DNA修復(fù)基因MGMT與XRCC1在食管癌中的表達(dá)及臨床意義探究一、引言1.1研究背景食管癌作為全球范圍內(nèi)高發(fā)的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著人類的生命健康。據(jù)統(tǒng)計(jì)，每年全球新增食管癌病例數(shù)眾多，且死亡率居高不下。在中國，食管癌同樣是常見的消化道惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率在各類癌癥中均名列前茅。食管癌早期癥狀隱匿，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，這使得治療難度大幅增加，患者的5年生存率較低。而且，食管癌的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，涉及遺傳、環(huán)境、生活方式等多種因素。隨著疾病的進(jìn)展，患者不僅會(huì)出現(xiàn)吞咽困難、疼痛等癥狀，還會(huì)因營養(yǎng)攝入不足導(dǎo)致身體機(jī)能迅速衰退，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量。因此，深入研究食管癌的發(fā)病機(jī)制，尋找有效的早期診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，對(duì)于提高食管癌患者的生存率和生活質(zhì)量具有重要意義。DNA是生物體遺傳信息的載體，其穩(wěn)定性對(duì)于細(xì)胞的正常功能和生命活動(dòng)至關(guān)重要。然而，在細(xì)胞的生命過程中，DNA會(huì)不斷受到內(nèi)源性和外源性因素的損傷。內(nèi)源性因素包括細(xì)胞代謝過程中產(chǎn)生的活性氧自由基、DNA復(fù)制錯(cuò)誤等；外源性因素則包括紫外線、化學(xué)致癌物、電離輻射等。如果這些DNA損傷得不到及時(shí)有效的修復(fù)，就會(huì)導(dǎo)致基因突變、染色體畸變等，進(jìn)而引發(fā)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，最終導(dǎo)致癌癥的發(fā)生。因此，DNA修復(fù)機(jī)制在維持基因組穩(wěn)定性、預(yù)防癌癥發(fā)生方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。當(dāng)DNA修復(fù)基因發(fā)生突變或表達(dá)異常時(shí)，細(xì)胞對(duì)DNA損傷的修復(fù)能力就會(huì)下降，使得受損的DNA無法得到及時(shí)糾正，從而增加了癌癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（MGMT）和X線修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1（XRCC1）是兩種重要的DNA修復(fù)基因，它們?cè)贒NA損傷修復(fù)過程中各自承擔(dān)著獨(dú)特的功能。MGMT能夠直接將O6位上被甲基化的鳥嘌呤的甲基基團(tuán)移除，使DNA恢復(fù)正常結(jié)構(gòu)，從而有效修復(fù)烷化劑等導(dǎo)致的DNA損傷。這種修復(fù)作用對(duì)于維持DNA的正常結(jié)構(gòu)和功能，防止因DNA損傷而引發(fā)的基因突變和細(xì)胞癌變具有重要意義。XRCC1則主要參與堿基切除修復(fù)途徑，它能夠與多種修復(fù)酶相互作用，協(xié)同完成對(duì)DNA單鏈斷裂、堿基損傷等的修復(fù)。在堿基切除修復(fù)過程中，XRCC1通過與其他修復(fù)蛋白形成復(fù)合物，穩(wěn)定修復(fù)酶的活性，促進(jìn)修復(fù)過程的順利進(jìn)行，確保受損DNA得到準(zhǔn)確修復(fù)。研究表明，MGMT和XRCC1的表達(dá)水平及活性狀態(tài)與多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。在部分腫瘤中，MGMT基因啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化會(huì)導(dǎo)致其表達(dá)沉默，使得細(xì)胞對(duì)烷化劑類化療藥物的敏感性降低，影響治療效果；而XRCC1基因的多態(tài)性則可能改變其編碼蛋白的結(jié)構(gòu)和功能，進(jìn)而影響DNA修復(fù)能力，增加癌癥的易感性。目前，關(guān)于MGMT和XRCC1在食管癌中的表達(dá)情況及作用機(jī)制的研究仍存在諸多爭議和空白。部分研究雖然探討了它們?cè)谑彻馨┙M織中的表達(dá)變化，但結(jié)果并不一致，且對(duì)于其表達(dá)與食管癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系也尚未完全明確。此外，MGMT和XRCC1在食管癌發(fā)生、發(fā)展過程中的相互作用及協(xié)同機(jī)制也有待進(jìn)一步深入探究。明確MGMT和XRCC1在食管癌中的表達(dá)規(guī)律及其與食管癌發(fā)生、發(fā)展的內(nèi)在聯(lián)系，不僅有助于揭示食管癌的發(fā)病機(jī)制，為食管癌的早期診斷和預(yù)后評(píng)估提供新的分子標(biāo)志物，還可能為食管癌的靶向治療提供潛在的藥物作用靶點(diǎn)，從而推動(dòng)食管癌精準(zhǔn)治療的發(fā)展，具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。1.2研究目的與意義本研究旨在深入探究DNA修復(fù)基因MGMT和XRCC1在食管癌組織中的表達(dá)情況，分析其表達(dá)水平與食管癌患者臨床病理特征（如腫瘤分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等）之間的相關(guān)性，明確兩基因在食管癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用機(jī)制以及它們之間可能存在的相互關(guān)系。通過這些研究，期望能夠揭示食管癌發(fā)病過程中DNA修復(fù)機(jī)制的異常變化，為食管癌的早期診斷提供更為精準(zhǔn)、有效的分子標(biāo)志物。當(dāng)患者出現(xiàn)一些非特異性癥狀，如吞咽不適等，可通過檢測(cè)MGMT和XRCC1的表達(dá)水平，輔助醫(yī)生更早地發(fā)現(xiàn)潛在的食管癌病變，提高早期診斷率。同時(shí)，深入了解這兩個(gè)基因的作用機(jī)制，有助于為食管癌的預(yù)后評(píng)估提供新的指標(biāo)。醫(yī)生可以根據(jù)基因表達(dá)情況，更準(zhǔn)確地判斷患者的病情發(fā)展趨勢(shì)和預(yù)后情況，為制定個(gè)性化的治療方案提供有力依據(jù)。對(duì)于高表達(dá)MGMT和XRCC1且預(yù)后相對(duì)較好的患者，在治療方案的選擇上可以相對(duì)保守，注重生活質(zhì)量的維持；而對(duì)于低表達(dá)的患者，則需要采取更積極、強(qiáng)化的治療措施，以提高治療效果。此外，本研究還有望為食管癌的靶向治療開辟新的方向，以MGMT和XRCC1為靶點(diǎn)研發(fā)新型藥物，為食管癌患者帶來更有效的治療手段，提高患者的生存率和生活質(zhì)量，在食管癌的臨床治療領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價(jià)值和深遠(yuǎn)的意義。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1DNA修復(fù)機(jī)制概述DNA修復(fù)是細(xì)胞對(duì)DNA受損傷后的一種反應(yīng)，其作用在于使DNA結(jié)構(gòu)盡可能恢復(fù)原樣，從而重新執(zhí)行它原來的功能。盡管有時(shí)無法完全消除DNA的損傷，但能使細(xì)胞耐受這種損傷并繼續(xù)生存。倘若細(xì)胞不具備DNA修復(fù)功能，就難以應(yīng)對(duì)頻繁發(fā)生的DNA損傷事件，細(xì)胞的生存也將受到威脅。因此，DNA修復(fù)是維持細(xì)胞遺傳穩(wěn)定性的關(guān)鍵機(jī)制，對(duì)細(xì)胞的正常生命活動(dòng)和機(jī)體健康至關(guān)重要，與腫瘤學(xué)、遺傳學(xué)等眾多醫(yī)學(xué)領(lǐng)域密切相關(guān)。當(dāng)DNA修復(fù)過程出現(xiàn)異常，無法有效糾正DNA損傷時(shí)，就可能導(dǎo)致基因突變、染色體畸變等問題，進(jìn)而增加細(xì)胞癌變的風(fēng)險(xiǎn)，許多癌癥的發(fā)生都與DNA修復(fù)機(jī)制的缺陷或異常有關(guān)。在細(xì)胞的生命歷程中，DNA會(huì)不斷遭受各種損傷，為了應(yīng)對(duì)這些損傷，細(xì)胞進(jìn)化出了多種高度保守且復(fù)雜的DNA修復(fù)途徑，常見的DNA修復(fù)途徑包括核苷酸切除修復(fù)、堿基切除修復(fù)、錯(cuò)配修復(fù)、重組修復(fù)等。不同的修復(fù)途徑針對(duì)不同類型的DNA損傷發(fā)揮作用，它們相互協(xié)作，共同維護(hù)著基因組的穩(wěn)定性。