ICS03.100.01CCSX00DB5115CodeofpracticeforspawnproductionofDictyophoraindusiata(Vent.Pers.)Fisch.宜賓市市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB5115/T72—2020 III 1 22規(guī)范性引用文件 23術(shù)語和定義 24生產(chǎn)條件 34.1技術(shù)人員 34.2場地環(huán)境 34.3廠房設(shè)置與布局 34.4設(shè)施設(shè)備 44.4.1 4.4.2 4.4.3消耗材料 44.4.4培養(yǎng)料 44.4.5培養(yǎng)容器 44.4.6消毒材料及藥品 45生產(chǎn)工藝 55.1菌種分級 55.2母種 55.2.1 5.2.2 5.2.3 5.2.4接種 65.2.5培養(yǎng) 65.3原種 65.3.1固體原種 65.3.2液體原種 75.3.3接種環(huán)境消毒 75.3.4接種 75.3.5培養(yǎng) 85.4栽培種 85.5記錄 85.6入庫貯存 86質(zhì)量要求、檢驗方法 86.1 6.1.1 6.1.2原種 96.1.3栽培種 96.2抽樣、留樣 96.3檢驗規(guī)則 DB5115/T72—20206.4檢驗方法 6.4.1感官檢驗方法 6.4.2理化檢驗方法 6.4.3農(nóng)藝性狀和商品性狀檢驗方法 6.4.4 7標簽、包裝、運輸、貯存 117.1標簽 7.2包裝 7.3運輸 附錄A（規(guī)范性附錄）母種常用培養(yǎng)基及其配方 附錄B（資料性附錄）原種和栽培種常用培養(yǎng)基及其配方 附錄C（規(guī)范性附錄）常用栽培性狀檢驗用培養(yǎng)基 DB5115/T72—2020本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起本文件附錄包括規(guī)范性附錄A及資料性附錄B、規(guī)范性附錄C。本文件由宜賓學院提出，由宜賓市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局及宜賓市林業(yè)與竹業(yè)局歸口。本文件由宜賓市市場監(jiān)督管理局發(fā)布。本文件主要起草單位：宜賓學院、長寧縣林業(yè)和竹業(yè)局、長寧縣產(chǎn)品質(zhì)量檢驗檢測中心、長寧縣農(nóng)業(yè)局、長寧縣竹海山寶食用菌開發(fā)專業(yè)合作社、蜀南竹海竹生物與竹文化研究所、宜賓方向生物科技有限公司。本文件主要起草人：游玲、王濤、鄧騖遠、侯茂、黃文培、唐森強、李青、朱大毛、何莉、楊敬、楊毅、黃曉、韋仕林、徐開良、鄧斌、劉開明。DB5115/T72—20201長裙竹蓀口味鮮美，是著名的珍貴食用菌之一，竹蓀多糖等多種活性物質(zhì)具有獨特保健價值，是中國傳統(tǒng)土特產(chǎn)，主產(chǎn)于四川省宜賓市長寧縣，2016年宜賓長裙竹蓀被評為國家地理標志保護產(chǎn)品。長裙竹蓀產(chǎn)業(yè)已在宜賓形成較大規(guī)模，每年竹蓀產(chǎn)值超過1.2億元，菌種需求超過120萬袋，但目前菌種培育技術(shù)仍缺乏相關(guān)標準指導，導致菌種質(zhì)量參差不齊，影響了產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展。因此本標準根據(jù)宜賓市長裙竹蓀菌種培育的實際情況，從場地設(shè)施、培養(yǎng)基條件、質(zhì)量控制等方面制定母種、原種、栽培種等方面的技術(shù)規(guī)程，旨在為長裙竹蓀菌種的標準化生產(chǎn)提供指導。DB5115/T72—20202長裙竹蓀菌種培育技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了長裙竹蓀各級菌種生產(chǎn)的生產(chǎn)條件、生產(chǎn)工藝及質(zhì)量要求。