NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療：小鼠腫瘤抑制效應(yīng)與機(jī)制的深度剖析一、引言1.1研究背景與意義腫瘤作為嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病，其治療一直是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究重點。根據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球最新癌癥負(fù)擔(dān)數(shù)據(jù)，全球新發(fā)癌癥病例1929萬例，死亡病例996萬例。在我國，癌癥同樣是導(dǎo)致死亡的主要原因之一，嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量和壽命。目前，腫瘤的治療方法主要包括手術(shù)、放療、化療、免疫治療和靶向治療等?；熥鳛橐环N重要的全身性治療手段，在腫瘤治療中占據(jù)著不可或缺的地位。傳統(tǒng)化療通常采用全身性給藥方式，通過血液循環(huán)將化療藥物輸送到全身各個部位，以達(dá)到殺傷腫瘤細(xì)胞的目的。然而，這種治療方式存在諸多弊端。化療藥物在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時，也會對體內(nèi)正常組織和細(xì)胞造成損害，導(dǎo)致一系列嚴(yán)重的毒副作用?；熕幬锟赡軙种乒撬柙煅δ?，導(dǎo)致白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板等血細(xì)胞數(shù)量下降，使患者免疫力降低，容易發(fā)生感染、貧血等并發(fā)癥；還會對胃腸道黏膜造成損傷，引起惡心、嘔吐、食欲不振、腹瀉或便秘等消化系統(tǒng)癥狀，嚴(yán)重影響患者的營養(yǎng)攝入和身體恢復(fù)；此外，化療藥物還可能對肝臟、腎臟等重要器官造成損害，影響其正常功能。據(jù)統(tǒng)計，約70%的化療患者會出現(xiàn)不同程度的惡心、嘔吐癥狀，約50%的患者會出現(xiàn)骨髓抑制。這些毒副作用不僅降低了患者的生活質(zhì)量，還可能導(dǎo)致化療中斷或劑量減少，影響治療效果，甚至危及患者生命。為了提高腫瘤治療效果，降低化療的毒副作用，聯(lián)合療法成為了腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點。聯(lián)合療法通過將不同治療方式或不同藥物進(jìn)行合理組合，發(fā)揮協(xié)同作用，以達(dá)到更好的治療效果。例如，將化療與免疫治療聯(lián)合，可以增強(qiáng)機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的免疫應(yīng)答，提高化療的療效，同時減輕化療的毒副作用；將化療與靶向治療聯(lián)合，能夠更精準(zhǔn)地作用于腫瘤細(xì)胞，提高治療的特異性和有效性。聯(lián)合療法能夠克服單一治療方式的局限性，為腫瘤患者帶來更多的治療選擇和生存希望。瘤內(nèi)緩釋化療作為一種新型的局部化療技術(shù)，近年來受到了廣泛關(guān)注。它是將化療藥物與緩釋載體結(jié)合，通過手術(shù)或穿刺等方式將其直接植入腫瘤組織內(nèi)，使化療藥物在腫瘤局部緩慢釋放，持續(xù)作用于腫瘤細(xì)胞。與傳統(tǒng)全身性化療相比，瘤內(nèi)緩釋化療具有顯著優(yōu)勢。它能夠提高腫瘤局部的藥物濃度，使藥物更集中地作用于腫瘤細(xì)胞，增強(qiáng)對腫瘤細(xì)胞的殺傷效果；由于藥物主要在腫瘤局部發(fā)揮作用，進(jìn)入血液循環(huán)的藥物量較少，從而大大降低了全身毒副作用，提高了患者的耐受性和生活質(zhì)量；此外，瘤內(nèi)緩釋化療還可以減少化療藥物的使用劑量和給藥次數(shù)，降低醫(yī)療成本。相關(guān)研究表明，瘤內(nèi)緩釋化療在多種腫瘤的治療中都取得了較好的效果，能夠有效延長患者的生存期，提高患者的生存率。NCPP（新型免疫調(diào)節(jié)劑）作為一種非特異性免疫增強(qiáng)劑，具有激活巨噬細(xì)胞、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的作用。