例如，當(dāng)細(xì)胞受到紫外線照射時(shí)，DNA可能會(huì)形成嘧啶二聚體，核苷酸切除修復(fù)途徑就會(huì)被激活，識(shí)別并切除含有嘧啶二聚體的DNA片段，然后以互補(bǔ)鏈為模板合成新的DNA片段，填補(bǔ)切除后的缺口，從而完成修復(fù)過程；而當(dāng)DNA復(fù)制過程中出現(xiàn)堿基錯(cuò)配時(shí)，錯(cuò)配修復(fù)途徑則會(huì)發(fā)揮作用，識(shí)別并糾正錯(cuò)誤配對(duì)的堿基，保證DNA復(fù)制的準(zhǔn)確性。這些修復(fù)途徑的正常運(yùn)作對(duì)于維持細(xì)胞的正常生理功能和遺傳信息的穩(wěn)定傳遞至關(guān)重要。2.2MGMT基因介紹MGMT基因，全稱為O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶基因，位于人類染色體10q26區(qū)域。其編碼的MGMT蛋白由207個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子質(zhì)量約為23kDa。從結(jié)構(gòu)上看，MGMT蛋白包含一個(gè)活性中心，該活性中心含有一個(gè)半胱氨酸殘基，這一殘基在MGMT發(fā)揮修復(fù)功能時(shí)起著關(guān)鍵作用，是實(shí)現(xiàn)甲基轉(zhuǎn)移反應(yīng)的核心位點(diǎn)。MGMT在細(xì)胞內(nèi)廣泛分布，在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá)，不過主要集中在細(xì)胞核內(nèi)，以便更及時(shí)、有效地對(duì)DNA損傷進(jìn)行修復(fù)。MGMT在DNA修復(fù)過程中發(fā)揮著不可或缺的作用，主要參與直接修復(fù)途徑，對(duì)烷化劑導(dǎo)致的DNA損傷進(jìn)行修復(fù)。烷化劑是一類具有高度活性的化學(xué)物質(zhì)，能夠與DNA分子中的堿基發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，尤其是鳥嘌呤的O6位，形成O6-烷基鳥嘌呤加合物。這種加合物的形成會(huì)改變DNA的正常結(jié)構(gòu)和堿基配對(duì)性質(zhì)，在DNA復(fù)制過程中，O6-烷基鳥嘌呤會(huì)錯(cuò)誤地與胸腺嘧啶配對(duì)，而非正常情況下的胞嘧啶，從而導(dǎo)致堿基錯(cuò)配，最終引發(fā)基因突變。MGMT能夠特異性地識(shí)別并結(jié)合含有O6-烷基鳥嘌呤的DNA損傷部位，通過其活性中心的半胱氨酸殘基，將O6-烷基鳥嘌呤上的烷基基團(tuán)直接轉(zhuǎn)移到自身的半胱氨酸殘基上。這一過程中，MGMT自身會(huì)發(fā)生不可逆的烷基化修飾，從而失去活性，但卻成功地將受損的鳥嘌呤恢復(fù)為正常狀態(tài)，使DNA結(jié)構(gòu)得以修復(fù)，有效避免了因DNA損傷而導(dǎo)致的基因突變和細(xì)胞癌變，保障了基因組的穩(wěn)定性。MGMT對(duì)DNA損傷的修復(fù)具有高效性和及時(shí)性，能夠在短時(shí)間內(nèi)對(duì)烷化劑造成的損傷進(jìn)行修復(fù)，降低基因突變的風(fēng)險(xiǎn)，維持細(xì)胞的正常生理功能。2.3XRCC1基因介紹XRCC1基因，即X線修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1，位于人類染色體19q13.31區(qū)域。該基因全長約32.3kb，由17個(gè)外顯子組成，其轉(zhuǎn)錄生成的mRNA全長2087nt，最終編碼產(chǎn)生由634個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)。XRCC1蛋白在結(jié)構(gòu)上可分為多個(gè)功能區(qū)域，每個(gè)區(qū)域都與特定的蛋白質(zhì)相互作用，從而在DNA修復(fù)過程中發(fā)揮獨(dú)特作用。例如，其N端功能域能夠與聚合酶β結(jié)合，通過調(diào)節(jié)聚合酶β的活性，精確有效地識(shí)別和修復(fù)DNA；中部的乳腺癌易感基因蛋白-1同源羧基末端I區(qū)（BRCTI）則與多聚ADP核糖轉(zhuǎn)移酶（PARP1）相互作用；而羧基末端的BRCTII區(qū)域主要與DNA連接酶III相互作用，影響其連接活性。XRCC1在DNA修復(fù)過程中扮演著極為重要的角色，主要參與堿基切除修復(fù)（BER）途徑，這是細(xì)胞應(yīng)對(duì)DNA單鏈斷裂、堿基損傷等常見損傷類型的關(guān)鍵修復(fù)機(jī)制。當(dāng)細(xì)胞受到電離輻射、烷化劑等因素作用導(dǎo)致DNA出現(xiàn)單鏈斷裂或堿基損傷時(shí)，XRCC1會(huì)迅速被招募到損傷部位。首先，PARP1能夠快速識(shí)別并結(jié)合到DNA的損傷位點(diǎn)，隨后XRCC1與PARP1相互作用，被招募至損傷區(qū)域。接著，XRCC1利用自身結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，協(xié)助招募其他關(guān)鍵的修復(fù)酶，如DNA連接酶III和聚合酶β。在修復(fù)過程中，聚合酶β負(fù)責(zé)填補(bǔ)因堿基切除或單鏈斷裂而產(chǎn)生的核苷酸裂隙，以正確的堿基序列為模板合成新的DNA片段；DNA連接酶III則在聚合酶β完成填補(bǔ)后，將新合成的DNA片段與原有的DNA鏈連接起來，形成完整的DNA分子。XRCC1通過與這些修復(fù)酶的協(xié)同作用，確保修復(fù)過程的準(zhǔn)確性和高效性，維持基因組的穩(wěn)定性。例如，在正常細(xì)胞中，當(dāng)DNA受到氧化損傷導(dǎo)致堿基損傷時(shí)，XRCC1參與的堿基切除修復(fù)途徑能夠及時(shí)修復(fù)損傷，保證細(xì)胞的正常功能和遺傳信息的穩(wěn)定傳遞；若XRCC1基因發(fā)生突變或表達(dá)異常，導(dǎo)致其功能受損，細(xì)胞對(duì)DNA損傷的修復(fù)能力就會(huì)下降，DNA損傷無法及時(shí)修復(fù)，從而增加了基因突變和細(xì)胞癌變的風(fēng)險(xiǎn)。三、研究設(shè)計(jì)與方法3.1研究對(duì)象本研究的樣本來源于[具體醫(yī)院名稱]在[具體時(shí)間段]內(nèi)收治的患者。食管癌患者樣本均為在該醫(yī)院接受食管癌根治術(shù)的患者，共納入[X]例。納入標(biāo)準(zhǔn)如下：經(jīng)術(shù)后病理檢查確診為食管癌，病理類型不限；患者簽署知情同意書，自愿參與本研究；患者術(shù)前未接受過放療、化療或其他針對(duì)食管癌的系統(tǒng)性治療，以避免治療對(duì)基因表達(dá)產(chǎn)生干擾。排除標(biāo)準(zhǔn)為：合并其他惡性腫瘤，防止其他腫瘤對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生混淆；存在嚴(yán)重的心、肝、腎等重要臟器功能障礙，可能影響基因表達(dá)或患者的生存狀態(tài)，干擾研究結(jié)果；患有精神疾病或認(rèn)知障礙，無法配合完成相關(guān)檢查和隨訪；臨床資料不完整，無法準(zhǔn)確獲取患者的相關(guān)信息，影響研究的準(zhǔn)確性和可靠性。正常對(duì)照樣本選取同期在該醫(yī)院因其他良性疾?。ㄈ缡彻芷交×?、食管憩室等）行食管局部切除手術(shù)或內(nèi)鏡下治療，且術(shù)后病理證實(shí)食管組織正常的患者，共[X]例。納入正常對(duì)照的標(biāo)準(zhǔn)為：食管組織經(jīng)病理檢查確認(rèn)無癌變及其他病變；患者簽署知情同意書；無惡性腫瘤病史，無放療、化療史。排除標(biāo)準(zhǔn)與食管癌患者組類似，包括排除合并其他惡性腫瘤、重要臟器功能障礙、精神疾病或認(rèn)知障礙以及臨床資料不完整的個(gè)體。通過嚴(yán)格的納入和排除標(biāo)準(zhǔn)篩選研究對(duì)象，以確保兩組樣本的同質(zhì)性和研究結(jié)果的準(zhǔn)確性，為后續(xù)深入研究MGMT和XRCC1基因在食管癌中的表達(dá)及作用機(jī)制奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。3.2實(shí)驗(yàn)方法3.2.1樣本采集與處理在食管癌根治術(shù)手術(shù)過程中，當(dāng)腫瘤組織被完整切除后，主刀醫(yī)生立即使用無菌器械切取大小約1cm×1cm×0.5cm的癌組織標(biāo)本。選取的部位需包含典型的腫瘤細(xì)胞區(qū)域，避免壞死組織和出血區(qū)域，以確保標(biāo)本的代表性。同時(shí)，在距離腫瘤邊緣5cm以上的正常食管組織處，同樣切取相同大小的標(biāo)本作為對(duì)照。標(biāo)本采集后，迅速放入含有10%中性福爾馬林固定液的標(biāo)本瓶中。固定液的量需確保完全浸沒標(biāo)本，以保證固定效果。標(biāo)本瓶需密封良好，防止固定液泄漏和標(biāo)本干燥。固定時(shí)間控制在12-24小時(shí)，固定完成后，將標(biāo)本轉(zhuǎn)移至70%乙醇溶液中保存，以防止組織進(jìn)一步退變，同時(shí)便于后續(xù)處理。在將標(biāo)本送往病理科進(jìn)行進(jìn)一步處理時(shí)，需填寫詳細(xì)的標(biāo)本送檢單。送檢單上記錄患者的基本信息，包括姓名、性別、年齡、住院號(hào)、病歷號(hào)等，以及手術(shù)信息，如手術(shù)日期、手術(shù)名稱、標(biāo)本部位等，確保標(biāo)本信息的可追溯性。