實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范手冊(cè)第一章總則1.1目的本手冊(cè)旨在規(guī)范實(shí)驗(yàn)室各類操作行為，保障實(shí)驗(yàn)人員人身安全、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境合規(guī)性，保證實(shí)驗(yàn)活動(dòng)科學(xué)、高效、有序開展。1.2適用范圍適用于進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的所有人員（包括科研人員、實(shí)驗(yàn)員、訪客等），涵蓋實(shí)驗(yàn)室通用安全、儀器操作、樣品管理、實(shí)驗(yàn)流程、廢棄物處理等全環(huán)節(jié)。1.3基本原則安全優(yōu)先：任何操作以保障人員安全為首要前提，嚴(yán)格遵守安全規(guī)程。規(guī)范操作：按既定流程和標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，杜絕隨意更改操作步驟。質(zhì)量保證：保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)、可追溯，符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。責(zé)任到人：明確各崗位操作職責(zé)，落實(shí)“誰操作、誰負(fù)責(zé)”的管理機(jī)制。第二章實(shí)驗(yàn)室通用安全規(guī)范2.1個(gè)人防護(hù)裝備（PPE）使用規(guī)范2.1.1防護(hù)服選擇標(biāo)準(zhǔn)：普通實(shí)驗(yàn)操作穿棉質(zhì)實(shí)驗(yàn)服；處理腐蝕性、有毒物質(zhì)時(shí)穿防化服；生物實(shí)驗(yàn)穿無菌隔離服。穿著要求：扣好全部紐扣，袖口收緊，禁止穿露腳趾鞋。實(shí)驗(yàn)服禁止穿出實(shí)驗(yàn)室，每周至少更換清洗1次。2.1.2防護(hù)手套材質(zhì)匹配：接觸有機(jī)溶劑用丁腈手套（耐油）；接觸強(qiáng)酸強(qiáng)堿用橡膠手套；接觸低溫樣品用防凍手套。使用規(guī)范：戴手套前檢查有無破損，佩戴后避免觸摸面部、手機(jī)等非實(shí)驗(yàn)物品；手套污染后立即更換，一次性手套禁止重復(fù)使用。2.1.3防護(hù)眼鏡/面罩適用場(chǎng)景：進(jìn)行可能產(chǎn)生飛濺（如離心、混勻）、有毒氣體釋放（如酸堿中和）的實(shí)驗(yàn)時(shí)必須佩戴。佩戴要求：眼鏡側(cè)邊無縫隙，面罩需完全覆蓋面部；霧氣大時(shí)可用防霧劑處理，禁止隨意摘下。2.1.4口罩/呼吸防護(hù)普通實(shí)驗(yàn)：佩戴醫(yī)用外科口罩（每4小時(shí)更換1次）。有毒氣體實(shí)驗(yàn)：根據(jù)氣體類型選擇防毒面具（如防有機(jī)蒸氣用濾毒盒），使用前檢查氣密性，使用后更換濾芯。2.2化學(xué)品安全規(guī)范2.2.1化學(xué)品分類與標(biāo)識(shí)分類標(biāo)準(zhǔn)：按GB13690-2009分為爆炸品、壓縮氣體、易燃液體、毒性物質(zhì)等8類。標(biāo)識(shí)要求：所有試劑容器必須粘貼清晰標(biāo)簽，標(biāo)注品名、濃度、危險(xiǎn)標(biāo)識(shí)（如易燃、有毒）、責(zé)任人及配制日期。無標(biāo)簽試劑禁止使用。