前言抗生素(antibiotics)又稱為抗菌素，是指由微生物（包括細(xì)菌、真菌、放線菌屬）分泌及其改造產(chǎn)物或以人工全合成的,可選擇性抑制某些生物活動(dòng)的小分子化合物,具有抗細(xì)菌、真菌、病毒以及腫瘤等作用。自1928年AlexanderFleming發(fā)現(xiàn)青霉素以來,已經(jīng)有超過31個(gè)大類,160種以上抗生素被發(fā)現(xiàn)REF_Ref16585\r\h[4]?？股匾话憧筛鶕?jù)來源分為天然抗生素和人工合成抗生素。同時(shí)也可以根據(jù)他們母體結(jié)構(gòu)分為β-內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、酰胺醇類等?？股刈?0世紀(jì)80年代以后,新批準(zhǔn)的抗生素不斷減少，發(fā)展進(jìn)入了瓶頸期REF_Ref7093\r\h[7]。近幾十年只有個(gè)位數(shù)新結(jié)構(gòu)的抗生素?？股氐臑E用會(huì)導(dǎo)致大量的耐藥菌產(chǎn)生,而新的抗生素發(fā)現(xiàn)卻停滯不前,這會(huì)影響到臨床中抗生素的正常使用。另外,通過比較幾十年變化的金黃色葡萄球菌,結(jié)果顯示耐藥性發(fā)展非?？霷EF_Ref7034\r\h[8]。新抗生素的研發(fā)遲緩這一問題引起科學(xué)界的重視,FDA對多個(gè)正在研發(fā)的新抗生素給予優(yōu)先評審和快速評審的資格,這給予抗生素研發(fā)者極大鼓舞。而對已有的抗生素進(jìn)行改造一直是抗生素研發(fā)的大趨勢REF_Ref7093\r\h[9]。通過結(jié)構(gòu)改造可以使得抗生素的具有更好的藥物穩(wěn)定性,較低的毒副作用以及更廣的抗菌譜。研究表明,MRSA等革蘭陽性菌正發(fā)展為多種抗生素耐藥菌:耐青霉素類(苯甲異噁唑青霉素和氨芐青霉素)、耐萬古霉素類和耐氟喹諾酮類等藥物細(xì)菌REF_Ref4954\r\h[10]REF_Ref6561\r\h[11]。因此，為了解決MRSA引起的感染問題，迫切需要開發(fā)新的抗菌藥物，截短側(cè)耳素及其衍生物就是新型抗菌藥物的研究方向之一。1.1截短側(cè)耳素簡介截短側(cè)耳素(pleuromutilin，圖1)是一種三環(huán)二萜類天然化合物，于二十世紀(jì)五十年代從兩種真菌(Pleurotusmutilus和P.passeckerianus)的培養(yǎng)物中分離出結(jié)晶形式，并確定其分子式為C22H34O5，相對分子量為378.51，具有八個(gè)立體中心極具剛性的568三環(huán)碳骨架和C(14)的乙醇酸鏈等結(jié)構(gòu)REF_Ref7191\r\h[12]。圖11.2抗菌機(jī)制截短側(cè)耳素類屬于三環(huán)二萜類抗生素，其發(fā)揮抗菌作用的主要結(jié)構(gòu)是化合物中的三環(huán)骨架，能夠與細(xì)菌核糖體50S亞基的肽酰轉(zhuǎn)移酶活性中心（PTC）形成誘導(dǎo)契合效應(yīng)，導(dǎo)致其亞基發(fā)生重排，同時(shí)三環(huán)核心突出部分能夠覆蓋核糖體P位點(diǎn)。這種抗菌機(jī)制不同于其他抑制蛋白合成的抗生素。值得注意的是，截短側(cè)耳素類化合物結(jié)構(gòu)分子中的C14側(cè)鏈，能夠深入核糖體亞基的疏水部分，影響其抗菌活性，因此，C14側(cè)鏈的化學(xué)修飾一直是截短側(cè)耳素衍生物改造的關(guān)鍵位置REF_Ref16911\r\h[14]。1.3已上市的截短側(cè)耳素衍生物1.3.1泰妙菌素泰妙菌素（Tiamulin）作為第一個(gè)動(dòng)物專用截短側(cè)耳素類抗生素，并于1979年被批準(zhǔn)用于治療豬的支原體肺炎和豬痢疾短螺旋體等感染REF_Ref18521\r\h[15]，結(jié)構(gòu)如下圖。