動物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)上課最基礎(chǔ)得就是——動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞工程常用得技術(shù):動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞核移植動物細(xì)胞融合單克隆抗體等生活聯(lián)系:

燒傷病人得治療通常就是取燒傷病人得健康皮膚進(jìn)行自體移植,但對于大面積燒傷病人來講,健康皮膚很有限,請同學(xué)們想一想如何來治療該病人？一、動物細(xì)胞培養(yǎng)1、概念:從動物機(jī)體中取出相關(guān)組織,將她們分散成單個(gè)細(xì)胞,然后放在適宜得培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長和增殖。原理:細(xì)胞增殖如何進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)?

結(jié)合問題,閱讀書本,以小組為單位進(jìn)行討論,寫出動物細(xì)胞培養(yǎng)得流程圖。每組推選一位“小老師”,準(zhǔn)備上臺講解學(xué)習(xí)活動一:合作學(xué)習(xí)(結(jié)合問題思考流程)1、為何動物細(xì)胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞呢？2、如何將動物組織分散成單個(gè)得細(xì)胞？3、胰蛋白酶得作用就是什么？由此可說明細(xì)胞間得物質(zhì)主要就是什么成分？4、培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿得內(nèi)表面為何要光滑、無毒？5、培養(yǎng)瓶中得細(xì)胞培養(yǎng)到什么時(shí)候就不再分裂、增殖？動物機(jī)體組織單個(gè)細(xì)胞原代培養(yǎng)胰蛋白酶膠原蛋白酶稀釋分裝傳代培養(yǎng)培養(yǎng)過程:原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞生長可能會出現(xiàn)了哪些現(xiàn)象？貼壁生長接觸抑制什么措施有利于貼壁生長？培養(yǎng)器具表面光滑、無毒什么措施有利于改善接觸抑制？用酶稀釋,分裝培養(yǎng)培養(yǎng)過程:動物胚胎或幼齡動物得組織、器官細(xì)胞懸浮液胰蛋白酶或膠原蛋白貼滿瓶壁得細(xì)胞10代細(xì)胞原代培養(yǎng)50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)細(xì)胞株無限傳代細(xì)胞系單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變動物組織細(xì)胞間隙中含有一定量得彈性纖維等蛋白質(zhì),將細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性和韌性得組織和器官。(分解彈性纖維)動物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體用胰蛋白酶處理接觸抑制9大家應(yīng)該也有點(diǎn)累了，稍作休息大家有疑問的，可以詢問和交流細(xì)胞接觸抑制細(xì)胞在貼壁生長過程中,隨著細(xì)胞分裂,數(shù)量不斷增加,最后形成一個(gè)單層,此時(shí)細(xì)胞間相互接觸,細(xì)胞分裂和生長停止,數(shù)量不再增加。細(xì)胞貼壁:指培養(yǎng)過程中,細(xì)胞貼附在瓶壁上得現(xiàn)象。要求:培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿得內(nèi)表面光滑、無毒。一動物細(xì)胞培養(yǎng)原代培養(yǎng):從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)得細(xì)胞為原代細(xì)胞。一般培養(yǎng)得第1代細(xì)胞與第10代以內(nèi)得細(xì)胞稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。傳代培養(yǎng):將原代細(xì)胞(10代以后)從培養(yǎng)瓶中取出,配制成細(xì)胞懸浮液,分裝到兩個(gè)或兩個(gè)以上得培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),稱為傳代培養(yǎng)。有關(guān)概念:細(xì)胞株:原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長停滯,大部分細(xì)胞衰老死亡,少數(shù)細(xì)胞存活到40~50代,這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。

細(xì)胞系:細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長停滯狀態(tài),只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)得改變,使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代,這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。遺傳物質(zhì)改變具癌細(xì)胞特點(diǎn)遺傳物質(zhì)未改變1、選用組織時(shí),一般用動物胚胎或幼齡個(gè)體得器官或組織做培養(yǎng)材料,而不用老齡動物得,這就是為什么？因?yàn)橛g組織或器官上得細(xì)胞增殖能力強(qiáng),有絲分裂旺盛,容易培養(yǎng)。老齡動物得細(xì)胞則相反。學(xué)習(xí)活動二:尋根問底,加深鞏固2、胰蛋白酶處理組織時(shí)要注意什么問題？能夠用胃蛋白酶代替嗎？

