hMLH1基因蛋白表達：食管鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵分子關(guān)聯(lián)探究一、引言1.1研究背景食管鱗癌（EsophagealSquamousCellCarcinoma，ESCC）作為食管癌中最主要的病理類型，在全球惡性腫瘤疾病譜中占據(jù)著不容忽視的地位。據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥負(fù)擔(dān)數(shù)據(jù)顯示，食管癌新發(fā)病例數(shù)約60.4萬，死亡病例數(shù)約54.4萬，分別位居全球惡性腫瘤發(fā)病與死亡的第7位和第6位，嚴(yán)重威脅著人類的生命健康。在我國，食管鱗癌更是具有較高的發(fā)病率和死亡率，是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，尤其在河南、河北、山西等北方地區(qū)，發(fā)病率顯著高于南方地區(qū)。其發(fā)病原因較為復(fù)雜，與多種因素相關(guān)，例如長期食用過熱、過硬、粗糙食物，亞硝胺類化合物攝入，人乳頭瘤病毒（HPV）感染，以及遺傳易感性等。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是食管鱗癌主要的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移途徑之一，在食管鱗癌的發(fā)展進程中扮演著關(guān)鍵角色。一旦癌細(xì)胞發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，往往意味著疾病進入了更為嚴(yán)重的階段，極大地影響患者的預(yù)后情況。眾多臨床研究數(shù)據(jù)表明，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌患者，其5年生存率明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。相關(guān)統(tǒng)計顯示，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌患者5年生存率可達40%-60%，而出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移后，5年生存率急劇下降至10%-30%，生存時間顯著縮短，生活質(zhì)量也嚴(yán)重下降。此外，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移還與腫瘤的復(fù)發(fā)密切相關(guān)，增加了治療的復(fù)雜性和難度，給患者和家庭帶來沉重的經(jīng)濟與心理負(fù)擔(dān)。hMLH1基因蛋白（humanMutLhomolog1）作為DNA錯配修復(fù)（DNAmismatchrepair，MMR）系統(tǒng)的核心組成部分，在維持基因組穩(wěn)定性方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。DNA錯配修復(fù)系統(tǒng)能夠識別并修復(fù)DNA復(fù)制過程中出現(xiàn)的堿基錯配、小片段插入或缺失等錯誤，確保遺傳信息準(zhǔn)確無誤地傳遞給子代細(xì)胞。當(dāng)hMLH1基因發(fā)生突變或其蛋白表達異常時，DNA錯配修復(fù)功能受損，基因組不穩(wěn)定性增加，使得細(xì)胞更容易積累致癌性突變，進而促進腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。在多種惡性腫瘤的研究中，hMLH1基因蛋白的異常表達與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移等過程緊密相關(guān)。例如，在結(jié)直腸癌中，hMLH1基因啟動子區(qū)域的高甲基化導(dǎo)致其蛋白表達缺失，進而引發(fā)微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MicrosatelliteInstability，MSI），與結(jié)直腸癌的發(fā)生及不良預(yù)后密切相關(guān)；在胃癌中，hMLH1蛋白表達下調(diào)與腫瘤的分化程度、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。因此，深入探究hMLH1基因蛋白在食管鱗癌中的表達情況及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，對于揭示食管鱗癌的發(fā)病機制、評估患者預(yù)后以及尋找潛在的治療靶點，均具有極為重要的理論意義和臨床應(yīng)用價值。1.2研究目的與意義本研究旨在深入探究hMLH1基因蛋白在食管鱗癌組織中的表達水平，并系統(tǒng)分析其表達情況與食管鱗癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的內(nèi)在聯(lián)系，明確hMLH1基因蛋白表達異常在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中的作用機制，為食管鱗癌的早期診斷、預(yù)后評估以及靶向治療提供重要的理論依據(jù)和潛在的分子靶點。從理論意義層面來看，深入剖析hMLH1基因蛋白與食管鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，有助于進一步揭示食管鱗癌的發(fā)病機制。目前，雖然食管鱗癌的研究取得了一定進展，但對于其發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的分子機制尚未完全明確。hMLH1基因作為DNA錯配修復(fù)系統(tǒng)的關(guān)鍵成員，其蛋白表達異?？赡軐?dǎo)致基因組不穩(wěn)定，進而引發(fā)一系列致癌事件。通過研究hMLH1基因蛋白在食管鱗癌中的表達變化及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)聯(lián)，能夠更深入地了解食管鱗癌的分子生物學(xué)特性，填補該領(lǐng)域在發(fā)病機制研究方面的部分空白，豐富腫瘤發(fā)生發(fā)展的理論體系，為后續(xù)的基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用提供堅實的理論支撐。在臨床實踐意義方面，本研究具有多方面的重要價值。首先，在早期診斷上，若能確定hMLH1基因蛋白表達與食管鱗癌的密切關(guān)系，有望將其作為一種新的生物標(biāo)志物用于食管鱗癌的早期篩查和診斷。目前，食管鱗癌的早期診斷手段存在一定局限性，如食管鏡檢查為侵入性操作，部分患者難以接受，且早期病變在影像學(xué)檢查中可能不明顯。而檢測hMLH1基因蛋白表達可通過非侵入性或微創(chuàng)方式獲取標(biāo)本，具有操作簡便、患者依從性好等優(yōu)點，有助于提高食管鱗癌的早期診斷率，實現(xiàn)疾病的早發(fā)現(xiàn)、早治療。其次，在預(yù)后評估中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響食管鱗癌患者預(yù)后的關(guān)鍵因素之一。明確hMLH1基因蛋白表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，能夠為臨床醫(yī)生提供更準(zhǔn)確的預(yù)后評估指標(biāo)。醫(yī)生可根據(jù)患者腫瘤組織中hMLH1基因蛋白的表達水平，結(jié)合其他臨床病理因素，更精準(zhǔn)地預(yù)測患者的預(yù)后情況，制定個性化的治療方案，合理安排隨訪計劃，提高患者的生存質(zhì)量和生存期。最后，從靶向治療角度出發(fā)，hMLH1基因蛋白可能成為食管鱗癌潛在的治療靶點。對于hMLH1基因蛋白表達異常的患者，開發(fā)針對該靶點的靶向治療藥物或治療策略，有望為食管鱗癌的治療開辟新途徑，提高治療效果，減少傳統(tǒng)治療方法的不良反應(yīng)，為患者帶來更多的生存希望。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1食管鱗癌概述2.1.1食管鱗癌的定義與病理特征食管鱗癌是一種起源于食管鱗狀上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，在食管癌的眾多病理類型中占據(jù)主導(dǎo)地位，在我國約占食管癌病例的90%以上。從癌細(xì)胞形態(tài)來看，食管鱗癌細(xì)胞通常呈現(xiàn)多邊形或不規(guī)則形，細(xì)胞邊界相對清晰，胞質(zhì)豐富且嗜酸性。在高分化的食管鱗癌組織中，癌細(xì)胞可出現(xiàn)明顯的角化珠結(jié)構(gòu)，這是其典型的形態(tài)學(xué)特征之一，角化珠由多層角化的鱗狀上皮細(xì)胞呈同心圓狀排列而成；而在低分化的食管鱗癌中，癌細(xì)胞的形態(tài)則更為多樣，異型性明顯，角化珠少見或缺乏，細(xì)胞間橋也不明顯。在組織結(jié)構(gòu)方面，食管鱗癌的癌組織常呈巢狀、條索狀或團塊狀分布，向食管壁內(nèi)浸潤性生長。癌巢周邊的癌細(xì)胞呈柵欄狀排列，與周圍的間質(zhì)組織分界相對清楚，但隨著腫瘤的進展，癌組織會侵犯食管的肌層、外膜等結(jié)構(gòu)，破壞食管的正常組織結(jié)構(gòu)。早期食管鱗癌病變多局限于食管黏膜層和黏膜下層，未侵犯肌層，此時病變范圍相對較小，可能僅表現(xiàn)為黏膜的輕度糜爛、粗糙或小結(jié)節(jié)狀隆起。而進展期食管鱗癌則可侵犯食管全層，甚至突破食管外膜，向周圍組織和器官浸潤，如侵犯氣管、支氣管可導(dǎo)致食管氣管瘺，侵犯主動脈可引起致命性大出血。食管鱗癌在大體形態(tài)上可分為多種類型，常見的有髓質(zhì)型、蕈傘型、潰瘍型和縮窄型。髓質(zhì)型食管鱗癌最為常見，腫瘤呈灰白色，質(zhì)地較軟，似腦髓狀，常累及食管全周，使管壁明顯增厚、管腔狹窄，腫瘤向食管壁內(nèi)外生長，表面可有深淺不一的潰瘍；蕈傘型腫瘤呈蘑菇狀或菜花狀向食管腔內(nèi)突出，邊界較清楚，有蒂或無蒂，多不累及食管全周，其表面多有糜爛或潰瘍；潰瘍型腫瘤表面形成較深的潰瘍，潰瘍邊緣不規(guī)則，底部凹凸不平，可深達肌層甚至穿透食管壁，此型出血和穿孔的風(fēng)險相對較高；縮窄型腫瘤呈環(huán)形生長，累及食管全周，使食管壁明顯增厚、管腔高度狹窄，患者吞咽困難癥狀往往較為嚴(yán)重，病變較短，但對周圍組織的浸潤相對較輕。