病理科接收標(biāo)本后，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)的脫水、透明、浸蠟和包埋處理。首先將標(biāo)本依次放入不同濃度梯度的乙醇溶液（70%、80%、90%、95%、100%）中進(jìn)行脫水，每個(gè)濃度的脫水時(shí)間根據(jù)標(biāo)本大小和質(zhì)地適當(dāng)調(diào)整，一般在1-3小時(shí)不等，以徹底去除組織中的水分。脫水后的標(biāo)本再放入二甲苯等透明劑中進(jìn)行透明處理，使組織變得透明，便于后續(xù)浸蠟，透明時(shí)間約為30分鐘-1小時(shí)。隨后，將透明后的標(biāo)本放入熔化的石蠟中進(jìn)行浸蠟，浸蠟過程在恒溫箱中進(jìn)行，溫度控制在56-58℃，浸蠟時(shí)間為2-3小時(shí)，確保石蠟充分滲透到組織內(nèi)部。最后，將浸蠟后的標(biāo)本包埋在石蠟塊中，制成石蠟組織塊，以便后續(xù)切片。使用切片機(jī)將石蠟組織塊切成厚度為4μm的連續(xù)切片，將切片裱貼在經(jīng)多聚賴氨酸處理的載玻片上，置于60℃恒溫箱中烘烤1-2小時(shí)，使切片牢固地粘附在載玻片上，完成標(biāo)本的處理過程，為后續(xù)的免疫組化檢測(cè)做好準(zhǔn)備。3.2.2免疫組化技術(shù)檢測(cè)基因表達(dá)免疫組化技術(shù)的基本原理是基于抗原與抗體之間的特異性結(jié)合反應(yīng)。利用針對(duì)MGMT和XRCC1蛋白的特異性抗體，與組織切片中的相應(yīng)抗原進(jìn)行結(jié)合。當(dāng)抗體與抗原結(jié)合后，通過標(biāo)記在抗體上的顯色系統(tǒng)，如辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）等，催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，從而使含有目標(biāo)抗原的細(xì)胞或組織部位呈現(xiàn)出特定的顏色，進(jìn)而在顯微鏡下觀察和判斷MGMT和XRCC1蛋白的表達(dá)情況和定位。具體操作步驟如下：將制備好的組織切片從恒溫箱中取出，冷卻至室溫。將切片放入二甲苯中進(jìn)行脫蠟處理，每次15分鐘，共進(jìn)行3次，以徹底去除石蠟。隨后，依次將切片放入不同濃度的乙醇溶液（100%、95%、80%、70%）中進(jìn)行水化，每個(gè)濃度浸泡5分鐘，使組織恢復(fù)到含水狀態(tài)。水化后的切片用蒸餾水沖洗3次，每次3分鐘。將切片放入盛有0.01M檸檬酸鈉緩沖液（pH6.0）的容器中，進(jìn)行抗原修復(fù)。采用微波修復(fù)法，將容器放入微波爐中，高火加熱至沸騰后，持續(xù)加熱5-10分鐘，然后自然冷卻至室溫。抗原修復(fù)后，將切片用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。為了減少非特異性染色，在切片上滴加5%羊血清封閉液，放入濕盒中，室溫孵育30分鐘。孵育結(jié)束后，傾去封閉液，不洗，直接在切片上滴加適當(dāng)稀釋度的一抗（針對(duì)MGMT和XRCC1的抗體），放入濕盒中，4℃過夜孵育。從冰箱中取出切片，室溫復(fù)溫30分鐘，然后用PBS緩沖液沖洗5次，每次5分鐘。在切片上滴加與一抗來源種屬匹配的二抗（如羊抗兔IgG等），放入濕盒中，37℃孵育30分鐘。孵育結(jié)束后，用PBS緩沖液沖洗5次，每次5分鐘。滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素（SP）工作液，37℃孵育30分鐘。孵育后，用PBS緩沖液沖洗5次，每次5分鐘。最后，滴加新鮮配制的DAB顯色液，在顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)陽性部位呈現(xiàn)出明顯的棕黃色時(shí)，立即用蒸餾水沖洗終止顯色反應(yīng)。用蘇木精復(fù)染細(xì)胞核3-5分鐘，然后用自來水沖洗返藍(lán)。將切片依次放入不同濃度的乙醇溶液（70%、80%、95%、100%）中進(jìn)行脫水，每個(gè)濃度浸泡3-5分鐘。脫水后的切片用二甲苯透明處理2次，每次5分鐘。最后，用中性樹膠封片，待干燥后即可在顯微鏡下觀察。免疫組化結(jié)果的判斷方法如下：在光學(xué)顯微鏡下，觀察組織切片中細(xì)胞的染色情況。MGMT和XRCC1蛋白陽性表達(dá)產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞核和（或）細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色。根據(jù)染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞所占比例進(jìn)行綜合判斷。染色強(qiáng)度分為4級(jí)：無染色為0分；淺黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。陽性細(xì)胞所占比例分為5級(jí)：陽性細(xì)胞數(shù)＜5%為0分；5%-25%為1分；26%-50%為2分；51%-75%為3分；＞75%為4分。將染色強(qiáng)度得分與陽性細(xì)胞所占比例得分相乘，得到最終的表達(dá)評(píng)分：0-2分為陰性（-）；3-4分為弱陽性（+）；5-8分為中度陽性（++）；9-12分為強(qiáng)陽性（+++）。由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師采用雙盲法獨(dú)立閱片，當(dāng)兩者評(píng)分差異較大時(shí)，共同協(xié)商確定最終評(píng)分。3.2.3其他檢測(cè)技術(shù)（如有）本研究中還采用了實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）技術(shù)，以進(jìn)一步驗(yàn)證免疫組化的檢測(cè)結(jié)果，并從mRNA水平分析MGMT和XRCC1基因在食管癌組織和正常食管組織中的表達(dá)差異。qRT-PCR技術(shù)的原理是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)的變化實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程。隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，擴(kuò)增產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)強(qiáng)度也隨之增強(qiáng)。通過對(duì)熒光信號(hào)的檢測(cè)和分析，可以精確測(cè)定目的基因的初始拷貝數(shù)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)水平的定量分析。具體操作過程如下：使用RNA提取試劑盒（如Trizol試劑）從食管癌組織和正常食管組織標(biāo)本中提取總RNA。在提取過程中，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，確保RNA的純度和完整性。首先將組織標(biāo)本剪碎，加入適量的Trizol試劑，充分勻漿，使細(xì)胞裂解，釋放出RNA。然后依次加入氯仿、異丙醇等試劑進(jìn)行抽提和沉淀，去除蛋白質(zhì)、DNA等雜質(zhì)，得到純凈的RNA。提取的RNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其完整性，觀察28S和18SrRNA條帶的亮度和清晰度，同時(shí)使用分光光度計(jì)測(cè)定其濃度和純度，確保OD260/OD280比值在1.8-2.0之間。以提取的總RNA為模板，利用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系中，加入隨機(jī)引物、逆轉(zhuǎn)錄酶、dNTPs等試劑，按照試劑盒推薦的反應(yīng)條件進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，為后續(xù)的PCR擴(kuò)增提供模板。根據(jù)MGMT和XRCC1基因的序列，設(shè)計(jì)并合成特異性引物。引物的設(shè)計(jì)遵循引物設(shè)計(jì)原則，如引物長度一般為18-25bp，GC含量在40%-60%之間，避免引物二聚體和發(fā)夾結(jié)構(gòu)的形成等。同時(shí)，選擇β-actin作為內(nèi)參基因，以校正不同樣本之間的RNA上樣量差異。在qRT-PCR反應(yīng)體系中，加入cDNA模板、特異性引物、SYBRGreen熒光染料、dNTPs、Taq酶等試劑，總體積為20μl。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30s；然后進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括95℃變性5s，60℃退火和延伸30s。在反應(yīng)過程中，通過熒光定量PCR儀實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)的變化，記錄每個(gè)循環(huán)的Ct值（循環(huán)閾值）。Ct值是指在PCR擴(kuò)增過程中，熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。Ct值與起始模板量的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系，起始模板量越多，Ct值越小。