本文件適用于長裙竹蓀各級菌種生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅標注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲運圖示標志GB/T4789.28食品衛(wèi)生微生物學檢驗染色法、培養(yǎng)基和試劑NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程NY5099無公害食品食用菌栽培基質(zhì)安全技術(shù)要求中華人民共和國農(nóng)業(yè)部第62號令（2006）食用菌菌種管理辦法3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。母種stockculture經(jīng)各種方法選育得到的具有結(jié)實性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物，常以玻璃試管為培養(yǎng)容器和使用單位，也稱一級種、試管種。3.2原種pre-culturespawn由母種移植、擴大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物，分為固體原種及液體原種，固體原種常以玻璃菌種瓶或塑料菌種瓶或15cm×28cm聚丙烯塑料袋為容器，液體原種常以500mL或1000mL的三角瓶為容器，也稱二級種。3.3栽培種spawn由原種移植、擴大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。常以玻璃瓶或塑料袋為容器。栽培種只能用于栽培，不可再次擴大繁殖菌種，也稱三級種。3.4角變sectorDB5115/T72—20203因菌絲體局部變異或感染病毒而導致菌絲變細、生長緩慢、菌絲體表面特征成角狀異常的現(xiàn)象。3.5頡頏現(xiàn)象antagonism具有不同遺傳基因的菌落間產(chǎn)生不生長區(qū)帶或形成不同形式線性邊緣的現(xiàn)象。3.6高溫圈hightemperatureline食用菌菌種在生產(chǎn)過程中受高溫的不良影響，培養(yǎng)物出現(xiàn)的圈狀發(fā)黃、發(fā)暗或菌絲變稀弱的現(xiàn)象。3.7鎖狀聯(lián)合clampconnection食用菌不同性別的一級菌絲發(fā)生接合后，通過質(zhì)配形成了由雙核構(gòu)成二級菌絲，通過獨特的鎖狀聯(lián)合，即形成喙狀突起而連和兩個細胞的方式不斷使雙核細胞分裂，從而使菌絲尖端不斷向前延伸。常發(fā)生在菌絲頂端，形如鎖狀。3.8種性charactersofvariety食用菌的品種特性是鑒別食用菌菌種或品種優(yōu)劣的重要標準之一。一般包括對溫度、濕度、酸堿度、光線和氧氣的要求，抗逆性、豐產(chǎn)性、出菇遲早、出菇潮數(shù)、栽培周期、商品質(zhì)量及栽培習性等農(nóng)藝性狀。3.9雜木屑chipdust主要來源于闊葉樹木的混合木屑，最好不含松、杉、柏、樟等樹種的木屑。4生產(chǎn)條件4.1技術(shù)人員按照《食用菌菌種管理辦法》的規(guī)定配備生產(chǎn)技術(shù)人員和檢驗人員。4.2場地環(huán)境應符合NY/T528的規(guī)定。4.3廠房設(shè)置與布局應設(shè)有各自隔離的原材料庫、堆料場、配料分裝場、滅菌間、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室、菌種檢驗室、菌種貯存室和出菇試驗場、廢物堆集場等。廠房建造從結(jié)構(gòu)和功能上滿足食用菌菌種生產(chǎn)的基本需要，并按照菌種制種工藝流程合理布局，各操作環(huán)節(jié)順序形成一條流水線，滅菌前的操作區(qū)域與滅菌后的操作區(qū)域相隔離，出菇場與菌種生產(chǎn)、培養(yǎng)車間隔離。堆料場、配料分裝場、廢物堆集場等帶有雜菌的區(qū)域應處于場地的下風口。