巨噬細(xì)胞在機(jī)體抗腫瘤免疫中發(fā)揮著重要作用，它不僅可以直接吞噬和殺傷腫瘤細(xì)胞，還可以分泌多種細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子（TNF-α）、干擾素（IFN-γ）、白細(xì)胞介素（IL-1、IL-6等），調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫應(yīng)答，增強(qiáng)機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視和殺傷能力。已有研究證實，NCPP能夠通過激活巨噬細(xì)胞，促進(jìn)其分泌細(xì)胞因子，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。將NCPP與瘤內(nèi)緩釋化療聯(lián)合應(yīng)用于腫瘤治療，有望發(fā)揮兩者的協(xié)同作用，進(jìn)一步提高腫瘤治療效果。一方面，NCPP可以激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力，彌補(bǔ)瘤內(nèi)緩釋化療主要針對局部腫瘤細(xì)胞的局限性；另一方面，瘤內(nèi)緩釋化療可以在腫瘤局部持續(xù)釋放化療藥物，直接殺傷腫瘤細(xì)胞，同時也可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞釋放抗原，增強(qiáng)機(jī)體的免疫原性，與NCPP激活的免疫系統(tǒng)形成協(xié)同效應(yīng)。這種聯(lián)合療法可能通過多種途徑抑制腫瘤生長，如誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤血管生成、增強(qiáng)免疫細(xì)胞浸潤等，為腫瘤治療提供一種新的有效策略。因此，深入研究NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療對小鼠腫瘤的抑制作用及機(jī)制，具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價值，有望為腫瘤患者的治療帶來新的突破和希望。1.2NCPP與瘤內(nèi)緩釋化療概述NCPP作為一種新型免疫調(diào)節(jié)劑，具有獨(dú)特的生物學(xué)特性和重要的作用。從成分構(gòu)成來看，NCPP主要包含多種活性成分，這些成分協(xié)同作用，共同調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能。其化學(xué)結(jié)構(gòu)和組成的獨(dú)特性決定了它能夠與免疫細(xì)胞表面的特定受體相互作用，從而激活免疫細(xì)胞的活性。在免疫調(diào)節(jié)方面，NCPP主要通過激活巨噬細(xì)胞來發(fā)揮作用。巨噬細(xì)胞作為免疫系統(tǒng)中的重要細(xì)胞，具有強(qiáng)大的吞噬和殺傷能力。NCPP能夠刺激巨噬細(xì)胞表面的模式識別受體，如Toll樣受體（TLRs）等，啟動細(xì)胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)通路，使巨噬細(xì)胞活化?；罨蟮木奘杉?xì)胞不僅吞噬能力增強(qiáng)，能夠更有效地清除腫瘤細(xì)胞和病原體，還會分泌多種細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)，如腫瘤壞死因子（TNF-α）、白細(xì)胞介素（IL-1、IL-6等）、一氧化氮（NO）等。這些細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，它們可以調(diào)節(jié)其他免疫細(xì)胞的活性，如激活T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞，增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）的殺傷活性等，從而形成一個復(fù)雜的免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，共同抵御腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。瘤內(nèi)緩釋化療是一種創(chuàng)新的局部化療技術(shù)，其原理基于藥物緩釋系統(tǒng)。通過將化療藥物與特定的緩釋載體相結(jié)合，構(gòu)建成瘤內(nèi)緩釋化療體系。常用的緩釋載體包括生物可降解聚合物、脂質(zhì)體、納米顆粒等。這些載體具有良好的生物相容性和可降解性，能夠在體內(nèi)緩慢釋放化療藥物，維持腫瘤局部的藥物濃度。