采用2-ΔΔCt法計(jì)算MGMT和XRCC1基因在食管癌組織和正常食管組織中的相對(duì)表達(dá)量。首先計(jì)算每個(gè)樣本中目的基因（MGMT或XRCC1）與內(nèi)參基因（β-actin）的Ct值之差（ΔCt），即ΔCt=Ct目的基因-Ctβ-actin。然后計(jì)算食管癌組織與正常食管組織中ΔCt的差值（ΔΔCt），即ΔΔCt=ΔCt食管癌組織-ΔCt正常食管組織。最后，根據(jù)公式2-ΔΔCt計(jì)算目的基因在食管癌組織中的相對(duì)表達(dá)量，若2-ΔΔCt＞1，表示目的基因在食管癌組織中表達(dá)上調(diào)；若2-ΔΔCt＜1，表示目的基因在食管癌組織中表達(dá)下調(diào)。3.3數(shù)據(jù)處理與分析本研究采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。對(duì)于計(jì)量資料，如免疫組化評(píng)分、qRT-PCR檢測(cè)得到的基因相對(duì)表達(dá)量等，若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）進(jìn)行描述，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組間比較則采用單因素方差分析（One-wayANOVA），當(dāng)方差分析結(jié)果顯示存在組間差異時(shí)，進(jìn)一步采用LSD法或Dunnett'sT3法進(jìn)行兩兩比較，以確定具體哪些組之間存在顯著差異。若數(shù)據(jù)不服從正態(tài)分布，則采用非參數(shù)檢驗(yàn)，如Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)用于多組比較，Mann-WhitneyU檢驗(yàn)用于兩組比較。對(duì)于計(jì)數(shù)資料，如不同病理類型、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等的例數(shù)分布，采用例數(shù)（n）和百分比（%）進(jìn)行描述。兩組或多組間的比較采用卡方檢驗(yàn)（x2檢驗(yàn)），當(dāng)理論頻數(shù)小于5時(shí)，采用連續(xù)校正的卡方檢驗(yàn)或Fisher確切概率法進(jìn)行分析。為了探究MGMT和XRCC1基因表達(dá)水平與食管癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系，采用Pearson相關(guān)分析或Spearman秩相關(guān)分析。若數(shù)據(jù)為正態(tài)分布的定量資料，采用Pearson相關(guān)分析計(jì)算相關(guān)系數(shù)r，判斷基因表達(dá)水平與各臨床病理參數(shù)之間的線性相關(guān)程度；若數(shù)據(jù)為非正態(tài)分布或等級(jí)資料，則采用Spearman秩相關(guān)分析，計(jì)算秩相關(guān)系數(shù)rs，以明確兩者之間的相關(guān)性。在生存分析方面，采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，以直觀展示不同MGMT和XRCC1表達(dá)水平患者的生存情況。通過Log-rank檢驗(yàn)比較不同組之間的生存曲線差異，判斷基因表達(dá)水平是否對(duì)患者的生存時(shí)間產(chǎn)生顯著影響。同時(shí)，采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行多因素分析，納入可能影響患者生存的因素，如年齡、性別、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及MGMT和XRCC1基因表達(dá)水平等，篩選出對(duì)患者生存有獨(dú)立影響的危險(xiǎn)因素，并計(jì)算其相對(duì)危險(xiǎn)度（HR）和95%可信區(qū)間（95%CI），為食管癌患者的預(yù)后評(píng)估提供更全面、準(zhǔn)確的依據(jù)。在所有統(tǒng)計(jì)分析中，以P＜0.05作為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)，以確保研究結(jié)果的可靠性和科學(xué)性。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1MGMT和XRCC1在食管癌組織及正常食管組織中的表達(dá)水平通過免疫組化技術(shù)對(duì)食管癌組織和正常食管組織中MGMT和XRCC1蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，在正常食管組織中，MGMT蛋白主要定位于細(xì)胞核，少數(shù)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)也有微弱表達(dá)，陽性細(xì)胞數(shù)較少，呈散在分布，染色強(qiáng)度較弱，多為淺黃色。XRCC1蛋白同樣主要定位于細(xì)胞核，少量表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，陽性細(xì)胞分布稀疏，染色較淺。在食管癌組織中，MGMT蛋白的表達(dá)明顯增強(qiáng)，陽性細(xì)胞數(shù)增多，呈彌漫性或灶性分布，染色強(qiáng)度也明顯加深，棕黃色或棕褐色的陽性顆粒較為明顯。XRCC1蛋白在食管癌組織中的表達(dá)也顯著高于正常食管組織，陽性細(xì)胞呈團(tuán)塊狀或片狀分布，染色強(qiáng)度較強(qiáng)，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均可見明顯的棕黃色陽性顆粒。對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行量化分析，結(jié)果見表1。食管癌組織中MGMT蛋白的陽性表達(dá)率為[X1]%（[X1]例陽性/[總例數(shù)]例），明顯高于正常食管組織的[X2]%（[X2]例陽性/[總例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=[具體值]，P＜0.05）。食管癌組織中XRCC1蛋白的陽性表達(dá)率為[X3]%（[X3]例陽性/[總例數(shù)]例），顯著高于正常食管組織的[X4]%（[X4]例陽性/[總例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=[具體值]，P＜0.05）。進(jìn)一步采用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)MGMT和XRCC1基因在mRNA水平的表達(dá)，結(jié)果與免疫組化結(jié)果一致。食管癌組織中MGMT基因的相對(duì)表達(dá)量為[X5]±[X6]，顯著高于正常食管組織的[X7]±[X8]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=[具體值]，P＜0.05）；XRCC1基因在食管癌組織中的相對(duì)表達(dá)量為[X9]±[X10]，明顯高于正常食管組織的[X11]±[X12]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=[具體值]，P＜0.05）。具體數(shù)據(jù)詳見圖1和圖2。表1MGMT和XRCC1在食管癌組織及正常食管組織中的表達(dá)情況組織類型例數(shù)MGMT陽性例數(shù)（%）XRCC1陽性例數(shù)（%）食管癌組織[總例數(shù)][X1][X3]正常食管組織[總例數(shù)][X2][X4]圖1MGMT在食管癌組織及正常食管組織中的相對(duì)表達(dá)量（橫坐標(biāo)為組織類型，縱坐標(biāo)為相對(duì)表達(dá)量，食管癌組織的表達(dá)量顯著高于正常食管組織，*P＜0.05）圖2XRCC1在食管癌組織及正常食管組織中的相對(duì)表達(dá)量（橫坐標(biāo)為組織類型，縱坐標(biāo)為相對(duì)表達(dá)量，食管癌組織的表達(dá)量顯著高于正常食管組織，*P＜0.05）4.2MGMT和XRCC1表達(dá)與食管癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性進(jìn)一步分析MGMT和XRCC1基因表達(dá)與食管癌臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性，結(jié)果如表2所示。在不同性別患者中，食管癌組織的MGMT陽性表達(dá)率男性為[X1]%（[X1]例陽性/[男性例數(shù)]例），女性為[X2]%（[X2]例陽性/[女性例數(shù)]例），經(jīng)卡方檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=[具體值]，P＞0.05）；XRCC1陽性表達(dá)率男性為[X3]%（[X3]例陽性/[男性例數(shù)]例），女性為[X4]%（[X4]例陽性/[女性例數(shù)]例），差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=[具體值]，P＞0.05）。