控制好消化時(shí)間,太長會消化細(xì)胞膜上得蛋白質(zhì)不能,因?yàn)閮烧叩米钸mPH不同,而正常組織細(xì)胞得生存環(huán)境與胰蛋白酶得最適PH較接近、學(xué)習(xí)活動二:尋根問底,加深鞏固3、動物細(xì)胞培養(yǎng)能否最終培養(yǎng)成新個(gè)體？不能,動物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多,不能發(fā)育成新得動物個(gè)體學(xué)習(xí)活動二:尋根問底,加深鞏固4、人類一般保存得就是哪類細(xì)胞呢？為什么？用于植皮得細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)該不多于多少代？？保存10代以內(nèi)得細(xì)胞;因?yàn)?0－50部分細(xì)胞得細(xì)胞核型可能發(fā)生變化,有少部分還發(fā)生突變向癌細(xì)胞方向發(fā)展;10代學(xué)習(xí)活動二:尋根問底,加深鞏固多細(xì)胞動物和人體得細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中,根據(jù)您所學(xué)得知識,認(rèn)為體外培養(yǎng)動物細(xì)胞應(yīng)該模擬內(nèi)環(huán)境得哪些條件呢？問題探討:3、條件:1、無菌、無毒得環(huán)境

2、營養(yǎng)3、溫度和PH

4、氣體環(huán)境:補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏得物質(zhì)一動物細(xì)胞培養(yǎng)(添加一定量得抗生素,定期更換培養(yǎng)液)36、5+0、5度;PH為7、2-7、4。O2作用:進(jìn)行呼吸,提供能量CO2作用:維持培養(yǎng)液得PH值(95%空氣和5%CO2

)(葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、微量元素、動物血清、血漿等。)有氧動物細(xì)胞培養(yǎng)條件:1、無菌、無毒得環(huán)境(添加一定量得抗生素,定期更換培養(yǎng)液)2、營養(yǎng)(葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、動物血清等。)3、溫度和PH36、5+(-)0、5度,7、2-7、44、氣體環(huán)境:O2和CO2(95%空氣和5%CO2)O2作用:進(jìn)行有氧呼吸,提供能量CO2作用:維持培養(yǎng)液得PH值保證細(xì)胞順利得生長增殖防止污染獲得細(xì)胞細(xì)胞得全能性植物體培養(yǎng)結(jié)果或細(xì)胞產(chǎn)物快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目得葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目學(xué)習(xí)活動三比較植物細(xì)胞和動物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞群體①生物制品得生產(chǎn)②用于基因工程③用于檢測有毒物質(zhì)④細(xì)胞得生理、病理、藥理研究4、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)得應(yīng)用1、動物細(xì)胞工程常用得技術(shù)手段中,最基礎(chǔ)得就是A、動物細(xì)胞培養(yǎng)B、動物細(xì)胞融合C、單克隆抗體D、胚胎核移植

練一練~~~Let'stry!2、貼壁細(xì)胞得分裂方式具體就是A、無絲分裂B、有絲分裂C、減數(shù)分裂D、增殖3、關(guān)于動物細(xì)胞培養(yǎng)得敘述,不正確得就是

A、動物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散開來B、通常將動物組織消化后得初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)C、動物細(xì)胞培養(yǎng)只能傳50代左右,所培育得細(xì)胞全部衰老死亡D、用于培養(yǎng)得細(xì)胞大都取自胚胎或幼齡動物得器官或組織

練一練~~~Let'stry!2、自然界中有一種含有葉綠體得原生動物──眼蟲,說明植物得細(xì)胞器同樣可以在某些動物細(xì)胞中存活,請?zhí)接?動物細(xì)胞與植物細(xì)胞之間可以實(shí)現(xiàn)雜交嗎？如果理論上可行,請?jiān)O(shè)計(jì)出具體實(shí)驗(yàn)方案。動物胚胎或幼齡動物得組織、器官胰蛋白酶剪碎單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液原代培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞增殖部分細(xì)胞無限傳代去掉組織間蛋白動物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體傳代培養(yǎng)

根據(jù)動物細(xì)胞核仍具有全能性得特點(diǎn),怎樣將動物細(xì)胞得全能性表達(dá)?

