目錄TOC\o"1-4"\h\u1引言 51.1復(fù)方磺胺甲噁唑片及重要組分的介紹 51.1.1復(fù)方磺胺甲噁唑片的介紹 51.1.2磺胺甲噁唑的介紹 51.1.3甲氧芐啶的介紹 61.2復(fù)方磺胺甲噁唑片的功能及用法用量 61.2.1復(fù)方磺胺甲噁唑片的功能 61.2.2復(fù)方磺胺甲噁唑片的用法用量[5] 7成人用法用量 7未成年人用法用量 7其他癥狀用量 71.3磺胺類藥物未來(lái)發(fā)展 71.4項(xiàng)目研究及內(nèi)容 82材料和方法 82.1實(shí)驗(yàn)儀器與材料 82.1.1實(shí)驗(yàn)儀器 82.1.2實(shí)驗(yàn)材料 92.2實(shí)驗(yàn)方法研究及選擇 92.2.1檢驗(yàn)方法分類及特點(diǎn) 9HPLC法 9雙波長(zhǎng)薄層掃描法 9高效毛細(xì)管電泳法 10一階導(dǎo)數(shù)光譜法 10紫外分光光度法 102.2.2試驗(yàn)方法的選擇 11紫外分光光度法的介紹 11實(shí)驗(yàn)原理 112.3實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì) 122.3.1溶液配制 12配制稀釋介質(zhì)溶液 12配制標(biāo)準(zhǔn)溶液 12配制樣品溶液 122.3.2最佳測(cè)定波長(zhǎng)的選擇[18] 12SMZ測(cè)定波長(zhǎng)的確定 12TMP測(cè)定波長(zhǎng)的確定 122.3.3繪制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液光譜曲線 12繪制SMZ標(biāo)準(zhǔn)系列溶液光譜曲線 13繪制TMP標(biāo)準(zhǔn)系列溶液光譜曲線 132.3.4樣品組分含量測(cè)定 13樣品中SMZ組分含量的測(cè)定 13樣品中TMP組分含量的測(cè)定 132.4實(shí)驗(yàn)條件選擇 132.4.1溶液介質(zhì)的選擇 132.4.2稀釋介質(zhì)溶液濃度的選擇 13SMZ稀釋介質(zhì)溶液濃度的選擇 13TMP稀釋介質(zhì)溶液濃度的選擇 132.4.3雙組分標(biāo)液含量濃度比例的選擇 142.4.4標(biāo)線組分溶液濃度[19]的選擇 142.4.5溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 142.4.6測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 142.5實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化 142.5.1溶液介質(zhì)的選擇 142.5.2稀釋介質(zhì)溶液濃度的選擇 14SMZ稀釋介質(zhì)溶液濃度的選擇 14TMP稀釋介質(zhì)溶液濃度的選擇 152.5.3雙組分標(biāo)液含量濃度比例的選擇 162.5.4標(biāo)線組分溶液濃度的選擇 162.5.5溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 172.5.6測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 173實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 173.1溶液配制 173.1.1配制稀釋介質(zhì)溶液 173.1.2配制標(biāo)準(zhǔn)工作溶液 173.1.3配制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 173.1.4配制樣品溶液 183.2最佳測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 183.2.1SMZ測(cè)定波長(zhǎng)的確定 183.2.2TMP測(cè)定波長(zhǎng)的確定 193.3繪制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液光譜曲線 203.3.1繪制SMZ標(biāo)準(zhǔn)系列溶液光譜曲線 203.3.2繪制TMP標(biāo)準(zhǔn)系列溶液光譜曲線 203.4樣品組分含量測(cè)定 213.5數(shù)據(jù)處理 213.5.1標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度計(jì)算 213.5.2標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度計(jì)算 213.5.3樣品濃度計(jì)算 224結(jié)論 234.1復(fù)方磺胺甲噁唑片的藥物組分含量分析 234.1.1SMZ組分分析 234.1.2TMP組分分析 234.2最佳實(shí)驗(yàn)條件確定 234.3最佳實(shí)驗(yàn)步驟確定 24致謝 24參考文獻(xiàn) 25復(fù)方磺胺甲噁唑片雙組分含量檢測(cè)的設(shè)計(jì)摘要：復(fù)方磺胺甲噁唑片是人們最經(jīng)常用的抗菌藥物，主要是由甲氧芐啶（TMP）以及磺胺甲噁唑（SMZ）組分。次藥物的含量測(cè)定方法不多，本文的主要內(nèi)容為尋找比較簡(jiǎn)單、方便的檢測(cè)方法，以及尋找最優(yōu)化的檢驗(yàn)路線。本法采用雙波長(zhǎng)紫外分光光度法對(duì)藥物的兩個(gè)主要成分進(jìn)行檢測(cè)分析，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)選擇了六個(gè)直接影響的因素：配制溶液介質(zhì)、配制介質(zhì)濃度、雙組份標(biāo)液濃度比例、標(biāo)液濃度的選擇、測(cè)定波長(zhǎng)選擇、溶液穩(wěn)定性。后進(jìn)行正交試驗(yàn)，選取了適合實(shí)驗(yàn)的最佳條件，結(jié)果如下：1.用乙醇來(lái)配制稀釋濃度比例為3:2的0.09g/LSMZ和0.06g/LTMP標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；2.