xl（y＞）＞藥物Y實(shí)驗(yàn)組（5.3x105）

＞藥物X實(shí)驗(yàn)組（6.7x10。，說(shuō)明加入藥物X的實(shí)驗(yàn)組存活的癌細(xì)胞數(shù)是最少的，即可

以初步判斷藥物X的抗癌效果較好，D正確。

故選C。

2.動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段中，最基礎(chǔ)的是（）

A.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)B.動(dòng)物細(xì)胞融合

C.動(dòng)物組織培養(yǎng)D.胚胎細(xì)胞核移植

【答案】A

【分析】

動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有很多，如：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞核移植、動(dòng)物細(xì)胞

融合、生產(chǎn)單克隆抗體等，其中動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物工程技術(shù)的基礎(chǔ)。

【詳解】

動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段中，最基礎(chǔ)的是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，其它技術(shù)都要建立在動(dòng)物

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)基礎(chǔ)之上,A正確，BCD錯(cuò)誤。

故選Ao

3.對(duì)某種動(dòng)物的肝腫瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，下列說(shuō)法正確的是（）

A.取單個(gè)肝腫瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，獲得細(xì)胞群的方法不屬于克隆培養(yǎng)法

B.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中不需考慮細(xì)菌的污染問(wèn)題

C.該培養(yǎng)液也能用來(lái)培養(yǎng)乙肝病毒

D.肝臟腫瘤細(xì)胞的分裂周期變短

【答案】D

【分析】

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程：取動(dòng)物組織塊-剪碎組織-用胰蛋白的處理分散成單個(gè)細(xì)胞T制

成細(xì)胞懸液一轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）一放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)一貼滿瓶壁的細(xì)胞

用酶分散為單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液一轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）一放入二氧化碳培養(yǎng)箱

培養(yǎng)。

【詳解】

A、取單個(gè)肝腫瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)獲得細(xì)胞群的方法屬于細(xì)胞層次的克隆，A錯(cuò)誤；

B、培養(yǎng)液受細(xì)菌污染后，其中的營(yíng)養(yǎng)成分會(huì)發(fā)生改變，不利于細(xì)胞的培養(yǎng)，B錯(cuò)誤；

C、病毒無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)，其生存離不開細(xì)胞，用培養(yǎng)液不能培養(yǎng)病毒，C錯(cuò)誤；

D、肝臟腫瘤細(xì)胞分裂能力增強(qiáng)，其分裂周期變短，D正確。

故選D。

4.某研究小組為測(cè)定藥物對(duì)肝腫瘤細(xì)胞的治療效果，準(zhǔn)備對(duì)某種動(dòng)物的肝腫瘤細(xì)胞（甲）

和正常肝細(xì)胞（乙）進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下列有關(guān)說(shuō)法正確的是（）

A.在利用兩種肝組織塊制備肝細(xì)胞懸液時(shí)，可用胃蛋白酶處理

B.細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在CQ2培養(yǎng)箱中進(jìn)行，CCh的作用是作為細(xì)胞代謝原料

C.取甲細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，傳至10~50代就會(huì)完全停止

D.乙細(xì)胞在原代培養(yǎng)過(guò)程中，最終會(huì)出現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象

【答案】D

【分析】

1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程：取動(dòng)物組織塊（動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織）一剪碎

T用胰蛋白酶或膠原蛋」酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞一制成細(xì)胞懸液一轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行

原代培養(yǎng)一貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳

代培養(yǎng)。

2、細(xì)胞貼壁和接觸抑制：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。細(xì)

胞數(shù)目不斷增多，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互抑制時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這

種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。

【詳解】

A、胃蛋白酶的最適pH大約為2,這一環(huán)境下細(xì)胞往往會(huì)受到破壞，不利于培養(yǎng)，所

以一般用胰蛋白酶而不用胃蛋白酶處理細(xì)胞，A錯(cuò)誤；

B、培養(yǎng)箱中CO2的作用是調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的pH,B錯(cuò)誤；

C、在適宜條件下，肝腫瘤細(xì)胞可以無(wú)限增殖，C錯(cuò)誤；

D、正常肝細(xì)胞在原代培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象，停止增殖，D正確。

故選D。

5.下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述中，不正確的是（）

A.傳代培養(yǎng)時(shí)需要用胰蛋白酹處理貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞

B.細(xì)胞的癌變發(fā)生于原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的過(guò)渡過(guò)程中

C.正常分裂的細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中會(huì)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象

D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一般需要使用C02培養(yǎng)箱

【答案】B

【分析】

I、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程：取動(dòng)物組織塊（動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織）-剪碎

T用胰蛋白酶或膠原蛋白能處理分散成單個(gè)細(xì)胞一制成細(xì)胞懸液一轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行

原代培養(yǎng)一貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酹處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳

代培養(yǎng)。

2、細(xì)胞貼壁和接觸抑制：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁.細(xì)

胞數(shù)目不斷增多，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互抑制時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這

種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。

【詳解】

A、由原代培養(yǎng)換瓶進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)，需要用胰蛋白悔或膠原蛋白酶處理貼壁生長(zhǎng)的細(xì)

胞，A正確；

B、細(xì)胞的癌變一般發(fā)生于5（）代后的細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，B錯(cuò)誤；

C、正常進(jìn)行分裂的細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象，C正確：

D、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的場(chǎng)所是CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)箱內(nèi)含有95%空氣加5%CO2的混合氣體，

為動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)提供適宜的pH,D正確。

故選B。

單克隆抗體的制備過(guò)程分析

I.動(dòng)物細(xì)胞融合

（1）原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性。

（2）融合方法：聚乙二醇（PEG）、滅活的病毒、電激等。

（3）意義：突破了有性雜交方法的局限,使遠(yuǎn)緣雜交成為可能,也為制造單克隆抗

他開辟了新途徑。

2.單克隆抗體

（1）制備過(guò)程

（2）優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高,可大量制備。

（3）用途：作為診斷試劑;用于治療疾病和運(yùn)載藥物。

制備單克隆抗體過(guò)程中兩次篩選的方法及目的

項(xiàng)目第一次篩選第二次篩選

由于小鼠在生活中還受到其他抗原的

篩選誘導(dǎo)融合后得到多種雜交細(xì)胞，另外還有

刺激，所以經(jīng)選擇性培養(yǎng)獲得的雜交

原因未融合的細(xì)胞

瘤細(xì)胞中有能產(chǎn)生其他抗體的細(xì)胞

用特定的選擇培養(yǎng)基篩選：未融合的細(xì)胞用多孔培養(yǎng)皿培養(yǎng)，在每個(gè)孔只有一

篩選和同種細(xì)胞融合后形成的細(xì)胞（"BB”細(xì)個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開始克降化培

方法胞、“瘤瘤”細(xì)胞）都會(huì)死亡，只有融合的養(yǎng)和抗體檢測(cè)，經(jīng)多次篩選得到能產(chǎn)