2.2.2化學(xué)品存儲(chǔ)分區(qū)存放：易燃品存放在防爆柜（遠(yuǎn)離熱源、電源）；氧化劑與還原劑分柜存放；?。ㄈ缜杌?、砒霜）雙人雙鎖管理，登記出入庫。環(huán)境控制：易揮發(fā)試劑存放在通風(fēng)柜內(nèi)，溫度控制在15-25℃；避光試劑用棕色瓶或錫紙包裹。2.2.3化學(xué)品取用固體試劑：用潔凈藥勺取用，禁止用手直接接觸；取用后立即蓋緊瓶蓋，禁止將多余試劑倒回原瓶。液體試劑：用潔凈量筒或移液管量取，禁止用口吸移液；揮發(fā)性試劑取用時(shí)在通風(fēng)柜內(nèi)操作，減少暴露時(shí)間。2.2.4化學(xué)品泄漏處理少量泄漏：用吸附棉（針對(duì)液體）或沙土（針對(duì)固體）覆蓋，收集后放入有害廢棄物袋；腐蝕性泄漏用中和劑（如酸泄漏用碳酸氫鈉）處理后再清理。大量泄漏：立即疏散人員，關(guān)閉通風(fēng)系統(tǒng)，穿戴全套防護(hù)裝備后處理，必要時(shí)聯(lián)系專業(yè)機(jī)構(gòu)。2.3電氣安全規(guī)范2.3.1設(shè)備使用前檢查檢查電源線有無破損、插頭是否松動(dòng)；設(shè)備接地線是否可靠（用萬用表測(cè)量接地電阻≤4Ω）；高溫設(shè)備（如烘箱、馬弗爐）保證溫控系統(tǒng)正常。2.3.2操作規(guī)范禁止?jié)袷钟|摸電器設(shè)備；設(shè)備運(yùn)行時(shí)禁止離開，尤其是加熱設(shè)備；嚴(yán)禁私拉亂接電線，大功率設(shè)備（如離心機(jī)）使用獨(dú)立線路。2.3.3故障處理設(shè)備冒煙、異響時(shí)立即切斷電源，拔掉插頭；禁止自行拆解設(shè)備，聯(lián)系專業(yè)維修人員并報(bào)備實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人。2.4消防安全規(guī)范2.4.1消防設(shè)施配置實(shí)驗(yàn)室按每50㎡配備1個(gè)8kgABC干粉滅火器，滅火器壓力表指針在綠色區(qū)域；消防通道寬度≥1.2m，禁止堆放雜物。2.4.2火災(zāi)應(yīng)對(duì)初期火災(zāi)：根據(jù)燃燒類型選擇滅火器（A類固體火用水基滅火器，B類液體火用干粉滅火器，C類氣體火先斷氣再滅火）；電器火用CO?滅火器，禁止用水。無法控制時(shí)：立即觸發(fā)火警報(bào)警器，沿疏散指示標(biāo)志撤離，撥打119報(bào)警時(shí)說明實(shí)驗(yàn)室地址、燃燒物類型。2.4.3消防演練每季度組織1次消防演練，內(nèi)容包括滅火器使用、疏散路線、傷員轉(zhuǎn)移；演練記錄需存檔備查。第三章實(shí)驗(yàn)室區(qū)域管理規(guī)范3.1區(qū)域劃分與功能區(qū)域類型功能說明進(jìn)入要求清潔區(qū)辦公室、資料室、數(shù)據(jù)處理區(qū)穿普通工作服，禁止攜帶實(shí)驗(yàn)物品緩沖區(qū)更衣室、風(fēng)淋室、過渡區(qū)脫掉外衣，穿戴潔凈PPE，風(fēng)淋30秒污染區(qū)樣品處理室、儀器室、反應(yīng)室穿全套防護(hù)服，戴手套、口罩，禁止隨意走動(dòng)3.2區(qū)域進(jìn)入與退出規(guī)范進(jìn)入污染區(qū)：從緩沖區(qū)穿戴PPE后進(jìn)入，禁止穿戴個(gè)人物品（如手表、首飾）。退出污染區(qū)：先在緩沖區(qū)脫掉防護(hù)服（內(nèi)翻包裹污染物），洗手后更換潔凈衣物，禁止穿著實(shí)驗(yàn)服返回清潔區(qū)。