用0.4%氫氧化鈉來(lái)做為SMZ標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的稀釋溶液介質(zhì)；用（0.625mL濃鹽酸+KCl6.9g）/L來(lái)作為TMP標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的稀釋溶液介質(zhì)。3.溶液穩(wěn)定性良好，最佳吸收波長(zhǎng)選擇根據(jù)當(dāng)天配制的溶液來(lái)確定比較合適。關(guān)鍵詞：磺胺甲噁唑，甲氧芐啶，雙波長(zhǎng)，多組分測(cè)定Designoftwo-componentcontentdetectionofcompoundsulfamethoxazoletabletsAbstract:Compoundsulfamethoxazoletabletisourcommonlyuseddrug,mainlycomposedofsulfamethoxazole(SMZ),trimethoprim(TMP)components.Therearenotmanymethodstodeterminethecontentofcompoundsulfamethoxazoletablets,andthemaincontentofthispaperistofindarelativelysimpleandconvenienttestmethods,andtofindtheoptimaltestroute.Thetwo-wavelengthultravioletspectrophotometryisusedtodetectandanalyzethetwomaincomponentsofthedrug,andsixfactorsaredirectlyselectedthroughone-factorexperiment:preparationsolutionmedium,preparationmediumconcentration,concentrationratiooftwo-componentstandardsolution,selectionofstandardsolutionconcentration,determinationwavelengthselectionandsolutionstability.Thentheorthogonaltestwasperformedtoselectthebestconditionssuitablefortheexperiment.Theresultsareasfollows:Standardworkingsolutionof0.09g/LSMZand0.06g/LTMP;2.Use0.4%sodiumhydroxideasdilutionsolutionmediumofSMZstandardseriessolution;use(0.625mLconcentratedhydrochloricacid+KCl6.9g)/LasdilutionsolutionmediumofTMPstandardseriessolution.3.Thesolutionstabilityisgood,andthebestabsorptionwavelengthisdeterminedaccordingtothechoiceofthesolutionpreparedonthesameday.Keywords:sulfamethoxazole,trimethoprim,double-wavelength,multicomponentdetermination；1引言1.1復(fù)方磺胺甲噁唑片及重要組分的介紹1.1.1復(fù)方磺胺甲噁唑片的介紹復(fù)方磺胺甲噁唑片[1],磺胺類抗菌藥，是磺胺甲噁唑(SMZ)與甲氧芐啶(TMP)[2]的復(fù)方制劑，具有良好抗菌作用。比較磺胺甲噁唑單藥特別是對(duì)大腸埃希菌、流感嗜血桿菌以及金黃色葡萄球菌的抗菌效果明顯增強(qiáng)，也具有較好的抗微生物活性。藥品作用原理為:SMZ作用于干擾葉酸的第一步合成，TMP作用于代謝第二步合成出的葉酸。隨機(jī)抑制二氫葉酸還原酶的使用，二者一起用可以一起阻斷細(xì)菌的葉酸代謝。本藥品的協(xié)同抗菌作用與單藥相比有所增強(qiáng)，耐藥性細(xì)菌株有所減少。然而近年來(lái)細(xì)菌對(duì)本品的耐藥性亦呈增高趨勢(shì)[3]。1.1.2磺胺甲噁唑的介紹磺胺甲噁唑，簡(jiǎn)稱SMZ，化學(xué)式為C10H11N3O3S，分子量為253.278，分子結(jié)構(gòu)式如圖1-1所示。\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"有機(jī)化合物，為白色\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"結(jié)晶性粉末。本品在H2O中幾乎不溶；在NaOH\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"試液、稀HCI或NH3試液中\(zhòng)t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"易溶。SMZ臨床上作為\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"抗菌劑使用，\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"抗菌譜廣、作用強(qiáng)，對(duì)\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"葡萄球菌、\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"大腸桿菌特別有效[4]。主要用于治療\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"禽霍亂\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"抗感染藥，用于\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"尿路感染、腸道感染、小兒急性中耳炎等。