圖21.3.2沃尼妙林沃尼妙林（Valnemulin）同樣也作為動(dòng)物專用抗菌藥用于治療豬和雞的呼吸道病以及兔的流行性腸炎，結(jié)構(gòu)如下圖。圖31.3.3瑞他妙林瑞他妙林（Retapamulin）作為第一個(gè)人用的截短側(cè)耳素類抗生素于截短側(cè)耳素藥物被發(fā)現(xiàn)近50年以后才獲批準(zhǔn)用于臨床，但且僅作為局部用藥治療成人及9個(gè)月以上兒童因金黃色葡萄球菌和化膿鏈球菌引起的膿皰病REF_Ref7217\r\h[13]REF_Ref7246\r\h[14]，結(jié)構(gòu)如下圖。圖41.3.4來法莫林來法莫林(Lefamulin)是第一個(gè)在人體內(nèi)全身使用的截短側(cè)耳素類抗生素，2019年8月被美國食品和藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)用于治療社區(qū)獲得性細(xì)菌性肺炎專用藥[]，結(jié)構(gòu)如下圖。圖51.4本課題的主要研究內(nèi)容(1)將對甲苯磺酰氯與原料截短側(cè)耳素縮合，以活化截短側(cè)耳素母核上14號(hào)位側(cè)鏈中的取代羥基，得中間體Ⅰ對甲苯磺?；囟虃?cè)耳素，用于下步反應(yīng)。

(2)以對甲苯磺?；囟虃?cè)耳素與4-氨基苯硫酚在加熱回流條件下反應(yīng)合成得到中間體Ⅱ粗品，用于下步反應(yīng)。(3)硅膠柱純化后將上述中間體Ⅱ粗品經(jīng)硅膠柱純化后，得到純凈的中間體Ⅱ用于下步反應(yīng)。(4)氯乙酰氯與上述截短側(cè)耳素中間體Ⅱ在低溫條件下反應(yīng)得到中間體Ⅲ。(5)硅膠柱純化后將上述中間體Ⅲ粗品經(jīng)硅膠柱純化后，得到純凈的中間體Ⅲ用于下步反應(yīng)。(6)中間體Ⅲ與含氮雜環(huán)烷烴在高溫條件下反應(yīng)得到最終化合物。(7)運(yùn)用質(zhì)譜、核磁等檢測方法對得到的產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征，以確證所得截短側(cè)耳素衍生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。

(8)利用上述合成得到的截短側(cè)耳素衍生物進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)，研究以4-氨基苯硫酚為連接的含氮雜環(huán)烷烴側(cè)鏈的截短側(cè)耳素衍生物的設(shè)計(jì)、合成及抗MRSA活性評價(jià).2截短側(cè)耳素衍生物的設(shè)計(jì)與合成2.1截短側(cè)耳素衍生物路線的設(shè)計(jì)2.1.1設(shè)計(jì)理念根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道REF_Ref25866\r\h[2],截短側(cè)耳素類衍生物的構(gòu)效關(guān)系應(yīng)當(dāng)如下:C14側(cè)鏈中連接中性基團(tuán)或酸性基團(tuán)的化合物抗菌活性較低，只有連接一個(gè)堿性中心會(huì)使衍生物活性改變;C14側(cè)鏈中含有硫醚基團(tuán)可以促進(jìn)抗菌活性;C14側(cè)鏈需要?；揎棧籆14側(cè)鏈需要含有像苯環(huán)、雜環(huán)或環(huán)烷基之類取代的環(huán)系可以提高衍生物的抗菌活性。2.1.2中間體1的制備原材料截短側(cè)耳素對甲苯磺?；上鄳?yīng)的磺酸脂，結(jié)構(gòu)如圖。圖72.1.3中間體2的制備生成的中間體1與4-氨基苯硫醇在加熱回流條件下反應(yīng)合成得到中間體Ⅱ粗品（結(jié)構(gòu)如圖），用于下步反應(yīng)。