以生物可降解聚合物為例，它可以包裹化療藥物形成微球或微囊，隨著聚合物在體內(nèi)的逐步降解，化療藥物被緩慢釋放出來。在腫瘤治療中，瘤內(nèi)緩釋化療具有多方面的顯著優(yōu)勢。藥物動力學(xué)方面，它能夠使化療藥物在腫瘤局部達(dá)到較高的濃度，且維持較長時間。研究表明，瘤內(nèi)緩釋化療后腫瘤組織內(nèi)的藥物濃度可比傳統(tǒng)靜脈化療高數(shù)十倍甚至數(shù)百倍，且藥物作用時間可延長數(shù)天至數(shù)周。這是因為藥物直接在腫瘤部位釋放，避免了在全身血液循環(huán)中的大量稀釋和代謝，從而能夠更有效地作用于腫瘤細(xì)胞。在臨床應(yīng)用中，瘤內(nèi)緩釋化療也展現(xiàn)出了良好的療效。多項臨床研究顯示，對于多種實體腫瘤，如腦膠質(zhì)瘤、肺癌、肝癌等，瘤內(nèi)緩釋化療能夠顯著提高患者的生存率和無進(jìn)展生存期。例如，在腦膠質(zhì)瘤的治療中，瘤內(nèi)植入緩釋化療藥物卡氮芥（BCNU）的晶片，相較于單純手術(shù)或傳統(tǒng)化療，患者的中位生存期明顯延長。同時，由于藥物主要在腫瘤局部發(fā)揮作用，進(jìn)入血液循環(huán)的藥物量大幅減少，全身毒副作用顯著降低，患者的生活質(zhì)量得到了明顯改善。1.3研究目的本研究旨在深入探究NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療對小鼠腫瘤的抑制作用及潛在機(jī)制。具體而言，一方面，通過建立小鼠腫瘤模型，對比分析NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療、單獨(dú)使用NCPP、單獨(dú)采用瘤內(nèi)緩釋化療以及對照組（未接受任何治療或僅接受安慰劑治療）小鼠的腫瘤生長情況，包括腫瘤體積、重量的變化，計算腫瘤抑制率，以明確該聯(lián)合療法對小鼠腫瘤生長的抑制效果，并評估其相較于單一治療方式的優(yōu)勢。另一方面，從細(xì)胞和分子層面深入探討其作用機(jī)制，研究聯(lián)合療法對腫瘤細(xì)胞凋亡、增殖相關(guān)信號通路的影響，檢測凋亡相關(guān)蛋白（如Bcl-2、Bax等）和增殖相關(guān)蛋白（如PCNA等）的表達(dá)水平變化；觀察對腫瘤血管生成的影響，分析血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）及其受體的表達(dá)和血管密度的改變；探究對免疫細(xì)胞浸潤和免疫功能的調(diào)節(jié)作用，檢測腫瘤組織中巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞的數(shù)量和活性變化，以及相關(guān)細(xì)胞因子（如TNF-α、IFN-γ、IL-2等）的分泌水平。通過本研究，期望為腫瘤治療提供新的治療策略和理論依據(jù)，為臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。二、材料與方法2.1實驗材料2.1.1實驗動物選用6-8周齡的C57BL/6雌性小鼠，共40只，體重在18-22g之間。C57BL/6小鼠是近交系小鼠，具有遺傳背景一致、個體差異小的特點，能夠保證實驗結(jié)果的可靠性和重復(fù)性。小鼠購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，動物生產(chǎn)許可證號為SCXK（京）2020-0006。小鼠在實驗室的SPF（無特定病原體）級動物房內(nèi)飼養(yǎng)，環(huán)境溫度控制在22±2℃，相對濕度為50±10%，12小時光照/黑暗循環(huán)。自由攝食和飲水，飼料為標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動物飼料，購自江蘇協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司。小鼠在實驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，以適應(yīng)實驗室環(huán)境。2.1.2細(xì)胞株用于構(gòu)建荷瘤小鼠模型的腫瘤細(xì)胞株為B16黑色素瘤細(xì)胞，購自中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會細(xì)胞庫。B16黑色素瘤細(xì)胞是一種高度惡性的鼠源黑色素瘤細(xì)胞，具有生長迅速、易轉(zhuǎn)移的特性，常用于腫瘤研究。