雜交瘤細(xì)胞（“B瘤”細(xì)胞用自生長(zhǎng)生特異性抗體的細(xì)胞群

篩選

得到雜交瘤細(xì)胞得到能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞

目的

【典例】

6.科學(xué)家用滅活的病毒把骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞融合得到雜交瘤細(xì)胞，

滅活病毒的作用是（）

A.病毒比較小，可鉆入到細(xì)胞內(nèi)

B.滅活的病毒已完全死亡，死亡的病毒可以讓細(xì)胞聚集

C.滅活的病毒已失去感染性，對(duì)各種動(dòng)物細(xì)胞不造成破壞，但所保留的融合活性可使

不同的動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行融合

D.滅活的病毒帶有目的基因，通過(guò)融合可以讓雜交細(xì)胞帶有目的基因

【答案】c

【分析】

誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法有：物理法、化學(xué)法、生物法。其中物理法包括離心、振動(dòng)和電刺

激，化學(xué)法中的誘導(dǎo)劑?般為聚乙二醇（PEG）,生物法中一般用滅活的病毒。

【詳解】

滅活的病毒已失去感染活性，對(duì)各種動(dòng)物細(xì)胞不造成破壞，但它所保留的融合活性，可

使不同動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行融合，故在骨髓瘤細(xì)胞與效應(yīng)B細(xì)胞融合過(guò)程中，滅活病毒起了誘

導(dǎo)細(xì)胞融合的作用，C正確，ABD錯(cuò)誤。

故選C。

7.CD47是一種跨膜糖蛋白。它可與巨噬細(xì)胞表面的信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合，從而抑制巨噬

細(xì)胞的吞噬作用。肺癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤細(xì)胞表面的CD47含量比正常細(xì)胞高1.6~5

倍，導(dǎo)致巨噬細(xì)胞對(duì)腫痛細(xì)胞的清除效果減弱。為證明抗CD47的單克隆抗體可以解除

CD47對(duì)巨噬細(xì)胞的抑制作用，科學(xué)家按照如下流程遂行了實(shí)驗(yàn)。

下列敘述不正確的是（）

A.多次進(jìn)行步驟①的FI的是獲得更多分泌抗CD47抗體的漿細(xì)胞

B.步驟②中可以利用聚乙二醇或滅活的病毒誘導(dǎo)完成細(xì)胞融合

C.經(jīng)篩選可得到既能產(chǎn)生抗CD47抗體又能無(wú)限增殖的雜交瘤細(xì)胞

D.對(duì)照組應(yīng)在巨噬細(xì)胞+正常細(xì)胞共培養(yǎng)體系中加入單克隆抗體

【答案】D

【分析】

1、單克隆抗體：由單個(gè)B淋巴細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖形成的細(xì)胞系所產(chǎn)生出的化學(xué)性質(zhì)單

一、特異性強(qiáng)的抗體。具有特異性強(qiáng)、靈敏度高，并可能大量制備的特點(diǎn)。

2、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟

中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞：誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選

出雜交瘤細(xì)胞;進(jìn)行抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞;進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，

即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

3、單克隆抗體的作用：①作為診斷試劑：（最廣泛的月途）具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快

速的優(yōu)點(diǎn)；②用于治療疾病和運(yùn)載藥物：主要用于治療癌癥，可制成“生物導(dǎo)彈

【詳解】

A、多次進(jìn)行步驟①的目的是加強(qiáng)免疫，獲得更多分泌抗CD47抗體的漿細(xì)胞，A正確：

B、誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合可以利用聚乙二醉或滅活的病毒，B正確；

C、經(jīng)兩次篩選可得到既能產(chǎn)生抗CD47抗體又能無(wú)限增殖的雜交瘤細(xì)胞，C正確;

D、對(duì)照組應(yīng)在巨噬細(xì)胞+腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)體系中不加入單克隆抗體，D錯(cuò)誤。

故選D。

8.新冠病毒表面的刺突蛋白可特異性結(jié)合宿主細(xì)胞上的受體CD147,從而介導(dǎo)新冠病

毒入侵宿主細(xì)胞。研究人員制備了針對(duì)刺突蛋白的單克隆抗體，該抗體可結(jié)合刺突蛋白，

從而阻斷新冠病毒刺突蛋白與CD147的結(jié)合，阻止病毒繼續(xù)感染新的細(xì)胞。下列說(shuō)法

正確的是（）

A.新冠病毒入侵人體后可刺激漿細(xì)胞增殖，促進(jìn)其分泌抗體

B.B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后，至少要經(jīng)過(guò)I次選擇才能夠得到專門分泌抗刺突

蛋白抗體的雜交瘤細(xì)胞

C.需將雜交瘤細(xì)胞置「含95%氧氣加5%二氧化碳混合氣體的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

D.可借助單克隆抗體的導(dǎo)向作用，在單克隆抗體上迨接抗新冠病毒的藥物制成生物

導(dǎo)彈

【答案】D

【分析】

單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原的抗體。通常采

用雜交瘤技術(shù)來(lái)制備，雜交瘤抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性

抗體能力的效應(yīng)B細(xì)胞和具有無(wú)限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)

胞既能產(chǎn)生抗體，乂能無(wú)限增殖。用具備這種特性的單個(gè)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)成細(xì)胞群，可

制備針對(duì)一種抗原的特異性抗體即單克隆抗體。

【詳解】

A、漿細(xì)胞是高度分化細(xì)胞，能合成并分泌抗體，不能增殖，A錯(cuò)誤；

B、B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后，至少要經(jīng)過(guò)2次選擇才能夠得到專門分泌抗刺突

蛋白抗體的雜交瘤細(xì)胞.第1次需要篩選出雜交瘤細(xì)胞，第2次篩選出能產(chǎn)生所需抗體

的雜交瘤細(xì)胞，B錯(cuò)誤；

C、需將雜交瘤細(xì)胞置于含95%空氣加5%二氧化碳混合氣體的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，C錯(cuò)誤；

D、根據(jù)抗原與抗體特異性結(jié)合的特性，可借助單克隆抗體的導(dǎo)向作用，在單克隆抗體

上連接抗新冠病毒的藥物制成生物導(dǎo)彈，D正確。

故選D。

9.為了解決雜交瘤細(xì)胞在傳代培養(yǎng)中出現(xiàn)來(lái)自B細(xì)胞染色體丟失的問(wèn)題，研究者在單

克隆抗體的制備過(guò)程中漕加了一個(gè)步驟，如下圖所示。除了抗原刺激之外，用EBV（-

種病毒顆粒）感染動(dòng)物B細(xì)胞，使其染色體核型更穩(wěn)定。這樣的細(xì)胞能夠在HAT培養(yǎng)