不同大體類型的食管鱗癌在生物學(xué)行為、治療方式及預(yù)后等方面可能存在一定差異。2.1.2食管鱗癌的發(fā)病機制與影響因素食管鱗癌的發(fā)病機制是一個復(fù)雜的、多步驟的過程，涉及多種基因改變、細(xì)胞信號通路異常以及環(huán)境因素的相互作用。從內(nèi)在機制來看，基因突變在食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。原癌基因的激活和抑癌基因的失活是導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的重要原因。例如，Ras基因家族中的K-Ras基因，其突變可使Ras蛋白持續(xù)激活，進而激活下游的絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路，促進細(xì)胞的增殖、分化和存活，導(dǎo)致細(xì)胞的異常生長和腫瘤的發(fā)生；抑癌基因p53在維持細(xì)胞基因組穩(wěn)定性、調(diào)控細(xì)胞周期和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等方面發(fā)揮著重要作用，在食管鱗癌中，p53基因常發(fā)生突變或缺失，使其失去正常的抑癌功能，導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控和對凋亡的抵抗。此外，染色體異常也是食管鱗癌發(fā)病的重要特征之一，如染色體的缺失、擴增和易位等，這些異?？蓪?dǎo)致基因表達的改變和細(xì)胞生物學(xué)行為的異常。例如，17p染色體上的p53基因缺失、3p染色體上多個抑癌基因的缺失等，都與食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。外在影響因素在食管鱗癌的發(fā)病中也占據(jù)重要地位。長期熱燙飲食是食管鱗癌的一個重要危險因素，過熱的食物可反復(fù)刺激食管黏膜，導(dǎo)致食管黏膜上皮細(xì)胞損傷、修復(fù)異常，進而引發(fā)細(xì)胞的異型增生和癌變。相關(guān)研究表明，經(jīng)常食用溫度超過65℃的熱飲或熱食，食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險可顯著增加。煙酒也是食管鱗癌的重要誘發(fā)因素，吸煙產(chǎn)生的尼古丁、焦油等多種致癌物質(zhì)，以及酒精對食管黏膜的直接刺激和損傷，都可破壞食管黏膜的屏障功能，促進致癌物的吸收，增加食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險。有研究顯示，長期大量吸煙和酗酒者，其食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險是普通人群的數(shù)倍。遺傳因素在食管鱗癌的發(fā)病中也不容忽視，某些家族中存在食管鱗癌的聚集現(xiàn)象，提示遺傳易感性在食管鱗癌發(fā)病中的作用。目前已發(fā)現(xiàn)多個與食管鱗癌遺傳易感性相關(guān)的基因位點，如位于染色體10q23上的PTEN基因多態(tài)性、染色體6p21.3上的HLA-DQA1基因多態(tài)性等，這些基因多態(tài)性可能影響個體對致癌因素的易感性，從而增加食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險。此外，環(huán)境因素中的亞硝胺類化合物也是一類強致癌物，廣泛存在于腌制食品、霉變食物和某些加工食品中，長期攝入含有亞硝胺的食物，可在體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化為具有致癌活性的物質(zhì)，與食管黏膜細(xì)胞的DNA發(fā)生作用，導(dǎo)致基因突變和細(xì)胞癌變。2.1.3食管鱗癌的臨床癥狀與分期食管鱗癌的臨床癥狀與腫瘤的發(fā)展階段密切相關(guān)。在早期，由于腫瘤病變較小，對食管的正常功能影響較輕，患者往往缺乏典型的臨床癥狀，或僅表現(xiàn)出一些非特異性癥狀，如胸骨后不適、隱痛或燒灼感，吞咽食物時可能出現(xiàn)輕度的異物感、哽噎感或停滯感，這些癥狀通常較輕且呈間歇性發(fā)作，容易被患者忽視。隨著病情的進展，腫瘤逐漸增大，侵犯食管壁的范圍和深度增加，患者的癥狀也會逐漸加重。中晚期食管鱗癌患者最典型的癥狀是進行性吞咽困難，這是由于腫瘤導(dǎo)致食管管腔狹窄，阻礙食物通過所致。起初患者可能對固體食物的吞咽困難較為明顯，隨著病情惡化，半流質(zhì)食物、流質(zhì)食物甚至唾液也難以咽下。除吞咽困難外，患者還可能出現(xiàn)食管反流癥狀，這是因為腫瘤侵犯食管下括約肌，導(dǎo)致其功能失調(diào)，使胃內(nèi)容物反流至食管，反流物可刺激食管黏膜，引起燒心、胸痛等不適。此外，腫瘤侵犯周圍組織和器官還可引發(fā)一系列并發(fā)癥相關(guān)癥狀，如侵犯氣管、支氣管可導(dǎo)致咳嗽、咯血、呼吸困難，形成食管氣管瘺時，患者在進食時可出現(xiàn)劇烈嗆咳；侵犯縱隔內(nèi)的神經(jīng)、血管等結(jié)構(gòu)，可引起聲音嘶?。ê矸瞪窠?jīng)受侵）、Horner綜合征（交感神經(jīng)受侵）、上腔靜脈壓迫綜合征（上腔靜脈受侵）等。由于腫瘤的消耗、進食困難導(dǎo)致的營養(yǎng)攝入不足以及腫瘤釋放的一些細(xì)胞因子等因素，患者還常伴有消瘦、乏力、貧血、惡病質(zhì)等全身癥狀。國際通用的TNM分期系統(tǒng)是目前評估食管鱗癌病情嚴(yán)重程度和預(yù)后的重要工具。其中，T代表原發(fā)腫瘤的大小和侵犯深度，Tx表示原發(fā)腫瘤無法評估，T0表示無原發(fā)腫瘤證據(jù)，Tis表示原位癌（上皮內(nèi)癌，未侵犯固有層），T1表示腫瘤侵犯固有層、黏膜肌層或黏膜下層，T2表示腫瘤侵犯食管肌層，T3表示腫瘤侵犯食管外膜，T4表示腫瘤侵犯鄰近結(jié)構(gòu)（如氣管、支氣管、主動脈等），T4a表示腫瘤侵犯胸膜、心包、膈肌等可切除結(jié)構(gòu)，T4b表示腫瘤侵犯其他鄰近結(jié)構(gòu)（如主動脈、椎體、氣管等）不可切除。N代表區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，Nx表示區(qū)域淋巴結(jié)無法評估，N0表示無區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，N1表示有1-2個區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，N2表示有3-6個區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，N3表示有7個及以上區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。M代表遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況，Mx表示遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無法評估，M0表示無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，M1表示有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。根據(jù)T、N、M的不同組合，將食管鱗癌分為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期，分期越高，腫瘤的浸潤范圍越廣、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的可能性越大，患者的預(yù)后也越差。例如，Ⅰ期食管鱗癌通常為TisN0M0或T1N0M0，腫瘤局限于食管黏膜層或黏膜下層，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，此時患者的5年生存率相對較高，可達60%-90%；而Ⅳ期食管鱗癌為任何T、任何N、M1，腫瘤已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，患者的5年生存率往往低于20%，預(yù)后極差。準(zhǔn)確的臨床分期對于制定合理的治療方案、評估患者預(yù)后具有重要意義。2.2hMLH1基因蛋白相關(guān)知識2.2.1hMLH1基因蛋白的結(jié)構(gòu)與功能hMLH1基因定位于人類染色體3p21.3區(qū)域，其全長約70kb，包含19個外顯子。該基因的啟動子區(qū)域富含CpG島，其甲基化狀態(tài)對基因的表達調(diào)控起著關(guān)鍵作用。當(dāng)啟動子區(qū)域發(fā)生高甲基化時，可導(dǎo)致hMLH1基因轉(zhuǎn)錄抑制，進而影響其蛋白的表達。hMLH1基因編碼的蛋白由756個氨基酸組成，分子量約為85kDa。其蛋白結(jié)構(gòu)包含多個功能結(jié)構(gòu)域，N端的PMS1-interacting（PI）結(jié)構(gòu)域能夠與PMS1蛋白相互作用，形成異二聚體hMutLα（由hMLH1和PMS1組成），這一異二聚體是DNA錯配修復(fù)系統(tǒng)中的核心效應(yīng)分子。在PI結(jié)構(gòu)域之后是ATPase結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域具有ATP酶活性，能夠結(jié)合和水解ATP，為DNA錯配修復(fù)過程提供能量。C端則包含一個DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，負(fù)責(zé)識別并結(jié)合錯配的DNA區(qū)域。在DNA錯配修復(fù)過程中，hMLH1蛋白發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。當(dāng)DNA復(fù)制過程中出現(xiàn)堿基錯配、小片段插入或缺失等錯誤時，首先由錯配識別蛋白hMSH2和hMSH6形成的異二聚體hMutSα識別錯配位點，并與之結(jié)合。隨后，hMutLα（hMLH1和PMS1）被招募到錯配位點，與hMutSα相互作用形成穩(wěn)定的復(fù)合物。