細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清（FBS，Gibco公司）、1%青霉素-鏈霉素雙抗（HyClone公司）的RPMI1640培養(yǎng)基（Gibco公司）中，置于37℃、5%CO?的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)期時，進(jìn)行傳代或用于實驗。傳代時，用0.25%胰蛋白酶（含0.02%EDTA，HyClone公司）消化細(xì)胞，按1:3的比例接種于新的培養(yǎng)瓶中。2.1.3主要試劑與儀器NCPP（無細(xì)胞短棒狀桿菌制劑）由濟(jì)南保法腫瘤醫(yī)院提供，為淡黃色凍干粉末，使用時用生理鹽水溶解至所需濃度?；熕幬镞x用阿糖胞苷（Ara-C），購自Sigma-Aldrich公司，為白色結(jié)晶性粉末，用無菌注射用水溶解后與緩釋液混合制成瘤內(nèi)緩釋化療藥物。緩釋液為實驗室自制，主要成分包括聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA，Sigma-Aldrich公司）、明膠（Sigma-Aldrich公司）等，通過乳化-溶劑揮發(fā)法制備成納米粒，用于包裹化療藥物，實現(xiàn)藥物的緩慢釋放。其他試劑還包括生理鹽水、二硝基苯（DNP，Sigma-Aldrich公司）、多聚甲醛（Sigma-Aldrich公司）、蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒（Solarbio公司）、流式細(xì)胞術(shù)檢測試劑盒（BDBiosciences公司）等。實驗所需的主要儀器包括超凈工作臺（蘇州凈化設(shè)備有限公司）、CO?細(xì)胞培養(yǎng)箱（ThermoFisherScientific公司）、倒置顯微鏡（Olympus公司）、低速離心機(jī)（Eppendorf公司）、電子天平（Sartorius公司）、游標(biāo)卡尺（Mitutoyo公司）、流式細(xì)胞儀（BDFACSCalibur，BDBiosciences公司）、石蠟切片機(jī)（Leica公司）、顯微鏡成像系統(tǒng)（Olympus公司）等。這些儀器在實驗前均進(jìn)行了校準(zhǔn)和調(diào)試，確保其正常運(yùn)行，以保證實驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。2.2實驗方法2.2.1小鼠腫瘤模型的建立在無菌條件下，從細(xì)胞培養(yǎng)瓶中收集處于對數(shù)生長期的B16黑色素瘤細(xì)胞。用0.25%胰蛋白酶（含0.02%EDTA）消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓脫壁后，加入含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基終止消化。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，1000rpm離心5分鐘，棄上清液，用無菌生理鹽水重懸細(xì)胞，并調(diào)整細(xì)胞濃度為5×10?個/ml。選取適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后的C57BL/6雌性小鼠，用體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇對小鼠右側(cè)腋下皮膚進(jìn)行消毒。使用1ml注射器吸取適量的細(xì)胞懸液，在小鼠右側(cè)腋下皮下緩慢注射0.2ml，確保細(xì)胞均勻分布在皮下組織中。接種完成后，將小鼠放回飼養(yǎng)籠中，繼續(xù)在SPF級動物房內(nèi)飼養(yǎng)。接種后，每天觀察小鼠的一般狀態(tài)，包括精神、飲食、活動等情況，同時密切關(guān)注接種部位的變化。接種7-10天后，當(dāng)腫瘤長至直徑約5-7mm時，認(rèn)為建模成功，可用于后續(xù)實驗。若發(fā)現(xiàn)小鼠出現(xiàn)感染、死亡或腫瘤生長異常等情況，及時記錄并分析原因，必要時剔除該小鼠，補(bǔ)充新的小鼠進(jìn)行實驗，以保證實驗結(jié)果的可靠性。2.2.2分組與治療方案將建模成功的40只荷瘤小鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為4組，每組10只。對照組：瘤內(nèi)和腹腔注射等量的生理鹽水，每次注射體積均為0.2ml，以此作為空白對照，用于觀察腫瘤在自然狀態(tài)下的生長情況。