基中存活，但對(duì)烏本甘（Oua）敏感。下列相關(guān)分析錯(cuò)誤的是（）

抗原晅動(dòng)物一B細(xì)胞

出丫骨髓瘤細(xì)胞

接丁掇

即轉(zhuǎn)傳噬PEG|Q合

HATi音養(yǎng)基T）ua篩選

一

EBVH化細(xì)胞凝施骨塞田胞

死亡

A.雜交瘤細(xì)胞具有持續(xù)產(chǎn)生抗EBV抗體的能力

B.雜交瘤細(xì)胞染色體丟失可能導(dǎo)致抗體產(chǎn)生能力下降

C.圖中B細(xì)胞取自于抗原刺激后動(dòng)物的脾臟等

D.骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)該無(wú)法在HAT選擇培養(yǎng)基中存活

【答案】A

【分析】

題圖分析：圖示為單克隆抗體制備過(guò)程，除了抗原刺激之外，還用EBV（一種病毒顆

粒）感染動(dòng)物B淋巴細(xì)胞，使其染色體核型更穩(wěn)定，不易發(fā)生變異，該細(xì)胞株能夠在

HAT培養(yǎng)基中存活。

【詳解】

A、本實(shí)驗(yàn)中EBV的作用是使B細(xì)胞染色體核型更粒定，而不是刺激B細(xì)胞分化成漿

細(xì)胞產(chǎn)生抗體，所以該雜交瘤細(xì)胞不能產(chǎn)生抗EBV的抗體，A錯(cuò)誤；

B、雜交瘤細(xì)胞染色體丟失可能導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生變異，從而導(dǎo)致抗體產(chǎn)生能力下降，B正

確；

C、B細(xì)胞分布在脾臟和淋巴結(jié)等免疫器官中，所以在單克隆抗體制備過(guò)程中，B細(xì)胞

取自于抗原刺激后動(dòng)物的淋巴結(jié)或脾臟等，C正確；

D、據(jù)圖可知，骨髓瘤細(xì)胞在HAT選擇培養(yǎng)基中死亡，D正確。

故選Ao

10.運(yùn)用細(xì)胞工程技術(shù)獲得單克隆抗體時(shí)，下列操作不必要的是（）

A.對(duì)小動(dòng)物注射抗原B.融合并篩選雜交瘤細(xì)胞

C.培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞D.將胰蛋白酶注入小鼠腹腔

【答案】D

【分析】

細(xì)胞來(lái)源：B淋巴細(xì)胞：能產(chǎn)生特異性抗體，在體外不能無(wú)限繁殖；骨髓瘤細(xì)胞：不產(chǎn)

生專一性抗體，體外能無(wú)限繁殖。

單克隆抗體的制備過(guò)程是：對(duì)小動(dòng)物注射抗原，從該動(dòng)物的脾臟中獲取效應(yīng)B細(xì)胞，將

效應(yīng)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細(xì)胞，克隆化培養(yǎng)雜交

瘤細(xì)胞（體內(nèi)培養(yǎng)和體外培養(yǎng)），最后獲取單克隆抗體。

【詳解】

A、為了獲得能產(chǎn)生特異性抗體的效應(yīng)B細(xì)胞，因此對(duì)小動(dòng)物注射抗原，A錯(cuò)誤；

B、為了集合效應(yīng)B細(xì)胞能產(chǎn)生特異性抗體和骨髓瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的優(yōu)點(diǎn)，需要將西個(gè)

細(xì)胞融合并篩選出雜交瘤細(xì)胞，B錯(cuò)誤；

C、篩選出的雜交瘤細(xì)胞需要克隆化培養(yǎng)獲取單克隆抗體，C錯(cuò)誤；

D、雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)需要用胰蛋白酶處理，但是在體內(nèi)培養(yǎng)不需要胰蛋白酶處理,

因此該步驟不必要，D正確。

故選Do

蹤訓(xùn)練

1.如圖所示是某動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)液中活細(xì)胞和死亡細(xì)胞密度統(tǒng)計(jì)結(jié)果，下列相

關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.實(shí)驗(yàn)中要控制胰蛋白酶溶液濃度和處理時(shí)間，以免損傷細(xì)胞

B.培養(yǎng)液中應(yīng)適當(dāng)加入青霉素、鏈霉素，以避免雜菌污染

C.曲線be段變化的主要原因是培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不足及有害代謝產(chǎn)物積累

D.培養(yǎng)至第6天時(shí)，新產(chǎn)生的細(xì)胞數(shù)等于死亡細(xì)胞淤

2.下列對(duì)動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)的描述中，錯(cuò)誤的是（）

A.哺乳動(dòng)物細(xì)胞核移植包括胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植

B.體細(xì)胞核移植的過(guò)程中可通過(guò)顯微操作去除卵母細(xì)胞中的核

C.體細(xì)胞核移植過(guò)程中通常采用減數(shù)第二次分裂中期的卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞

D.通過(guò)體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動(dòng)物是對(duì)供核動(dòng)物進(jìn)行了100%的更制

3.1997年，美國(guó)威斯康星州的一個(gè)奶牛場(chǎng)有一頭名叫盧辛達(dá)的奶牛，年產(chǎn)奶量為30.8t,

創(chuàng)造了世界奶牛產(chǎn)奶量最高新紀(jì)錄，下圖是利用盧辛達(dá)的體細(xì)胞進(jìn)行克隆高產(chǎn)奶牛的流

程圖。有關(guān)說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）

A.供體細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞能確?？寺∨Ｅc供體牛遺傳性狀更相近

B.供體細(xì)胞的培養(yǎng)需要無(wú)菌無(wú)毒的環(huán)境，需加入血清、血漿等一些天然成分

C.從卵巢中采集卵母細(xì)胞都要在體外經(jīng)人工培養(yǎng)成熟后再去核作受體細(xì)胞

D.將胚胎移植到代孕母牛子宮里，發(fā)生免疫排斥反應(yīng)的可能性很大

4.下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程和相關(guān)技術(shù)的敘述正確的是（）

A.動(dòng)物細(xì)胞必須培養(yǎng)在有抗生素的培養(yǎng)液中

B.低壓交流電場(chǎng)可擊穿質(zhì)膜脂雙層從而促進(jìn)細(xì)胞雜交

C.胚胎干細(xì)胞核移植前需對(duì)受體細(xì)胞進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)限制性培養(yǎng)

D.按?定標(biāo)準(zhǔn)從細(xì)胞系中篩選獲得的細(xì)胞都具有相同的遺傳信息

5.在克隆哺乳動(dòng)物過(guò)程中，通常作為核移植受體細(xì)胞的是去核的（）

A.卵原細(xì)胞

B.初級(jí)卵母細(xì)胞

C.次級(jí)卵母細(xì)胞

D.卵細(xì)胞

6.下列關(guān)于細(xì)胞工程和胚胎工程中操作目的的說(shuō)法箱送的是（）

A.單克隆抗體制備過(guò)程中，注射抗原的目的是獲得特異性抗體

B.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中定期更換培養(yǎng)液的目的是補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，去除代謝廢物

C.胚胎分割時(shí)，對(duì)內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割的目的是防止影響分割后胚胎的恢復(fù)和發(fā)育