3.3區(qū)域清潔與消毒3.3.1日常清潔實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用75%酒精擦拭實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、儀器表面（精密儀器用專用清潔劑）；地面用含氯消毒液（500mg/L）拖洗，每日1次。3.3.2定期消毒生物安全實(shí)驗(yàn)室：每周用甲醛熏蒸消毒（濃度1-2ml/m3），作用12小時(shí)后通風(fēng)；細(xì)胞培養(yǎng)室每季度用紫外燈照射1小時(shí)（燈管距地面1.2m）?；瘜W(xué)實(shí)驗(yàn)室：高氯酸臺(tái)面每月用硝酸溶液（5%）擦拭，防止氯酸鹽積累。3.4物品擺放規(guī)范試劑架：按酸、堿、鹽、有機(jī)物分類擺放，固體試劑放上層，液體放下層，標(biāo)簽朝外。儀器臺(tái)：精密儀器（如天平、分光光度計(jì)）放置在無振動(dòng)、無陽光直射位置；大儀器（如離心機(jī)）底部墊防震墊。通道：實(shí)驗(yàn)室主通道寬度≥1.5m，儀器間距≥0.5m，保證緊急疏散空間。第四章儀器設(shè)備操作規(guī)范4.1通用設(shè)備操作4.1.1電子天平操作前準(zhǔn)備：檢查水平儀（氣泡居中），預(yù)熱30分鐘（精度0.1mg以上天平），校準(zhǔn)（用標(biāo)準(zhǔn)砝碼）。操作步驟：稱量紙/容器放置秤盤，去皮；用藥勺緩慢添加樣品，避免灑落；讀數(shù)時(shí)關(guān)閉天平門，記錄至小數(shù)點(diǎn)后4位（0.0001g）。維護(hù)：用軟毛刷清理稱量盤，禁止用強(qiáng)溶劑擦拭；每周校準(zhǔn)1次，記錄校準(zhǔn)數(shù)據(jù)。4.1.2移液器分類使用：微量移液器（0.1-1000μl）用于精確移取，大體積移液器（1-10ml）用于粗略移取。操作規(guī)范：選擇合適量程（避免超過最大量程的10%），預(yù)潤(rùn)吸頭（慢吸快排，排空時(shí)頂住管壁）；移取粘稠液體后用酒精棉頭擦拭外壁。維護(hù)：每月校準(zhǔn)1次，更換密封圈；禁止將移液器放入高壓滅菌鍋。4.1.3離心機(jī)操作前檢查：檢查轉(zhuǎn)子有無裂紋，離心管是否對(duì)稱放置（重量差≤0.1g），蓋門鎖緊。參數(shù)設(shè)置：根據(jù)樣品類型設(shè)置轉(zhuǎn)速（如血液樣品3000rpm，細(xì)胞沉淀1500rpm），時(shí)間≤20分鐘。注意事項(xiàng)：運(yùn)行中禁止打開蓋子；異常振動(dòng)立即停機(jī)，檢查轉(zhuǎn)子平衡；轉(zhuǎn)子用后擦干，涂防銹油。4.2專用設(shè)備操作4.2.1高效液相色譜儀（HPLC）開機(jī)流程：開啟泵、色譜柱恒溫箱（平衡30分鐘），流動(dòng)劑脫氣（超聲10分鐘），檢測(cè)器預(yù)熱（基線穩(wěn)定）。進(jìn)樣操作：用進(jìn)樣針吸取樣品（避免氣泡），插入進(jìn)樣口，旋轉(zhuǎn)手柄至鎖定位置，推入樣品（5μl）。關(guān)機(jī)流程：用純水沖洗流路30分鐘，關(guān)閉泵、檢測(cè)器，蓋上防塵罩。4.2.2聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）儀反應(yīng)體系配制：在冰上操作，按順序加入模板DNA、引物、MasterMix，避免交叉污染；每管反應(yīng)液體積20μl，蓋緊管蓋。程序設(shè)置：變性（95℃，30s）、退火（根據(jù)引物Tm值，55-65℃，30s）、延伸（72℃，1min），循環(huán)30次；最終延伸72℃，5min。