在不同年齡組（以60歲為界，分為＜60歲組和≥60歲組）中，MGMT和XRCC1的陽性表達(dá)率差異同樣無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在食管癌的TNM分期方面，隨著分期的進(jìn)展（I期、II期、III期、IV期），MGMT陽性表達(dá)率呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢(shì)。I期患者中MGMT陽性表達(dá)率為[X5]%（[X5]例陽性/[I期例數(shù)]例），II期為[X6]%（[X6]例陽性/[II期例數(shù)]例），III期為[X7]%（[X7]例陽性/[III期例數(shù)]例），IV期為[X8]%（[X8]例陽性/[IV期例數(shù)]例）。經(jīng)趨勢(shì)卡方檢驗(yàn)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2趨勢(shì)=[具體值]，P＜0.05）。XRCC1陽性表達(dá)率在不同TNM分期中雖也有變化趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=[具體值]，P＞0.05）。在腫瘤分化程度上，高分化食管癌組織中MGMT陽性表達(dá)率為[X9]%（[X9]例陽性/[高分化例數(shù)]例），中分化為[X10]%（[X10]例陽性/[中分化例數(shù)]例），低分化為[X11]%（[X11]例陽性/[低分化例數(shù)]例），隨著分化程度降低，MGMT陽性表達(dá)率顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=[具體值]，P＜0.05）。XRCC1陽性表達(dá)率在不同分化程度的食管癌組織中，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=[具體值]，P＞0.05）。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌患者中，MGMT陽性表達(dá)率為[X12]%（[X12]例陽性/[有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移例數(shù)]例），顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的[X13]%（[X13]例陽性/[無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=[具體值]，P＜0.05）。XRCC1陽性表達(dá)率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者之間，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=[具體值]，P＞0.05）。表2MGMT和XRCC1表達(dá)與食管癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性臨床病理參數(shù)例數(shù)MGMT陽性例數(shù)（%）x2值P值XRCC1陽性例數(shù)（%）x2值P值性別男[男性例數(shù)][X1][具體值]＞0.05[X3][具體值]＞0.05女[女性例數(shù)][X2][X4]年齡（歲）＜60[例數(shù)][X14][具體值]＞0.05[X15][具體值]＞0.05≥60[例數(shù)][X16][X17]TNM分期I期[例數(shù)][X5][具體值]＜0.05[X18][具體值]＞0.05II期[例數(shù)][X6][X19]III期[例數(shù)][X7][X20]IV期[例數(shù)][X8][X21]分化程度高分化[例數(shù)][X9][具體值]＜0.05[X22][具體值]＞0.05中分化[例數(shù)][X10][X23]低分化[例數(shù)][X11][X24]淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有[例數(shù)][X12][具體值]＜0.05[X25][具體值]＞0.05無[例數(shù)][X13][X26]4.3MGMT和XRCC1表達(dá)之間的相關(guān)性進(jìn)一步對(duì)MGMT和XRCC1在食管癌組織中的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，兩者之間存在顯著的正相關(guān)關(guān)系（r=[具體相關(guān)系數(shù)值]，P＜0.05）。具體數(shù)據(jù)見表3，在MGMT陽性表達(dá)的食管癌組織中，XRCC1陽性表達(dá)的比例較高；而在MGMT陰性表達(dá)的組織中，XRCC1陽性表達(dá)的比例相對(duì)較低。例如，在[具體病例數(shù)]例MGMT陽性表達(dá)的食管癌組織中，有[XRCC1陽性例數(shù)]例XRCC1也呈陽性表達(dá)，占比為[X]%；而在[MGMT陰性例數(shù)]例MGMT陰性表達(dá)的組織中，XRCC1陽性表達(dá)的僅[XRCC1陽性例數(shù)]例，占比為[X]%。這表明MGMT和XRCC1在食管癌組織中的表達(dá)具有協(xié)同性，兩者可能在食管癌的發(fā)生、發(fā)展過程中存在相互作用，共同參與了DNA修復(fù)過程，維持細(xì)胞的生存和增殖。表3MGMT和XRCC1在食管癌組織中的表達(dá)相關(guān)性MGMT表達(dá)例數(shù)XRCC1陽性例數(shù)（%）XRCC1陰性例數(shù)（%）陽性[MGMT陽性例數(shù)][XRCC1陽性例數(shù)][MGMT陽性XRCC1陰性例數(shù)]陰性[MGMT陰性例數(shù)][XRCC1陽性例數(shù)][MGMT陰性XRCC1陰性例數(shù)]4.4MGMT和XRCC1表達(dá)與食管癌患者預(yù)后的關(guān)系對(duì)[X]例食管癌患者進(jìn)行隨訪，隨訪時(shí)間從手術(shù)日期開始計(jì)算，截止到患者死亡、失訪或隨訪結(jié)束日期（[具體隨訪截止日期]），隨訪期間患者的生存狀態(tài)通過電話隨訪、門診復(fù)查或查閱住院病歷等方式進(jìn)行記錄。采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，結(jié)果如圖3所示。高表達(dá)MGMT的食管癌患者5年生存率為[X]%（[具體例數(shù)]例生存/[高表達(dá)MGMT例數(shù)]例），低表達(dá)MGMT患者的5年生存率為[X]%（[具體例數(shù)]例生存/[低表達(dá)MGMT例數(shù)]例）。經(jīng)Log-rank檢驗(yàn)，兩組生存曲線差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[具體值]，P＜0.05），表明MGMT表達(dá)水平與食管癌患者的生存時(shí)間密切相關(guān)，高表達(dá)MGMT的患者生存時(shí)間明顯長于低表達(dá)患者。這可能是因?yàn)楦弑磉_(dá)的MGMT能夠更有效地修復(fù)DNA損傷，維持基因組的穩(wěn)定性，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，從而改善患者的預(yù)后。同理，高表達(dá)XRCC1的食管癌患者5年生存率為[X]%（[具體例數(shù)]例生存/[高表達(dá)XRCC1例數(shù)]例），低表達(dá)XRCC1患者的5年生存率為[X]%（[具體例數(shù)]例生存/[低表達(dá)XRCC1例數(shù)]例）。Log-rank檢驗(yàn)顯示，兩組生存曲線差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[具體值]，P＜0.05），提示XRCC1表達(dá)水平也是影響食管癌患者預(yù)后的重要因素，高表達(dá)XRCC1的患者生存情況較好。這可能與XRCC1參與堿基切除修復(fù)途徑，及時(shí)修復(fù)DNA損傷，減少基因突變的發(fā)生，進(jìn)而降低腫瘤細(xì)胞的惡性程度有關(guān)。進(jìn)一步將患者分為MGMT和XRCC1雙高表達(dá)組（MGMT和XRCC1均為高表達(dá)）、單高表達(dá)組（MGMT高表達(dá)且XRCC1低表達(dá)，或MGMT低表達(dá)且XRCC1高表達(dá)）和雙低表達(dá)組（MGMT和XRCC1均為低表達(dá)）。生存分析結(jié)果顯示，雙高表達(dá)組患者的5年生存率最高，為[X]%（[具體例數(shù)]例生存/[雙高表達(dá)例數(shù)]例）；單高表達(dá)組次之，為[X]%（[具體例數(shù)]例生存/[單高表達(dá)例數(shù)]例）；雙低表達(dá)組最低，為[X]%（[具體例數(shù)]例生存/[雙低表達(dá)例數(shù)]例）。經(jīng)Log-rank檢驗(yàn)，三組生存曲線差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[具體值]，P＜0.05）。這表明MGMT和XRCC1的表達(dá)具有協(xié)同作用，雙高表達(dá)的患者預(yù)后最好，提示同時(shí)檢測(cè)MGMT和XRCC1的表達(dá)水平，對(duì)于評(píng)估食管癌患者的預(yù)后具有更重要的價(jià)值。為了進(jìn)一步明確影響食管癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素，采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行多因素分析。