分子診斷樣品制備技術(shù)日期:目錄CATALOGUE02.預(yù)處理技術(shù)規(guī)范04.質(zhì)量控制體系05.自動(dòng)化技術(shù)應(yīng)用01.樣品采集與保存03.核酸提取核心方法06.臨床應(yīng)用適配策略樣品采集與保存01生物樣品類型選擇標(biāo)準(zhǔn)樣品類型根據(jù)分子診斷的需求，選擇合適的生物樣品類型，如血液、組織、細(xì)胞、分泌物等，不同類型的樣品包含的生物分子信息不同。樣品質(zhì)量要求樣品新鮮、無(wú)污染、無(wú)降解，且具有一定的代表性，能夠真實(shí)反映患者體內(nèi)的病理生理狀態(tài)。采集量根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的需求，確定采集的生物樣品量，既要滿足檢測(cè)需求，又不能過(guò)多浪費(fèi)。采集容器與抗凝劑要求采集容器選擇對(duì)生物分子無(wú)吸附、無(wú)抑制、無(wú)污染的惰性材料制成的容器，如玻璃試管、聚丙烯管等。01抗凝劑選擇根據(jù)樣品類型和檢測(cè)項(xiàng)目的要求，選擇合適的抗凝劑，避免血液凝固對(duì)分子診斷的影響。02容器處理采集前需對(duì)容器進(jìn)行清洗、消毒、干燥等處理，確保容器內(nèi)無(wú)雜質(zhì)、無(wú)殘留。03運(yùn)輸與暫存條件控制運(yùn)輸溫度根據(jù)生物樣品的特性，選擇合適的運(yùn)輸溫度，避免樣品在運(yùn)輸過(guò)程中發(fā)生變質(zhì)或降解。運(yùn)輸時(shí)間盡量縮短樣品在運(yùn)輸過(guò)程中的時(shí)間，確保樣品盡快送達(dá)實(shí)驗(yàn)室。暫存條件對(duì)于不能及時(shí)檢測(cè)的樣品，需在適當(dāng)?shù)臏囟取穸?、光照等條件下進(jìn)行暫存，以保證樣品的質(zhì)量和穩(wěn)定性。預(yù)處理技術(shù)規(guī)范02細(xì)胞裂解方法與適用場(chǎng)景化學(xué)裂解法超聲裂解法機(jī)械裂解法酶解法適用于細(xì)胞質(zhì)組分和蛋白質(zhì)分析，通過(guò)加入化學(xué)試劑破壞細(xì)胞膜，釋放細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)。適用于組織、細(xì)胞等樣品的均質(zhì)化，通過(guò)機(jī)械破碎細(xì)胞膜，釋放細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)。適用于細(xì)胞和小分子物質(zhì)的破碎，利用超聲波產(chǎn)生的空化效應(yīng)破壞細(xì)胞膜，釋放細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)。適用于特定細(xì)胞和組織，通過(guò)加入特定的酶，破壞細(xì)胞膜或細(xì)胞壁，釋放細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)。干擾物質(zhì)去除策略通過(guò)加入化學(xué)試劑或改變?nèi)芤簵l件，使干擾物質(zhì)沉淀下來(lái)，從而分離和去除。沉淀法利用不同物質(zhì)在層析介質(zhì)中的吸附或溶解能力不同，將干擾物質(zhì)分離出去。利用不同物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)不同，通過(guò)色譜柱將干擾物質(zhì)分離。層析法利用磁場(chǎng)作用，將帶有磁性的顆粒與樣品中的干擾物質(zhì)分離。磁分離技術(shù)01020403高效液相色譜法（HPLC）濃縮與稀釋操作標(biāo)準(zhǔn)濃縮操作根據(jù)樣品的性質(zhì)，選擇合適的濃縮方法，如旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、膜濃縮等，提高目標(biāo)組分的濃度。稀釋操作根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，將濃縮后的樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂專源_保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。濃縮稀釋倍數(shù)計(jì)算根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和樣品性質(zhì)，計(jì)算濃縮和稀釋的倍數(shù)，確保樣品濃度在實(shí)驗(yàn)所需范圍內(nèi)。濃縮稀釋過(guò)程監(jiān)控在濃縮和稀釋過(guò)程中，要定時(shí)監(jiān)控樣品的濃度和質(zhì)量，確保操作過(guò)程的穩(wěn)定性和可控性。核酸提取核心方法03化學(xué)裂解-沉淀法流程樣本處理→化學(xué)裂解→沉淀→洗滌→溶解。流程優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)利用化學(xué)試劑使樣品中的核酸與蛋白質(zhì)等雜質(zhì)分離，再通過(guò)沉淀的方式將核酸提取出來(lái)。