注意事項(xiàng)：離心管無滲漏，避免產(chǎn)生氣泡；使用專用槍頭，減少氣溶膠污染。4.2.3高壓滅菌鍋裝載規(guī)范：物品間留有空隙（≥2cm），裝量不超過鍋體容積的2/3；培養(yǎng)基用專用滅菌筐，避免堆積。參數(shù)設(shè)置：121℃，101.3kPa，時(shí)間15-20min（根據(jù)物品調(diào)整）；滅菌后緩慢排氣（防止液體沖溢）。效果驗(yàn)證：每月用生物指示劑（嗜熱脂肪芽孢桿菌）滅菌，培養(yǎng)48小時(shí)觀察結(jié)果（無菌生長(zhǎng)為合格）。第五章樣品采集與處理規(guī)范5.1樣品采集準(zhǔn)備采樣工具：無菌容器（預(yù)先滅菌，121℃，20min）、采樣袋（防滲漏）、標(biāo)簽紙（防水）。采樣計(jì)劃：明確采樣點(diǎn)位、數(shù)量、時(shí)間，填寫《采樣計(jì)劃表》，經(jīng)負(fù)責(zé)人審核后執(zhí)行。5.2樣品采集操作5.2.1液體樣品表層水：用采樣瓶在水面下0.5m處采集，避免攪動(dòng)底泥。血液樣品：用EDTA抗凝管，采血后立即顛倒混勻8次（防止凝固），采血量2-3ml。5.2.2固體樣品土壤：去除表層雜物，用采樣器取0-20cm深度土樣，混合后取500g裝入無菌袋。組織：用無菌器械取新鮮組織（避免脂肪、結(jié)締組織），放入含生理鹽水的容器，4℃保存。5.2.3氣體樣品用氣體采樣器，流量0.5-1L/min，采樣時(shí)間30min；活性炭吸附管采樣后密封，4℃保存24小時(shí)內(nèi)分析。5.3樣品標(biāo)識(shí)與記錄標(biāo)識(shí)要求：樣品標(biāo)簽標(biāo)注唯一編號(hào)、采樣時(shí)間、采樣人、樣品名稱、保存條件。記錄內(nèi)容：填寫《樣品采集記錄表》，包括采樣環(huán)境（溫度、濕度）、采樣方法、異常情況（如樣品渾濁、有雜質(zhì)）。5.4樣品保存與運(yùn)輸樣品類型保存溫度保存時(shí)間運(yùn)輸要求水樣4℃24小時(shí)內(nèi)分析避光、密封，添加固定劑（如HNO?）血清-20℃1個(gè)月干冰運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融微生物4℃（短期）24小時(shí)無菌操作，厭氧環(huán)境運(yùn)輸土壤-4℃7天避壓碎，保持原有濕度第六章實(shí)驗(yàn)操作流程規(guī)范6.1化學(xué)實(shí)驗(yàn)操作流程6.1.1滴定分析儀器準(zhǔn)備：酸式滴定管（洗凈后潤(rùn)洗3次，裝液至0刻度以上）、錐形瓶（用蒸餾水洗凈，烘干）。操作步驟：移取25.00ml待測(cè)液至錐形瓶，加2-3滴指示劑；滴定管尖端插入瓶口1cm，邊滴邊搖（速度3-4滴/秒）；臨近終點(diǎn)時(shí)半滴操作（用洗瓶沖洗瓶壁），溶液顏色突變且30秒不褪色為終點(diǎn)。數(shù)據(jù)記錄：平行滴定3次，相對(duì)偏差≤0.2%，取平均值計(jì)算結(jié)果。6.1.2萃取分離操作步驟：將萃取液與待測(cè)液加入分液漏斗（體積比1:3），蓋緊塞子，倒置并立即打開活塞放氣；振搖30秒（頻繁開排氣），靜置分層；下層液體從活塞放出，上層液體從上口倒出。注意事項(xiàng)：禁止用手直接接觸活塞；腐蝕性液體用聚四氟乙烯活塞漏斗。6.2生物實(shí)驗(yàn)操作流程6.2.1細(xì)胞培養(yǎng)復(fù)蘇：從液氮罐取出凍存管，37℃水浴中速融（1分鐘），用75%酒精消毒后轉(zhuǎn)入離心管，加培養(yǎng)基（10ml）終止凍存劑，離心（1000rpm，5min），棄上清，重懸培養(yǎng)。