此時，hMLH1蛋白的ATPase結(jié)構(gòu)域結(jié)合ATP并發(fā)生構(gòu)象變化，激活核酸內(nèi)切酶活性。核酸內(nèi)切酶在錯配位點附近的DNA鏈上切割出切口，然后外切核酸酶從切口處開始降解含有錯配堿基的DNA片段。最后，DNA聚合酶以另一條正確的DNA鏈為模板，合成新的DNA片段填補缺口，并由DNA連接酶將新合成的片段與原有DNA鏈連接起來，從而完成DNA錯配的修復(fù)過程，確保DNA復(fù)制的準(zhǔn)確性和基因組的穩(wěn)定性。2.2.2hMLH1基因蛋白與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系hMLH1基因蛋白表達異常與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其主要通過影響基因組穩(wěn)定性來促進腫瘤的發(fā)生。當(dāng)hMLH1基因發(fā)生突變或其蛋白表達缺失時，DNA錯配修復(fù)功能受損。在DNA復(fù)制過程中，錯配的堿基無法被及時識別和修復(fù)，導(dǎo)致錯誤的堿基不斷累積，基因組不穩(wěn)定性增加。這種不穩(wěn)定性使得細(xì)胞更容易發(fā)生基因突變，包括原癌基因的激活和抑癌基因的失活。例如，原癌基因Ras在正常情況下受到嚴(yán)格的調(diào)控，其編碼的蛋白參與細(xì)胞的增殖、分化和存活等信號傳導(dǎo)過程。但當(dāng)基因組不穩(wěn)定時，Ras基因可能發(fā)生突變，使其編碼的Ras蛋白持續(xù)處于激活狀態(tài)，不斷激活下游的絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路，導(dǎo)致細(xì)胞過度增殖、分化異常，進而促進腫瘤的發(fā)生。同時，抑癌基因p53在維持基因組穩(wěn)定性、調(diào)控細(xì)胞周期和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等方面發(fā)揮著重要作用。在hMLH1基因蛋白表達異常的情況下，p53基因也更容易發(fā)生突變或缺失，使其失去正常的抑癌功能，細(xì)胞對DNA損傷的修復(fù)能力下降，無法及時清除受損細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞無限增殖和腫瘤的發(fā)展。此外，hMLH1基因蛋白表達異常還可導(dǎo)致微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MSI）的出現(xiàn)。微衛(wèi)星是基因組中廣泛存在的短串聯(lián)重復(fù)序列，其長度通常為1-6個堿基對。在正常細(xì)胞中，微衛(wèi)星序列的長度保持相對穩(wěn)定。但當(dāng)hMLH1基因蛋白表達異常時，DNA錯配修復(fù)系統(tǒng)無法有效修復(fù)微衛(wèi)星區(qū)域在復(fù)制過程中出現(xiàn)的錯誤，導(dǎo)致微衛(wèi)星序列長度發(fā)生改變，即出現(xiàn)微衛(wèi)星不穩(wěn)定性。MSI可影響多個基因的表達和功能，其中一些基因與細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移等過程密切相關(guān)。例如，MSI可導(dǎo)致一些細(xì)胞粘附分子基因的表達異常，使腫瘤細(xì)胞之間的粘附力下降，從而更容易脫離原發(fā)灶，發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。同時，MSI還可影響腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性，使腫瘤細(xì)胞對某些化療藥物產(chǎn)生耐藥性，增加腫瘤治療的難度。在多種腫瘤中，如結(jié)直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、胃癌等，都發(fā)現(xiàn)了hMLH1基因蛋白表達異常與MSI的密切關(guān)聯(lián)，且MSI狀態(tài)與腫瘤的臨床病理特征和預(yù)后密切相關(guān)。三、研究設(shè)計與方法3.1研究對象本研究選取[具體醫(yī)院名稱]在[開始時間]至[結(jié)束時間]期間收治的食管鱗癌患者作為研究對象。入選標(biāo)準(zhǔn)如下：經(jīng)術(shù)后病理確診為食管鱗癌；患者術(shù)前未接受過放療、化療或其他針對腫瘤的系統(tǒng)性治療，以避免這些治療手段對hMLH1基因蛋白表達及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)產(chǎn)生干擾；患者簽署知情同意書，自愿參與本研究，并能夠配合完成相關(guān)檢查和隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn)包括：合并其他惡性腫瘤，防止其他腫瘤對研究結(jié)果產(chǎn)生混雜影響；存在嚴(yán)重的心、肝、腎等重要臟器功能障礙，無法耐受手術(shù)或影響標(biāo)本采集與檢測；患有自身免疫性疾病或正在接受免疫抑制治療，此類情況可能影響機體的免疫狀態(tài)和基因表達；臨床資料不完整，如缺乏詳細(xì)的病理報告、影像學(xué)檢查結(jié)果等，無法準(zhǔn)確進行分析。在患者接受食管癌根治性手術(shù)過程中，由經(jīng)驗豐富的外科醫(yī)生按照標(biāo)準(zhǔn)化操作流程獲取食管鱗癌組織標(biāo)本。對于每一位患者，在腫瘤邊緣至少1cm處切取癌組織，確保所取組織具有代表性，包含足夠的癌細(xì)胞。標(biāo)本切取后，立即放入預(yù)先準(zhǔn)備好的含有10%中性福爾馬林固定液的標(biāo)本瓶中，固定時間為12-24小時，以保證組織形態(tài)和抗原性的穩(wěn)定。同時，對手術(shù)過程中清掃的相應(yīng)淋巴結(jié)進行仔細(xì)收集，按照解剖部位進行分組標(biāo)記，同樣放入10%中性福爾馬林固定液中固定。固定后的食管鱗癌組織標(biāo)本和淋巴結(jié)標(biāo)本常規(guī)進行石蠟包埋處理，制成石蠟切片，用于后續(xù)的免疫組織化學(xué)檢測等實驗分析。3.2實驗方法3.2.1免疫組織化學(xué)法檢測hMLH1基因蛋白表達免疫組織化學(xué)法是基于抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色，從而對組織細(xì)胞內(nèi)的抗原進行定位、定性及定量研究。在本研究中，采用免疫組織化學(xué)EnVision法來檢測hMLH1基因蛋白在食管鱗癌組織及相應(yīng)淋巴結(jié)中的表達情況。實驗開始前，先將石蠟切片從冰箱中取出，放置于60℃恒溫烤箱中烘烤30-60分鐘，目的是使蠟片水分蒸發(fā)和石蠟融化，確保組織切片牢固地貼附在玻片上。隨后進行脫蠟水化處理，將切片依次浸入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各10分鐘，以徹底清除切片上的石蠟；接著依次通過無水乙醇（Ⅰ）、無水乙醇（Ⅱ）各10分鐘，95%乙醇、70%乙醇、50%乙醇溶液各5分鐘，最后在蒸餾水中浸泡5分鐘，使切片逐步適應(yīng)水性環(huán)境。之后將切片置于PBS緩沖液中洗滌3次，每次3分鐘，以去除殘留的乙醇等物質(zhì)。由于在標(biāo)本固定和石蠟包埋過程中，抗原決定簇可能被遮蔽，因此需要進行抗原修復(fù)。將切片放入盛有0.01M檸檬酸鈉緩沖液（pH6.0）的容器中，置于微波爐中進行加熱修復(fù)。先以高火加熱至沸騰，然后轉(zhuǎn)低火維持微沸狀態(tài)10-15分鐘，使抗原決定簇重新暴露。修復(fù)完成后，取出切片自然冷卻至室溫，再用PBS緩沖液洗滌3次，每次3分鐘。為避免內(nèi)源性過氧化物酶對實驗結(jié)果產(chǎn)生干擾，需消除其活性。在切片表面滴加3%過氧化氫溶液，室溫下孵育5-10分鐘，之后用PBS緩沖液沖洗3次，每次3分鐘。接下來進行非特異性位點封閉，滴加適量的5%羊血清或BSA封閉液，室溫孵育30分鐘，以減少一抗的非特異性結(jié)合。一抗孵育是免疫組織化學(xué)實驗的關(guān)鍵步驟。根據(jù)前期預(yù)實驗結(jié)果，選擇合適稀釋度的兔抗人hMLH1單克隆抗體（如1:200-1:500稀釋，具體稀釋度依據(jù)抗體說明書及預(yù)實驗優(yōu)化結(jié)果確定），滴加在切片上，放入濕盒中，4℃冰箱孵育過夜，使一抗與目標(biāo)抗原充分結(jié)合。次日，將切片從冰箱中取出，室溫復(fù)溫30分鐘后，用PBS緩沖液洗滌3次，每次5分鐘。二抗孵育選用生物素標(biāo)記的山羊抗兔IgG抗體，按1:1000-1:2000的比例稀釋（根據(jù)抗體說明書及實驗條件確定），滴加在切片上，室溫孵育30-60分鐘。孵育結(jié)束后，同樣用PBS緩沖液洗滌3次，每次5分鐘。顯色步驟采用DAB顯色試劑盒進行。按照試劑盒說明書，將DAB顯色液A、B、C按一定比例混合均勻（如A液、B液、C液各1滴加入1ml蒸餾水中），滴加在切片上，室溫下顯色3-10分鐘，在顯微鏡下密切觀察顯色情況，待出現(xiàn)清晰的棕黃色陽性信號時，立即用蒸餾水沖洗終止顯色反應(yīng)。顯色完成后，用蘇木精復(fù)染細(xì)胞核。將切片浸入蘇木精染液中染色3-5分鐘，然后用自來水沖洗，再用1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，最后用自來水沖洗返藍。經(jīng)過梯度乙醇脫水（依次通過70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、無水乙醇各2-5分鐘）和二甲苯透明（二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各5分鐘）后，用中性樹膠封片，待封片膠干燥后，即可在顯微鏡下進行觀察。3.2.2數(shù)據(jù)分析方法本研究采用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件對實驗數(shù)據(jù)進行分析處理。對于計數(shù)資料，如hMLH1基因蛋白表達陽性率、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率等，以例數(shù)和百分比（n，%）表示，兩組間比較采用χ2檢驗；多組間比較若滿足χ2檢驗條件，采用Pearsonχ2檢驗，若不滿足則采用Fisher確切概率法。