操作簡(jiǎn)便、成本低廉，適用于大量樣本的初步處理。提取純度較低，可能存在化學(xué)殘留，對(duì)后續(xù)PCR擴(kuò)增等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生干擾。原理磁珠法自動(dòng)化適配性原理優(yōu)點(diǎn)自動(dòng)化流程缺點(diǎn)利用磁珠表面特定的官能團(tuán)與目標(biāo)核酸進(jìn)行特異性結(jié)合，通過(guò)磁場(chǎng)的作用將磁珠與目標(biāo)核酸分離。樣本處理→磁珠結(jié)合→洗滌→洗脫→PCR擴(kuò)增。自動(dòng)化程度高、操作簡(jiǎn)便、提取速度快、純度高，適用于復(fù)雜樣本的核酸提取。成本較高，需要特定的磁珠和儀器設(shè)備。柱式純化技術(shù)優(yōu)化要點(diǎn)原理流程優(yōu)化要點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)利用不同物質(zhì)在特定條件下的吸附與洗脫特性，將目標(biāo)核酸純化出來(lái)。樣本處理→過(guò)柱→洗滌→洗脫→PCR擴(kuò)增。選擇適當(dāng)?shù)闹?、洗脫條件以及洗脫液，以提高核酸的純度和回收率。純化效果好、純度高、回收率高，適用于多種樣本類型的核酸提取。操作相對(duì)繁瑣，需要一定的實(shí)驗(yàn)技能。質(zhì)量控制體系04純度與濃度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)紫外分光光度法利用特定波長(zhǎng)下樣品對(duì)光的吸收特性，檢測(cè)樣品中核酸或蛋白質(zhì)的濃度。質(zhì)譜法通過(guò)樣品分子的質(zhì)荷比（質(zhì)量-電荷比）進(jìn)行測(cè)定，可準(zhǔn)確測(cè)量樣品中分子量的大小和分布，從而評(píng)估樣品的純度。熒光染料法利用熒光染料與DNA或RNA結(jié)合的特性，測(cè)定樣品中核酸的濃度。完整性評(píng)估技術(shù)（如電泳/芯片）電泳技術(shù)利用電場(chǎng)作用下樣品分子在介質(zhì)中的遷移速率進(jìn)行分離和鑒定，評(píng)估樣品的完整性。芯片技術(shù)將生物分子固定在芯片表面，通過(guò)樣品與芯片表面的生物分子相互作用，檢測(cè)樣品中是否存在特定生物分子，評(píng)估樣品的完整性。內(nèi)參基因選擇原則適用性內(nèi)參基因應(yīng)在不同組織或細(xì)胞中廣泛表達(dá)，適用于多種實(shí)驗(yàn)條件。03內(nèi)參基因應(yīng)與目標(biāo)基因無(wú)同源序列，避免非特異性擴(kuò)增。02特異性穩(wěn)定性內(nèi)參基因應(yīng)在各種實(shí)驗(yàn)條件下穩(wěn)定表達(dá)，不受外界因素干擾。01自動(dòng)化技術(shù)應(yīng)用05全自動(dòng)提取儀操作規(guī)范操作前準(zhǔn)備檢查全自動(dòng)提取儀的電源、試劑和耗材是否充足，確保設(shè)備處于良好狀態(tài)。01操作步驟按照儀器說(shuō)明書和程序設(shè)置，將樣本放入全自動(dòng)提取儀中，啟動(dòng)儀器進(jìn)行提取。02操作注意事項(xiàng)操作過(guò)程中需保持儀器清潔，避免交叉污染；定期維護(hù)儀器，確保其正常運(yùn)行。03高通量樣本并行處理樣本處理效率采用高通量樣本處理技術(shù)，可同時(shí)處理大量樣本，提高實(shí)驗(yàn)效率。樣本處理質(zhì)量通過(guò)優(yōu)化提取條件和流程，確保每個(gè)樣本的提取質(zhì)量穩(wěn)定可靠。樣本兼容性全自動(dòng)提取生產(chǎn)線可適用于不同類型的樣本，如血液、組織、細(xì)胞等。防污染控制機(jī)制實(shí)驗(yàn)環(huán)境控制全自動(dòng)提取生產(chǎn)線應(yīng)放置在潔凈、干燥、無(wú)污染的環(huán)境中，以減少外部污染對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。試劑和耗材管理使用高質(zhì)量的試劑和耗材，并嚴(yán)格遵循使用說(shuō)明，避免污染和浪費(fèi)。儀器清潔與消毒每次使用前后均對(duì)全自動(dòng)提取儀進(jìn)行清潔和消毒，減少污染風(fēng)險(xiǎn)。臨床應(yīng)用適配策略06病原體檢測(cè)樣本處理根據(jù)病原體特性和感染部位選擇合適的采集方法，確保樣本的代表性。樣本采集對(duì)采集的樣本進(jìn)行恰當(dāng)?shù)奶幚恚ǚ蛛x、純化、濃縮等，以提高檢測(cè)的靈敏度和特異性。樣本處理應(yīng)用分子診斷技術(shù)檢測(cè)樣本中的病原體核酸或相關(guān)標(biāo)志物，以確定感染類型和病原體種類。病原體檢測(cè)腫瘤基因分析預(yù)處理樣本篩選根據(jù)腫瘤類型和基因變異特點(diǎn)，選擇合適的樣本類型，如組織、血液、尿液等。01樣本處理與質(zhì)量控制對(duì)樣本進(jìn)行精細(xì)的處理和質(zhì)量控制，以確保基因分析的準(zhǔn)確性和可靠性。02基因突變檢測(cè)應(yīng)用分子診斷技術(shù)檢測(cè)腫瘤相關(guān)基因的突變情況，為