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ICS71.100.70T/SHRH007-Cosmetics-InVitroSkinIrritationTest 目前 范 5試驗結(jié) 本方法參考《InVitrosafetytestingforskinirritationusingthe3Dreconstructedhumanepidemis皮膚刺激性skin細胞活力cell半數(shù)有效時間medianeffectiveET50medianeffectivetime（半數(shù)有效時間-2,5二苯基-2氫-四氮唑溴鹽ODOpticalDensity(吸光度PBSphosphatebufferedsaline（磷酸鹽緩沖液表 3D表皮模型24個模型/4℃,EpiRecovery5mL4℃,表 博士德4℃6TritonX-SIGMA/室溫,2-20℃1國藥集團化學(xué)試劑有限公司室溫,2表 24MTT63D963D3D3（續(xù)）3D500mL用于盛裝PBS3D2000mL用于PBS3D6孔板每孔中添加0.9mLEpiRecoveryEpiRecovery培養(yǎng)液放入4℃冰箱將放有模型的6孔板全部轉(zhuǎn)移至CO2培養(yǎng)箱（37±1℃、5±1%CO2、95%相對濕度）（183h配置1%（V/V）TritonX-100溶液。使用正壓移液器吸取100μLTritonX-100，加入到10mL無菌離心管中，再向離心管中補加9900μLPBS溶液，吹打溶解后，用0.22μm濾器過濾，盛裝，2h，4h6h16h24h，6h，16h，24h添加0.9mL的EpiRecovery培養(yǎng)液。為樣品組各時間點準(zhǔn)備新的6孔板，同一檢測時間點的兩液體受試物：對照組（1%(V/V)TritonX-100）和樣品組的模型表面給藥量為80μL，采固體受試物：先在模型內(nèi)表面加入80μLPBS潤濕表面，再稱取80mg固體粉末均勻鋪展于模型表面。對照組（1%(V/V)TritonX-100）給藥量為80μL。給藥后，用鑷子輕輕晃外表面，后用無菌棉簽輕輕拭去模型內(nèi)、外殘留液體。每個模型的清洗總時間控制在1根據(jù)模型總數(shù)量準(zhǔn)備24孔板，并做相應(yīng)標(biāo)記。每孔加入0.3mLMTT工作液。注意：避光模型的24孔板放置于CO2培養(yǎng)箱中（37±1℃、5±1%CO2、95%相對濕度3h±5min。參考文 CostinGE,RaabeH,CurrenR.InVitrosafetytestingforskinirritationusingthe3Dreconstructedhumanepidemis[

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