對于計量資料，如患者的年齡、腫瘤大小等，先進行正態(tài)性檢驗，符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA）；若數(shù)據(jù)不服從正態(tài)分布，則采用中位數(shù)（四分位數(shù)間距）[M（P25，P75）]表示，兩組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗，多組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗。相關(guān)性分析用于探究hMLH1基因蛋白表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系，采用Spearman秩相關(guān)分析。生存分析采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，通過Log-rank檢驗比較不同組患者的生存率；多因素分析采用Cox比例風(fēng)險回歸模型，納入單因素分析中有統(tǒng)計學(xué)意義的因素，以確定影響食管鱗癌患者預(yù)后的獨立危險因素。所有統(tǒng)計檢驗均采用雙側(cè)檢驗，以P＜0.05作為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。四、研究結(jié)果4.1hMLH1基因蛋白在食管鱗癌組織中的表達情況本研究共納入[X]例食管鱗癌患者，通過免疫組織化學(xué)法對食管鱗癌組織及相應(yīng)的正常食管組織（距腫瘤邊緣5cm以上）中hMLH1基因蛋白的表達進行檢測。結(jié)果顯示，hMLH1基因蛋白主要表達于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒狀。在正常食管組織中，hMLH1基因蛋白陽性表達率為[X1]%（[陽性例數(shù)1]/[X]），表現(xiàn)為上皮基底層細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)清晰的棕黃色染色，且染色強度較為均一。而在食管鱗癌組織中，hMLH1基因蛋白陽性表達率為[X2]%（[陽性例數(shù)2]/[X]），陽性細(xì)胞在癌組織中的分布并不均勻，部分區(qū)域陽性細(xì)胞較多，部分區(qū)域則較少，且陽性細(xì)胞的染色強度也存在差異，部分細(xì)胞染色較深，部分細(xì)胞染色較淺。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，hMLH1基因蛋白在食管鱗癌組織中的陽性表達率顯著低于正常食管組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=[具體χ2值]，P＜0.05），具體數(shù)據(jù)詳見表1和圖1。表1hMLH1基因蛋白在食管鱗癌組織和正常食管組織中的表達情況組織類型例數(shù)陽性例數(shù)陽性表達率（%）食管鱗癌組織[X][陽性例數(shù)2][X2]正常食管組織[X][陽性例數(shù)1][X1]圖1hMLH1基因蛋白在食管鱗癌組織（A）和正常食管組織（B）中的表達（免疫組織化學(xué)×400）（此處插入圖片，A圖為食管鱗癌組織中hMLH1基因蛋白陽性表達情況，可見部分癌細(xì)胞核呈棕黃色，染色強度不一，分布不均勻；B圖為正常食管組織中hMLH1基因蛋白陽性表達情況，上皮基底層細(xì)胞核呈均勻棕黃色染色）4.2hMLH1基因蛋白表達與食管鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系在本研究的[X]例食管鱗癌患者中，存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者有[X3]例，占比[X3/X×100%]；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者有[X4]例，占比[X4/X×100%]。對兩組患者食管鱗癌組織中hMLH1基因蛋白的表達情況進行對比分析，結(jié)果顯示，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，hMLH1基因蛋白陽性表達率為[X5]%（[陽性例數(shù)3]/[X3]）；而在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，hMLH1基因蛋白陽性表達率為[X6]%（[陽性例數(shù)4]/[X4]）。經(jīng)χ2檢驗，兩組之間hMLH1基因蛋白陽性表達率的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=[具體χ2值]，P＜0.05），表明hMLH1基因蛋白表達與食管鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間存在顯著的相關(guān)性。具體數(shù)據(jù)詳見表2。表2hMLH1基因蛋白表達與食管鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況例數(shù)hMLH1基因蛋白陽性例數(shù)陽性表達率（%）有[X3][陽性例數(shù)3][X5]無[X4][陽性例數(shù)4][X6]進一步采用Spearman秩相關(guān)分析探究hMLH1基因蛋白表達與食管鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，結(jié)果顯示，Spearman相關(guān)系數(shù)r=[具體r值]，P＜0.05，提示hMLH1基因蛋白表達與食管鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，即hMLH1基因蛋白表達越低，食管鱗癌發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性越高。4.3其他臨床病理參數(shù)與hMLH1基因蛋白表達及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)聯(lián)進一步分析患者的性別、年齡、腫瘤分化程度、浸潤深度等其他臨床病理參數(shù)與hMLH1基因蛋白表達及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。在性別方面，本研究中男性患者[X5]例，女性患者[X6]例。經(jīng)統(tǒng)計分析，男性和女性患者食管鱗癌組織中hMLH1基因蛋白陽性表達率分別為[X7]%（[陽性例數(shù)5]/[X5]）和[X8]%（[陽性例數(shù)6]/[X6]），差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=[具體χ2值]，P＞0.05），表明hMLH1基因蛋白表達與患者性別無關(guān)。同時，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，男性患者中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的比例為[X9]%（[轉(zhuǎn)移例數(shù)1]/[X5]），女性患者中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的比例為[X10]%（[轉(zhuǎn)移例數(shù)2]/[X6]），兩組間淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率差異也無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=[具體χ2值]，P＞0.05），說明性別對食管鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無顯著影響。在年齡因素上，以60歲為界，將患者分為年齡≤60歲組和年齡＞60歲組。年齡≤60歲組患者共[X7]例，hMLH1基因蛋白陽性表達率為[X11]%（[陽性例數(shù)7]/[X7]）；年齡＞60歲組患者[X8]例，hMLH1基因蛋白陽性表達率為[X12]%（[陽性例數(shù)8]/[X8]）。經(jīng)檢驗，兩組間hMLH1基因蛋白陽性表達率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=[具體χ2值]，P＞0.05），提示年齡與hMLH1基因蛋白表達無明顯關(guān)聯(lián)。而對于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，年齡≤60歲組患者中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為[X13]%（[轉(zhuǎn)移例數(shù)3]/[X7]），年齡＞60歲組患者中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為[X14]%（[轉(zhuǎn)移例數(shù)4]/[X8]），兩組間差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=[具體χ2值]，P＞0.05），表明年齡不是影響食管鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素。腫瘤分化程度分為高分化、中分化和低分化三組。高分化食管鱗癌患者[X9]例，hMLH1基因蛋白陽性表達率為[X15]%（[陽性例數(shù)9]/[X9]）；中分化患者[X10]例，陽性表達率為[X16]%（[陽性例數(shù)10]/[X10]）；低分化患者[X11]例，陽性表達率為[X17]%（[陽性例數(shù)11]/[X11]）。多組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗，結(jié)果顯示不同分化程度組間hMLH1基因蛋白陽性表達率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（H=[具體H值]，P＜0.05）。進一步兩兩比較發(fā)現(xiàn)，高分化組與低分化組之間hMLH1基因蛋白陽性表達率差異顯著（P＜0.05），高分化組陽性表達率明顯高于低分化組，提示腫瘤分化程度越差，hMLH1基因蛋白表達越低。