D.體外受精技術(shù)中將精子在一定濃度的肝素溶液中培養(yǎng)目的是誘導(dǎo)精子獲能

7.下圖是利用奶牛乳腺生產(chǎn)血清白蛋白的過(guò)程。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.將牛組織置于清水口并加入一定量的胰蛋白酶處理可得到單細(xì)胞

B.圖中涉及基因工程、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞核移植、胚胎移植等技術(shù)

C.選用未受精的卵細(xì)胞作為受體細(xì)胞是因?yàn)槠渚哂凶尲?xì)胞核全能性得到表達(dá)的環(huán)境

D.若要獲得同卵雙胎或多胎，分割囊胚時(shí)需將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割

8.下列實(shí)驗(yàn)中，不能達(dá)成實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡氖牵ǎ?/p>

A.PCR技術(shù)中用高溫對(duì)DNA解旋B.用Taq聚合酶構(gòu)建表達(dá)載體

C.用胰蛋白酶制備動(dòng)物細(xì)胞懸液D.用纖維素酶和果膠酶制備植物原生質(zhì)

體

9.用一定的技術(shù)獲得處于同一時(shí)期的同步生長(zhǎng)的細(xì)胞群體，可為研究細(xì)胞的生長(zhǎng)和代

謝帶來(lái)便利。研究表明.哺乳動(dòng)物細(xì)胞需要促有絲分裂因子（如血清）才能經(jīng)過(guò)Gi期

繼續(xù)分裂，而分裂期（M期）細(xì)胞會(huì)變圓。下列誘導(dǎo)或選擇細(xì)胞同步化的方法或措施,

不合理的是（）

A.用DNA合成抑制劑可將細(xì)胞阻止在S期

B.用秋水仙素可使細(xì)胞停留在有絲分裂中期

C.降低血清濃度，使細(xì)胞僅能存活而不分裂，可獲得大量Gi期細(xì)胞

D.搖動(dòng)或拍打培養(yǎng)瓶可收集到占培養(yǎng)細(xì)胞總數(shù)50%以上的M期細(xì)胞

10.6磷酸葡萄糖脫氫的（G6PD）有F和S兩種類型，分別由一對(duì)等位基因XF和XS

編碼。將基因型為XFXS的女性皮膚組織用胰蛋白酶處理，進(jìn)行原代培養(yǎng)，然后用不同

的單個(gè)細(xì)胞分別進(jìn)行單克隆培養(yǎng)。分別從原代培養(yǎng)和各單克隆培養(yǎng)取樣，對(duì)G6PD蛋白

進(jìn)行電泳檢測(cè)，結(jié)果如下圖所示。以下敘述不氐硬的是

原代培養(yǎng)細(xì)胞單克隆培養(yǎng)細(xì)胞

123456789

S型蚤門

F型蛋白

A.原代培養(yǎng)的細(xì)胞中都含有X-基因和XS基因

B.原代培養(yǎng)細(xì)胞電泳圖有2個(gè)條帶是因?yàn)橥瑫r(shí)檢測(cè)了多個(gè)細(xì)胞

C.單克隆培養(yǎng)的細(xì)胞1、2、4、5、8、9與3、6、7所含基因不同

D.實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能是女性細(xì)胞中一條X染色體隨機(jī)失許導(dǎo)致的

真題再現(xiàn)

1.（2021?浙江高考真題）將蝌蚪腸細(xì)胞的細(xì)胞核移植到去核的蛙卵中，形成重建的“合

子有些“合子”發(fā)育成正常的蝌蚪，而單獨(dú)培養(yǎng)腸細(xì)胞卻不能發(fā)育成蝌蚪。下列敘述

錯(cuò)誤的是（）

A.腸細(xì)胞不能表達(dá)全能性是受某些物質(zhì)的限制

B.“合子”第一次分裂后形成的細(xì)胞已失去全能性

C.“合子”發(fā)育成正常蝌蚪的過(guò)程中伴隨著細(xì)胞分化

D.細(xì)胞核具有全能性是由于其含有該物種的全套基因

2.（2021?浙江高考真題）下圖為動(dòng)物成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程示意圖。下列敘述止確的

是)

①切取組織②制備細(xì)胞懸浮'液③原代培養(yǎng)④傳代培養(yǎng)

A.步驟①的操作不需要在無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行

B.步驟②中用鹽酸溶解細(xì)胞間物質(zhì)使細(xì)胞分離

C.步驟③到④的分瓶操作前常用胰蛋白酶處理

D.步驟④培養(yǎng)過(guò)程中不會(huì)發(fā)生細(xì)胞轉(zhuǎn)化

二、多選題

3.（2020.江蘇高考真題）小鼠胚胎干細(xì)胞經(jīng)定向誘導(dǎo)可獲得多種功能細(xì)胞、制備流程

如圖所示。下列敘述錯(cuò)送的是（）

囊跖胚胎干細(xì)胞

A.為獲得更多的囊胚，采用激素注射促進(jìn)雄鼠產(chǎn)生更多的精子

B.細(xì)胞a和細(xì)胞b內(nèi)含有的核基因不同，所以全能性高低不同

C.用胰蛋白酶將細(xì)胞a的膜蛋白消化后可獲得分散的胚胎干細(xì)胞

D.胚胎干細(xì)胞和誘導(dǎo)出的各種細(xì)胞都需在CCh培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)

三、綜合題

4.（2021.湖南高考真題）M基因編碼的M蛋白在動(dòng)物A的肝細(xì)胞中特異性表達(dá)。現(xiàn)

設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，將外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通過(guò)核移植、胚胎培養(yǎng)和

胚胎移植等技術(shù)獲得M基因失活的轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物A,流程如圖所示?；卮鹣铝袉?wèn)通：

F

卵母細(xì)胞

成纖維細(xì)胞去核卵母細(xì)胞

I核移植

胚胎培養(yǎng)

早期胚胎

［胚胎移植

代孕母親

1

克隆動(dòng)物A

（1）在構(gòu)建含有片段F的重組質(zhì)粒過(guò)程中，切割質(zhì)粒DNA的工具酶是_________，這

類酶能將特定部位的兩個(gè)核甘酸之間的斷開。

（2）在無(wú)菌、無(wú)毒等適宜環(huán)境中進(jìn)行動(dòng)物A成纖維組胞的原代和傳代培養(yǎng)時(shí)，需要定

期更換培養(yǎng)液，目的是o

（3）與胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)相比，體細(xì)胞核移植技術(shù)的成功率更低，原因是。

從早期胚胎中分離獲得的胚胎干細(xì)胞，在形態(tài)上表現(xiàn)為（答出兩點(diǎn)即可），功

能上具有。

（4）鑒定轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：以免疫小鼠的淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，篩選

