B乙酰溴法測定棉花纖維中的苯丙烷類化合物含量TheAcetylbromidemethodforanalysingthecontentofphenylaprapanoid2010-12-30實施2010-12-30實施新疆維吾爾自治區(qū)質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB65/T3191—2010本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T1.1—2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》和GB/T20001.4-2001《標(biāo)準(zhǔn)編寫規(guī)則第4部分：化學(xué)分析方法》編寫。本標(biāo)準(zhǔn)由新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出。本標(biāo)準(zhǔn)由新疆維吾爾自治區(qū)農(nóng)業(yè)廳歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院核技術(shù)生物技術(shù)研究所。本標(biāo)準(zhǔn)起草人：范玲，胡文冉，曹雙瑜IDB65/T3191—2010乙酰溴法測定棉花纖維中的苯丙烷類化合物含量件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6097-2006棉纖維試驗取樣方法3術(shù)語和定義3.1苯丙烷類化合物：由莽草酸經(jīng)芳香氨基酸(L-苯丙氨酸和L-酪氨酸),再通過脫氫、羥基化、偶4試劑乙酰溴(Sigma-Aldrich,強腐蝕性試劑);堿木質(zhì)素(Sigma-Aldrich):TritonX-100(分析純);Tris-HCI(分析純);NaCI(分析純);丙酮(分析純);NaOH(分析純);冰乙酸(分析純);鹽酸羥胺(分析純)。天平(ACCULABALC-310.3型);MYLAB通風(fēng)櫥；電熱恒溫震蕩水槽(DKZ-2型);紫外-可見分光光度計(CINTRA-20型)。6.1采樣2DB65/T3191—2010采摘種植在大田自然成熟的棉花纖維，按GB/T6097-2006《棉纖維試驗取樣方法》進(jìn)行取樣，反復(fù)挑揀棉花纖維，徹底揀去棉花纖維中的非纖維雜質(zhì)。6.2勻一化緩沖液(HBuffer)的配制50mmol/LTris-HCl,10g/LTritonX-100,1mol/LNaCl;pH8.36.3酸化乙酰溴溶液的配制乙酰溴/乙酸(V/V1:3),使用前新鮮配制。6.4棉花纖維樣品的準(zhǔn)備稱取1.0g棉樣，分別用40mL均一化緩沖液(H-buffer)清洗兩次，40mL80%丙酮洗兩次，40mL純丙酮洗一次，避免可溶物質(zhì)對分析的干擾。每次清洗后都渦旋、反復(fù)擠壓、最后用金屬夾蒜器將纖維中的殘留溶液擠干，45℃烘干備用。7標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制用酸化乙酰溴溶液溶解堿木質(zhì)素，配制成濃度為0、10、20、30、40、50、60μg/mL的酸化乙酰溴木質(zhì)素溶液。以不含木質(zhì)素的溶液為空白基礎(chǔ)背景，用紫外/可見分光光度計在280nm處測定吸光光度值，獲得吸光光度值與溶液木質(zhì)素含量之間的線性回歸方程。8棉花纖維中苯丙烷類化合物的測定8.1準(zhǔn)確稱取0.10g清洗過的棉纖維，置于30mL血清瓶(聚四氟乙烯內(nèi)墊的瓶蓋)內(nèi)，加5mL酸化乙酰溴溶液，充分混勻后旋緊瓶蓋，置于電熱恒溫振蕩水浴鍋中，70℃輕緩震蕩(每分鐘約60rpm)水浴105min;8.2反應(yīng)完成后將血清瓶取出置于冰浴中快速冷卻以終止反應(yīng)。加10mL冰乙酸將反應(yīng)溶液轉(zhuǎn)入50mL容量瓶內(nèi)，加4mol/LNaOH4.5mL混勻后，再加入5mol/L鹽酸羥胺1.5mL混勻，用冰乙酸定容至50mL;8.3空白背景溶液的配制：5mL酸化乙酰溴溶液中加10mL冰乙酸，加4mol/L·NaOH4.5mL混勻后，再次加5mol/L鹽酸羥胺1.5mL混勻，用冰乙酸定容至50mL,靜止30min;8.4以不含木質(zhì)素的空白背景溶液為基礎(chǔ)，用紫外分光光度計在280nm處測定吸光值。如果測定的吸光度值不在所用的標(biāo)準(zhǔn)曲線的吸光值范圍內(nèi)，則用冰乙酸稀釋所測溶液。8.5棉花纖維中苯丙烷類化合物含量的計算8.5.1根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和測定溶液的吸光度值計算溶液的濃度C=a+b×AB?80式中：C——待測提取液的濃度，ug/mL;a——回歸方程的截距；b——回歸方程的回歸系數(shù)；AB?80——待測溶液在280nm處的吸光值。DB65/T3191—20108.5.2根據(jù)溶液濃度、樣品定