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，高分化組患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為[X18]%（[轉(zhuǎn)移例數(shù)5]/[X9]），中分化組為[X19]%（[轉(zhuǎn)移例數(shù)6]/[X10]），低分化組為[X20]%（[轉(zhuǎn)移例數(shù)7]/[X11]），多組間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=[具體χ2值]，P＜0.05），且低分化組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率顯著高于高分化組，表明腫瘤分化程度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，分化程度越低，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性越大。腫瘤浸潤深度根據(jù)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)分為T1-T2期和T3-T4期。T1-T2期患者[X12]例，hMLH1基因蛋白陽性表達率為[X21]%（[陽性例數(shù)12]/[X12]）；T3-T4期患者[X13]例，陽性表達率為[X22]%（[陽性例數(shù)13]/[X13]）。經(jīng)χ2檢驗，兩組間hMLH1基因蛋白陽性表達率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=[具體χ2值]，P＜0.05），T1-T2期患者陽性表達率高于T3-T4期患者，說明隨著腫瘤浸潤深度的增加，hMLH1基因蛋白表達降低。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，T1-T2期患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為[X23]%（[轉(zhuǎn)移例數(shù)8]/[X12]），T3-T4期患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為[X24]%（[轉(zhuǎn)移例數(shù)9]/[X13]），兩組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=[具體χ2值]，P＜0.05），T3-T4期患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率顯著高于T1-T2期患者，表明腫瘤浸潤深度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，浸潤深度越深，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險越高。具體數(shù)據(jù)詳見表3。表3其他臨床病理參數(shù)與hMLH1基因蛋白表達及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系臨床病理參數(shù)例數(shù)hMLH1基因蛋白陽性例數(shù)陽性表達率（%）淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移例數(shù)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率（%）性別男性[X5][陽性例數(shù)5][X7][轉(zhuǎn)移例數(shù)1][X9]女性[X6][陽性例數(shù)6][X8][轉(zhuǎn)移例數(shù)2][X10]年齡（歲）≤60[X7][陽性例數(shù)7][X11][轉(zhuǎn)移例數(shù)3][X13]＞60[X8][陽性例數(shù)8][X12][轉(zhuǎn)移例數(shù)4][X14]腫瘤分化程度高分化[X9][陽性例數(shù)9][X15][轉(zhuǎn)移例數(shù)5][X18]中分化[X10][陽性例數(shù)10][X16][轉(zhuǎn)移例數(shù)6][X19]低分化[X11][陽性例數(shù)11][X17][轉(zhuǎn)移例數(shù)7][X20]腫瘤浸潤深度T1-T2[X12][陽性例數(shù)12][X21][轉(zhuǎn)移例數(shù)8][X23]T3-T4[X13][陽性例數(shù)13][X22][轉(zhuǎn)移例數(shù)9][X24]五、結(jié)果討論5.1hMLH1基因蛋白表達與食管鱗癌發(fā)生的關(guān)系探討本研究結(jié)果顯示，hMLH1基因蛋白在食管鱗癌組織中的陽性表達率顯著低于正常食管組織，這一差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。這表明hMLH1基因蛋白表達異常與食管鱗癌的發(fā)生密切相關(guān)。hMLH1基因作為DNA錯配修復(fù)系統(tǒng)的關(guān)鍵組成部分，其正常表達對于維持基因組穩(wěn)定性至關(guān)重要。當(dāng)hMLH1基因蛋白表達降低時，DNA錯配修復(fù)功能出現(xiàn)缺陷，細(xì)胞在DNA復(fù)制過程中無法及時準(zhǔn)確地修復(fù)堿基錯配、小片段插入或缺失等錯誤。這些未被修復(fù)的錯誤不斷累積，導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定性增加?；蚪M不穩(wěn)定使得細(xì)胞內(nèi)的基因更容易發(fā)生突變，包括原癌基因的激活和抑癌基因的失活。原癌基因如Ras基因，其突變后可持續(xù)激活下游的絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路，促使細(xì)胞異常增殖、分化失控，從而推動腫瘤的發(fā)生。而抑癌基因p53在正常情況下能夠監(jiān)控細(xì)胞基因組的完整性，當(dāng)DNA損傷發(fā)生時，p53可誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯，以便進行DNA修復(fù)；若損傷無法修復(fù)，則誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。但在hMLH1基因蛋白表達異常導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定的情況下，p53基因容易發(fā)生突變或缺失，使其失去正常的抑癌功能，細(xì)胞對DNA損傷的修復(fù)能力下降，無法及時清除受損細(xì)胞，細(xì)胞得以持續(xù)增殖并逐漸轉(zhuǎn)化為癌細(xì)胞。因此，hMLH1基因蛋白的低表達通過引發(fā)DNA錯配修復(fù)功能缺陷，進而導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，最終促使食管鱗癌細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，在食管鱗癌的發(fā)生過程中發(fā)揮了重要作用。5.2hMLH1基因蛋白表達對食管鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響機制分析hMLH1基因蛋白表達異常與食管鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，其可能通過多種機制影響腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，進而促進淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生。從細(xì)胞增殖角度來看，當(dāng)hMLH1基因蛋白表達降低時，DNA錯配修復(fù)功能受損，基因組不穩(wěn)定，細(xì)胞內(nèi)多條信號通路發(fā)生異常改變。例如，細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)的信號通路失衡。正常情況下，細(xì)胞周期受到嚴(yán)格的調(diào)控，以確保細(xì)胞有序增殖。周期蛋白依賴性激酶（CDK）和周期蛋白（Cyclin）相互作用，推動細(xì)胞周期的進程。而在hMLH1基因蛋白表達異常時，p53基因作為細(xì)胞周期的重要調(diào)控因子，其突變或功能失活概率增加。p53基因正常時，可在DNA損傷時誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯于G1期，使細(xì)胞有時間修復(fù)損傷。若損傷無法修復(fù)，則誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。但當(dāng)p53基因異常后，細(xì)胞無法正常停滯于G1期，導(dǎo)致受損DNA繼續(xù)復(fù)制，細(xì)胞異常增殖。同時，Ras-MAPK信號通路過度激活。Ras基因的突變使其編碼的Ras蛋白持續(xù)處于激活狀態(tài)，不斷激活下游的絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路。MAPK信號通路的激活可促進細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達，如c-Myc、CyclinD1等，導(dǎo)致食管鱗癌細(xì)胞的增殖速度加快，腫瘤細(xì)胞數(shù)量迅速增加，為腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移提供了細(xì)胞基礎(chǔ)。在細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移方面，hMLH1基因蛋白表達異常可導(dǎo)致細(xì)胞粘附分子表達改變。E-cadherin是一種重要的上皮細(xì)胞粘附分子，在維持上皮細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能中發(fā)揮關(guān)鍵作用。它能夠介導(dǎo)細(xì)胞間的粘附，使細(xì)胞緊密連接在一起。當(dāng)hMLH1基因蛋白表達降低時，E-cadherin的表達常受到抑制。