融合雜種細(xì)胞，制備M蛋白的單克隆抗體。簡(jiǎn)要寫出利用此抗體確定克隆動(dòng)物A中M

基因是否失活的實(shí)驗(yàn)思路o

5.（2020?全國(guó)高考真題）為研制抗病毒A的單克隆抗體，某同學(xué)以小鼠甲為實(shí)驗(yàn)材料

設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)流程。

回答下列問(wèn)題：

（1）上述實(shí)驗(yàn)前必須紿小鼠甲注射病毒A,該處理的目的是_________________。

（2）寫出以小鼠甲的脾臟為材料制備單細(xì)胞懸液的主要實(shí)驗(yàn)步驟:，，

（3）為了得到能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，需要進(jìn)行篩選。圖中篩選

1所采用的培養(yǎng)基屬于,使用該培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的結(jié)果是

。圖中篩選2含多次篩選，篩選所依據(jù)的基本原理是

（4）若要使能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞大量增殖，可采用的方法有

_________________（答出2點(diǎn)即可）。

《盡模擬檢測(cè)

一、單選題

1.如圖為體細(xì)胞克隆猴“中中”和“華華”的培育流程，為建立人類疾病的動(dòng)物模型、研

究疾病機(jī)理帶來(lái)光明前景。卜.列敘述正確的是（）

A.過(guò)程①將成纖維細(xì)胞注射到去核的卵母細(xì)胞中，體現(xiàn)細(xì)胞膜的選擇透過(guò)性

B.過(guò)程②在培養(yǎng)基中加入的動(dòng)物血清含有激發(fā)成纖維細(xì)胞核全能性表達(dá)的物質(zhì)

C.過(guò)程③進(jìn)行同步發(fā)情處理，可降低代孕母猴對(duì)“中中又華華”的免疫排斥反應(yīng)

D.與模型小鼠相比，模型猴更適合于研究人類疾病的發(fā)病機(jī)理、研發(fā)診治藥物

二、多選題

2.下圖是利用體細(xì)胞核移植技術(shù)獲得克隆奶牛的流程圖。下列敘述正確的是（）

現(xiàn)曹一|外1臂幺|去核卵母囹門④⑤而

母細(xì)胞卵母紐胞|毓I恨一髓肝舒一圉

----------②~《入

高產(chǎn)奶牛的二供體

體細(xì)胞細(xì)胞

A.體細(xì)胞核移植的難度高于胚胎細(xì)胞核移植

B.過(guò)程②和過(guò)程④所使用的培養(yǎng)基成分完全相同

C.過(guò)程③可用電刺激使供體細(xì)胞和去核卵母細(xì)胞融合

D.過(guò)程⑤操作前需要對(duì)代孕母牛進(jìn)行發(fā)情處理

三、實(shí)驗(yàn)題

3.2015年10月5日，我國(guó)科學(xué)家屠呦呦因發(fā)現(xiàn)青蒿素而獲得諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。

青蒿索被譽(yù)為“東方神藥”，是一種高效低毒的治療瘧疾的藥物，近年來(lái)又發(fā)現(xiàn)青蒿素具

有較強(qiáng)的抗腫瘤活性作用。某科研小組為了研究青蒿素的濃度和作用時(shí)間與人膽囊癌

（GBCSD）細(xì)胞增殖的關(guān)系，進(jìn)行了相應(yīng)實(shí)驗(yàn)。

材料用具：人膽囊癌（GBCSD）細(xì)胞懸液、細(xì)胞培養(yǎng)液、不同濃度青蒿素（0陽(yáng)楨1兒、

2pmol/L.4nmol/L.8Hmol/L.16Hmol/L）、培養(yǎng)瓶、CO2培養(yǎng)箱、滴管、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

（測(cè)定細(xì)胞目的工具）、顯微鏡等。

（說(shuō)明：實(shí)驗(yàn)持續(xù)72小時(shí)，每24小時(shí)測(cè)定一次，具體測(cè)定方法不作要求）

（1）實(shí)驗(yàn)思路：

①將分別接種于5組含有等量培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中，編號(hào)A、B、C、D、E；

②向各組培養(yǎng)瓶中分別加入,置于中恒溫培養(yǎng)；

③____________吸取每組培養(yǎng)液，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在顯微鏡下觀測(cè)細(xì)胞數(shù)；

④。

（2）請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)用于記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果的表格。

（3）為了進(jìn)一步確定青蒿素抑制人膽囊癌（GBCSD）細(xì)胞增殖的具體作用機(jī)理，研究

人員在上述實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)匕測(cè)定了不同濃度青蒿素處理24小時(shí)后各時(shí)期細(xì)胞所占百分

比，結(jié)果如下：

細(xì)

胞

比

例

%

藥物作用24h后細(xì)胞各周期分布柱形圖

據(jù)此推測(cè)，青蒿素可能是通過(guò)_____來(lái)抑制人膽囊癌（GBCSD）細(xì)胞的增殖。

四、綜合題

4.由西班牙研究團(tuán)隊(duì)在《Science》雜志.上刊登的?項(xiàng)最新研究成果表明，當(dāng)T淋巴細(xì)

胞的代謝能力發(fā)生變化時(shí)，體內(nèi)積累的炎癥會(huì)讓動(dòng)物未老先衰，出現(xiàn)各種“老年病這

一成果表明了T淋巴細(xì)胞在動(dòng)物體衰老進(jìn)程中的重要作用。回答下列問(wèn)題：

（1）對(duì)于多細(xì)胞生物而言個(gè)體的衰老意味著體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞的衰老，生物體內(nèi)衰老細(xì)

胞的及時(shí)清除體現(xiàn)了免疫系統(tǒng)的功能。

（2）有科學(xué)家提出可利用人體細(xì)胞培養(yǎng)出T淋巴細(xì)胞，再通過(guò)向人體內(nèi)適當(dāng)輸入T淋

巴細(xì)胞來(lái)延緩衰老。下面是該設(shè)想的流程圖。

過(guò)程①的培養(yǎng)液中除合成培養(yǎng)基的成分外，還需添加等天然成分，同時(shí)要

保證被培養(yǎng)的細(xì)胞處于的環(huán)境中。進(jìn)行過(guò)程②時(shí)，需要先利用

技術(shù)將四種目的基因擴(kuò)漕。iPS細(xì)胞是一類具有胚胎干細(xì)胞特性的細(xì)胞。哺乳動(dòng)物的胚

胎干細(xì)胞是由___________中分離出來(lái)的一類細(xì)胞，在功能上具有發(fā)育的。

過(guò)程③的實(shí)質(zhì)是__________。

5.流感病毒是一種有包膜的單鏈RNA病毒，是引起流行性感冒的主要病原體。流感病

毒的培養(yǎng)是研發(fā)滅活流感疫苗的基礎(chǔ)。滅活是用物理或化學(xué)手段使培養(yǎng)得到的流感病毒

失去侵染能力，并不破壞流感病毒的抗原結(jié)構(gòu)，滅活后，還需對(duì)抗原進(jìn)行分離、純化，

得到疫苗。目前受技術(shù)限制難以徹底地分離和純化疫苗，因此，得到的疫苗可能含有培

養(yǎng)基成分。

非洲綠猴腎細(xì)胞（Vcro細(xì)胞）是世界衛(wèi)生組織推薦用于培養(yǎng)流感病毒生產(chǎn)疫苗的細(xì)胞

基質(zhì)，Vcro細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基中通常要添加血清，促進(jìn)細(xì)胞高密度生長(zhǎng)。但是，血清