圖1-1磺胺甲噁唑分子結(jié)構(gòu)式1.1.3甲氧芐啶的介紹甲氧芐啶（Trimethoprim），簡(jiǎn)稱TMP，分子量為290.318，是一種有機(jī)化合物，化學(xué)式為C14H18N4O3，分子結(jié)構(gòu)式如圖1-2所示，它為淡黃或白色結(jié)晶性粉末，在CH3COOH、HCI-KCI混合溶液中易溶、在三氯甲烷中略溶、在CH3CH2OH或C3H6O中微溶、在H2O中幾乎不溶。甲氧芐啶為合成的廣譜抗菌劑，單獨(dú)用于呼吸道、泌尿道、腸道等感染病癥，可用于治療敏感菌所致的腦膜炎、傷寒、志賀菌?。ň。┑萚2]。圖1-2甲氧芐啶分子結(jié)構(gòu)式1.2復(fù)方磺胺甲噁唑片的功能及用法用量1.2.1復(fù)方磺胺甲噁唑片的功能復(fù)方磺胺甲噁唑片主要用于治療腸炎，心內(nèi)膜炎，急性支氣管炎，淋病，骨髓炎，敗血癥等疾病。1.2.2復(fù)方磺胺甲噁唑片的用法用量[5]成人用法用量成年人常用量：醫(yī)治細(xì)菌性感染每次TMP0.16g和SMZ0.8g，一天早晚各一次。醫(yī)治卡氏肺孢子蟲肺炎每次SMZ3.75～5mg/kg，磺胺甲唑18.75～25mg/kg，一天四次。成年人預(yù)防疾病用藥：第一次吃每次TMP0.16g和SMZ0.8g，一天早晚各一次，后面用一樣的劑量一天吃一次。未成年人用法用量2月以下嬰兒禁止用藥。醫(yī)治細(xì)菌感染，2個(gè)月以上體重在40kg以下的嬰幼兒根據(jù)體重口服，每次TMP4～6mg/kg以及SMZ20～30mg/kg及，一天早晚各一次;體重在40kg及以上的小孩用藥劑量同成年人相同。其他癥狀用量醫(yī)治慢性支氣管炎急性發(fā)作的需要最少10天～兩周;醫(yī)治兒童急性中耳炎需要最少10天;醫(yī)治卡氏肺孢子蟲肺炎的需要兩周～21日三周，或一周服3次。不良反應(yīng)及禁忌復(fù)方磺胺甲噁唑片所致的嚴(yán)重不良反應(yīng)較少見(jiàn)，但常累及各器官并可致命，如剝脫性皮炎、暴發(fā)性肝壞死、再生障礙性貧血等\t"/item/%E5%A4%8D%E6%96%B9%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91%E7%89%87/_blank"血液系統(tǒng)異常[6]。艾滋病患者的上述不良反應(yīng)較非艾滋病患者為多見(jiàn)。對(duì)SMZ和TMP其中有藥物過(guò)敏史的不能用；\t"/item/%E5%A4%8D%E6%96%B9%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91%E7%89%87/_blank"孕婦及哺乳期婦女禁用該品[7]。1.3磺胺類藥物未來(lái)發(fā)展磺胺類藥物[3]臨床應(yīng)用已有幾十年的歷史，磺胺類藥物是人工合成的化學(xué)類藥品。它具有抗菌廣譜、性質(zhì)穩(wěn)定、價(jià)格便宜、使用方便、吸收較迅速等優(yōu)點(diǎn)。所以是現(xiàn)在抗生素略遜色的一大類藥物，特別是更優(yōu)良的新型磺胺和抗菌增效劑合成以后，使磺胺類藥物有了更加廣闊的前途。1.4項(xiàng)目研究及內(nèi)容復(fù)方磺胺甲噁唑片的含量測(cè)定方法比較少。本文的主要內(nèi)容為尋找比較簡(jiǎn)單、方便的檢測(cè)方法，尋找最優(yōu)化的檢驗(yàn)路線。本法采用雙波長(zhǎng)紫外分光光度法對(duì)藥物的兩個(gè)主要成分進(jìn)行檢測(cè)分析，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)選擇了六個(gè)直接影響的因素：配制溶液介質(zhì)、配制介質(zhì)濃度、雙組份標(biāo)液濃度比例、標(biāo)液濃度的選擇、測(cè)定波長(zhǎng)選擇、溶液穩(wěn)定性。后進(jìn)行正交試驗(yàn)[8]，選取了適合實(shí)驗(yàn)的最佳條件。2材料和方法2.1實(shí)驗(yàn)儀器與材料2.1.1實(shí)驗(yàn)儀器表2-1實(shí)驗(yàn)儀器表序號(hào)儀器名稱規(guī)格數(shù)量1分析天平ES224DS-BA-RSB1臺(tái)2分析天平ES602DS-02S-RSB1臺(tái)3紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)M600-DS1臺(tái)4封閉電爐可調(diào)控溫1臺(tái)5超聲波清洗器1臺(tái)7單標(biāo)線吸量管各種規(guī)格若干9容量瓶各種規(guī)格若干10吸收池1cm1套13無(wú)色試劑瓶125、250、5004、1、2個(gè)14無(wú)色小口試劑瓶2500mL2個(gè)15棕色試劑瓶500mL4個(gè)16燒杯100、500mL28、16個(gè)17量筒100mL4個(gè)18稱量瓶25*403個(gè)19玻璃棒5mm*20cm、8mm*30cm24、2根20稱量紙10*10cm1盒21洗瓶500mL2個(gè)22洗耳球60mL1個(gè)23藥匙18個(gè)24一次性滴管3mL若干25移液管架1個(gè)26滴定管架1套27擦鏡紙若干28個(gè)人安全防護(hù)用品1套29白色塑料筐50×38×14、37×29×11cm各1個(gè)30濾紙定性、定量3.0×7.0cm各1盒31實(shí)驗(yàn)室用抹布30×30cm兩塊32實(shí)驗(yàn)室用毛刷中號(hào)1個(gè)33洗滌劑250mL1瓶34帶把塑料刻度計(jì)量燒杯1000、500mL各1個(gè)2.1.2實(shí)驗(yàn)材料表2-2實(shí)驗(yàn)材料表序號(hào)藥品、試劑名稱規(guī)格1磺胺甲噁唑（SMZ）GR2甲氧芐啶（TMP）GR3碘化鉀AR4無(wú)水乙醇AR5鹽酸AR6氫氧化鈉AR7氯化鉀AR8去離子水或蒸餾水4.5L復(fù)方磺胺甲惡唑片（國(guó)藥準(zhǔn)字H44023640）特一藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司產(chǎn)2.2實(shí)驗(yàn)方法研究及選擇2.2.1檢驗(yàn)方法分類及特點(diǎn)復(fù)方磺胺甲噁唑片含量的測(cè)定方法[9]有：HPLC法[10]、雙波長(zhǎng)薄層掃描法[11]、高效毛細(xì)管電泳法[12]、一階導(dǎo)數(shù)光譜法[13]、雙波長(zhǎng)光分光光度法[14]。