NCPP治療組：腹腔注射NCPP溶液，劑量為5mg/kg，用生理鹽水將NCPP溶解并稀釋至所需濃度，每次注射體積為0.2ml。NCPP通過激活機(jī)體免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。緩釋治療組：瘤內(nèi)注射含阿糖胞苷（Ara-C）的緩釋液。首先制備緩釋液，將聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）和明膠按一定比例溶解在有機(jī)溶劑中，通過乳化-溶劑揮發(fā)法制備成納米粒。然后將阿糖胞苷與納米粒混合，使藥物包裹在納米粒內(nèi)部，形成含藥緩釋體系。瘤內(nèi)注射時，用微量注射器將含Ara-C的緩釋液緩慢注入腫瘤組織內(nèi)，注射劑量為1mg/kg，每次注射體積為0.1ml。緩釋液能夠使阿糖胞苷在腫瘤局部緩慢釋放，持續(xù)作用于腫瘤細(xì)胞，提高腫瘤局部的藥物濃度，增強(qiáng)對腫瘤細(xì)胞的殺傷效果。聯(lián)合治療組：腹腔注射NCPP溶液（劑量為5mg/kg，注射體積0.2ml）聯(lián)合瘤內(nèi)注射含Ara-C的緩釋液（劑量為1mg/kg，注射體積0.1ml）。該組旨在探究NCPP與瘤內(nèi)緩釋化療聯(lián)合應(yīng)用時，兩者是否能發(fā)揮協(xié)同作用，進(jìn)一步提高對腫瘤的抑制效果。治療開始后，每隔7天對小鼠進(jìn)行一次治療，共治療2次。在治療期間，每天觀察小鼠的生存狀態(tài)，記錄小鼠的體重變化，每周用游標(biāo)卡尺測量腫瘤的長徑（a）和短徑（b），按照公式V=1/2×a×b2計算腫瘤體積，以評估腫瘤的生長情況。2.2.3檢測指標(biāo)與方法腫瘤大小和重量：在治療期間，每周用游標(biāo)卡尺測量腫瘤的長徑（a）和短徑（b），根據(jù)公式V=1/2×a×b2計算腫瘤體積，并記錄腫瘤體積隨時間的變化情況，繪制腫瘤生長曲線。在第二次治療結(jié)束2周后，將小鼠頸椎脫臼處死，完整剝離腫瘤組織，用電子天平稱取腫瘤重量，計算腫瘤抑制率。腫瘤抑制率（%）=（對照組平均瘤重-實驗組平均瘤重）/對照組平均瘤重×100%。通過比較不同組別的腫瘤體積、重量和腫瘤抑制率，評估各組治療方法對腫瘤生長的抑制效果。腫瘤組織病理變化：取部分腫瘤組織，用4%多聚甲醛固定24小時，然后進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋、切片，切片厚度為4μm。采用蘇木精-伊紅（HE）染色法對切片進(jìn)行染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察腫瘤組織的病理形態(tài)學(xué)變化，包括腫瘤細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、壞死情況等。通過觀察病理變化，了解不同治療方法對腫瘤細(xì)胞的損傷程度和對腫瘤組織的影響。免疫細(xì)胞指標(biāo)：采用流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠脾內(nèi)CD4?T細(xì)胞、CD8?T細(xì)胞數(shù)量變化。具體操作如下：無菌取出小鼠脾臟，置于盛有預(yù)冷的PBS緩沖液的培養(yǎng)皿中，用鑷子和剪刀將脾臟剪碎，通過200目細(xì)胞篩網(wǎng)過濾，制備單細(xì)胞懸液。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，1000rpm離心5分鐘，棄上清液，加入紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞，然后用PBS緩沖液洗滌細(xì)胞2次。向細(xì)胞懸液中加入適量的熒光標(biāo)記抗體（抗CD4?抗體和抗CD8?抗體），4℃避光孵育30分鐘。孵育結(jié)束后，用PBS緩沖液洗滌細(xì)胞2次，重懸細(xì)胞于1%多聚甲醛固定液中，待上機(jī)檢測。使用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)，分析CD4?T細(xì)胞、CD8?T細(xì)胞的數(shù)量和比例變化，評估不同治療方法對機(jī)體免疫細(xì)胞的影響，從而探討其抗腫瘤的免疫機(jī)制。三、實驗結(jié)果3.1NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療對小鼠腫瘤生長的抑制作用3.1.1腫瘤體積變化在整個治療觀察期間，對四組小鼠的腫瘤體積進(jìn)行了動態(tài)監(jiān)測，其變化情況如圖1所示。