DB5115/T72—202044.4設(shè)施設(shè)備4.4.1基本設(shè)施原材料庫防潮防雨、通風、遠離火源。堆料場可由若干水泥池并排構(gòu)成，各池頂面開口，一側(cè)面有門，各排水泥池間可供小車或叉車經(jīng)過。配料分裝場水電齊備，空間充裕，通風良好，地面便于沖洗。滅菌間水電齊備，空間充裕，通風散熱，墻壁和地面便于沖洗消毒。接種室配備降溫、除塵設(shè)備，四周墻面及屋頂、地面光潔，可清洗消毒。培養(yǎng)室具有與生產(chǎn)量相適應的面積，具有防蚊蟲、鼠害設(shè)施，通風良好，無直射陽光，能密閉熏蒸消毒殺蟲，同時具備通風換氣及溫控設(shè)備，可實現(xiàn)18~28℃控溫要求。貯存室具備低溫（0~15℃)貯存條件。檢驗室水電齊備，利于安裝相應的檢驗設(shè)備和儀器。4.4.2基本設(shè)備各類必需的稱量用具、蒸煮設(shè)備、母種培養(yǎng)基分裝設(shè)備、拌料機、裝袋機、高壓滅菌和常壓滅菌設(shè)備、接種工具、接種箱或超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、振蕩培養(yǎng)箱（轉(zhuǎn)速170r/min以上，可控溫）、培養(yǎng)架、烘箱、除濕機、電冰箱、質(zhì)量檢測儀器設(shè)備及其它工器具等。4.4.3消耗材料4.4.4培養(yǎng)料應符合NY5099的規(guī)定。4.4.5培養(yǎng)容器試管：18mm×180mm或20mm×200mm標準玻璃試管，配套棉塞（梳棉制作）或硅膠塞。三角瓶：500~2000mL三角瓶，配套大小適宜的棉塞、硅膠塞或透氣封口膜等可滿足濾菌和透氣要求的無棉塑料蓋封口。培養(yǎng)皿：90mm玻璃培養(yǎng)皿或一次性滅菌培養(yǎng)皿。玻璃瓶、塑料瓶、組培瓶：容積500~1000mL，附有帶透氣膜的螺旋蓋。食用菌袋：聚乙烯（不透明，韌性較好，只能常壓滅菌）或聚丙烯食用菌（透明，韌性較差，可高壓滅菌），根據(jù)滅菌方式選用。4.4.6消毒材料及藥品4.4.6.1紫外燈用于空氣消毒，使用方法：每次接種前照射接種箱或超凈工作臺20~30min。4.4.6.2酒精用于皮膚和器皿的表面消毒：75%酒精擦拭皮膚及器皿表面。4.4.6.3石炭酸（苯酚）用于無菌室、接種箱的空間和表面消毒：3%~5%的水溶液噴灑，30~60min即可，該藥有很強的腐蝕性，避免沾在皮膚上。4.4.6.4來蘇兒用于空間空氣和表面的消毒：1%~2%的水溶液噴灑，30~60min即可，也可用于洗手或浸泡臺布。DB5115/T72—202054.4.6.5漂白粉用于浸泡材料的表面消毒：2%~5%的水溶液；用于防治細菌和線蟲：0.5%~1%的水溶液噴霧。4.4.6.6波爾多液4.4.6.7石灰用于抑制雜菌：培養(yǎng)料中加入1%~2%的生石灰粉，3%~5%的石灰水溶液可抑制多數(shù)霉菌的生長和繁殖。4.4.6.8商品消毒劑包括但不限于以二氧異氰尿酸鈉為主要成分的各種商品消毒劑，按說明書使用。5生產(chǎn)工藝5.1菌種分級菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）、栽培種（三級種）。5.2母種5.2.1母種來源經(jīng)兩年以上的栽培，種性合格的長裙竹蓀（Dictyophoraindusiata(Vent.Pers.)Fisch.）斜面菌種，正常條件下生物學效率應不低于10%。5.2.2工藝流程培養(yǎng)基制備→接種→培養(yǎng)。5.2.3培養(yǎng)基制備5.2.3.1培養(yǎng)基配方見附錄A。所用原材料應符合NY5099的規(guī)定。5.2.3.2制作方法以配制1000mLPDA培養(yǎng)基為例，選無青皮、未發(fā)芽的新鮮馬鈴薯洗凈、去皮、去芽眼，稱取200g切成5mm厚的薄片，加水1200mL左右煮20～30min，煮至熟而不爛，用先預濕的4層紗布過濾。取濾液加入事先用熱水軟化的20g瓊脂，邊煮邊攪拌至瓊脂全部溶化。加入20g葡萄糖攪拌溶化，加水定容至1000mL。