BD流式細(xì)胞儀技術(shù)全解析演講人：日期:CATALOGUE目錄02儀器結(jié)構(gòu)與功能模塊01技術(shù)原理與基礎(chǔ)03核心應(yīng)用場(chǎng)景04標(biāo)準(zhǔn)操作流程05維護(hù)與故障排除06性能評(píng)估指標(biāo)技術(shù)原理與基礎(chǔ)01流式細(xì)胞術(shù)核心工作原理細(xì)胞的流動(dòng)與液流系統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)通過(guò)液流系統(tǒng)將細(xì)胞懸浮液送入檢測(cè)區(qū)，在高壓驅(qū)動(dòng)下使細(xì)胞以單個(gè)形式通過(guò)檢測(cè)區(qū)。光學(xué)檢測(cè)與信號(hào)處理數(shù)據(jù)采集與分析細(xì)胞通過(guò)檢測(cè)區(qū)時(shí)，被激光照射并產(chǎn)生散射光和熒光信號(hào)，這些信號(hào)被光學(xué)系統(tǒng)接收并轉(zhuǎn)化為電信號(hào)進(jìn)行處理。經(jīng)過(guò)信號(hào)處理后，得到的數(shù)據(jù)可以用于細(xì)胞計(jì)數(shù)、大小分析、內(nèi)部結(jié)構(gòu)分析等多種參數(shù)分析，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的定量分析和分選。123光學(xué)系統(tǒng)與信號(hào)檢測(cè)機(jī)制流式細(xì)胞術(shù)通常采用激光作為光源，并通過(guò)光束成形技術(shù)將激光聚焦到極小的光點(diǎn)，以保證檢測(cè)精度。光源與光束成形散射光檢測(cè)熒光信號(hào)檢測(cè)當(dāng)細(xì)胞通過(guò)光束時(shí)，會(huì)產(chǎn)生散射光，散射光的角度和強(qiáng)度與細(xì)胞的形態(tài)、大小、結(jié)構(gòu)等特征相關(guān)，可以用來(lái)分析細(xì)胞形態(tài)和種類(lèi)。細(xì)胞經(jīng)過(guò)熒光染料標(biāo)記后，在激光照射下會(huì)產(chǎn)生熒光信號(hào)，熒光信號(hào)的強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)熒光染料的濃度相關(guān)，可以用來(lái)分析細(xì)胞內(nèi)特定成分的含量。多色熒光標(biāo)記技術(shù)特點(diǎn)通過(guò)多色熒光標(biāo)記技術(shù)，可以同時(shí)檢測(cè)一個(gè)細(xì)胞上的多個(gè)參數(shù)，如細(xì)胞表面標(biāo)記、細(xì)胞內(nèi)成分等，提高了分析的準(zhǔn)確性和靈敏度。多參數(shù)分析多色熒光標(biāo)記技術(shù)采用高靈敏度的熒光染料和檢測(cè)技術(shù)，可以檢測(cè)到極低濃度的熒光信號(hào)，提高了檢測(cè)的靈敏度。高靈敏度檢測(cè)多色熒光標(biāo)記技術(shù)得到的數(shù)據(jù)可以通過(guò)計(jì)算機(jī)進(jìn)行處理和分析，實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)的可視化展示和多種參數(shù)的綜合分析。數(shù)據(jù)分析與可視化儀器結(jié)構(gòu)與功能模塊02液流控制系統(tǒng)組件樣品池容納待測(cè)樣品，確保細(xì)胞在檢測(cè)過(guò)程中處于良好的液態(tài)環(huán)境。03提供穩(wěn)定的液流，確保細(xì)胞在檢測(cè)區(qū)域中的準(zhǔn)確位置。02液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)樣品引入系統(tǒng)用于將待測(cè)樣品引入至檢測(cè)區(qū)域，確保樣品在檢測(cè)過(guò)程中保持穩(wěn)定。01激光光源488nm藍(lán)色激光器和640nm紅色激光器（AccuriC6Plus），或雙激光系統(tǒng)（488nm氬離子激光和635nm紅色二極管激光，F(xiàn)ACSCalibur）。激光器與濾光片配置濾光片用于選擇特定波長(zhǎng)的熒光信號(hào)，濾除干擾信號(hào)，提高檢測(cè)靈敏度。熒光檢測(cè)器用于接收樣品中的熒光信號(hào)，并將其轉(zhuǎn)換為電信號(hào)進(jìn)行后續(xù)分析。電子信號(hào)處理單元信號(hào)放大將微弱的熒光信號(hào)進(jìn)行放大，以便后續(xù)處理和檢測(cè)。01模數(shù)轉(zhuǎn)換將連續(xù)的模擬信號(hào)轉(zhuǎn)換為離散的數(shù)字信號(hào)，便于計(jì)算機(jī)分析和處理。02數(shù)據(jù)處理與分析通過(guò)專業(yè)分析軟件對(duì)收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析，得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。03核心應(yīng)用場(chǎng)景03臨床免疫分型診斷利用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行淋巴細(xì)胞亞群分析，輔助臨床判斷免疫功能障礙或免疫增殖性疾病。淋巴細(xì)胞亞群分析通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)白血病細(xì)胞的免疫表型，輔助診斷和分類(lèi)白血病。白血病免疫分型監(jiān)測(cè)免疫治療前后淋巴細(xì)胞亞群的變化，評(píng)估免疫治療的效果。免疫治療效果評(píng)估細(xì)胞周期與凋亡研究細(xì)胞周期與凋亡調(diào)控機(jī)制研究探討不同藥物或處理對(duì)細(xì)胞周期和凋亡的影響，揭示其調(diào)控機(jī)制。03通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)指標(biāo)，如磷脂酰絲氨酸外翻、DNA斷裂等，評(píng)估細(xì)胞凋亡程度。