圖82.1.4中間體3的制備氯乙酰氯與上述截短側(cè)耳素中間體Ⅱ在低溫條件下反應(yīng)得到中間體Ⅲ，結(jié)構(gòu)如下圖。圖92.1.5化合物的制備中間體Ⅲ與不同含氮雜環(huán)烷烴在高溫條件下反應(yīng)得到最終化合物?；衔?：22O[(4(2((四氫吡咯)乙酰氨基)苯基)]硫乙酰基妙林圖10化合物2：22O[(4(2((四哌啶基哌啶)乙酰氨基)苯基)]硫乙?；盍謭D11化合物3：22O[(4(2((哌啶)乙酰氨基)苯基)]硫乙?；盍謭D122.2截短側(cè)耳素衍生物的合成2.2.1合成中間體1的一般程序?qū)?.0g(13.2mmol)截短側(cè)耳素溶于15mL乙酸乙酯中，并置于冰浴條件下，將3.3g(17.3mmol)對甲基苯磺酰氯緩慢加入上述溶液中，3分鐘后緩慢滴加(1-2滴/秒)6mol/L的氫氧化鈉溶液3ml?；旌弦涸谕瓿傻渭?分鐘后撤去冰浴，再反應(yīng)3小時(shí)左右，用薄層色譜法(TLC)監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程(展開劑比例為二氯甲烷：乙酸乙酯：石油醚=1:1:2)，當(dāng)觀測到原料點(diǎn)淡化至消失，即反應(yīng)結(jié)束。旋蒸除去溶劑后，將反應(yīng)液倒入分液漏斗中，用二氯甲烷進(jìn)行二次萃取，加入適量無水硫酸鈉除水，取有機(jī)相再次旋蒸，加入乙醇進(jìn)行重結(jié)晶（通過加熱讓溶劑溶解產(chǎn)物，再降溫析出），抽濾，烘干，即可得中間體1截短側(cè)耳素對甲苯磺酸酯。2.2.2合成中間體2的一般程序由于4-氨基苯硫醇保存狀態(tài)為一整塊固體，一般提前拿出來放在旋蒸水浴鍋里復(fù)溫，之后即可用吸管取;稱取9g（16.9mmol）中間體1溶于30-50mL乙酸乙酷，將反應(yīng)瓶置于電子上稱量滴加2.33g（18.6mmol）的4-氨基苯硫醇;小燒杯稱好NaOH溶于水中，盡量以飽和溶液狀態(tài)(6.67g一般溶于10mL)，溶解時(shí)可將燒杯放入冰中幫助降溫，邊攪拌邊溶解;NaOH水溶液滴加入反應(yīng)瓶中，架在反應(yīng)臺(tái)上開攪拌后加，不需要加得很慢。反應(yīng)瓶置于油浴鍋中70℃回流攪拌反應(yīng)2-3h;TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)度，展開劑石油醚:乙酸乙酯=2:1，產(chǎn)物極性變大;旋蒸除去瓶中乙酸乙酯，用二氯甲烷和飽和食鹽水萃取，適量100-200目硅膠吸附;過柱純化，洗脫劑二氯甲烷:甲醇=200:1,旋干溶劑得中間體2白色輕質(zhì)粉末，產(chǎn)率約70%;2.2.3合成中間體3的一般程序?qū)?.0g（6.2mmol）中間體2溶于20mL二氯甲烷中，并置于冰鹽浴條件下，將1.7g(12.3mmol)無水碳酸鉀加入上述溶液中，然后緩慢滴加(1-2滴/秒)0.84g(7.5mmol)的氯乙酰氯?；旌弦涸诒}浴下攪拌反應(yīng)2小時(shí)后撤去冰浴，用薄層色譜法(TLC)監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程(展開劑比例為乙酸乙酯：石油醚=1:1)，當(dāng)觀測到原料點(diǎn)淡化至消失，即反應(yīng)結(jié)束。加水淬滅反應(yīng)，用二氯甲烷萃取有機(jī)相，再用飽和碳酸氫鈉萃有機(jī)層2-3次，加入適量無水硫酸鈉除水，取有機(jī)相再次旋蒸，旋干后得白色粉末中間體3。2.2.4合成化合物1的一般程序?qū)?.5g（1.1mmol）中間體3溶解在3ml乙腈中，將0.09g（1.3mmol）四氫吡咯加入上述溶液，再加入0.29g(2.1mmol)無水碳酸鉀于該溶液中，于70℃冷凝回流攪拌2小時(shí)。