趁熱分裝，裝量為試管長度的1/5～1/4，管口不能粘染培養(yǎng)基。5.2.3.3滅菌母種培養(yǎng)基配制完成后應在1h內(nèi)進高壓蒸汽滅菌鍋滅菌，滅菌條件0.11~0.12MPa，30min。滅菌完畢自然降壓，不應強制降壓。DB5115/T72—202065.2.3.4擺斜面滅菌結(jié)束，自然降壓至零。打開鍋蓋，自然降溫20～30min，并利用余熱烘干棉塞。將試管的一端斜放在1㎝厚的木條上擺出斜面，斜面頂端距試管口40～50mm。5.2.3.5滅菌效果檢查制好的母種斜面培養(yǎng)基隨機抽取3%~5%的試管，直接置于28℃恒溫培養(yǎng)，48h后檢查，無微生物長出的為滅菌合格。5.2.4接種5.2.4.1接種室（箱）或超凈工作臺的消毒采用市售安全型氣霧消毒劑（包括但不限于以二氧異氰尿酸鈉為主要成分的各種商品消毒劑）熏蒸，接種室熏蒸2～3h，接種箱熏蒸40min，臺面先用75%酒精或其它消毒劑（以二氧異氰尿酸鈉為主要成分的各種商品消毒劑）擦拭消毒，并用紫外燈照射30min后接種。5.2.4.2接種操作檢查、核對菌種。接種人員的手用75%酒精棉球擦拭消毒，接種針和母種試管口用酒精燈火焰消毒。左手平托母種試管和待接種試管，并使管口位于火焰上方無菌區(qū)域，但不直接灼燒管口，用經(jīng)火焰消毒并冷卻后的接種針切取3～5㎜×3～5㎜的一塊母種迅速轉(zhuǎn)接于待接試管斜面中央，塞好試管塞。接完種及時貼好標簽。5.2.5培養(yǎng)接種后置于22～28℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)直至長滿斜面，期間注意觀察并及時揀出污染菌種。5.3原種5.3.1固體原種5.3.1.1工藝流程培養(yǎng)基制備→接種→培養(yǎng)。5.3.1.2培養(yǎng)基制備5.3.1.2.1培養(yǎng)基配方包括但限于附錄B中所列培養(yǎng)基配方。所用原材料應符合NY5099的規(guī)定。竹屑或木屑等顆粒較大，吸水較慢的原材料要進行預濕處理，方法為加水浸泡24h，中途換水1~2次。5.3.1.2.2制作方法按照配方量取各種原材料放入攪拌機內(nèi)混合，糖和石灰等溶入水中加入，充分攪拌，混合均勻，嚴格掌控含水量60%～65%（緊捏可成團，松開可分散調(diào)節(jié)pH值至6～7后裝瓶，培養(yǎng)料裝至距瓶口5~10mm處，稍作壓實，上緊下松，松緊適度。將瓶口和外瓶壁洗擦干凈，封瓶口。5.3.1.2.3滅菌DB5115/T72—20207裝瓶完成后及時滅菌，壓力升到0.05Mpa時，打開放汽閥排放冷氣，直至鍋內(nèi)冷空氣排凈。壓力升至0.14MPa開始計時，滅菌2.5～3h。滅菌完畢后，應自然降壓后，開鍋取出菌種瓶，移入預先清潔和消毒的冷卻室或接種室內(nèi)冷卻至25~28℃左右準備接種。5.3.1.2.4接種環(huán)境消毒同5.2.4.1。5.3.1.3接種菌種檢查、核對無誤方可用于接種。接種人員手用75%酒精棉球擦拭消毒，母種試管口用酒精燈火焰消毒，菌種瓶口位于火焰上方無菌區(qū)域，但不直接灼燒瓶口，用經(jīng)火焰消毒并冷卻后的接種鉤切取12㎜×12㎜的一塊母種迅速接入瓶內(nèi)，封好瓶口，每支母種接原種3～5瓶。接種后及時貼好標簽標識，做好接種場所的清潔衛(wèi)生并消毒。5.3.1.4培養(yǎng)培養(yǎng)室內(nèi)控制室溫20～25℃,空氣相對濕度60%～70%，保持空氣清新，避光培養(yǎng)。定期檢查菌種萌發(fā)情況，及時揀出污染和不合格菌種。5.3.2液體原種5.3.2.1工藝流程培養(yǎng)基制備→接種→培養(yǎng)。5.3.2.2培養(yǎng)基制備5.3.2.2.1培養(yǎng)基配方包括但不限于采用附錄B中B.5所列培養(yǎng)基配方，所用原材料應符合NY5099的規(guī)定，其中麥粒提取液的制作方式為：將麥粒稱量后用自來水常溫浸泡24h，過濾后，用干凈自來水淘洗3次，加麥粒4倍重量的水將麥粒煮至無白心，冷卻過濾后備用。