將年齡、性別、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及MGMT和XRCC1基因表達(dá)水平等因素納入模型，結(jié)果顯示，腫瘤分期（HR=[具體值]，95%CI=[具體區(qū)間]，P＜0.05）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（HR=[具體值]，95%CI=[具體區(qū)間]，P＜0.05）、MGMT表達(dá)水平（HR=[具體值]，95%CI=[具體區(qū)間]，P＜0.05）和XRCC1表達(dá)水平（HR=[具體值]，95%CI=[具體區(qū)間]，P＜0.05）是影響食管癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。腫瘤分期越晚、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、MGMT和XRCC1低表達(dá)的患者，其死亡風(fēng)險(xiǎn)越高，預(yù)后越差。這為臨床醫(yī)生制定個(gè)性化的治療方案和評(píng)估患者預(yù)后提供了重要的參考依據(jù)。圖3MGMT和XRCC1表達(dá)與食管癌患者生存曲線（A為MGMT表達(dá)與生存曲線，B為XRCC1表達(dá)與生存曲線，C為MGMT和XRCC1聯(lián)合表達(dá)與生存曲線，高表達(dá)組生存時(shí)間明顯長于低表達(dá)組，雙高表達(dá)組預(yù)后最佳，*P＜0.05）五、討論5.1MGMT和XRCC1在食管癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制探討本研究結(jié)果顯示，MGMT和XRCC1在食管癌組織中的表達(dá)顯著高于正常食管組織，這表明兩基因在食管癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能發(fā)揮著重要作用。從MGMT基因來看，其編碼的蛋白在DNA修復(fù)過程中，主要負(fù)責(zé)對(duì)烷化劑導(dǎo)致的DNA損傷進(jìn)行直接修復(fù)。當(dāng)細(xì)胞受到烷化劑的攻擊時(shí)，DNA鳥嘌呤的O6位容易被烷基化修飾，形成O6-烷基鳥嘌呤加合物。這種加合物會(huì)改變DNA的正常結(jié)構(gòu)和堿基配對(duì)方式，在DNA復(fù)制過程中，可能導(dǎo)致堿基錯(cuò)配，進(jìn)而引發(fā)基因突變。而MGMT能夠識(shí)別并結(jié)合含有O6-烷基鳥嘌呤的DNA損傷部位，通過將烷基基團(tuán)轉(zhuǎn)移到自身的半胱氨酸殘基上，使受損的鳥嘌呤恢復(fù)正常，有效避免了因DNA損傷而導(dǎo)致的基因突變和細(xì)胞癌變。在食管癌組織中，MGMT表達(dá)上調(diào)，可能是機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞內(nèi)DNA損傷增加的一種代償性反應(yīng)。腫瘤細(xì)胞在快速增殖過程中，DNA復(fù)制頻繁，更容易受到內(nèi)源性和外源性因素的損傷，因此需要更高水平的MGMT來維持基因組的穩(wěn)定性。XRCC1基因主要參與堿基切除修復(fù)途徑，在維持基因組穩(wěn)定性方面同樣起著關(guān)鍵作用。當(dāng)細(xì)胞受到電離輻射、氧化應(yīng)激等因素作用時(shí)，DNA會(huì)出現(xiàn)單鏈斷裂、堿基損傷等。XRCC1蛋白能夠與PARP1、DNA連接酶III、聚合酶β等多種修復(fù)酶相互作用，協(xié)同完成對(duì)DNA損傷的修復(fù)。在食管癌組織中，XRCC1表達(dá)升高，可能意味著腫瘤細(xì)胞試圖通過增強(qiáng)堿基切除修復(fù)能力，來應(yīng)對(duì)DNA損傷的增加。這一現(xiàn)象也提示，XRCC1在食管癌的發(fā)生、發(fā)展過程中，對(duì)于維持腫瘤細(xì)胞的生存和增殖具有重要意義。例如，當(dāng)腫瘤細(xì)胞受到氧化應(yīng)激導(dǎo)致DNA堿基損傷時(shí)，XRCC1參與的修復(fù)途徑能夠及時(shí)修復(fù)損傷，使腫瘤細(xì)胞得以繼續(xù)生存和增殖。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)MGMT和XRCC1在食管癌組織中的表達(dá)存在顯著的正相關(guān)關(guān)系。這一結(jié)果表明，兩基因在食管癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能存在協(xié)同作用。一方面，兩者可能共同參與了DNA損傷修復(fù)的網(wǎng)絡(luò)，針對(duì)不同類型的DNA損傷，發(fā)揮各自的修復(fù)功能，相互協(xié)作，共同維持基因組的穩(wěn)定性。例如，當(dāng)細(xì)胞同時(shí)受到烷化劑和電離輻射的作用時(shí)，MGMT可以修復(fù)烷化劑導(dǎo)致的O6-烷基鳥嘌呤損傷，而XRCC1則參與修復(fù)電離輻射引起的堿基損傷和單鏈斷裂，兩者相互配合，確保DNA損傷得到全面修復(fù)。另一方面，MGMT和XRCC1的協(xié)同表達(dá)可能與腫瘤細(xì)胞的耐藥性相關(guān)。研究表明，DNA修復(fù)基因的高表達(dá)往往與腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物和放療的耐藥性增加有關(guān)。在食管癌中，MGMT和XRCC1的同時(shí)高表達(dá)，可能使腫瘤細(xì)胞對(duì)多種治療手段產(chǎn)生更強(qiáng)的抵抗能力，從而影響治療效果。5.2MGMT和XRCC1表達(dá)與食管癌臨床病理特征及預(yù)后相關(guān)性分析本研究對(duì)MGMT和XRCC1表達(dá)與食管癌臨床病理特征的相關(guān)性進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，MGMT表達(dá)與食管癌的TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。隨著TNM分期的進(jìn)展，MGMT陽性表達(dá)率逐漸降低；腫瘤分化程度越低，MGMT陽性表達(dá)率也越低；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者M(jìn)GMT陽性表達(dá)率顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。這表明MGMT可能在食管癌的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。在腫瘤的早期階段，機(jī)體可能通過上調(diào)MGMT的表達(dá)，來增強(qiáng)對(duì)DNA損傷的修復(fù)能力，維持腫瘤細(xì)胞的基因組穩(wěn)定性，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生存和增殖。然而，隨著腫瘤的發(fā)展，當(dāng)腫瘤細(xì)胞面臨更復(fù)雜的微環(huán)境和更強(qiáng)的選擇壓力時(shí)，MGMT的表達(dá)可能受到抑制，導(dǎo)致DNA損傷修復(fù)能力下降，基因組不穩(wěn)定性增加，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。相比之下，XRCC1表達(dá)與食管癌的各項(xiàng)臨床病理參數(shù)（性別、年齡、TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等）之間未發(fā)現(xiàn)顯著相關(guān)性。這可能是由于XRCC1在食管癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用較為復(fù)雜，受到多種因素的調(diào)控，其表達(dá)變化對(duì)臨床病理特征的影響可能被其他因素所掩蓋。雖然XRCC1在食管癌組織中的表達(dá)總體上高于正常食管組織，但這種升高可能并不直接反映腫瘤的惡性程度和進(jìn)展情況，而是在維持腫瘤細(xì)胞的基本生存和代謝方面發(fā)揮作用。生存分析結(jié)果顯示，MGMT和XRCC1表達(dá)水平均與食管癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。高表達(dá)MGMT和XRCC1的患者5年生存率明顯高于低表達(dá)患者，且兩者雙高表達(dá)的患者預(yù)后最佳。這進(jìn)一步證實(shí)了MGMT和XRCC1在食管癌發(fā)生、發(fā)展中的重要作用。高表達(dá)的MGMT和XRCC1能夠更有效地修復(fù)DNA損傷，減少基因突變的發(fā)生，維持基因組的穩(wěn)定性，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，改善患者的預(yù)后。相反，低表達(dá)的MGMT和XRCC1使得腫瘤細(xì)胞對(duì)DNA損傷的修復(fù)能力減弱，基因組不穩(wěn)定，腫瘤細(xì)胞更容易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致患者預(yù)后不良。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型多因素分析結(jié)果表明，腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、MGMT表達(dá)水平和XRCC1表達(dá)水平是影響食管癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。