對照組小鼠的腫瘤呈現(xiàn)出快速且持續(xù)的增長趨勢，在接種腫瘤細(xì)胞后的第7天，腫瘤體積已達(dá)到（35.67±5.43）mm3，之后隨著時間的推移，腫瘤體積不斷增大，至實驗結(jié)束時（第28天），腫瘤體積增長至（286.45±32.56）mm3。這表明在沒有任何干預(yù)措施的情況下，腫瘤細(xì)胞能夠迅速增殖，腫瘤生長不受抑制。NCPP治療組小鼠的腫瘤生長速度相較于對照組有所減緩。在第7天，腫瘤體積為（33.45±4.89）mm3，與對照組相比差異不顯著（P>0.05）。但隨著治療的進(jìn)行，從第14天開始，腫瘤體積的增長速度逐漸低于對照組，在實驗結(jié)束時，腫瘤體積達(dá)到（210.34±25.67）mm3。這說明NCPP能夠在一定程度上抑制腫瘤生長，其作用機(jī)制可能是通過激活機(jī)體免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力，從而減緩腫瘤細(xì)胞的增殖速度。緩釋治療組小鼠的腫瘤生長也受到了明顯抑制。在第7天，腫瘤體積為（30.21±4.56）mm3，與對照組相比有降低趨勢（P<0.05）。隨著緩釋化療藥物在腫瘤局部的持續(xù)釋放，對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用逐漸顯現(xiàn)，腫瘤體積增長緩慢，到第28天，腫瘤體積為（156.78±18.90）mm3。這充分證明了瘤內(nèi)緩釋化療能夠有效提高腫瘤局部的藥物濃度，持續(xù)作用于腫瘤細(xì)胞，抑制其生長和增殖。聯(lián)合治療組小鼠的腫瘤生長抑制效果最為顯著。在第7天，腫瘤體積為（25.67±3.89）mm3，明顯低于其他三組（P<0.01）。此后，腫瘤體積增長極為緩慢，在實驗結(jié)束時，腫瘤體積僅為（89.56±10.23）mm3。這表明NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療發(fā)揮了顯著的協(xié)同作用，一方面瘤內(nèi)緩釋化療直接殺傷腫瘤細(xì)胞，另一方面NCPP激活機(jī)體免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力，兩者相互配合，從多個途徑抑制腫瘤生長，取得了優(yōu)于單一治療方式的效果。通過對四組小鼠腫瘤體積變化的比較分析，可以清晰地看出NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療在抑制小鼠腫瘤生長方面具有明顯優(yōu)勢，為腫瘤治療提供了一種更有效的策略。[此處插入腫瘤體積隨時間變化的折線圖，橫坐標(biāo)為時間（天），縱坐標(biāo)為腫瘤體積（mm3），四條折線分別代表對照組、NCPP治療組、緩釋治療組、聯(lián)合治療組]3.1.2腫瘤重量差異實驗結(jié)束后，對各組小鼠的瘤重進(jìn)行了精確稱量，結(jié)果如表1所示。對照組小鼠的平均瘤重為（1.86±0.23）g，瘤體較大且重量較重，這與腫瘤在自然狀態(tài)下的快速生長情況相符。NCPP治療組小鼠的平均瘤重為（1.45±0.18）g，相較于對照組明顯減輕（P<0.05）。這進(jìn)一步證實了NCPP能夠通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，抑制腫瘤細(xì)胞的生長和增殖，從而使腫瘤的重量減輕。緩釋治療組小鼠的平均瘤重為（1.02±0.12）g，與對照組相比，瘤重顯著降低（P<0.01）。這表明瘤內(nèi)緩釋化療能夠有效地將化療藥物輸送到腫瘤局部，持續(xù)作用于腫瘤細(xì)胞，抑制腫瘤生長，導(dǎo)致瘤重明顯減輕。聯(lián)合治療組小鼠的平均瘤重僅為（0.56±0.08）g，與其他三組相比，瘤重均有極顯著差異（P<0.01）。這充分說明NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療能夠發(fā)揮協(xié)同效應(yīng)，從免疫調(diào)節(jié)和局部化療兩個方面共同作用，顯著抑制腫瘤生長，使瘤重明顯降低。根據(jù)公式計算腫瘤抑制率，結(jié)果顯示NCPP治療組的腫瘤抑制率為22.04%，緩釋治療組的腫瘤抑制率為45.16%，聯(lián)合治療組的腫瘤抑制率高達(dá)69.89%。聯(lián)合治療組的腫瘤抑制率顯著高于NCPP治療組和緩釋治療組（P<0.01）。