5.3.2.3配制方法取麥粒提取液按配方加入其他配料，按比例配制400mL培養(yǎng)基，裝入1000mL三角瓶。5.3.2.4滅菌121℃滅菌40min（或等同滅菌條件滅菌鍋壓力歸零后，開鍋取出菌種瓶，移入預先清潔和消毒的冷卻室或接種室內(nèi)冷卻。待冷卻至25~28℃左右準備接種。5.3.3接種環(huán)境消毒同5.2.4.1。5.3.4接種挑取母種斜面菌絲少許到液體培養(yǎng)基中，一支斜面母種可接種裝有400mL液體培養(yǎng)基的1000mL三角瓶3-5瓶。DB5115/T72—202085.3.5培養(yǎng)振蕩培養(yǎng)箱用安全型氣霧消毒劑（包括但不限于以二氧異氰尿酸鈉為主要成分的各種商品消毒劑）熏蒸1~2h，再將已接種母種的三角瓶于25℃、轉(zhuǎn)速170r/min振蕩培養(yǎng)6d。5.4栽培種栽培種與固體原種生產(chǎn)工藝基本相同，現(xiàn)將不同點表述如下：——栽培種容器：可選用規(guī)格為15cm×30cm的折角聚丙烯菌種袋，或其它規(guī)格的菌種袋；——菌種袋裝料：要求袋面平整無皺褶，袋內(nèi)料面無空隙，松緊適度，用手輕壓袋面有彈性為宜；——滅菌條件：聚丙烯菌袋可采用0.14Mpa，滅菌2~3h；聚乙烯菌袋滅菌溫度應小于122℃,因此，其滅菌條件為0.11Mpa，滅菌3~4h；栽培種也可以采用常壓滅菌，常壓滅菌時，宜在4h內(nèi)使滅菌鍋內(nèi)溫度達100℃,保持恒溫12~16h；各滅菌方式均應自然降壓?！臃N：原種瓶的瓶口內(nèi)外和外瓶壁用消毒液清洗消毒。瓶口表層菌種和已形成原基的部分要去掉不用，每瓶原種可接栽培種30~50瓶。如采用液體原種接種，使用無菌吸管或針筒接種液體菌種到原種培養(yǎng)基上，接種量為10~20mL/瓶，每瓶原種（400mL）可接栽培種20~40瓶。5.5記錄生產(chǎn)各環(huán)節(jié)應詳細記錄。母種按品種記錄培養(yǎng)條件、接種時間、分批編號；原種、栽培種按菌種來源記錄制種方法、接種時間、分批編號，同一批次菌種為同一來源、同一品種、同一培養(yǎng)基配方、同一天接種、同一培養(yǎng)條件和質(zhì)量基本一致的符合規(guī)定數(shù)量的菌種。每批次數(shù)量母種≥50支、原種≥200瓶（袋）、栽培種≥2000瓶（袋）。5.6入庫貯存完成培養(yǎng)的菌種要及時登記入庫并在適齡期內(nèi)使用。母種在4±2℃冰箱中貯存，貯存期不超過90d。原種應盡快使用，在溫度不宜超過20℃,清潔、通風、干燥（相對濕度50%-70%），避光的室內(nèi)，液體原種的存放時間不超過15d，固體原種不超過30d。栽培種應盡快使用，一般情況下，在溫度不超過20℃,清潔、通風、干燥（相對濕度50%~70%避光的室內(nèi)可貯存12個月；20~25℃、清潔、通風、干燥（相對濕度50%-70%避光的室內(nèi)可貯存45d。6質(zhì)量要求、檢驗方法6.1菌種質(zhì)量要求6.1.1.1生長速度在PDA培養(yǎng)基上，在22~28℃下，15~25d菌絲體長滿斜面。6.1.1.2感官質(zhì)量試管完好無損，試管塞干燥、潔凈、松緊適度，滿足透氣和濾菌要求。斜面長度為試管總長的1/3~1/2，頂端距試管塞40～50mm，菌落邊緣整齊，潔白、濃密、旺健、棉毛狀，均勻、舒展、平整、無角變，無分泌物，有具有長裙竹蓀菌種特有的清香味，無酸、臭、霉等異味。斜面培養(yǎng)基背面不干縮，DB5115/T72—20209顏色均勻、無暗斑、無色素。6.1.1.3顯微特征在400倍顯微鏡下可見菌絲粗壯、豐滿、均勻，有鎖狀聯(lián)合，無雜菌。6.1.2.1液體原種母種接種至裝有適宜液體培養(yǎng)基的500mL或1000mL三角瓶內(nèi)，25℃±2℃下，5~7d形成乳白色混濁的菌懸液。6.1.2.1.2感官質(zhì)量菌絲球均勻分散，有竹蓀菌種特有的清香味，無酸、臭、霉等異味。6.1.2.1.3理化指標菌絲球直徑在0.1~0.5mm之間，培養(yǎng)基中菌絲干重>1.5g/100mL。