傳代：吸棄舊培養(yǎng)基，PBS洗2次，加胰酶（0.25%）1ml，37℃消化2分鐘，加培養(yǎng)基終止；吹打細(xì)胞成懸液，分裝至新培養(yǎng)瓶（比例1:3-1:5），放入37℃、5%CO?培養(yǎng)箱。換液：貼壁細(xì)胞長(zhǎng)至80%-90%密度時(shí)換液，懸浮細(xì)胞每2-3天換液1次，換液量為1/2-2/3。6.2.2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接收：檢查動(dòng)物合格證（來源、周齡、體重），檢疫3天后使用；飼養(yǎng)環(huán)境溫度20-25℃，濕度40%-70%，12h光照/黑暗循環(huán)。操作規(guī)范：抓取小鼠時(shí)抓住尾根部，提起后放在粗糙表面，順勢(shì)抓取頸背部皮膚；腹腔注射時(shí)進(jìn)針角度45°，回抽無血后緩慢推藥；實(shí)驗(yàn)后動(dòng)物麻醉（戊巴比妥鈉50mg/kg）后處死，方法符合動(dòng)物倫理要求。6.3物理實(shí)驗(yàn)操作流程6.3.1光譜分析分光光度計(jì)操作：開機(jī)預(yù)熱20分鐘，選擇波長(zhǎng)（如蛋白質(zhì)測(cè)定用595nm），用空白管調(diào)零；將樣品池放入光路，記錄吸光度值；測(cè)量后用蒸餾水清洗樣品池，擦干后歸位。注意事項(xiàng)：禁止用手觸摸樣品池光學(xué)面；比色皿中液體體積≤3/4容積。6.3.2電泳實(shí)驗(yàn)制膠：瓊脂糖凝膠濃度（如0.8%瓊脂糖分離DNA），微波爐加熱溶解，冷卻至60℃加入EB（終濃度0.5μg/ml），倒入膠槽，插梳子。上樣：取5μlDNA樣品與1μl上樣緩沖液混合，點(diǎn)入點(diǎn)樣孔；Marker點(diǎn)于第一孔。電泳：電壓120V，時(shí)間30分鐘（根據(jù)片段大小調(diào)整）；電泳后紫外燈觀察（戴防護(hù)眼鏡），拍照記錄。第七章實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與記錄管理規(guī)范7.1數(shù)據(jù)采集要求實(shí)時(shí)記錄：實(shí)驗(yàn)過程中同步記錄數(shù)據(jù)，禁止事后補(bǔ)記；記錄用鉛筆或簽字筆，字跡清晰，不得涂改（錯(cuò)誤處劃線修改，簽名并注明日期）。數(shù)據(jù)完整性：記錄實(shí)驗(yàn)條件（溫度、濕度、儀器型號(hào)）、操作步驟、異?，F(xiàn)象（如樣品泄漏、儀器故障），保證可追溯。7.2數(shù)據(jù)存儲(chǔ)與備份電子數(shù)據(jù)：原始數(shù)據(jù)存儲(chǔ)在實(shí)驗(yàn)專用電腦（加密），每周備份至服務(wù)器；實(shí)驗(yàn)記錄表（Excel格式）命名規(guī)則為“項(xiàng)目編號(hào)-日期-操作人”。紙質(zhì)數(shù)據(jù)：打印后手寫簽名，按項(xiàng)目分類存檔于文件柜（防火、防潮），保存期限≥5年。7.3數(shù)據(jù)審核與追溯三級(jí)審核：操作者自審（檢查數(shù)據(jù)合理性）、項(xiàng)目負(fù)責(zé)人審核（簽字確認(rèn)）、實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人終審（蓋章）。追溯機(jī)制：每個(gè)數(shù)據(jù)對(duì)應(yīng)唯一實(shí)驗(yàn)編號(hào)，通過編號(hào)可關(guān)聯(lián)采樣記錄、儀器使用記錄、操作人員等信息。