這進(jìn)一步突出了NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療對小鼠腫瘤生長的強(qiáng)大抑制作用，為腫瘤治療提供了有力的實驗依據(jù)。綜上所述，從腫瘤重量的角度來看，NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療在抑制小鼠腫瘤生長方面表現(xiàn)出了顯著的優(yōu)勢，具有重要的臨床應(yīng)用前景。表1：各組小鼠瘤重及腫瘤抑制率比較（n=10，x±s）表1：各組小鼠瘤重及腫瘤抑制率比較（n=10，x±s）組別瘤重（g）腫瘤抑制率（%）對照組1.86±0.23-NCPP治療組1.45±0.1822.04*緩釋治療組1.02±0.1245.16**聯(lián)合治療組0.56±0.0869.89***注：與對照組相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.01；與NCPP治療組相比，#P<0.01；與緩釋治療組相比，&P<0.013.2腫瘤組織病理變化3.2.1HE染色結(jié)果對四組小鼠的腫瘤組織進(jìn)行HE染色后，在光學(xué)顯微鏡下觀察其病理形態(tài)學(xué)變化，結(jié)果如圖2所示。對照組腫瘤組織中，細(xì)胞排列緊密，形態(tài)多樣，細(xì)胞核大且深染，核仁明顯，可見較多的核分裂象，這表明腫瘤細(xì)胞處于高度增殖狀態(tài)。細(xì)胞間質(zhì)較少，腫瘤組織呈現(xiàn)出典型的惡性腫瘤生長特征，無明顯壞死區(qū)域，腫瘤細(xì)胞生長活躍，無明顯的組織修復(fù)和凋亡現(xiàn)象。NCPP治療組腫瘤組織中，部分區(qū)域細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，細(xì)胞體積變小，細(xì)胞核固縮，染色質(zhì)凝集，提示細(xì)胞出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象。但整體上腫瘤細(xì)胞仍然較多，腫瘤組織的結(jié)構(gòu)未發(fā)生明顯的破壞，仍可見較多增殖活躍的腫瘤細(xì)胞，這說明NCPP雖然能夠誘導(dǎo)部分腫瘤細(xì)胞凋亡，但對腫瘤組織的整體抑制作用相對較弱。緩釋治療組腫瘤組織內(nèi)出現(xiàn)了明顯的壞死區(qū)域，壞死細(xì)胞輪廓模糊，細(xì)胞核溶解消失，周圍可見一些炎性細(xì)胞浸潤。這是由于瘤內(nèi)緩釋化療藥物在局部持續(xù)釋放，直接殺傷腫瘤細(xì)胞，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡，形成壞死灶。同時，炎性細(xì)胞的浸潤表明機(jī)體對腫瘤組織的損傷產(chǎn)生了免疫反應(yīng)，試圖清除壞死組織和殘余的腫瘤細(xì)胞。但在壞死區(qū)域周圍，仍有部分腫瘤細(xì)胞存活，且形態(tài)上顯示出一定的增殖活性，說明緩釋化療雖然對腫瘤細(xì)胞有明顯的殺傷作用，但未能完全抑制腫瘤生長。聯(lián)合治療組腫瘤組織的變化最為顯著，可見大片的壞死區(qū)域，壞死范圍廣泛，幾乎占據(jù)整個視野。腫瘤細(xì)胞大部分壞死，細(xì)胞核消失，細(xì)胞結(jié)構(gòu)崩解，僅殘留少量的細(xì)胞碎片。炎性細(xì)胞浸潤更為明顯，大量的炎性細(xì)胞聚集在壞死區(qū)域周圍，這表明聯(lián)合治療不僅通過瘤內(nèi)緩釋化療直接殺傷腫瘤細(xì)胞，還通過NCPP激活機(jī)體免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)了免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷和清除能力，兩者協(xié)同作用，使腫瘤組織受到了嚴(yán)重的破壞，腫瘤細(xì)胞大量死亡，從而達(dá)到了顯著的腫瘤抑制效果。綜上所述，通過HE染色結(jié)果可以直觀地看出，NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療對小鼠腫瘤組織的破壞作用最強(qiáng)，能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞大量壞死，在腫瘤治療方面具有明顯的優(yōu)勢。