腫瘤分期越晚，意味著腫瘤細(xì)胞的侵襲范圍越廣，對(duì)周圍組織和器官的破壞越嚴(yán)重，患者的預(yù)后也就越差。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是腫瘤轉(zhuǎn)移的重要途徑之一，一旦出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，說明腫瘤細(xì)胞已經(jīng)突破了局部組織的限制，進(jìn)入了淋巴循環(huán)，更容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，從而顯著增加患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)。而MGMT和XRCC1表達(dá)水平的降低，使得腫瘤細(xì)胞的DNA修復(fù)能力受損，進(jìn)一步加劇了腫瘤的惡性程度，導(dǎo)致患者預(yù)后不佳。這些結(jié)果為臨床醫(yī)生評(píng)估食管癌患者的預(yù)后提供了重要的參考指標(biāo)，有助于制定個(gè)性化的治療方案。對(duì)于腫瘤分期晚、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移且MGMT和XRCC1低表達(dá)的患者，應(yīng)采取更積極的綜合治療措施，如強(qiáng)化化療、放療聯(lián)合靶向治療等，以提高治療效果，改善患者的預(yù)后。5.3本研究結(jié)果與其他相關(guān)研究的比較與分析將本研究結(jié)果與其他相關(guān)研究進(jìn)行對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，在MGMT和XRCC1基因表達(dá)水平方面，多數(shù)研究與本研究結(jié)果具有一致性。許多研究均表明MGMT和XRCC1在食管癌組織中的表達(dá)顯著高于正常食管組織。有研究通過免疫組化和qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，食管癌組織中MGMT和XRCC1的蛋白和mRNA表達(dá)水平均明顯高于正常食管黏膜組織，這與本研究采用免疫組化和qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)得到的結(jié)果相符。然而，也有少數(shù)研究結(jié)果存在差異。有研究報(bào)道稱在部分食管癌病例中，MGMT的表達(dá)并未顯著升高，甚至出現(xiàn)了低表達(dá)的情況。這種差異可能是由于研究樣本的來源、病例選擇標(biāo)準(zhǔn)、檢測(cè)方法及技術(shù)的不同所導(dǎo)致。不同地區(qū)食管癌的發(fā)病因素和分子特征可能存在差異，這會(huì)影響基因的表達(dá)情況。本研究樣本來自[具體地區(qū)]，而其他研究的樣本可能來自不同地區(qū)，地域差異可能導(dǎo)致食管癌的發(fā)病機(jī)制和基因表達(dá)譜有所不同。在病例選擇標(biāo)準(zhǔn)上，若其他研究未嚴(yán)格控制患者的治療史、合并癥等因素，也可能對(duì)基因表達(dá)結(jié)果產(chǎn)生干擾。此外，不同的檢測(cè)方法和技術(shù)，如免疫組化中使用的抗體來源、質(zhì)量以及實(shí)驗(yàn)操作過程中的差異，qRT-PCR反應(yīng)體系和條件的不同等，都可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偏差。在MGMT和XRCC1表達(dá)與食管癌臨床病理特征的相關(guān)性方面，本研究發(fā)現(xiàn)MGMT表達(dá)與TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，而XRCC1表達(dá)與各項(xiàng)臨床病理參數(shù)無顯著相關(guān)性。部分研究支持MGMT與TNM分期和分化程度的負(fù)相關(guān)關(guān)系，認(rèn)為隨著腫瘤分期的進(jìn)展和分化程度的降低，MGMT表達(dá)下降，與本研究結(jié)果一致。然而，關(guān)于XRCC1與臨床病理特征的關(guān)系，不同研究結(jié)果存在較大差異。有研究表明XRCC1表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性患者組XRCC1在癌組織與癌旁組織的表達(dá)差異程度高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性患者組，這與本研究結(jié)果不同。分析其原因，可能是由于不同研究納入的樣本量大小、病理類型分布以及研究設(shè)計(jì)等方面存在差異。若研究樣本量較小，可能無法準(zhǔn)確反映XRCC1與臨床病理參數(shù)之間的真實(shí)關(guān)系。而且，食管癌病理類型多樣，不同病理類型中XRCC1的表達(dá)模式可能不同，若研究中病理類型分布不均衡，也會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。此外，研究設(shè)計(jì)的差異，如是否對(duì)其他影響因素進(jìn)行了有效的控制等，也可能導(dǎo)致研究結(jié)果的不一致。在預(yù)后相關(guān)性方面，本研究表明MGMT和XRCC1高表達(dá)的食管癌患者預(yù)后較好，且兩者雙高表達(dá)的患者預(yù)后最佳。多數(shù)相關(guān)研究也支持MGMT和XRCC1表達(dá)與食管癌患者預(yù)后的正相關(guān)關(guān)系，認(rèn)為高表達(dá)這兩個(gè)基因的患者生存時(shí)間更長，生存率更高。然而，也有研究報(bào)道稱未發(fā)現(xiàn)XRCC1蛋白表達(dá)影響食管鱗癌預(yù)后的證據(jù)，這與本研究結(jié)果存在差異。這可能是由于隨訪時(shí)間的長短、隨訪方式的差異以及研究對(duì)象的個(gè)體差異等因素造成的。隨訪時(shí)間過短可能無法觀察到基因表達(dá)對(duì)患者預(yù)后的長期影響；不同的隨訪方式，如電話隨訪、門診隨訪等，可能導(dǎo)致患者生存狀態(tài)信息的準(zhǔn)確性存在差異；研究對(duì)象的個(gè)體差異，如患者的基礎(chǔ)健康狀況、對(duì)治療的反應(yīng)等，也可能干擾基因表達(dá)與預(yù)后之間的關(guān)系。5.4研究的局限性與展望盡管本研究在探究DNA修復(fù)基因MGMT和XRCC1在食管癌中的表達(dá)及作用機(jī)制方面取得了一定成果，但仍存在一些局限性。首先，本研究樣本量相對(duì)較小，可能無法全面、準(zhǔn)確地反映MGMT和XRCC1在食管癌患者中的表達(dá)情況及與各種臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。較小的樣本量可能導(dǎo)致研究結(jié)果存在偏差，影響結(jié)論的普遍性和可靠性。在未來的研究中，應(yīng)進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，涵蓋不同地區(qū)、不同種族的食管癌患者，以增強(qiáng)研究結(jié)果的說服力。其次，本研究僅從蛋白和mRNA水平檢測(cè)了MGMT和XRCC1的表達(dá)情況，對(duì)于基因的調(diào)控機(jī)制研究不夠深入。DNA修復(fù)基因的表達(dá)受到多種因素的調(diào)控，包括轉(zhuǎn)錄因子、表觀遺傳修飾等。例如，MGMT基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)會(huì)影響其轉(zhuǎn)錄活性，進(jìn)而影響蛋白表達(dá)水平；XRCC1基因可能受到微小RNA（miRNA）的調(diào)控，miRNA可以通過與XRCC1mRNA的互補(bǔ)配對(duì)，抑制其翻譯過程或促進(jìn)其降解。未來可深入研究MGMT和XRCC1基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，探索相關(guān)的調(diào)控因子和信號(hào)通路，為食管癌的發(fā)病機(jī)制研究提供更深入的理論依據(jù)。此外，本研究主要探討了MGMT和XRCC1在食管癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中的作用，對(duì)于它們?cè)谑彻馨┲委熤械臐撛趹?yīng)用研究較少。鑒于DNA修復(fù)基因與腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物和放療的敏感性密切相關(guān)，后續(xù)研究可考慮開展相關(guān)的體外實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，探索以MGMT和XRCC1為靶點(diǎn)的食管癌治療新策略。例如，研發(fā)能夠抑制MGMT活性的小分子抑制劑，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)烷化劑類化療藥物的敏感性；或者通過基因編輯技術(shù)，調(diào)控XRCC1的表達(dá)，提高腫瘤細(xì)胞對(duì)放療的敏感性。同時(shí)，還可以結(jié)合臨床數(shù)據(jù)，評(píng)估這些治療策略的有效性和安全性，為食管癌的臨床治療提供新的思路和方法。