是成分不完全明確的攵雜混合物，且不同批次的血清在質(zhì)量上存在很大差異，增加了

疫苗生產(chǎn)工藝的不穩(wěn)定性和疫苗質(zhì)量控制的難度，從而影響疫苗的安全性和質(zhì)量。

為進(jìn)一步探索能夠用于培養(yǎng)高密度Vero細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基，科研人員自制了添加胰

島素，轉(zhuǎn)鐵蛋白等替代成分的無(wú)血清培養(yǎng)基（SFM）進(jìn)行研究。研究人員對(duì)傳代的Vero

細(xì)胞消化后，用SFM制成細(xì)胞懸液，置于37度、5%CCh條件下培養(yǎng)，每隔3d更換新

鮮SFM,并繪制了SFM中Vero細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線，如圖所示。請(qǐng)回答：

24［活細(xì)胞濃度（X10^/mL）

001234567891,01*11213141,51,6

培養(yǎng)時(shí)間（d）

（1）與DNA病毒相比，流感病毒易出現(xiàn)變異的原因是,接種滅活流感疫苗后，

體內(nèi)會(huì)發(fā)生相應(yīng)的—（填"體液免疫''、"細(xì)胞免疫''或"體液免疫和細(xì)胞免疫）。

（2）消化Vero細(xì)胞應(yīng)使用的酶是。培養(yǎng)Vcro細(xì)胞時(shí)，將其置于5%COZ條件

下培養(yǎng)，CCh的作用是。細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，通常還要在SFM中添加一定量的

，以防培養(yǎng)過(guò)程中的污染。

（3）SFM中的胰島素能促進(jìn)Vcro細(xì)胞生長(zhǎng)的原因是_________。分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，12d

以后細(xì)胞濃度下降的原因可能是。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，不能有效評(píng)價(jià)無(wú)血清培養(yǎng)

基對(duì)Ver。細(xì)胞的培養(yǎng)效果，應(yīng)補(bǔ)充的實(shí)驗(yàn)是________o

（4）應(yīng)用無(wú)血清培養(yǎng)的Ver。細(xì)胞生產(chǎn)流感疫苗，能夠提高疫苗的安全性，原因是

6.下圖表示通過(guò)核移植等技術(shù)獲得某種克隆哺乳動(dòng)物（二倍體）的流程。回答下列問(wèn)

題:

（1）圖中A表示正常細(xì)胞核，染色體數(shù)為2n,則其性染色體的組成可為o過(guò)程

①表示去除細(xì)胞核，該過(guò)程一般要在卵母細(xì)胞培養(yǎng)至適當(dāng)時(shí)期再進(jìn)行，去核時(shí)常采用—

的方法。②代表的過(guò)程是______。

（2）經(jīng)過(guò)多次傳代后，供體細(xì)胞中的穩(wěn)定性會(huì)降低。因此，選材時(shí)必須關(guān)注

傳代次數(shù)。

（3）若獲得的克隆動(dòng)物與供體動(dòng)物性狀不完全相同，從遺傳物質(zhì)的角度分析其原因是

（4）與克隆羊“多莉（利）”培育成功一樣，其他克隆動(dòng)物的成功獲得也證明了一。

7.科學(xué)家從哺乳動(dòng)物早期胚胎中分離出一類胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞），并進(jìn)一步將ES細(xì)

胞誘導(dǎo)分化出某些組織細(xì)胞。由此回答下列問(wèn)題：

（1）哺乳動(dòng)物胚胎干細(xì)胞在形態(tài)上表現(xiàn)為（至少答3點(diǎn)）。

（2）離體培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞時(shí)，一般需要在合成培養(yǎng)基中加入等天然成分，培

養(yǎng)時(shí)所需的氣體主要有0?和CO?,C02的主要作用是。

（3）將胚胎干細(xì)胞用于檢測(cè)有毒物質(zhì)是否引起了基因突變，在分子水平上需要采用

技術(shù)。為了提高胚胎利用率，通過(guò)__________技術(shù)處理可以獲得更多的胚胎。

（4）研究還發(fā)現(xiàn)，胚胎干細(xì)胞可以誘導(dǎo)分化為造血干細(xì)胞，這體現(xiàn)了胚胎細(xì)胞具有

。臨床上常用誘導(dǎo)干細(xì)胞定向分化的方法修補(bǔ)損傷或衰老的組織器官，從而解

決了問(wèn)題。

8.結(jié)核病是由結(jié)核桿菌引起的人畜共患病。結(jié)核桿菌通常以氣溶膠形式傳播，氣溶膠

顆粒被肺泡吞噬細(xì)胞吞噬，吞噬細(xì)胞破裂導(dǎo)致結(jié)核桿茵在機(jī)體內(nèi)進(jìn)一步傳播。羊癢病是

由正常細(xì)胞的非致病性撫蛋白異構(gòu)化為癢病骯蛋白所致。為研制既能抗結(jié)核病又能抗羊

癢病的雙抗羊，科學(xué)家進(jìn)行了如下操作。

組1組2組3

圖1

（i）將山羊吞噬細(xì)胞特異性啟動(dòng)子MRS與小鼠SP110基因形成融合基因，用

將融合基因與質(zhì)粒構(gòu)建成重組質(zhì)粒，導(dǎo)入山羊肺泡吞噬細(xì)胞（組2）。以（組

3）和轉(zhuǎn)入空質(zhì)粒的山羊吞噬細(xì)胞為對(duì)照組（組1）。分別接種等量的結(jié)核桿菌，72h后

加入使吞噬細(xì)胞破裂，取裂解液進(jìn)行涂布培養(yǎng)，結(jié)果如圖1。由圖可知小鼠

SP110基因可用于雙抗羊的研制，依據(jù)是o

（2）非致病性骯蛋白是由山羊13號(hào)染色體上的PRNP基因的第三外顯子控制合成的，

PRNP基因的結(jié)構(gòu)如圖2。

啟動(dòng)外顯子3

--------____________________________________________________

5'-----------------------AGTTGGATCCTGGTT-----------------------

-----------------------TCAACCTAGGACCAA---------------------------5*

R1序列

圖2

注:限制醐BamHI的識(shí)別序列為GGATCC

以L4和Ri為識(shí)別位點(diǎn)設(shè)計(jì)TALEN敲除載體，對(duì)山羊成纖維細(xì)胞L與Ri之間的序列

實(shí)施定點(diǎn)敲除。請(qǐng)根據(jù)上述信息，寫出檢測(cè)敲除是否成功的思路，并描述敲除成功的實(shí)