HPLC法優(yōu)點(diǎn)為檢測(cè)速度快、高效率、準(zhǔn)確性好，在識(shí)別和量化化學(xué)成分方面用途廣泛。缺點(diǎn)為有局限性、成本高，而且分析過(guò)程較為復(fù)雜。HPLC對(duì)某些化合物的靈敏度較低，有些化合物由于不可逆吸附而無(wú)法檢測(cè)到。雙波長(zhǎng)薄層掃描法優(yōu)點(diǎn)為操作方便、檢測(cè)速度快、設(shè)備簡(jiǎn)單、顯色容易等特點(diǎn)；混合物易分離，可以使用有強(qiáng)腐蝕性的顯色劑。缺點(diǎn)是對(duì)分離生物高分子效果不好。高效毛細(xì)管電泳法優(yōu)點(diǎn)是高效塔板數(shù)目在105-106片/m間，當(dāng)采用CGE時(shí)毛細(xì)管電泳色譜圖，踏板數(shù)可達(dá)107片/m以上；可以進(jìn)行nL級(jí)微量進(jìn)樣，并可多模式使用，比較經(jīng)濟(jì)。缺點(diǎn)為制備能力差；靈敏度比較低。一階導(dǎo)數(shù)光譜法優(yōu)點(diǎn)是方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確。缺點(diǎn)是對(duì)復(fù)雜組分可不經(jīng)分離而直接測(cè)定。紫外分光光度法優(yōu)點(diǎn)是靈敏度較高，一般為10-7次方到10-4次方g/mL；準(zhǔn)確度較好，相對(duì)誤差一般在0.5%；儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便，分析速度較快；缺點(diǎn)是在實(shí)際儀器中，波長(zhǎng)選擇器并不完美，來(lái)自寬波長(zhǎng)范圍的少量光仍可能從光源傳輸，這可能會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的測(cè)量錯(cuò)誤。雜散光也可能來(lái)自環(huán)境或儀器中安裝松散的隔間；光散射通常是由液體樣品中的懸浮固體引起的，這可能會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的測(cè)量誤差。比色皿或樣品中存在的氣泡會(huì)散射光，導(dǎo)致無(wú)法重現(xiàn)的結(jié)果；儀器組件如果有沒(méi)有對(duì)準(zhǔn)位置的，特別是測(cè)定樣品的比色皿，會(huì)影響測(cè)樣。所以比色皿擺放位置要盡可能一樣，所以一般建議進(jìn)行一些基本的操作培訓(xùn)，以避免誤差。2.2.2試驗(yàn)方法的選擇檢驗(yàn)復(fù)方磺胺甲噁唑片中雙組分含量選用雙組分紫外-分光光度法來(lái)測(cè)定。雙組分紫外-分光光度法對(duì)比其他幾種方法，操作更加簡(jiǎn)單，儀器更加常見(jiàn)，成本更低。紫外分光光度法的介紹紫外-可見(jiàn)分光光度法[15]是在190～800nm\t"/item/%E7%B4%AB%E5%A4%96-%E5%8F%AF%E8%A7%81%E5%88%86%E5%85%89%E5%85%89%E5%BA%A6%E6%B3%95/_blank"波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定物質(zhì)的\t"/item/%E7%B4%AB%E5%A4%96-%E5%8F%AF%E8%A7%81%E5%88%86%E5%85%89%E5%85%89%E5%BA%A6%E6%B3%95/_blank"吸光度，用于鑒別、雜質(zhì)檢查和多組分定量測(cè)定[16]的方法。利用溶液里的待測(cè)物質(zhì)在一定測(cè)定波長(zhǎng)下發(fā)生對(duì)光的特定吸收效應(yīng)，符合Lambert-Beer定律，被測(cè)吸光度與被測(cè)溶液濃度成正比，進(jìn)行比較或采用吸收\(chéng)t"/item/%E7%B4%AB%E5%A4%96-%E5%8F%AF%E8%A7%81%E5%88%86%E5%85%89%E5%85%89%E5%BA%A6%E6%B3%95/_blank"系數(shù)法求算出被測(cè)樣品溶液的濃度。實(shí)驗(yàn)原理分光光度雙波長(zhǎng)法測(cè)定雙組分[17]。一般選擇待測(cè)組分的較大吸收波長(zhǎng)為測(cè)量波長(zhǎng)，用作圖法找到干擾組分等吸點(diǎn)波長(zhǎng)作為參比波長(zhǎng)，在待測(cè)組分的測(cè)量波長(zhǎng)和參比波長(zhǎng)處測(cè)定，得到吸光度差值?A，以?A與被測(cè)組分濃度建立工作曲線，分析待測(cè)組分含量。2.3實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)2.3.1溶液配制配制稀釋介質(zhì)溶液查找資料，尋找能溶解SMZ以及TMP的試劑，配制合適濃度的稀釋介質(zhì)溶液。配制標(biāo)準(zhǔn)溶液按藥物比例進(jìn)行配制標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，準(zhǔn)確稱取適量的磺胺甲惡唑和甲氧芐啶分別用合適的溶劑配制成貯備液。分別移取適量的上述標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，再分別加合適的稀釋介質(zhì)溶液稀釋至合適的濃度，單取適量的乙醇，按照同樣的步驟配制空白溶液。配制樣品溶液稱取適量的樣品配制成待測(cè)液，分別移取適量的待測(cè)液，分別加合適的稀釋介質(zhì)溶液稀釋至適量濃度。