ICS11.220B41備案號(hào)：DB42Methodofthelatexagglutinationforthedetectionofantibodiesagainst湖北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布IDB42/T792—2012前言 12術(shù)語(yǔ)和定義 13實(shí)驗(yàn)原理 14實(shí)驗(yàn)條件 15實(shí)驗(yàn)材料 16樣品處理 17實(shí)驗(yàn)方法 28結(jié)果判定 29注意事項(xiàng) 2 3DB42/T792—2012本標(biāo)準(zhǔn)按GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)》給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)提出。本標(biāo)準(zhǔn)由湖北省農(nóng)業(yè)廳歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院、武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司、湖北省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：曹勝波、金梅林、陳煥春、宋念華、黃少梅、李淑云、董曉輝。DB42/T792—2012乙型腦炎（Japaneseencephalitis,JE）是一種急性自然疫源性蟲(chóng)媒傳播的人畜共患傳染病，可對(duì)人類(lèi)的健康造成極大的危害，被衛(wèi)生部列為乙類(lèi)傳染病。豬是乙型腦炎主要的傳染源之一，可與蚊蟲(chóng)一起形成循環(huán)傳播，嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)。國(guó)家農(nóng)業(yè)部將豬乙型腦炎歸于二類(lèi)動(dòng)物疫病。為有效預(yù)防和控制乙型腦炎，在加強(qiáng)預(yù)防和免疫的同時(shí)，臨床上急需一種特異、敏感、快速、便于操作的診斷方法，以用于檢測(cè)豬乙型腦炎病毒的抗體。DB42/T792—20121豬乙型腦炎乳膠凝集抗體檢測(cè)方法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬乙型腦炎乳膠凝集抗體檢測(cè)的方法的術(shù)語(yǔ)和定義、實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)條件、實(shí)驗(yàn)材料、樣品處理、實(shí)驗(yàn)方法、結(jié)果判定和注意事項(xiàng)等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬血清、全血和乳汁中豬乙型腦炎病毒抗體的檢測(cè)。2術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。乳膠(latex)：泛指聚合物微粒分散于水中形成的膠體乳液。3實(shí)驗(yàn)原理乳膠凝集試驗(yàn)也稱(chēng)間接乳膠凝集試驗(yàn)，是將抗原或抗體結(jié)合在聚苯乙烯乳膠微粒表面，然后與相應(yīng)的抗原或抗體作用，在電解質(zhì)存在的適宜條件下，微粒發(fā)生凝集，從而觀察反應(yīng)的結(jié)果。4實(shí)驗(yàn)條件4.1實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)操作宜在常溫（18℃~25℃)進(jìn)行。4.2儀器臺(tái)式低溫高速離心機(jī)、微量移液器、冰箱、玻片、吸頭。4.3人員注意個(gè)人防護(hù)和環(huán)境保護(hù)。5實(shí)驗(yàn)材料5.1豬乙型腦炎病毒致敏的乳膠抗原：為乳白色均勻膠狀液，如出現(xiàn)分層，使用前輕輕搖勻。5.2豬乙型腦炎病毒陽(yáng)性對(duì)照血清。5.3陰性對(duì)照血清。5.4樣品稀釋液配制見(jiàn)附錄A。6樣品處理6.1血清2DB42/T792—2012按常規(guī)方法采血及分離血清，血清宜清亮。6.2全血用針尖刺破待檢動(dòng)物耳靜脈，用吸頭吸取血液一滴，置于載玻片上。6.3乳汁按常規(guī)方法采集乳汁，經(jīng)3000r/min離心10min，取上清液作樣品。7實(shí)驗(yàn)方法取樣品(血清、全血或乳汁)、陽(yáng)性對(duì)照血清、陰性對(duì)照血清、稀釋液各一滴，分別置于玻片上。各加乳膠抗原一滴，混勻并晃動(dòng)1min～2min，于3min～5min內(nèi)觀察結(jié)果。8結(jié)果判定8.1凝集反應(yīng)可能出現(xiàn)以下幾種結(jié)果：a)“++++”：全部乳膠凝集，顆粒聚于液滴邊緣，液體完全透明；b)“+++”：大部分乳膠凝集，顆粒明顯，液體稍混濁；c)“++”：約50％乳膠凝集，但顆粒較細(xì)，液體較混濁；d)“+”：有少許凝集，液體略顯混濁；e)“-”：液滴呈原有的均勻乳狀。8.2成立條件30sec～60sec內(nèi)出現(xiàn)如下結(jié)果，試驗(yàn)方可成立：陽(yáng)性對(duì)照樣品與乳膠診斷液進(jìn)行乳膠凝集反應(yīng)，應(yīng)出現(xiàn)“++”以上凝集；陰性對(duì)照樣品與乳膠診斷液進(jìn)行乳膠凝集反應(yīng)，應(yīng)不凝集。8.3結(jié)果判斷30sec～60sec內(nèi)出現(xiàn)“++”以上凝集，判為陽(yáng)性；30sec～60sec內(nèi)液滴呈原有的均勻乳狀為陰性。9注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中注意做好個(gè)人的生物安全防護(hù)措施，廢棄物應(yīng)做無(wú)害化處理。DB42/T792—20123（規(guī)范性附錄）試劑配制A.1樣品稀釋液的配制氯化鈉（NaCl）8.0g氯化鉀（KCl）0.2g磷酸氫二鈉（Na2HPO3?12H2O）2.9g磷酸二氫鈉（KH