用薄層色譜法(TLC)監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程(展開劑比例為乙酸乙酯：石油醚=1:1)，當(dāng)觀測到原料點(diǎn)淡化至消失，即反應(yīng)結(jié)束。攪拌結(jié)束將反應(yīng)液倒入分液漏斗中，加水淬滅反應(yīng)，用二氯甲烷萃取有機(jī)相，再用飽和食鹽水萃有機(jī)層2-3次，加入適量無水硫酸鈉除水，取有機(jī)相再次旋蒸，所得有機(jī)相旋轉(zhuǎn)蒸干即可得化合物1。2.2.5合成化合物2的一般程序?qū)?.5g（1.1mmol）中間體溶解在3ml乙腈中，將0.21g（1.3mmol）4-哌啶基哌啶加入上述溶液，再加入0.29g(2.1mmol)無水碳酸鉀于該溶液中，于70℃冷凝回流攪拌2小時(shí)。用薄層色譜法(TLC)監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程(展開劑比例為乙酸乙酯：石油醚=1:1)，當(dāng)觀測到原料點(diǎn)淡化至消失，即反應(yīng)結(jié)束。攪拌結(jié)束將反應(yīng)液倒入分液漏斗中，加水淬滅反應(yīng)，用二氯甲烷萃取有機(jī)相，再用飽和食鹽水萃有機(jī)層2-3次，加入適量無水硫酸鈉除水，取有機(jī)相再次旋蒸，所得有機(jī)相旋轉(zhuǎn)蒸干即可得化合物2。2.2.6合成化合物3的一般程序?qū)?.5g（1.1mmol）中間體溶解在3ml乙腈中，將0.11g（1.3mmol）哌啶加入上述溶液，再加入0.29g(2.1mmol)無水碳酸鉀于該溶液中，于70℃冷凝回流攪拌2小時(shí)。用薄層色譜法(TLC)監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程(展開劑比例為乙酸乙酯：石油醚=1:1)，當(dāng)觀測到原料點(diǎn)淡化至消失，即反應(yīng)結(jié)束。攪拌結(jié)束將反應(yīng)液倒入分液漏斗中，加水淬滅反應(yīng)，用二氯甲烷萃取有機(jī)相，再用飽和食鹽水萃有機(jī)層2-3次，加入適量無水硫酸鈉除水，取有機(jī)相再次旋蒸，所得有機(jī)相旋轉(zhuǎn)蒸干即可得化合物3。2.3本章小結(jié)對于實(shí)驗(yàn)過程中旋蒸之后的產(chǎn)物一般需要過柱純化，純化后的產(chǎn)物才可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，藥物的保存一般置于-4℃的冰箱保存，而且在使用前要點(diǎn)板檢驗(yàn)藥物純度，可能存在藥物的分解問題。本實(shí)驗(yàn)室前期進(jìn)行了一些基礎(chǔ)的截短側(cè)耳素類衍生物的設(shè)計(jì)與合成，并獲得較好活性的截短側(cè)耳素衍生物，具有一定的經(jīng)驗(yàn)，此外本項(xiàng)目研究所需儀器設(shè)備學(xué)院均有，不需要另外購買大型儀器設(shè)備，預(yù)計(jì)能夠順利進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)化合物的合成及其體外、內(nèi)活性實(shí)驗(yàn)均有一定的難度，但預(yù)期可以順利完成。3碳譜結(jié)果3.1儀器ChemBioDrawUltra20.0、mestrenova以及Prism等繪圖軟件。3.2結(jié)果圖3.2.1化合物122O[(4(2((四氫吡咯)乙酰氨基)苯基)]硫乙?