2.3.2最佳測(cè)定波長(zhǎng)的選擇[18]SMZ測(cè)定波長(zhǎng)的確定按照分光光度法，在適合的波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，得到光譜圖，從圖里選SMZ的較大波長(zhǎng)為測(cè)定點(diǎn)設(shè)為λSMZ1，過(guò)λSMZ1作垂直于波長(zhǎng)軸的直線，直線交TMP的吸收光譜上的某一點(diǎn)，在過(guò)這個(gè)交點(diǎn)作波長(zhǎng)軸的并行線，并行線在TMP的吸收光譜上得到一個(gè)交點(diǎn)，則該交點(diǎn)對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)設(shè)為參比波長(zhǎng)λSMZ2,用△A=AλSMZ2-AλSMZ1做吸光線性，從而測(cè)定算出SMZ的含量。TMP測(cè)定波長(zhǎng)的確定按照分光光度法，在適合的波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，移取適量的TMP標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，分別加另一種稀釋介質(zhì)溶液稀釋至適量濃度。在適合的波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，得紫外光譜圖，從圖里選TMP的較大吸收峰波長(zhǎng)為測(cè)定點(diǎn)λTMP2，過(guò)λTMP2作垂直于波長(zhǎng)軸的直線，直線交SMZ的吸收光譜上的某一點(diǎn)，在過(guò)這個(gè)交點(diǎn)作波長(zhǎng)軸的并行線，并行線在SMZ的吸收光譜上得到一個(gè)交點(diǎn)，則該交點(diǎn)對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)設(shè)為參比波長(zhǎng)λTMP1,在這兩個(gè)波長(zhǎng)處，待測(cè)組分TMP的吸光度差值ΔATMP足夠大,用△A=AλTMP1-AλTMP2做吸光線性，從而測(cè)定算出TMP的含量。2.3.3繪制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液光譜曲線繪制SMZ標(biāo)準(zhǔn)系列溶液光譜曲線磺胺甲噁唑：準(zhǔn)確移取適量的磺胺甲噁唑標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用稀釋介質(zhì)溶液分別稀釋成適量濃度的溶液，分別在λsmz1和λsmz2波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，求出ΔSMZAA=λSMZ2-AλSMZ1，計(jì)算線性回歸方程。繪制TMP標(biāo)準(zhǔn)系列溶液光譜曲線甲氧芐啶：準(zhǔn)確移取適量的甲氧芐啶標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用稀釋介質(zhì)溶液分別稀釋成適量濃度的溶液，分別在λTMP1和λTMP2波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，求出ΔTMPA=AλTMP1-AλTMP2，計(jì)算線性回歸方程。2.3.4樣品組分含量測(cè)定樣品中SMZ組分含量的測(cè)定SMZ的測(cè)定：在SMZ的測(cè)定波長(zhǎng)和參比波長(zhǎng)下測(cè)定樣品溶液的吸光度，用樣品的△SMZ代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的ΔSMZAA=λSMZ2-AλSMZ1回歸方程，計(jì)算出樣品中SMZ的含量結(jié)果。樣品中TMP組分含量的測(cè)定TMP的測(cè)定：在TMP的測(cè)定波長(zhǎng)下測(cè)定樣品溶液的吸光度，用樣品的△TMP代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的ΔTMPA=AλTMP1-AλTMP2回歸方程，計(jì)算出樣品中TMP的含量結(jié)果。2.4實(shí)驗(yàn)條件選擇2.4.1溶液介質(zhì)的選擇磺胺甲噁唑：由于幾乎不溶于水，易溶于丙酮，溶于稀氫氧化鈉溶液和稀酸。微溶于乙醇（96%）。所以溶解磺胺甲噁唑在丙酮、氫氧化鈉、稀酸以及乙醇中選擇。甲氧芐胺嘧啶：在CH3COOH、HCI-KCI混合溶液中易溶、在三氯甲烷中略溶、在CH3CH2OH或C3H6O中微溶、在H2O中幾乎不溶。因此，溶解甲氧芐胺在CH3COOH、HCI-KCI混合溶液、CH3CH2OH以及C3H6O中選擇。2.4.2稀釋介質(zhì)溶液濃度的選擇SMZ稀釋介質(zhì)溶液濃度的選擇分別配制0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%的氫氧化鈉溶液，分別用來(lái)稀釋相同濃度的SMZ溶液，測(cè)定溶液的吸光度進(jìn)行對(duì)比。TMP稀釋介質(zhì)溶液濃度的選擇分別配制?。?.25mL濃鹽酸+KCl6.9g）/L混合溶液、（0.375mL濃鹽酸+KCl6.9g）/L混合溶液、（0.5mL濃鹽酸+KCl6.9g）/L混合溶液、（0.625mL濃鹽酸+KCl6.9g）/L混合溶液、（0.75mL濃鹽酸+KCl6.9g）/L混合溶液、（0.875mL濃鹽酸+KCl6.9g）/L混合溶液、（1.00mL濃鹽酸+KCl6.9g）/L混和溶液，用來(lái)稀釋相同濃度TMP溶液，測(cè)定溶液的吸光度進(jìn)行對(duì)比。2.4.3雙組分標(biāo)液含量濃度比例的選擇分別配制5:1、4:1、3:2、3:1、2:1、1:1SMZ和TMP的比例的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，準(zhǔn)確移取1.00至10.00mL加適合的稀釋溶液稀釋至50.00mL配制成系列溶液，在適合的測(cè)定波長(zhǎng)下測(cè)定出標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.4.4標(biāo)線組分溶液濃度的選擇分別配制SMZ以及TMP：0.3g/L、0.25g/L、0.2g/L、0.15g/L、0.1g/L、0.05g/L、0.01g/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，準(zhǔn)確移取5mL加適合的稀釋溶液稀釋至50.00mL。