驗(yàn)結(jié)果o

（3）將TALEN敲除載體與供體DNA載體共轉(zhuǎn)化幼羊成纖維細(xì)胞，可將SP110基因定

點(diǎn)敲入PRNP基因的第三外顯子中，原理如圖3。請(qǐng)指出圖4中的數(shù)字分別代表的結(jié)構(gòu)。

1234經(jīng)檢測(cè)，成纖維細(xì)胞的

SP110基因表達(dá)量明顯下降。

（4）欲用上述細(xì)胞獲得雙抗羊，需要用到的技術(shù)有。

9.CART細(xì)胞免疫療法，是一種治療腫瘤的新型精準(zhǔn)靶向療法。借助基因工程給T細(xì)

胞裝上定位導(dǎo)航裝置CAR（腫瘤嵌合抗原受體），T組胞就能獲得特異性識(shí)別和攻擊腫

瘤細(xì)胞的能力，猶如“細(xì)胞導(dǎo)彈”，能精確“點(diǎn)射”腫瘤細(xì)胞，但又不會(huì)傷及正常細(xì)胞。治

療流程如下，回答下列有關(guān)問(wèn)題：

（1）將T細(xì)胞改造成CART細(xì)胞，可以借助逆轉(zhuǎn)錄病毒載體將CAR基因整合到正

常T細(xì)胞的基因序列中，這個(gè)過(guò)程稱為。

（2）除借助病毒侵染外，也可通過(guò)電穿孔技術(shù)（通過(guò)高強(qiáng)度的電場(chǎng)作用，瞬時(shí)提高細(xì)胞

膜的通透性，從而吸收周圍介質(zhì)中的外源分子）直接將導(dǎo)入細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行

表達(dá)，該方法相較于病毒侵染更安全，原因是o

（3）讓CART細(xì)胞進(jìn)行增殖，需要用到技術(shù)，此技術(shù)應(yīng)在5%的C02

培養(yǎng)箱中進(jìn)行，CO2的作用是。

（4）將CART細(xì)胞回輸?shù)交颊唧w內(nèi)后，CART細(xì)胞表面的抗原受體能與

發(fā)生特異性結(jié)合，從而高效地殺滅腫瘤細(xì)胞。

10.（一）回答下列與釀酒和制醋有關(guān)的問(wèn)題：

（1）果酒制作過(guò)程中嚴(yán)格控制發(fā)酵條件是保證發(fā)酵正常進(jìn)行的關(guān)鍵，這直接關(guān)系到是

否能得到質(zhì)量高、產(chǎn)量多的理想產(chǎn)物，通常所指的發(fā)酵條件不包括

A.溫度控制B.溶氧控制C.pH控制D.酶的控制

（2）對(duì)野生酵母菌進(jìn)行誘變后用和的培養(yǎng)基，可篩選得到具有耐高糖和

耐酸特性的酵母菌，提高酒精發(fā)酵的效率。

（3）可通過(guò)測(cè)定酵母菌數(shù)量、發(fā)酵液密度和酒精濃度等措施監(jiān)控酒精發(fā)酵情況。發(fā)酵

初期，可采用法測(cè)定酵母菌的活菌數(shù)量；發(fā)酵中期，發(fā)酵液密度降低的原因是

（4）轉(zhuǎn)入醋酸發(fā)酵前，需調(diào)整的發(fā)酵條件是______；發(fā)酵過(guò)程中常通過(guò)______來(lái)監(jiān)控

醋酸發(fā)酵情況。

（二）2017年，世界上首例體細(xì)胞克隆猴在中國(guó)誕生。圖是體細(xì)胞克隆猴的技術(shù)流程

圖，請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：

卵母細(xì)

胞供體

掰猴胚胎成纖

維細(xì)胞的培養(yǎng)

天體細(xì)胞卵母

胚胎成纖維細(xì)胞\幽？?細(xì)胞

KDM4dniRNA①I

融合

激活

胚胎

移植

J體細(xì)胞克

代孕母猴K隆的舜猴

（1）圖中選擇稱猴胚胎期而非成年期的成纖維細(xì)胞進(jìn)夕亍培養(yǎng)，其原因是，

剛放入培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞沉降到瓶底部后首先會(huì)出現(xiàn)現(xiàn)象。

（2）圖中步驟①是克隆猴技術(shù)難點(diǎn)之一，需要將卵母細(xì)胞培養(yǎng)到中期II后進(jìn)行去核操

作，去核事實(shí)上是去除卵母細(xì)胞的紡錘體和結(jié)構(gòu)。

（3）體細(xì)胞克隆猴的另外一個(gè)難點(diǎn)是猴的體細(xì)胞克隆胚胎發(fā)育差，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)胚胎發(fā)

育障礙與克隆胚胎基因組上大量組蛋白的甲基化密切相關(guān)。由此推測(cè)，圖中KDM4d

mRNA翻譯產(chǎn)生的酶的作用是_____oAKDM4dmRNA導(dǎo)入重組細(xì)胞的技術(shù)是_______

導(dǎo)入前的激活一般使用力法。垂組細(xì)胞經(jīng)______、胚胎移植等過(guò)程獲得克隆猴,

克隆猴的遺傳物質(zhì)來(lái)自于。

參考答案

跟蹤訓(xùn)練

1.D

【分析】

分析曲線圖可知，ab段表示活細(xì)胞密度增加，be段表示活細(xì)胞密度減少；培養(yǎng)。?8天

時(shí)，死細(xì)胞密度增加。涪養(yǎng)第6天時(shí)，活細(xì)胞數(shù)等于死亡細(xì)胞數(shù)。

【詳解】

A、實(shí)驗(yàn)中要控制胰蛋白酶溶液濃度和處理時(shí)間，以免損傷細(xì)胞，A正確；

B、培養(yǎng)液中應(yīng)適當(dāng)加入青霉素、鏈霉素，以避免雜菌污染，B正確；

C、曲線be段表示活細(xì)胞密度減少而死細(xì)胞密度增加，產(chǎn)生的主要原因是培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)

物質(zhì)不足及有害代謝產(chǎn)物積累等，C正確：

D、培養(yǎng)第6天時(shí)，活細(xì)胞數(shù)等于死亡細(xì)胞數(shù)，D錯(cuò)誤。

故選D。

2.D

【分析】

利用核移植技術(shù)獲得的動(dòng)物與供核動(dòng)物性狀不完全相同的原因：①克隆動(dòng)物絕大部分

DNA來(lái)自供體細(xì)胞的細(xì)胞核，但其細(xì)胞質(zhì)中的DNA主要來(lái)自去核的卵母細(xì)胞；②性狀

是基因和環(huán)境共同作用的結(jié)果，供核動(dòng)物生活的環(huán)境與克隆動(dòng)物生活的環(huán)境不完全相同,

其性狀也不可能和供核動(dòng)物完全相同：③克隆動(dòng)物在個(gè)體發(fā)育過(guò)程中有可能發(fā)生基因突

變，產(chǎn)生供核動(dòng)物沒(méi)有的性狀。

【詳解】

A、哺乳動(dòng)物核移植包括胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植，并且胚胎細(xì)胞核移植成功率