再想一想利用動物體細(xì)胞核移植技術(shù)理論基礎(chǔ):動物得細(xì)胞核具有全能性二、動物體細(xì)胞核移植技術(shù)

1、概念:將動物得一個(gè)細(xì)胞得細(xì)胞核,移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核得卵母細(xì)胞中,使其重組并發(fā)育成一個(gè)新得胚胎,這個(gè)新得胚胎最終發(fā)育成動物個(gè)體。

用核移植得方法得到得動物稱克隆動物二、動物體細(xì)胞核移植技術(shù)2、核移植得種類胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植(易)(難)學(xué)習(xí)活動四:思考探究1997年,美國威斯康星州得一個(gè)奶牛場有一頭名叫盧辛達(dá)得奶牛,年產(chǎn)奶量為30、8t,創(chuàng)造了世界奶牛產(chǎn)奶量得最高記錄。目前世界各國高產(chǎn)牛奶場得奶牛,平均每年產(chǎn)量為十幾噸,而我國平均水平僅有3－4噸。

您能想辦法繁殖盧辛達(dá)得后代,使年產(chǎn)奶量為30、8t嗎？供體細(xì)胞培養(yǎng)(MⅡ卵母細(xì)胞)減數(shù)第二次分裂中期去核得卵母細(xì)胞供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞激活受體細(xì)胞,完成分裂、發(fā)育胚胎移植代孕牛子宮克隆牛3、過程:供體細(xì)胞(供核)細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞卵巢卵母細(xì)胞(MⅡ中期:供質(zhì))去核無核卵母細(xì)胞注入細(xì)胞融合重組細(xì)胞構(gòu)建重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳基礎(chǔ)相同得犢牛歸納:1、共分成兩大階段:核移植和胚胎移植2、取卵細(xì)胞作受體細(xì)胞得原因就是:她就是最大得細(xì)胞,易操作,她發(fā)育可直接表達(dá)性狀3、嚴(yán)格來說新個(gè)體有卵巢母細(xì)胞得細(xì)胞質(zhì)所以有兩個(gè)親本得性狀核移植過程受體細(xì)胞為減數(shù)分裂第二次分裂中期(MⅡ)得卵母細(xì)胞。重組細(xì)胞需通過物理或化學(xué)方法激活,從而完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程。體細(xì)胞核移植得技術(shù)操作過程主要包括核供體細(xì)胞和核受體細(xì)胞得處理和制備、核移植、構(gòu)建重組胚胎、胚胎移植等步驟。卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊得培育過程融合后的卵細(xì)胞①加速家畜遺傳改良進(jìn)程,促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育②保護(hù)瀕危物種,增加存活數(shù)量③克隆動物作為生物反應(yīng)器,生產(chǎn)醫(yī)用蛋白④可以作為異種移植得供體4、應(yīng)用前景:⑤可以用于組織器官得移植5、存在問題:①成功率低②克隆動物存在健康問題③克隆動物食品得安全性問題存有爭議從母羊甲得體細(xì)胞中取出細(xì)胞核,注入到母羊乙得去核卵母細(xì)胞中,融合后得細(xì)胞經(jīng)卵裂形成早期胚胎,再將胚胎移到另一只母羊丙得子宮內(nèi),出生得小羊大多數(shù)性狀

A、難以預(yù)測 B、像甲C、像乙D、像丙

練一練~~~Let'stry!2、下列有關(guān)克隆得敘述,不正確得就是

A、生物體通過體細(xì)胞進(jìn)行得無性繁殖B、將某種瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)繁殖成大量細(xì)胞C、扦插和嫁接實(shí)質(zhì)上也就是克隆

D、將雞得某個(gè)DNA片段整合到小鼠得DNA中練一練~~~Let'stry!問題1、植物組織培養(yǎng)過程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞得嗎？２、動物細(xì)胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞得嗎？３、為何動物細(xì)胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞得呢？４、如何將動物組織分散成單個(gè)得細(xì)胞呢？５、胰蛋白酶得作用就是什么呢？由此可說明細(xì)胞間得物質(zhì)就是什么成份？沒有就是成塊得組織細(xì)胞靠在一起,彼此限制了細(xì)胞得生長和增殖先用剪刀剪碎,后用蛋白酶處理胰蛋白酶水解蛋白質(zhì)細(xì)胞間得成份就是蛋白質(zhì)