7.4數(shù)據(jù)保密與共享保密要求：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不得擅自泄露給第三方，涉及專利、商業(yè)秘密的數(shù)據(jù)按相關(guān)保密制度管理。共享規(guī)范：數(shù)據(jù)共享需經(jīng)項(xiàng)目負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)，共享時(shí)去除敏感信息（如個(gè)人隱私、企業(yè)機(jī)密）。第八章實(shí)驗(yàn)室應(yīng)急處理規(guī)范8.1化學(xué)品泄漏應(yīng)急處理少量泄漏（＜100ml）：疏散泄漏區(qū)域人員，開啟通風(fēng)柜。穿戴防護(hù)服、手套、護(hù)目鏡，用吸附棉覆蓋泄漏物。收集吸附棉至有害廢棄物袋，貼“危險(xiǎn)廢棄物”標(biāo)簽。用清水沖洗地面，用pH試紙檢測(cè)至中性。大量泄漏（＞100ml）：立即啟動(dòng)應(yīng)急預(yù)案，通知實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和安全員。設(shè)置警戒線，禁止無關(guān)人員進(jìn)入。聯(lián)系專業(yè)?；诽幚頇C(jī)構(gòu)，協(xié)助清理。8.2人員傷害應(yīng)急處理8.2.1化學(xué)灼傷皮膚灼傷：立即用流動(dòng)清水沖洗15-30分鐘（強(qiáng)酸用5%碳酸氫鈉溶液，強(qiáng)堿用2%硼酸溶液），去除污染衣物，送醫(yī)時(shí)說明化學(xué)品名稱。眼睛濺入：立即翻開眼瞼，用生理鹽水或清水沖洗，沖洗時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)眼球，持續(xù)15分鐘，立即送眼科急診。8.2.2割傷與刺傷小傷口：用碘伏消毒，貼創(chuàng)可貼；大傷口或出血：壓迫止血（用紗布加壓包扎），抬高傷肢，立即撥打120。8.2.3中毒吸入有毒氣體：立即轉(zhuǎn)移至通風(fēng)處，解開衣領(lǐng)，保持呼吸道通暢；呼吸困難時(shí)給予吸氧，嚴(yán)重時(shí)送高壓氧艙。誤食毒物：立即漱口，飲用300ml牛奶或蛋清（保護(hù)胃黏膜），禁止催吐（腐蝕性毒物），送醫(yī)時(shí)攜帶毒物標(biāo)簽。8.3火災(zāi)應(yīng)急處理初期火災(zāi)：切斷電源、氣源，移走易燃物品。根據(jù)火情選擇滅火器（電器火用CO?，油類火用干粉），站在上風(fēng)向滅火。火勢(shì)無法控制時(shí)，立即撤離至安全區(qū)域，撥打119。8.4應(yīng)急演練與培訓(xùn)演練頻率：每季度組織1次綜合應(yīng)急演練（包括化學(xué)品泄漏、火災(zāi)、人員傷害），每半年組織1次專項(xiàng)演練（如生物污染）。培訓(xùn)內(nèi)容：急救技能（心肺復(fù)蘇、止血包扎）、消防器材使用、應(yīng)急疏散路線；培訓(xùn)記錄需存檔，考核合格后方可上崗。第九章實(shí)驗(yàn)室廢棄物管理規(guī)范9.1廢棄物分類廢棄物類型包含內(nèi)容收集容器標(biāo)識(shí)化學(xué)廢液有機(jī)廢液（甲醇、丙酮）、無機(jī)廢液（酸、堿）、含重金屬廢液（汞、鉛）紅色塑料桶生物廢棄物培養(yǎng)皿、菌液、血液樣本、動(dòng)物尸體黃色醫(yī)療廢物袋銳器廢物針頭、刀片、破碎玻璃器皿防刺穿專用容器固體廢棄物廢棄濾紙、手套、口罩黑色垃圾袋9.2廢棄物收集與