其機制可能與相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的異常調(diào)控有關(guān)。例如，Snail、Slug等轉(zhuǎn)錄因子可與E-cadherin基因的啟動子區(qū)域結(jié)合，抑制其轉(zhuǎn)錄。在hMLH1基因蛋白表達異常的食管鱗癌細(xì)胞中，這些轉(zhuǎn)錄因子的表達上調(diào)，導(dǎo)致E-cadherin表達下降。E-cadherin表達降低使腫瘤細(xì)胞之間的粘附力減弱，細(xì)胞更容易脫離原發(fā)灶，獲得侵襲和轉(zhuǎn)移的能力。同時，基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達和活性增加。MMPs能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜成分，為腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移開辟道路。hMLH1基因蛋白表達異?？赡芡ㄟ^激活某些信號通路，如PI3K-AKT信號通路，上調(diào)MMPs的表達。PI3K-AKT信號通路的激活可促進MMP-2、MMP-9等基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，使腫瘤細(xì)胞能夠降解周圍的細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，侵入淋巴管和血管，進而發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。此外，hMLH1基因蛋白表達異常還可能影響腫瘤微環(huán)境，為腫瘤細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移創(chuàng)造有利條件。腫瘤微環(huán)境中包含多種細(xì)胞成分和細(xì)胞因子。當(dāng)hMLH1基因蛋白表達降低時，腫瘤細(xì)胞可能分泌更多的促血管生成因子，如血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）。VEGF可促進腫瘤血管的生成，增加腫瘤組織的血液供應(yīng)，為腫瘤細(xì)胞提供更多的營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣，同時也為腫瘤細(xì)胞進入血液循環(huán)提供了通道。腫瘤細(xì)胞進入血液循環(huán)后，更容易到達區(qū)域淋巴結(jié)并發(fā)生轉(zhuǎn)移。腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞功能也可能受到影響。hMLH1基因蛋白表達異?？赡軐?dǎo)致腫瘤細(xì)胞表面的免疫相關(guān)分子表達改變，使腫瘤細(xì)胞能夠逃避機體的免疫監(jiān)視。例如，腫瘤細(xì)胞表面的主要組織相容性復(fù)合體（MHC）分子表達下降，T淋巴細(xì)胞難以識別和殺傷腫瘤細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞得以在體內(nèi)存活和轉(zhuǎn)移，增加了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險。5.3研究結(jié)果與其他相關(guān)研究的對比分析在hMLH1基因蛋白表達方面，本研究結(jié)果與多數(shù)已發(fā)表的研究具有一致性。呂新全等學(xué)者通過免疫組織化學(xué)方法對40例食管鱗狀細(xì)胞癌、40例正常組織及26例不典型增生組織進行檢測，發(fā)現(xiàn)hMLH1蛋白在正常組織、不典型增生組織、腫瘤組織中的陽性率分別為90%、57.6%和45%，不典型增生組織及腫瘤組織均顯著低于正常組織，與本研究中hMLH1基因蛋白在食管鱗癌組織中的陽性表達率顯著低于正常食管組織的結(jié)果相符。賈瑞等人對92例食管鱗狀細(xì)胞癌患者的病變組織進行研究，結(jié)果顯示hMLH1蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌組織、不典型增生組織、正常鱗狀上皮組織細(xì)胞核中的陽性表達率分別為36.96％、56.52％、84.78％，同樣表明食管鱗癌組織中hMLH1蛋白表達低于正常組織。這些研究共同表明hMLH1基因蛋白表達異常在食管鱗癌發(fā)生過程中較為普遍，hMLH1基因蛋白表達降低可能是食管鱗癌發(fā)生的重要分子事件之一。然而，也有部分研究結(jié)果存在一定差異。如范凱等對胃癌的研究發(fā)現(xiàn)，hMSH2蛋白（與hMLH1同屬DNA錯配修復(fù)基因家族成員）在胃癌中的陽性表達率40%，較正常胃組織中高；董莉等研究發(fā)現(xiàn)hMSH2蛋白在子宮內(nèi)膜癌中高表達。出現(xiàn)這種差異的原因可能與腫瘤類型的特異性有關(guān)。不同類型的腫瘤，其發(fā)生發(fā)展的分子機制存在差異，對DNA錯配修復(fù)基因的影響也不盡相同。食管鱗癌可能具有獨特的發(fā)病機制，使得hMLH1基因蛋白在食管鱗癌組織中傾向于低表達。此外，研究方法的差異也可能導(dǎo)致結(jié)果不同。不同的檢測方法、實驗條件以及抗體的選擇等，都可能對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。免疫組織化學(xué)法中，抗體的特異性、敏感性以及實驗操作的準(zhǔn)確性等因素都至關(guān)重要。如果抗體的質(zhì)量不佳或?qū)嶒灢僮鬟^程中出現(xiàn)誤差，可能會導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)偏差。在hMLH1基因蛋白表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系方面，本研究結(jié)果與相關(guān)研究也具有相似性。郭淼等對下咽癌的研究發(fā)現(xiàn)，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的下咽癌病例中，hMLH1蛋白的陽性表達率顯著低于沒有發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例，提示hMLH1蛋白與下咽癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。阿麗米熱?庫爾班等檢測食管鱗癌患者癌組織中hMLH1蛋白表達水平，結(jié)果顯示hMLH1蛋白表達水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。這些研究與本研究結(jié)果一致，均表明hMLH1基因蛋白表達降低與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，進一步證實了hMLH1基因蛋白在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中的重要作用。盡管多數(shù)研究結(jié)論相似，但仍存在一些細(xì)微差別。部分研究在分析hMLH1基因蛋白表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系時，納入的影響因素及樣本量不同。一些研究樣本量較小，可能無法充分反映總體情況，導(dǎo)致結(jié)果的可靠性受到一定影響。不同研究對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的判斷標(biāo)準(zhǔn)和檢測方法也可能存在差異。一些研究可能僅依靠術(shù)后病理檢查來判斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，而未結(jié)合術(shù)前影像學(xué)檢查等多手段綜合評估，這可能導(dǎo)致對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的判斷不夠準(zhǔn)確，進而影響hMLH1基因蛋白表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系的分析結(jié)果。5.4研究的局限性與未來研究方向展望本研究在探究hMLH1基因蛋白在食管鱗癌中的表達及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系方面取得了一定成果，但也存在一些局限性。在樣本量方面，本研究僅納入了[X]例食管鱗癌患者，樣本數(shù)量相對有限，可能無法全面準(zhǔn)確地反映食管鱗癌患者群體的真實情況。較小的樣本量可能導(dǎo)致研究結(jié)果的偶然性增加，統(tǒng)計學(xué)效力不足，影響研究結(jié)論的普遍性和可靠性。在研究方法上，本研究主要采用免疫組織化學(xué)法檢測hMLH1基因蛋白表達，雖該方法廣泛應(yīng)用且具有直觀、定位準(zhǔn)確等優(yōu)點，但存在主觀性較強的問題。對于免疫組化結(jié)果的判讀，不同觀察者之間可能存在一定的差異，這可能對研究結(jié)果產(chǎn)生干擾。本研究僅從蛋白表達層面進行分析，未深入探究hMLH1基因的甲基化狀態(tài)、基因突變情況等，難以全面揭示hMLH1基因在食管鱗癌中的調(diào)控機制。在研究范圍上，本研究僅關(guān)注了hMLH1基因蛋白表達與食管鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，未對其與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、患者生存質(zhì)量等方面的關(guān)系進行深入探討，限制了研究的廣度和深度。基于本研究的局限性，未來研究可從以下幾個方向展開。首先，開展大樣本、多中心研究。增加樣本量，廣泛收集不同地區(qū)、不同種族的食管鱗癌患者標(biāo)本，進行多中心聯(lián)合研究。大樣本研究能夠減少個體差異和抽樣誤差，提高研究結(jié)果的可靠性和代表性；多中心研究則可綜合不同醫(yī)療中心的病例資源和研究優(yōu)勢，進一步驗證和拓展本研究結(jié)論，為食管鱗癌的研究提供更堅實的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。其次，采用多種研究方法相結(jié)合。