更高，A正確；

B、通過(guò)顯微操作去除卵母細(xì)胞中的核，同時(shí)也可??并吸出第?極體，B正確；

C、體細(xì)胞核移植中，卵母細(xì)胞要在體外培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期，C正確；

D、通過(guò)體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的重組細(xì)胞中，核是供體細(xì)胞的，但細(xì)胞質(zhì)是受體細(xì)胞

的，所以不是對(duì)供核動(dòng)物進(jìn)行了100%的復(fù)制，D錯(cuò)誤。

故選D。

3.D

【分析】

1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：

（1）無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，

以清除代謝廢物。

（2）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血

漿等天然物質(zhì)。

（3）溫度和PH：36.5r±0.50C；適宜的pH：7.2?7.4。

（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO2（維持培養(yǎng)液的pH）。

2.動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，

使其重組弁發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體，核移植得到的動(dòng)

物稱克隆動(dòng)物。

3.胚胎移植的生理學(xué)基礎(chǔ)：

①動(dòng)物發(fā)情排卵后，同種動(dòng)物的供、受體生殖器官的生理變化是相同的，這就為供體的

胚胎移入受體提供了相同的生理環(huán)境。

②早期胚胎在一定時(shí)間內(nèi)處于游離狀態(tài)，這就為胚胎的收集提供了可能。

③受體對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為胚胎在受體的存活提供了可能。

④供體胚胎可與受體子自建立正常的生理和組織聯(lián)系，但供體胚胎的遺傳特性在孕育過(guò)

程中不受影響。

【詳解】

A、供體細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞能確保核遺傳物質(zhì)來(lái)自于供體細(xì)胞，使克隆牛與供體

牛遺傳性狀更相近，A正確；

B、供體細(xì)胞的培養(yǎng)需要無(wú)菌無(wú)毒的環(huán)境，需加入血清、血漿等一些天然成分，B正確；

C、采集的卵母細(xì)胞需培養(yǎng)減數(shù)第二次分裂中期（MH中期）才成熟，C正確；

D、受體對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為胚胎在受體的存活提供了可

能,D錯(cuò)誤。

故選D。

4.B

【分析】

1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：（1）無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗

生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物。（2）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、

無(wú)機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)。（3）溫度和PHo<4）氣體環(huán)

境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO2（二氧化碳的作用是維持培養(yǎng)液的PH）o

【詳解】

A、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中需要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素以保證無(wú)菌環(huán)境，若已在

無(wú)菌環(huán)境中也可以不加入，A錯(cuò)誤。

B、電融合技術(shù)可在低壓交流電場(chǎng)中擊穿質(zhì)膜脂雙層導(dǎo)致胞質(zhì)融通可高效促進(jìn)細(xì)胞融合,

B正確

C、核移植操作前需對(duì)供體細(xì)胞進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)限制性培養(yǎng)，以利于細(xì)胞核的一系列變化和基

因表達(dá)分子的開關(guān)的啟動(dòng)，C錯(cuò)誤；

D、按一定標(biāo)準(zhǔn)從細(xì)胞系中篩選獲得的細(xì)胞可能因發(fā)生變異，遺傳信息不一定相同，D

錯(cuò)誤。

故選Bo

5.C

【分析】

體細(xì)胞核移植過(guò)程；

I卯集I

J/

將供體細(xì)胞注入去核9呻細(xì)胞

①通過(guò)電刺激使兩細(xì)胞融合，供體核進(jìn)入受

體羽母2礴。曳組細(xì)胞

②用物理或化學(xué)方法（如電脈沖、鈣離子載

體、2加享、蛋白酶合成抑制劑等）激活受體

細(xì)胞，使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育過(guò)程。代孕母體

【詳解】

在克隆哺乳動(dòng)物過(guò)程中，通常選擇減數(shù)第二次分裂中期的去核卵母細(xì)胞作為受體細(xì)庖,

即次級(jí)卵母細(xì)胞。

故選C。

6.A

【分析】

單克隆抗體的制備流程：人工誘導(dǎo)經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，再經(jīng)篩選

獲得能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞，通過(guò)培養(yǎng)獲得的雜交瘤細(xì)胞得到單克隆抗體。

【詳解】

A、單克隆抗體制備過(guò)程中，注射抗原的目的是獲得能產(chǎn)生特異性抗體的漿細(xì)胞，A錯(cuò)

誤；

B、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中定期更換培養(yǎng)液的目的是補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，去除代謝廢物，防止

細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害，B正確；

C、胚胎分割時(shí)，對(duì)內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割的目的是防止影響分割后胚胎的恢更和發(fā)育，C

正確：

D、精子只有獲能后才能與卵細(xì)胞結(jié)合形成受精卵，體外受精技術(shù)中將精子在一定濃度

的肝素溶液中培養(yǎng)目的是誘導(dǎo)精子獲能，D正確。

故選Ao

7.A

【分析】

圖中，首先把血清蛋白基因?qū)肱５募?xì)胞中，獲得轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞，取該轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞核

移植到去核的卵細(xì)胞中,經(jīng)過(guò)早期胚胎培養(yǎng)及胚胎移植獲得轉(zhuǎn)基因奶牛。

【詳解】

動(dòng)物細(xì)胞需要在特定的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，用胰蛋白酶可以分離得到單細(xì)胞，A錯(cuò)誤；圖示

有轉(zhuǎn)基因技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)、核移植、早期胚胎普養(yǎng)及胚胎移植等技術(shù)，B正確；

未受精的卵母細(xì)胞較大，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富，含有促進(jìn)細(xì)胞核全能性表達(dá)的物質(zhì)，C正魂；

為獲得同卵雙胎或多胎，可通過(guò)胚胎分割獲得多個(gè)胚胎，一般分割囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，

且需均等分割，D正確。故選A。

8.B

【分析】

PCR技術(shù)：（1）概念：PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，皓一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA

的核酸合成技術(shù)；（2）原理：DNA復(fù)制；（3）前提條件：要有一段已知目的基因的核

甘酸序以便合成一對(duì)引物；（4）條件：模板DNA、四種脫氧核昔酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)

定DNA聚合酶（Taq酶）；（5）過(guò)程：①高溫變性：DNA解旋過(guò)程；②低溫復(fù)性：引

物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈.PCR擴(kuò)增中雙鏈DNA解開不需要

解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動(dòng)解開。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中需要胰蛋白酶或膠原蛋白酶

處理獲得細(xì)胞懸浮液；植物細(xì)胞壁的主要成分是纖維素和果膠，其存在阻礙了植物細(xì)胞

的融合，所以必須用相關(guān)酶處理掉。

【詳解】

PCR技術(shù)中