在紫外分光光度計(jì)光譜掃描中描吸收光譜[19]。2.4.5溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)對(duì)照品與樣品的稀釋液放置0.5、1.0、1.5、2.0、4.0、6.0小時(shí)后分別測(cè)定，所有測(cè)定結(jié)果進(jìn)行對(duì)照比對(duì)。2.4.6測(cè)定波長(zhǎng)的選擇配制適量濃度的SMZ和TMP標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行掃描吸收光譜，尋找合適的測(cè)定吸收波長(zhǎng)以及參比波長(zhǎng)。2.5實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化2.5.1溶液介質(zhì)的選擇因?yàn)橐掖肌⒑拖∷崮苋芙釹MZ和TMP，但是用稀酸來(lái)做SMZ的稀釋介質(zhì)溶液做出來(lái)的吸光度比較低，所以用乙醇來(lái)配制稀釋SMZ和TMP標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。用氫氧化鈉來(lái)作為SMZ標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的稀釋溶液介質(zhì)。用鹽酸-氯化鉀來(lái)作為TMP標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的稀釋溶液介質(zhì)。2.5.2稀釋介質(zhì)溶液濃度的選擇SMZ稀釋介質(zhì)溶液濃度的選擇按實(shí)驗(yàn)步驟操作，實(shí)驗(yàn)證明選用0.4%的氫氧化鈉溶液作為SMZ標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的稀釋溶液介質(zhì)。氫氧化鈉溶液濃度百分比與吸光度關(guān)系見(jiàn)表2-3、圖2-1。表2-3氫氧化鈉溶液濃度與吸光度的關(guān)系溶液濃度（%）0.7吸光度A0.3900.3950.3980.4000.4000.4000.401圖2-1氫氧化鈉溶液濃度與吸光度的關(guān)系TMP稀釋介質(zhì)溶液濃度的選擇按實(shí)驗(yàn)步驟操作，實(shí)驗(yàn)證明選用用（0.625mL濃鹽酸+KCl6.9g）/L來(lái)作為TMP標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的稀釋溶液介質(zhì)最為合適。濃鹽酸+KCI混合溶液與吸光度關(guān)系見(jiàn)表2-4、圖2-2。表2-4濃鹽酸+KCI混合溶液溶液濃度與吸光度的關(guān)系溶液濃度（%）0250mL濃鹽酸+KCl6.90.375mL濃鹽酸+KCl6.90.5mL濃鹽酸+KCl6.90.625mL濃鹽酸+KCl6.90.750mL濃鹽酸+KCl6.90.875mL濃鹽酸+KCl6.91.00mL濃鹽酸+KCl6.9吸光度A0.1350.1400.1440.1470.1470.1470.148圖2-2濃鹽酸+KCI混合溶液溶液濃度與吸光度的關(guān)系2.5.3雙組分標(biāo)液含量濃度比例的選擇按2.4.3實(shí)驗(yàn)步驟操作，實(shí)驗(yàn)證明選用3:2SMZ和TMP濃度比例的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液做出來(lái)的吸收光譜圖比例比較合適。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)圖2-3所示。圖2-3標(biāo)液濃度比例圖2.5.4標(biāo)線組分溶液濃度的選擇按2.4.4實(shí)驗(yàn)步驟操作，因?yàn)樽贤夥止夤舛确?biāo)準(zhǔn)曲線吸光度最大一般不超過(guò)1，實(shí)驗(yàn)證明選用0.09g/LSMZ標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和0.06g/LTMP標(biāo)準(zhǔn)工作溶液比較合適。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表2-5、表2-6所示。SMZ:標(biāo)線組分溶液濃度的選擇表2-5SMZ不同濃度的吸光度濃度g/L50.01吸光度A2.9562.7562.3051.5080.9200.4550.091TMP:標(biāo)線組分溶液濃度的選擇表2-6TMP不同濃度的吸光度濃度g/L50.01吸光度A5.6884.5603.5692.5471.6500.8200.4122.5.5溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)按2.4.5實(shí)驗(yàn)步驟操作，對(duì)照品與樣品的稀釋液放置0.5、1.0、1.5、2.0、4.0、6.0小時(shí)后分別進(jìn)行吸光度測(cè)定，實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果顯示吸光度變化不大。實(shí)驗(yàn)證明該溶液在2.0小時(shí)內(nèi)吸光度比較穩(wěn)定。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表2-6所示。表2-6溶液不同實(shí)驗(yàn)的吸光度穩(wěn)定時(shí)間（h）0.51.01.52.04.06.0吸光度（A）0.1500.1500.1510.1520.1550.1602.5.6測(cè)定波長(zhǎng)的選擇按2.4.5和2.4.6實(shí)驗(yàn)步驟操作，實(shí)驗(yàn)證明由于儀器和溶液等待時(shí)間問(wèn)題最佳吸收波長(zhǎng)選擇根據(jù)當(dāng)天配制不超過(guò)4小時(shí)溶液來(lái)確定比較合適。