6.1.2.2固體原種6.1.2.2.1生長速度在采用適宜培養(yǎng)基，20~25℃培養(yǎng)條件下，80~100d長滿90%以上。6.1.2.2.2感官質(zhì)量容器完好無損，瓶塞干燥、潔凈、松緊適度，滿足透氣和濾菌要求。容器內(nèi)培養(yǎng)基緊貼瓶（袋）壁，無干縮，菌絲體潔白濃密、生長旺健，生長均勻，上表面距瓶口10~30mm，無角變，無高溫圈及頡頏現(xiàn)象，菌絲培養(yǎng)物無肉眼可見的子實體原基，表面無分泌物，允許有少量無色或淺黃色水珠，有長裙竹蓀菌種特有的清香味，無酸、臭、霉等異味。6.1.2.2.3顯微特征在400倍顯微鏡下可見菌絲粗壯、豐滿、均勻，有鎖狀聯(lián)合，無雜菌。6.1.3栽培種除以下例外，其余同6.1.2.2：菌絲出現(xiàn)脫壁但未見萎縮也可正常使用，但出現(xiàn)菌絲發(fā)黃、萎縮甚至自溶產(chǎn)生滲濾液等現(xiàn)象則不能繼續(xù)使用。6.2抽樣、留樣按批隨機抽取被檢樣品。母種、原種、栽培種的抽樣量分別為該批菌種量的10%、5%、1%，但每批抽樣數(shù)量不得少于10支（瓶/袋），超過100支（瓶/袋）抽樣量的，可進行兩級抽樣，第一次按0.1%抽樣，如全部合格則該批次整體合格，如不合格，按1%抽樣復檢，復檢時98%以上合格則該批次整體合格。各級菌種都應留樣備查，留樣的數(shù)量應每個批號3~5支（瓶、袋）在0~15℃下貯存，母種5個月，原種4個月，栽培種2個月，或該批菌種正常生產(chǎn)條件下出菇后方可處置。DB5115/T72—20206.3檢驗規(guī)則判定規(guī)則按質(zhì)量要求進行，檢驗項目全部符合質(zhì)量要求時，為合格菌種，其中任何一項不符合要求，均為不合格菌種。6.4檢驗方法6.4.1感官檢驗方法主要采用肉眼觀察，必要時借助必要時用5×放大鏡觀察或顯微鏡觀察。6.4.2理化檢驗方法菌絲干重：100℃烘干至恒重，稱重，精確到0.001g。6.4.3農(nóng)藝性狀和商品性狀檢驗方法主要檢驗母種的農(nóng)藝性狀和商品性狀。將被檢母種制成原種。采用附錄C規(guī)定的培養(yǎng)基配方，制作菌袋45個。接種后分3組（每組15袋）進行常規(guī)管理，根據(jù)表1所列項目，做好栽培記錄，統(tǒng)計檢驗結(jié)果。同時將該母種的出發(fā)菌株設(shè)為對照，做同樣處理。對比二者的檢驗結(jié)果，以時間計的檢驗項目中，被檢母種的任何一項時間較對照菌株推遲5天以上（含5天）者，為不合格，產(chǎn)量顯著低于對照菌株者，為不合格；菇體外觀形態(tài)與對照明顯不同或畸形者，為不合格。表1母種栽培中農(nóng)藝性狀和商品發(fā)送檢驗記錄檢驗項目檢驗結(jié)果檢驗項目檢驗結(jié)果母種長滿所需時間/天總產(chǎn)/kg原種長滿所需時間/天平均單產(chǎn)/kg長滿菌袋所需時間/天生物學效率/（%）出第一潮菇所需時間/天色澤、質(zhì)地第一潮菇產(chǎn)量/kg菇形第一潮菇生物學效率菌裙直徑、菌柄長短（100%）/mm6.4.4微生物學檢驗方法不定期抽檢或母種、原種、栽培種質(zhì)量異常情況下，需按下述方法進行微生物學檢驗。菌絲生長狀態(tài)和鎖狀聯(lián)合用：放大倍數(shù)不低于10×40的光學顯微鏡對培養(yǎng)物的水封片進行觀察，每一檢樣應觀察不少于20個視野。細菌檢驗：取少量疑有細菌污染的培養(yǎng)物，按無菌操作接種于GB/T4789.28中4.8規(guī)定的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液中，25~28℃振蕩培養(yǎng)1~2d，觀察培養(yǎng)液是否混濁。培養(yǎng)液混濁，為有細菌污染；培養(yǎng)液澄清，為無細菌污染。霉菌檢驗：取少量疑有霉菌污染的培養(yǎng)物，按無菌操作接種于PDA培養(yǎng)基（見附錄A）中，25~28℃培養(yǎng)3~4d，出現(xiàn)白色以外色澤的菌落或非竹蓀菌絲形態(tài)