在研究方法上，本研究主要采用了免疫組化和qRT-PCR技術(shù)，雖然這些技術(shù)能夠準(zhǔn)確檢測(cè)基因的表達(dá)水平，但對(duì)于基因功能的研究還不夠全面。未來可運(yùn)用基因敲除、過表達(dá)等技術(shù)，在細(xì)胞水平和動(dòng)物模型中深入研究MGMT和XRCC1的生物學(xué)功能及其在食管癌發(fā)生、發(fā)展過程中的具體作用機(jī)制。例如，構(gòu)建MGMT和XRCC1基因敲除的食管癌細(xì)胞系和動(dòng)物模型，觀察細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲等生物學(xué)行為的變化，以及腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移情況，從而更直接地揭示這兩個(gè)基因在食管癌中的作用。本研究雖然取得了一定進(jìn)展，但仍有許多方面有待進(jìn)一步完善和深入研究。未來的研究應(yīng)針對(duì)這些局限性，不斷拓展和深化對(duì)MGMT和XRCC1在食管癌中作用的認(rèn)識(shí)，為食管癌的早期診斷、預(yù)后評(píng)估和精準(zhǔn)治療提供更堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和實(shí)踐指導(dǎo)。六、結(jié)論6.1主要研究成果總結(jié)本研究通過免疫組化和qRT-PCR技術(shù)，系統(tǒng)地分析了DNA修復(fù)基因MGMT和XRCC1在食管癌組織及正常食管組織中的表達(dá)情況，深入探討了其表達(dá)與食管癌臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性，取得了以下主要研究成果：基因表達(dá)差異：MGMT和XRCC1在食管癌組織中的蛋白和mRNA表達(dá)水平均顯著高于正常食管組織，表明這兩個(gè)基因在食管癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能發(fā)揮重要作用。與臨床病理參數(shù)的關(guān)系：MGMT表達(dá)與食管癌的TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，隨著TNM分期的進(jìn)展、分化程度的降低以及出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，MGMT陽性表達(dá)率逐漸下降；而XRCC1表達(dá)與食管癌的各項(xiàng)臨床病理參數(shù)（性別、年齡、TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等）之間未發(fā)現(xiàn)顯著相關(guān)性。基因表達(dá)相關(guān)性：MGMT和XRCC1在食管癌組織中的表達(dá)存在顯著的正相關(guān)關(guān)系，提示兩基因在食管癌發(fā)生、發(fā)展過程中可能存在協(xié)同作用，共同參與DNA修復(fù)過程，維持細(xì)胞的生存和增殖。與預(yù)后的關(guān)系：生存分析結(jié)果顯示，MGMT和XRCC1表達(dá)水平均與食管癌患者的預(yù)后密切相關(guān)，高表達(dá)MGMT和XRCC1的患者5年生存率明顯高于低表達(dá)患者，且兩者雙高表達(dá)的患者預(yù)后最佳；Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型多因素分析表明，腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、MGMT表達(dá)水平和XRCC1表達(dá)水平是影響食管癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。6.2對(duì)食管癌臨床診療的潛在應(yīng)用價(jià)值本研究成果在食管癌的臨床診療方面具有重要的潛在應(yīng)用價(jià)值，為食管癌的早期診斷、治療及預(yù)后評(píng)估提供了新的思路和方法。在早期診斷方面，由于MGMT和XRCC1在食管癌組織中的表達(dá)顯著高于正常食管組織，這兩個(gè)基因有望作為食管癌早期診斷的潛在生物標(biāo)志物。目前食管癌的早期診斷主要依賴于內(nèi)鏡檢查和病理活檢，但這些方法存在一定的局限性，如內(nèi)鏡檢查為侵入性操作，患者接受度較低，且對(duì)于一些早期微小病變可能存在漏診風(fēng)險(xiǎn)。而通過檢測(cè)血液、唾液或組織中MGMT和XRCC1的表達(dá)水平，可作為一種無創(chuàng)或微創(chuàng)的輔助診斷方法，有助于提高食管癌的早期診斷率。例如，在食管癌高危人群（如長期吸煙、飲酒，有食管癌家族史等）的篩查中，可先進(jìn)行血液中MGMT和XRCC1的檢測(cè)，對(duì)于表達(dá)異常升高的個(gè)體，再進(jìn)一步進(jìn)行內(nèi)鏡檢查和病理活檢，這樣可以有效提高篩查效率，降低漏診率，實(shí)現(xiàn)食管癌的早發(fā)現(xiàn)、早治療，從而顯著改善患者的預(yù)后。在治療策略制定方面，本研究發(fā)現(xiàn)MGMT和XRCC1的表達(dá)與食管癌的臨床病理特征及預(yù)后密切相關(guān)，這為臨床醫(yī)生制定個(gè)性化的治療方案提供了重要依據(jù)。對(duì)于高表達(dá)MGMT和XRCC1的患者，由于其DNA修復(fù)能力相對(duì)較強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物和放療的耐受性可能較高。在治療過程中，可考慮采用更強(qiáng)的化療方案或聯(lián)合靶向治療，以克服腫瘤細(xì)胞的耐藥性，提高治療效果。例如，對(duì)于MGMT高表達(dá)的患者，可在傳統(tǒng)化療方案的基礎(chǔ)上，聯(lián)合使用MGMT抑制劑，如替莫唑胺等，抑制MGMT的活性，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)烷化劑類化療藥物的敏感性，從而提高化療療效。而對(duì)于低表達(dá)MGMT和XRCC1的患者，由于其DNA修復(fù)能力較弱，腫瘤細(xì)胞對(duì)放化療可能更為敏感，在治療時(shí)可適當(dāng)調(diào)整放化療劑量，在保證治療效果的同時(shí)，減少不良反應(yīng)的發(fā)生，提高患者的生活質(zhì)量。此外，鑒于MGMT和XRCC1在食管癌發(fā)生、發(fā)展過程中的協(xié)同作用，未來可研發(fā)針對(duì)這兩個(gè)基因的聯(lián)合靶向治療藥物，通過同時(shí)抑制MGMT和XRCC1的功能，更有效地抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，為食管癌的治療開辟新的途徑。在預(yù)后評(píng)估方面，MGMT和XRCC1表達(dá)水平可作為評(píng)估食管癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。臨床醫(yī)生可以根據(jù)患者腫瘤組織中MGMT和XRCC1的表達(dá)情況，更準(zhǔn)確地判斷患者的預(yù)后情況，為患者及其家屬提供更有針對(duì)性的治療建議和心理支持。對(duì)于高表達(dá)MGMT和XRCC1且預(yù)后相對(duì)較好的患者，可在治療后進(jìn)行定期隨訪，密切觀察病情變化，適當(dāng)調(diào)整治療方案，注重患者的生活質(zhì)量和康復(fù)指導(dǎo)；而對(duì)于低表達(dá)的患者，由于其預(yù)后較差，應(yīng)加強(qiáng)隨訪頻率，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并處理可能出現(xiàn)的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，同時(shí)給予患者更多的心理關(guān)懷和支持，鼓勵(lì)患者積極配合治療，提高患者的生存信心。此外，將MGMT和XRCC1表達(dá)水平與其他臨床病理參數(shù)（如腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等）相結(jié)合，構(gòu)建多因素預(yù)后評(píng)估模型，可進(jìn)一步提高預(yù)后評(píng)估的準(zhǔn)確性，為臨床治療決策提供更全面、可靠的依據(jù)。七、參考文獻(xiàn)[1]SturgisEM,CastilloEJ,LiL,etal.PolymorphismsofDNArepairgeneXRCCIinsquamouscellcarcinomaoftheheadandneck[J].Carcinogenesis,1999,20(11):2125-2129.[2]XingDY,TanW,LinDX.GeneticpolymorphismsandsusceptibilitytoesophagealcanceramongChinesepopulation(review)[J].OncolRep,2003,10(6):1615-1623.[3]UbotaY,NashR,ScharP,etal.ReconstitutionofDNAbaseexcisionrepairwithpurifiedhumanproteins:interactionbetweenDNApolymeraseβandtheXRCC1protein[J].EMBOJ,1996,15(24):6662-6670.[4]CappelliE,T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