02細(xì)胞凋亡檢測(cè)細(xì)胞周期分析利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞DNA含量，分析細(xì)胞周期各時(shí)相的分布，了解細(xì)胞增殖狀態(tài)。01微生物快速檢測(cè)技術(shù)利用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)菌進(jìn)行快速鑒定和分類(lèi)，提高臨床微生物檢測(cè)效率。細(xì)菌快速鑒定真菌檢測(cè)病毒顆粒檢測(cè)通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)真菌的特定熒光標(biāo)記物，實(shí)現(xiàn)對(duì)真菌的快速檢測(cè)和鑒定。利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)病毒顆粒的特定熒光信號(hào)，輔助病毒學(xué)研究和臨床診斷。標(biāo)準(zhǔn)操作流程04樣本制備與染色規(guī)范01樣本制備收集待測(cè)細(xì)胞，制備成單細(xì)胞懸液，并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，確保細(xì)胞濃度在適宜范圍內(nèi)。02染色規(guī)范選擇合適的熒光染料，按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行染色，注意控制染色時(shí)間、溫度和染料濃度，避免非特異性染色和細(xì)胞損傷。儀器校準(zhǔn)與參數(shù)設(shè)置使用標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行儀器校準(zhǔn)，確保儀器各項(xiàng)性能指標(biāo)處于最佳狀態(tài)，包括激光功率、熒光靈敏度、散射光通道等。儀器校準(zhǔn)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，設(shè)置合適的檢測(cè)參數(shù)，包括熒光通道選擇、電壓調(diào)節(jié)、閾值設(shè)定等，以確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。參數(shù)設(shè)置數(shù)據(jù)采集與分析步驟數(shù)據(jù)采集通過(guò)儀器軟件控制，進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，包括細(xì)胞信號(hào)的獲取、轉(zhuǎn)換和存儲(chǔ)，同時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞的散射光和熒光信號(hào)。01數(shù)據(jù)分析利用專業(yè)分析軟件，對(duì)采集的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析，包括細(xì)胞群體的識(shí)別、細(xì)胞周期分析、多參數(shù)散點(diǎn)圖分析等，以獲取有價(jià)值的生物學(xué)信息。02維護(hù)與故障排除05每次實(shí)驗(yàn)前、后需用75%乙醇或?qū)Ｓ们鍧嵰翰潦脙x器表面及樣品室，避免樣本殘留或污染。日常清潔與消毒要求清潔流程每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，需對(duì)接觸樣本的部件進(jìn)行紫外消毒或化學(xué)浸泡消毒，確保無(wú)菌狀態(tài)。消毒措施定期拆卸清洗進(jìn)樣針、樣品杯等易污染部件，防止堵塞和污染。部件拆卸與清洗常見(jiàn)報(bào)錯(cuò)代碼解析報(bào)錯(cuò)代碼E01報(bào)錯(cuò)代碼E02報(bào)錯(cuò)代碼E03報(bào)錯(cuò)代碼E04表示儀器無(wú)法啟動(dòng)，可能由于電源故障或儀器內(nèi)部組件損壞，需檢查電源連接及儀器內(nèi)部狀態(tài)。表示激光系統(tǒng)異常，可能由于激光管老化或激光源污染，需檢查激光管狀態(tài)及更換光源。表示樣品流動(dòng)異常，可能由于樣品管堵塞或進(jìn)樣針位置不正確，需檢查樣品管及進(jìn)樣針狀態(tài)。表示數(shù)據(jù)異常，可能由于檢測(cè)器故障或數(shù)據(jù)處理軟件異常，需檢查檢測(cè)器及軟件狀態(tài)。關(guān)鍵耗材更換周期激光管根據(jù)使用頻率和功率衰減情況，建議每半年至一年更換一次，以確保激光穩(wěn)定及檢測(cè)靈敏度。02040301濾光片與熒光染料根據(jù)使用頻率及熒光染料穩(wěn)定性，定期更換濾光片及熒光染料，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。進(jìn)樣針與樣品杯每次實(shí)驗(yàn)后需及時(shí)清洗，如發(fā)現(xiàn)有磨損或污染需立即更換，防止樣品交叉污染。清洗液與消毒液定期更換清洗液與消毒液，防止細(xì)菌滋生及污染樣品，建議每周更換一次。性能評(píng)估指標(biāo)06靈敏度與分辨率標(biāo)準(zhǔn)靈敏度BD流式細(xì)胞儀的熒光靈敏度可達(dá)到FITC水平，能夠檢測(cè)到微弱的熒光信號(hào)，確保對(duì)低表達(dá)蛋白的準(zhǔn)確檢測(cè)。01分辨率儀器具有高分辨率，能夠清晰地區(qū)分細(xì)胞群體中的不同細(xì)胞類(lèi)型或狀態(tài)，如區(qū)分細(xì)胞的大小、形態(tài)和熒光強(qiáng)度等。02熒光補(bǔ)償驗(yàn)證方法01熒光補(bǔ)償原理熒光補(bǔ)償是通過(guò)調(diào)整檢測(cè)器對(duì)不同熒光染料的靈敏度，消除熒光染料之間的重疊和干擾，提高多色熒光檢測(cè)的準(zhǔn)確性。02補(bǔ)償驗(yàn)證方法采用已知熒光染料標(biāo)記的樣品進(jìn)行熒光補(bǔ)償調(diào)整，驗(yàn)證補(bǔ)