；盍滞ㄟ^2.2.4中描述的方法制備，產(chǎn)物為輕質(zhì)粉末，產(chǎn)率為53.3%13CNMR(151MHz,CDCl3)δ217.07(C3),169.06,168.30(C21),138.94,137.24(C19),131.98,129.30,119.94,117.24(C20),74.61(C11),69.46(C14),59.73,58.18(C4),54.61,45.44(C9),44.73(C13),43.87(C12),41.76(C5),38.15(C6),36.77(C10),35.99(C2),34.47(C22),30.43(C8),26.83(C7),26.29(C18),24.84(C1),24.09,16.75(C16),14.87(C15),11.50(C17).圖13化合物1碳譜圖圖14化合物2碳譜圖3.2.2化合物222O[(4(2((四哌啶基哌啶)乙酰氨基)苯基)]硫乙?；盍滞ㄟ^2.2.5中描述的方法制備，產(chǎn)物為輕質(zhì)粉末，產(chǎn)率為68.5%13CNMR(151MHz,CDCl3)δ217.09(C3),168.75,168.30(C21),138.93,138.93(C19),132.03,129.37,119.83,117.24(C20),74.60(C11),69.47(C14),61.99,61.70,58.18(C4),53.88,50.50,45.44(C9),44.72(C13),43.87(C12),41.76(C5),38.13(C6),36.77(C10),35.99(C2),34.47(C22),30.43(C8),28.76,26.83(C7),26.30(C18),26.28,24.84(C1),24.69,16.75(C16),14.87(C15),11.50(C17).3.2.3化合物322O[(4(2((哌啶)乙酰氨基)苯基)]硫乙?；盍滞ㄟ^2.2.6中描述的方法制備，產(chǎn)物為輕質(zhì)粉末，產(chǎn)率為61.34%13CNMR(151MHz,CDCl3)δ217.07(C3),169.02,168.30(C21),138.94,137.24(C19),132.08,129.22,119.83,117.23(C20),74.61(C11),69.45(C14),62.76,58.18(C4),54.92,45.44(C9),44.72(C13),43.86(C12),41.76(C5),38.17(C6),36.77(C10),35.99(C2),34.47(C22),30.43(C8),26.83(C7),26.31(C18),26.26,24.84(C1),23.60,16.75(C16),14.87(C15),11.50(C17).圖15化合物3碳譜圖4衍生物活性的測定4.1目標(biāo)化合物最小抑菌濃度（MIC）的測定方法4.1.1菌種及對照藥物實(shí)驗(yàn)菌種：金黃色葡萄球菌（ATCC43300）對照藥物：泰妙菌素（Tiamulin）、萬古霉素（Vancomycin）、鹽酸沃尼妙林（Valnemulin）培養(yǎng)基配制：MH肉湯培養(yǎng)基、甘露醇培養(yǎng)基（培養(yǎng)基高壓滅菌后使用）4.1.2藥液配制分別精密稱取6.4mg截短側(cè)耳素、泰妙菌素以及三種目標(biāo)化合物，于250μLDMSO中溶解，搖勻后添加250μL吐溫80，最后加入4500μL超純水，將藥物配制成濃度為1280μg/ml的母液。在超凈工作臺(tái)中，用去除針頭的注射器吸取母液，然后使用0.22μm的微孔濾膜對藥液進(jìn)行過濾，隨后將其放置于-20℃冰箱中保存，備用。4.1.3菌液配制將低溫保存的待測菌株MSRA（ATCC43300）接種到甘露醇培養(yǎng)基中進(jìn)行菌的傳代。菌株傳代完成后將培養(yǎng)基中生長良好的單一菌落用接種環(huán)接種至培養(yǎng)基上，隨后放到恒溫培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)24小時(shí)之后取出，挑選大小合適、長勢優(yōu)良的單個(gè)菌落使用接種環(huán)接種到裝有高壓滅菌后的BHI肉湯培養(yǎng)基中。接好菌種的EP管固定于搖床中，繼續(xù)37℃恒溫在210rpm培養(yǎng)4.5h后獲得菌液。