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析3.1溶液配制3.1.1配制稀釋介質(zhì)溶液稱取8.0gNaOH溶解稀釋至2L。移取1.25mL濃HCI+和13.8gKCl溶解稀釋至2L。3.1.2配制標(biāo)準(zhǔn)工作溶液SMZ標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：稱取0.0225gSMZ加適量的乙醇溶解，（如果不好溶解可以用微波消解儀進(jìn)行輔助溶解）,完全溶解后轉(zhuǎn)移至250.00mL容量瓶中，加乙醇稀釋定容。TMP標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：稱取0.0150gTMP加適量的乙醇溶解，（如果不好溶解可以用微波消解儀進(jìn)行輔助溶解）,完全溶解轉(zhuǎn)移至250.00mL容量瓶中，加乙醇稀釋定容。3.1.3配制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液SMZ：分別移取1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mLSMZ標(biāo)準(zhǔn)工作溶液于6個(gè)50.00mL容量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液稀釋定容。移取體積及對(duì)應(yīng)濃度見(jiàn)表3-1。表3-1SMZ標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制移取體積/mL0.001.002.003.004.005.006.00SMZ濃度/(mg/L)0.0001.8003.6005.4007.2009.00010.80TMP：分別移取1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mLSMZ標(biāo)準(zhǔn)工作溶液于6個(gè)50.00mL容量瓶中，加濃HCI和KCl混合溶液稀釋定容。移取體積及對(duì)應(yīng)濃度見(jiàn)表3-2。表3-2TMP標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制移取體積/mL0.001.002.003.004.005.006.00TMP濃度/(mg/L)0.0001.2402.4803.7204.9606.2007.4403.1.4配制樣品溶液稱取1片復(fù)方磺胺甲惡唑片用乙醇溶解稀釋至1000mL配制成樣品液。SMZ：分別準(zhǔn)確移取待測(cè)樣品液1.50mL于100.0mL容量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液稀釋定容搖勻。平行制樣兩份。TMP：分別準(zhǔn)確移取樣品液3.00mL于100.0mL容量瓶中，加鹽酸-氯化鉀混合溶液稀釋并定容搖勻。平行制樣兩份。樣品溶液的移取體積和稀釋倍數(shù)見(jiàn)表3-3。表3-3樣品溶液的配制移取體積/mL定容后體積/mL稀釋倍數(shù)SMZ1.50100.0200TMP3.00100.01003.2最佳測(cè)定波長(zhǎng)的選擇3.2.1SMZ測(cè)定波長(zhǎng)的確定SMZ：分別準(zhǔn)確移取30.00mLSMZ、10.00mLTMP標(biāo)準(zhǔn)工作溶液于100.0mL燒杯中，加0.4%氫氧化鈉溶液稀釋至100mL。在200.0～350.0納米波長(zhǎng)范圍中掃描吸收光譜，確定SMZ的最大吸收波長(zhǎng)為測(cè)量波長(zhǎng)λsmz1，確定SMZ與TMP等吸點(diǎn)波長(zhǎng)為參比波長(zhǎng)λsmz2。SMZ：圖3-1SMZ測(cè)定波長(zhǎng)選擇如圖3-1所示，測(cè)定SMZ含量時(shí)，以SMZ吸收曲線的最大吸收波長(zhǎng)257.0nm為測(cè)量波長(zhǎng)，干擾組分TMP在此波長(zhǎng)下的吸光度為0.058，干擾組分TMP吸收曲線的等吸點(diǎn)波長(zhǎng)為303.3nm，以303.3nm為SMZ測(cè)定的參比波長(zhǎng)。3.2.2TMP測(cè)定波長(zhǎng)的確定TMP：分別準(zhǔn)確移取20mLSMZ、20mLTMP標(biāo)準(zhǔn)工作溶液于100mL燒杯中，加HCI-KCI混合溶液稀釋至100mL。在200.0～350.0納米波長(zhǎng)范圍中掃描吸收光譜，確定TMP的較大吸收波長(zhǎng)為測(cè)量波長(zhǎng)λTMP1，確定TMP與SMZ等吸點(diǎn)波長(zhǎng)為參比波長(zhǎng)λTMP2。TMP：圖3-2TMP測(cè)定波長(zhǎng)選擇如圖3-2所示，測(cè)定TMP含量時(shí)，以TMP吸收曲線的較大吸收波長(zhǎng)238.0nm為測(cè)量波長(zhǎng)，干擾組分SMZ在此波長(zhǎng)下的吸光度為0.230，干擾組分SMZ吸收曲線的等吸點(diǎn)波長(zhǎng)為297.4nm，以297.4nm為TMP測(cè)定的參比波長(zhǎng)。表3-4測(cè)定波長(zhǎng)的選擇測(cè)量波長(zhǎng)/nm參比波長(zhǎng)/nmSMZ257.0303.3TMP238.0297.43.3繪制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液光譜曲線3.3.1繪制SMZ標(biāo)準(zhǔn)系列溶液光譜曲線根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表3-5所示：SMZ：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)線性回歸方程為A=0.06629ρ+0.00133，R為0.999993。