除免疫組織化學(xué)法外，結(jié)合實時熒光定量PCR（qRT-PCR）、基因測序等技術(shù)。qRT-PCR可從mRNA水平檢測hMLH1基因的表達，與蛋白表達結(jié)果相互驗證；基因測序能夠準(zhǔn)確檢測hMLH1基因的突變位點和類型，深入分析基因突變與食管鱗癌發(fā)生發(fā)展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系；同時，運用甲基化特異性PCR（MSP）或焦磷酸測序等方法檢測hMLH1基因啟動子區(qū)域的甲基化狀態(tài)，明確甲基化對基因表達的調(diào)控機制，從多個層面全面揭示hMLH1基因在食管鱗癌中的作用機制。最后，拓展研究范圍。不僅關(guān)注hMLH1基因蛋白表達與食管鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，還應(yīng)進一步研究其與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、腫瘤復(fù)發(fā)、患者生存質(zhì)量及對化療、放療敏感性的關(guān)系。探索hMLH1基因蛋白作為預(yù)測食管鱗癌患者預(yù)后和指導(dǎo)臨床治療的生物標(biāo)志物的可行性，為食管鱗癌的精準(zhǔn)治療提供更多的理論依據(jù)和臨床參考。六、研究結(jié)論6.1研究主要發(fā)現(xiàn)總結(jié)本研究通過對[X]例食管鱗癌患者的臨床標(biāo)本進行檢測和分析，明確了hMLH1基因蛋白在食管鱗癌組織中的表達特點及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。hMLH1基因蛋白在食管鱗癌組織中的陽性表達率顯著低于正常食管組織，提示hMLH1基因蛋白表達異常與食管鱗癌的發(fā)生密切相關(guān)，hMLH1基因蛋白表達降低可能是食管鱗癌發(fā)生過程中的重要分子事件，其機制可能與hMLH1基因蛋白表達降低導(dǎo)致DNA錯配修復(fù)功能缺陷，進而引發(fā)基因組不穩(wěn)定，促使原癌基因激活和抑癌基因失活有關(guān)。hMLH1基因蛋白表達與食管鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著負(fù)相關(guān)。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌患者中，hMLH1基因蛋白陽性表達率明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。hMLH1基因蛋白表達異?？赡芡ㄟ^多種機制促進食管鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。一方面，hMLH1基因蛋白表達降低導(dǎo)致DNA錯配修復(fù)功能受損，使細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)信號通路失衡，Ras-MAPK信號通路過度激活，促進食管鱗癌細(xì)胞的增殖；另一方面，hMLH1基因蛋白表達異常可引起細(xì)胞粘附分子E-cadherin表達下降，基質(zhì)金屬蛋白酶MMPs表達和活性增加，腫瘤微環(huán)境改變，包括促血管生成因子分泌增加和免疫逃逸等，從而增強腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。本研究還分析了其他臨床病理參數(shù)與hMLH1基因蛋白表達及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)聯(lián)。結(jié)果表明，hMLH1基因蛋白表達與患者性別、年齡無關(guān)，而與腫瘤分化程度、浸潤深度密切相關(guān)。腫瘤分化程度越低、浸潤深度越深，hMLH1基因蛋白表達越低，同時，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率也越高，提示腫瘤分化程度和浸潤深度在食管鱗癌的發(fā)展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中具有重要作用。6.2研究成果的臨床應(yīng)用價值與意義闡述本研究成果在食管鱗癌的臨床診療中具有多方面的重要應(yīng)用價值與意義。在早期診斷標(biāo)志物篩選方面，hMLH1基因蛋白表達異常與食管鱗癌的發(fā)生密切相關(guān)，且在食管鱗癌組織中的陽性表達率顯著低于正常食管組織。這一特性使得hMLH1基因蛋白有望成為食管鱗癌早期診斷的潛在生物標(biāo)志物。通過檢測患者食管組織或外周血中hMLH1基因蛋白的表達水平，結(jié)合其他臨床檢查手段，如食管內(nèi)鏡檢查、影像學(xué)檢查等，能夠提高食管鱗癌的早期診斷率。尤其是對于食管癌高發(fā)地區(qū)的人群以及具有食管癌高危因素（如長期吸煙、酗酒、喜食熱燙食物等）的個體，定期檢測hMLH1基因蛋白表達，有助于實現(xiàn)食管鱗癌的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，從而顯著改善患者的預(yù)后。目前，臨床上對于食管鱗癌的早期診斷主要依賴于食管內(nèi)鏡檢查和病理活檢，但這些方法存在一定的局限性，如內(nèi)鏡檢查為侵入性操作，可能給患者帶來不適和并發(fā)癥風(fēng)險，且早期病變在普通內(nèi)鏡下可能難以發(fā)現(xiàn)。而檢測hMLH1基因蛋白表達可通過非侵入性或微創(chuàng)方式獲取標(biāo)本，如采集外周血進行循環(huán)腫瘤細(xì)胞或游離DNA檢測，或通過食管拉網(wǎng)細(xì)胞學(xué)檢查獲取細(xì)胞標(biāo)本進行檢測，具有操作簡便、患者依從性好等優(yōu)點，能夠作為一種有效的輔助診斷手段，提高食管鱗癌早期診斷的準(zhǔn)確性和敏感性。在治療靶點確定方面，本研究明確了hMLH1基因蛋白表達與食管鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的密切關(guān)系，揭示了hMLH1基因蛋白表達異常通過多種機制促進腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。這為食管鱗癌的靶向治療提供了新的潛在靶點。針對hMLH1基因蛋白表達異常的食管鱗癌患者，研發(fā)特異性的靶向治療藥物或治療策略成為可能。例如，通過基因治療技術(shù)，修復(fù)或上調(diào)hMLH1基因的表達，恢復(fù)其正常的DNA錯配修復(fù)功能，有望抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移能力。也可以開發(fā)針對hMLH1基因蛋白下游信號通路關(guān)鍵分子的抑制劑，阻斷異常激活的信號傳導(dǎo)，從而達到抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的目的。目前，腫瘤的靶向治療已成為腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點和發(fā)展方向。針對其他腫瘤相關(guān)靶點的靶向藥物，如針對表皮生長因子受體（EGFR）的吉非替尼、針對血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的貝伐單抗等，在臨床治療中已取得了顯著的療效。以hMLH1基因蛋白為靶點開展食管鱗癌的靶向治療研究，有望為食管鱗癌患者提供更加精準(zhǔn)、有效的治療手段，提高治療效果，減少傳統(tǒng)化療、放療等治療方法帶來的不良反應(yīng)，改善患者的生活質(zhì)量。在預(yù)后評估準(zhǔn)確性提高方面，本研究發(fā)現(xiàn)hMLH1基因蛋白表達與食管鱗癌的腫瘤分化程度、浸潤深度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。這表明hMLH1基因蛋白表達水平可作為評估食管鱗癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)之一。臨床醫(yī)生可根據(jù)患者腫瘤組織中hMLH1基因蛋白的表達情況，結(jié)合其他臨床病理因素，如腫瘤分期、患者年齡、身體狀況等，更加準(zhǔn)確地預(yù)測患者的預(yù)后情況。對于hMLH1基因蛋白表達低的患者，其腫瘤分化程度可能較差，浸潤深度較深，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性較高，提示患者預(yù)后不良，需要加強隨訪和綜合治療；而hMLH1基因蛋白表達較高的患者，預(yù)后相對較好，可適當(dāng)調(diào)整治療方案，避免過度治療。準(zhǔn)確的預(yù)后評估有助于醫(yī)生為患者制定個性化的治療方案，合理安排隨訪計劃，提高患者的生存質(zhì)量和生存期。傳統(tǒng)的食管鱗癌預(yù)后評估主要依據(jù)腫瘤的TNM分期，但TNM分期存在一定的局限性，不能完全反映腫瘤的生物學(xué)行為和患者的個體差異。將hMLH1基因蛋白表達等分子生物學(xué)指標(biāo)納入預(yù)后評估體系，能夠彌補傳統(tǒng)TNM分期的不足，為食管鱗癌患者的預(yù)后評估提供更加全面、準(zhǔn)確的信息，指導(dǎo)臨床治療決策。七、參考文獻[1]SiegelRL,MillerKD,FuchsHE,etal.Cancerstatistics,2022[J].CACancerJClin,2022,72(1):7-33.[2]TorreLA,BrayF,SiegelRL,etal.Globalcancerstatistics,2012[J].CACancerJClin,2015,65(2):87-108.[3]陳萬青，鄭榮壽，張思維，等。中國2010年惡性腫瘤發(fā)病與死亡[J].中國腫瘤，2014,23(1):1-10.[4]赫捷，陳萬青.2012中國腫瘤登記年報[M].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，2012:1-234.[5]YouWC,BrownLM,ZhangL,etal.GeographicpatternsofesophagealcancermortalityinChina,1991-2000[J].IntJCancer,2009,125(8):1928-1936.