4.1.4活性測定（1）在超凈工作臺(tái)上，取三個(gè)96孔滴定板，自上而下各排標(biāo)號(hào)，A至H共八排。用移液槍向A-F各排第一孔添加180μL無菌MH肉湯，A-H各排其余孔添加100μL無菌MH肉湯。（2）每組藥平行測定三次，因此分別用移液槍吸取20μL配制好的目標(biāo)化合物1母液（濃度為1280μg/ml）添加進(jìn)ABC排的第一個(gè)孔中，同理，分別吸取20μL配制好的目標(biāo)化合物2母液（濃度為1280μg/ml）添加進(jìn)DEF排的第一個(gè)孔中，將母液加入每個(gè)孔中的同時(shí)進(jìn)行充分反復(fù)吹打混勻。用移液槍從A~F排第一個(gè)孔中吸取100μL混合液轉(zhuǎn)移至A~F排第二孔中，進(jìn)行充分的反復(fù)吹打混勻，重復(fù)上述操作至第十二個(gè)孔，最后用移液槍吸取100μL第十二孔中混合液棄去。此時(shí)A~F排每孔藥物濃度依次是128，64，32，16，8，4，2，1，0.5，0.25，0.125，0.06μg/ml。（3）用移液槍向A~H各孔加入100μL稀釋后的菌液，此時(shí)A-F排每孔藥物濃度依次是64，32，16，8，4，2，1，0.5，0.25，0.125，0.06，0.03μg/ml。（4）在第G排各孔添加200μL無菌MH肉湯作陰性對照，第H排各孔添加100μL無菌MH肉湯以及100μL稀釋后的菌液作陽性對照。（5）重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)步驟將配制好的三個(gè)目標(biāo)化合物、泰妙菌素、萬古霉素、沃尼妙林母液（濃度均為1280μg/ml）稀釋至各孔內(nèi)并添加菌液。每個(gè)96孔板有倆組藥，共三個(gè)板。（6）將配制好的96孔滴定板在37℃環(huán)境中靜置恒溫培養(yǎng)24小時(shí)后，取出，觀察結(jié)果。（7）在光線良好的情況下觀察滴定板，孔內(nèi)若有渾濁現(xiàn)象，則說明有菌生長；孔內(nèi)若是澄清狀態(tài)，則說明無菌生長。滴定板每排各孔從右往左觀察，以第一個(gè)出現(xiàn)澄清狀態(tài)的孔的濃度視為該藥物的最小抑菌濃度（MIC）。4.2目標(biāo)化合物最小殺菌濃度（MBC）的測定方法（1）觀察完藥物的MIC之后，繼續(xù)在37℃環(huán)境中靜置恒溫培養(yǎng)24小時(shí)后取出，觀察情況，選取視為MIC的孔的左側(cè)四個(gè)澄清孔進(jìn)行涂板，取數(shù)個(gè)MH肉湯瓊脂板于超凈工作臺(tái)中，使用移液槍移取50μL澄清孔的混合液分別于板上均勻涂布。（2）菌液均勻分布且瓊脂平板表面干燥后在37℃環(huán)境中靜置恒溫培養(yǎng)24小時(shí)后，取出培養(yǎng)箱中的固體培養(yǎng)基進(jìn)行觀察，結(jié)果判定：若在平板觀察到細(xì)菌的特征性菌落，則說明有細(xì)菌生長；若不能觀察到菌落，則說明無菌生長。第一個(gè)出現(xiàn)無菌生長的藥液濃度視為該藥的最小殺菌濃度（MBC）。4.3結(jié)果觀察泰妙菌素：24h觀察時(shí)第9孔開始變澄清，經(jīng)涂布培養(yǎng)24h后第7孔涂布結(jié)果開始無菌落。沃尼妙林：24h觀察時(shí)第11孔開始變澄清，經(jīng)涂布培養(yǎng)24h后第11孔涂布結(jié)果開始無菌落。萬古霉素：24h觀察時(shí)第6孔開始變澄清，經(jīng)涂布培養(yǎng)24h后第5孔涂布結(jié)果開始無菌落。目標(biāo)合成化合物1：24h觀察時(shí)第9孔開始澄清，經(jīng)涂布培養(yǎng)24h后第9孔涂布結(jié)果開始無菌落。