表3-5SMZ標(biāo)準(zhǔn)系列溶液測(cè)定結(jié)果濃度A257.0mmA303.3mm△A0.0000.0000.0000.0001.8000.1280.0050.1233.6000.2520.0090.2435.4000.3770.0130.3647.2000.5000.0150.4849.0000.6270.0210.60610.800.7500.0250.7253.3.2繪制TMP標(biāo)準(zhǔn)系列溶液光譜曲線根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表3-6所示：TMP：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)線性回歸方程為A=0.05348ρ-0.00025，R為0.999995。表3-6TMP標(biāo)準(zhǔn)系列溶液測(cè)定結(jié)果濃度A238.0mmA297.4mm△A0.0000.0000.0000.0001.2400.0470.0030.0442.4800.0950.0070.0883.7200.1420.0100.1324.9600.1890.0130.1766.2000.2350.0140.2217.4400.2860.0200.2853.4樣品組分含量測(cè)定根據(jù)SMZ、TMP標(biāo)準(zhǔn)工作曲線進(jìn)行了樣品的測(cè)定，結(jié)果如下表3-7：表3-7樣品測(cè)定結(jié)果表濃度/(mg/L)ΔASMZ6.0020.3996.0020.399TMP2.3940.1282.3940.1283.5數(shù)據(jù)處理3.5.1標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度計(jì)算ρρ3.5.2標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度計(jì)算SMZ:ρρρρρρρTMP:ρρρρρρρ3.5.3樣品濃度計(jì)算ρρρρρρAA準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度4結(jié)論4.1復(fù)方磺胺甲噁唑片的藥物組分含量分析本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為第五次，數(shù)據(jù)分析如下：4.1.1SMZ組分分析SMZ標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的方程為A=0.06629ρ+0.00133，R為0.999993。樣品中SMZ的含量為0.4001g/L，相對(duì)相差為0.00%，準(zhǔn)確度為0.02%。4.1.2TMP組分分析TMP標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的方程為A=0.05348ρ-0.00025，R為0.999995。樣品中TMP的含量為0.07980g/L，相對(duì)相差為0.00%，準(zhǔn)確度為0.25%。取不同批次樣品5批，按照本法測(cè)定，數(shù)據(jù)對(duì)比如下表4-1：表4-15批次樣品測(cè)定結(jié)果SMZTMP批次含量/（g/L）相對(duì)相差/（%）準(zhǔn)確度/（%）含量/（g/L）相對(duì)相差/（%）準(zhǔn)確度/（%）010.40000.000.000.079860.000.18020.40020.000.050.079900.000.12030.39970.000.080.080150.000.19040.40040.000.100.079880.000.15050.40010.000.020.079800.000.254.2最佳實(shí)驗(yàn)條件確定用乙醇來(lái)配制稀釋0.09g/LSMZ和0.06g/LTMP標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；用0.4%氫氧化鈉來(lái)作為SMZ標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的稀釋溶液介質(zhì)；用（0.625mL濃鹽酸+KCl6.9g）/L來(lái)作為TMP標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的稀釋溶液介質(zhì)。最佳吸收波長(zhǎng)選擇根據(jù)當(dāng)天配制的溶液來(lái)確定比較合適。4.3最佳實(shí)驗(yàn)步驟確定SMZ：使用乙醇來(lái)稀釋配制0.09g/L的SMZ標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在分別準(zhǔn)確移取1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mLSMZ的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，樣品準(zhǔn)確移取待測(cè)樣品液1.50mL，用0.4%氫氧化鈉溶液稀釋。TMP:使用乙醇來(lái)稀釋配制0.06g/L的TMP標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在分別準(zhǔn)確移取1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mLTMP的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，樣品準(zhǔn)確移取待測(cè)樣品液3.00mL，用鹽酸-氯化鉀溶液稀釋。測(cè)定波長(zhǎng)選定SMZ：分別取30.00mLSMZ、10.00mLTMP標(biāo)準(zhǔn)工作溶液于100.0mL燒杯中，加0.4%氫氧化鈉溶液稀釋至100mL。在200納米～3500納米波長(zhǎng)范圍中掃描繪制吸收光譜圖，以SMZ的最大吸收波長(zhǎng)為測(cè)量波長(zhǎng)，確定SMZ與TMP等吸點(diǎn)波長(zhǎng)為參比波長(zhǎng)。TMP：分別取20mLSMZ、20mLT