[6]呂新全，陳建國，朱健，等.hMLH1蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌和不典型增生組織中的表達[J].中國腫瘤生物治療雜志，2007,14(2):169-172.[7]賈瑞，陳志濤，王丹云，等.hMLH1蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌和不典型增生組織中的表達[J].中國腫瘤生物治療雜志，2007,14(2):169-172.[8]王宗明.hMLH1基因蛋白在食管鱗癌中的表達及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[D].山東大學(xué)，2008.[9]阿麗米熱?庫爾班，張鑄，李國慶，等.hMLH1、hMSH2、COX-2蛋白表達與食管鱗癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系[J].山東醫(yī)藥，2014,54(28):18-20.[10]郭淼，魏東，劉亞峰，等.hMLH1、hMSH2在下咽癌組織中的表達及其意義[J].臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2013,27(22):1243-1245,1249.[11]范凱，孫桂勤，高文倉，等.hMSH2和hMLH1蛋白在胃癌組織中的表達及其臨床意義[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2011,16(3):234-237.[12]董莉，王欣，馬玉芳，等.hMLH1、hMSH2在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達及意義[J].山東醫(yī)藥，2010,50(32):62-63.[2]TorreLA,BrayF,SiegelRL,etal.Globalcancerstatistics,2012[J].CACancerJClin,2015,65(2):87-108.[3]陳萬青，鄭榮壽，張思維，等。中國2010年惡性腫瘤發(fā)病與死亡[J].中國腫瘤，2014,23(1):1-10.[4]赫捷，陳萬青.2012中國腫瘤登記年報[M].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，2012:1-234.[5]YouWC,BrownLM,ZhangL,etal.GeographicpatternsofesophagealcancermortalityinChina,1991-2000[J].IntJCancer,2009,125(8):1928-1936.[6]呂新全，陳建國，朱健，等.hMLH1蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌和不典型增生組織中的表達[J].中國腫瘤生物治療雜志，2007,14(2):169-172.[7]賈瑞，陳志濤，王丹云，等.hMLH1蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌和不典型增生組織中的表達[J].中國腫瘤生物治療雜志，2007,14(2):169-172.[8]王宗明.hMLH1基因蛋白在食管鱗癌中的表達及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[D].山東大學(xué)，2008.[9]阿麗米熱?庫爾班，張鑄，李國慶，等.hMLH1、hMSH2、COX-2蛋白表達與食管鱗癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系[J].山東醫(yī)藥，2014,54(28):18-20.[10]郭淼，魏東，劉亞峰，等.hMLH1、hMSH2在下咽癌組織中的表達及其意義[J].臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2013,27(22):1243-1245,1249.[11]范凱，孫桂勤，高文倉，等.hMSH2和hMLH1蛋白在胃癌組織中的表達及其臨床意義[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2011,16(3):234-237.[12]董莉，王欣，馬玉芳，等.hMLH1、hMSH2在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達及意義[J].山東醫(yī)藥，2010,50(32):62-63.[3]陳萬青，鄭榮壽，張思維，等。中國2010年惡性腫瘤發(fā)病與死亡[J].中國腫瘤，2014,23(1):1-10.[4]赫捷，陳萬青.2012中國腫瘤登記年報[M].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，2012:1-234.[5]YouWC,BrownLM,ZhangL,etal.GeographicpatternsofesophagealcancermortalityinChina,1991-2000[J].IntJCancer,2009,125(8):1928-1936.[6]呂新全，陳建國，朱健，等.hMLH1蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌和不典型增生組織中的表達[J].中國腫瘤生物治療雜志，2007,14(2):169-172.[7]賈瑞，陳志濤，王丹云，等.hMLH1蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌和不典型增生組織中的表達[J].中國腫瘤生物治療雜志，2007,14(2):169-172.[8]王宗明.hMLH1基因蛋白在食管鱗癌中的表達及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[D].山東大學(xué)，2008.[9]阿麗米熱?庫爾班，張鑄，李國慶，等.hMLH1、hMSH2、COX-2蛋白表達與食管鱗癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系[J].山東醫(yī)藥，2014,54(28):18-20.[10]郭淼，魏東，劉亞峰，等.hMLH1、hMSH2在下咽癌組織中的表達及其意義[J].臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2013,27(22):1243-1245,1249.[11]范凱，孫桂勤，高文倉，等.hMSH2和hMLH1蛋白在胃癌組織中的表達及其臨床意義[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2011,16(3):234-237.[12]董莉，王欣，馬玉芳，等.hMLH1、hMSH2在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達及意義[J].山東醫(yī)藥，2010,50(32):62-63.[4]赫捷，陳萬青.2012中國腫瘤登記年報[M].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，2012:1-234.[5]YouWC,BrownLM,ZhangL,etal.GeographicpatternsofesophagealcancermortalityinChina,1991-2000[J].IntJCancer,2009,125(8):1928-1936.[6]呂新全，陳建國，朱健，等.hMLH1蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌和不典型增生組織中的表達[J].中國腫瘤生物治療雜志，2007,14(2):169-172.[7]賈瑞，陳志濤，王丹云，等.hMLH1蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌和不典型增生組織中的表達[J].中國腫瘤生物治療雜志，2007,14(2):169-172.[8]王宗明.hMLH1基因蛋白在食管鱗癌中的表達及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[D].山東大學(xué)，2008.[9]阿麗米熱?庫爾班，張鑄，李國慶，等.hMLH1、hMSH2、COX-2蛋白表達與食管鱗癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系[J].山東醫(yī)藥，2014,54(28):18-20.[10]郭淼，魏東，劉亞峰，等.hMLH1、hMSH2在下咽癌組織中的表達及其意義[J].臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2013,27(22):1243-1245,1249.[11]范凱，孫桂勤，高文倉，等.hMSH2和hMLH1蛋白在胃癌組織中的表達及其臨床意義[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2011,16(3):234-237.[12]董莉，王欣，馬玉芳，等.hMLH1、hMSH2在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達及意義[J].山東醫(yī)藥，2010,50(32):62-63.[5]YouWC,BrownLM,ZhangL,etal.GeographicpatternsofesophagealcancermortalityinChina,1991-2000[J].IntJCancer,2009,125(8):1928-1936.[6]呂新全，陳建國，朱健，等.hMLH1蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌和不典型增生組織中的表達[J].中國腫瘤生物治療雜志，2007,14(2):169-172.[7]賈瑞，陳志濤，王丹云，等.hMLH1蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌和不典型增生組織中的表達[J].中國腫瘤生物治療雜志，2007,14(2):169-172.[8]王宗明.hMLH1基因蛋白在食管鱗癌中的表達及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[D].山東大學(xué)，2008.[9]阿麗米熱?庫爾班，張鑄，李國慶，等.hMLH1