目標(biāo)合成化合物2：24h觀察時(shí)第11孔開始變澄清，經(jīng)涂布培養(yǎng)24h后第8孔涂布結(jié)果開始無菌落。目標(biāo)合成化合物3：24h觀察時(shí)第11孔開始變澄清，經(jīng)涂布培養(yǎng)24h后第8孔涂布結(jié)果開始無菌落。表1MIC測定結(jié)果ATTCC43300(ul/mL)泰妙菌素0.25沃尼妙林0.06萬古霉素2化合物10.125化合物20.06化合物30.06表2MBC測定結(jié)果表ATTCC43300(ul/mL)泰妙菌素1沃尼妙林0.06萬古霉素4化合物10.25化合物20.5化合物30.5從表中的數(shù)據(jù)可以看出,制備的化合物對金黃色葡萄球菌的體外抑菌活性良好。對MRSA的MIC值分別為0.125μg/mL、0.06μg/mL、0.06μg/mL，對MRSA的MBC值分別為0.25ug/ml、0.5ug/ml、0.5ug/ml。其中化合物1對MRSA抑菌濃度與殺菌濃度一致，化合物2、3對MRSA的殺菌活性較差，抑菌濃度與殺菌濃度有明顯變化。綜上所述,三種化合物的體外抗菌活性均位于對照藥物泰妙菌素與沃尼妙林之間,有進(jìn)一步的研究價(jià)值。5結(jié)論抗生素自被發(fā)現(xiàn)使用至今，已經(jīng)經(jīng)過了多代抗生素藥物的更迭。截短側(cè)耳素類藥物的廣譜抗菌活性使其在耐藥菌感染的治療中具有廣闊的應(yīng)用前景,可以為多藥耐藥的細(xì)菌感染提供新的解決方案REF_Ref7093\r\h[7]。目前對截短側(cè)耳素的構(gòu)效關(guān)系和耐藥機(jī)制的研究已經(jīng)逐漸成熟,現(xiàn)在對于該類化合物的研究重點(diǎn)是如何進(jìn)一步開發(fā)更廣泛適用的截短側(cè)耳素類衍生物。而目前在使用的動(dòng)物專用抗生素泰妙菌素和沃尼妙林已經(jīng)對部分革蘭氏陽性菌產(chǎn)生了部分耐藥性。因此,利用現(xiàn)有科技水平繼續(xù)深入研究截短側(cè)耳素類衍生物的結(jié)構(gòu)修飾,,使截短側(cè)耳素衍生物的在研發(fā)中加大抗耐藥性，增加側(cè)鏈骨架結(jié)構(gòu)多樣化,尋找新型良好抗菌活性的抗生素至關(guān)重要。細(xì)菌耐藥是臨床上一大難題，目前大部分抗生素都被發(fā)現(xiàn)有相對應(yīng)的耐藥菌株，而新截短側(cè)耳素衍生物有較好的開發(fā)潛力和應(yīng)用前景，本研究在前人的基礎(chǔ)上，合成了新的基團(tuán)，期待以后有更有效的截短側(cè)耳素衍生物以及提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。參考文獻(xiàn)李云鴿.截短側(cè)耳素衍生物的設(shè)計(jì)、合成及抗菌活性研究[D].錦州醫(yī)科大學(xué),2019崔格.截短側(cè)耳素新型衍生物的合成[D].河北科技大學(xué),2021丁超月,徐艷,孫麗,等.截短側(cè)耳素類抗生素及其耐藥研究進(jìn)展[J].國外醫(yī)藥(抗生素分冊),2023,44(03):166-172.DOI:10.13461/ki.wna.005548.林樹乾，張家銘，衣云鵬，黃中利，趙增成，楊世發(fā)，殷斌，劉月月，李桂明，張榮玲，閆遵祥，宋士凱.截短側(cè)耳素衍生物及其合成方法和應(yīng)用[P].中國專利：CN116063227A,2023.05.05湯有志，李珂，靳珍，曾振靈，黃顯會(huì)，丁煥中.一種具有噻唑側(cè)鏈的截短側(cè)耳素衍生物及其制備方法和應(yīng)用[P].中國專利：CN117304133A,2023.12.29馬丹倩,張賀超,齊顯龍,等.截短側(cè)耳素衍生物PCI對48株牛源耐甲氧西林金黃色葡萄球菌臨床菌株的抗菌活性[J/OL].中國草食動(dòng)物科學(xué):1-9[2024-04-08]./kcms/detail/62.12