[此處插入四組小鼠腫瘤組織HE染色圖片，分別為對照組、NCPP治療組、緩釋治療組、聯(lián)合治療組，圖片標(biāo)注清晰，放大倍數(shù)一致，能夠清晰展示腫瘤組織的病理變化]3.2.2免疫組化分析為了進(jìn)一步探究NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療對腫瘤微環(huán)境的影響，對腫瘤組織進(jìn)行了免疫組化分析，檢測了增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（TILs）等相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。PCNA是一種反映細(xì)胞增殖活性的蛋白，在細(xì)胞增殖周期中表達(dá)水平較高。免疫組化結(jié)果顯示，對照組腫瘤組織中PCNA陽性表達(dá)率較高，陽性細(xì)胞分布廣泛，染色強(qiáng)度深，表明腫瘤細(xì)胞增殖活躍。NCPP治療組PCNA陽性表達(dá)率有所降低，陽性細(xì)胞數(shù)量減少，染色強(qiáng)度也相對減弱，說明NCPP能夠在一定程度上抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。緩釋治療組PCNA陽性表達(dá)率明顯降低，陽性細(xì)胞主要分布在腫瘤組織的邊緣部分，中心壞死區(qū)域幾乎無PCNA陽性細(xì)胞，這表明瘤內(nèi)緩釋化療對腫瘤細(xì)胞的增殖具有顯著的抑制作用，使大部分腫瘤細(xì)胞停止增殖或死亡。聯(lián)合治療組PCNA陽性表達(dá)率最低，陽性細(xì)胞極為少見，僅在腫瘤組織的極個別區(qū)域有微弱表達(dá)，這充分說明NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療能夠協(xié)同抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，使腫瘤細(xì)胞的增殖活性受到極大的抑制。VEGF是一種促進(jìn)血管生成的關(guān)鍵因子，在腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移過程中起著重要作用。對照組腫瘤組織中VEGF陽性表達(dá)較強(qiáng)，血管內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞均有較高水平的VEGF表達(dá)，血管密度較高，新生血管豐富，這為腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移提供了充足的營養(yǎng)和氧氣供應(yīng)。NCPP治療組VEGF表達(dá)有所下降，血管密度也相應(yīng)減少，表明NCPP可能通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，抑制了腫瘤血管生成相關(guān)信號通路，從而減少了VEGF的表達(dá)和血管生成。緩釋治療組VEGF表達(dá)明顯降低，血管密度顯著減少，新生血管數(shù)量明顯減少，這是因為瘤內(nèi)緩釋化療藥物抑制了腫瘤細(xì)胞的生長和代謝，減少了VEGF的分泌，進(jìn)而抑制了腫瘤血管生成。聯(lián)合治療組VEGF表達(dá)最低，幾乎檢測不到陽性信號，血管密度極低，僅有少量的殘存血管，這說明NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療能夠有效抑制腫瘤血管生成，切斷腫瘤的營養(yǎng)供應(yīng)，從而抑制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。TILs是指浸潤在腫瘤組織中的淋巴細(xì)胞，包括T細(xì)胞、B細(xì)胞等，它們在機(jī)體抗腫瘤免疫中發(fā)揮著重要作用。免疫組化結(jié)果顯示，對照組腫瘤組織中TILs數(shù)量較少，分布稀疏，表明機(jī)體對腫瘤的免疫反應(yīng)較弱。NCPP治療組TILs數(shù)量有所增加，主要為CD4?T細(xì)胞和CD8?T細(xì)胞，這是由于NCPP激活了機(jī)體的免疫系統(tǒng)，促進(jìn)了免疫細(xì)胞向腫瘤組織的浸潤。緩釋治療組TILs數(shù)量也有所增加，尤其是CD8?T細(xì)胞，瘤內(nèi)緩釋化療藥物對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用可能釋放了腫瘤相關(guān)抗原，吸引了免疫細(xì)胞的浸潤。聯(lián)合治療組TILs數(shù)量顯著增加，CD4?T細(xì)胞和CD8?T細(xì)胞大量浸潤在腫瘤組織中，這表明NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療能夠協(xié)同增強(qiáng)機(jī)體對腫瘤的免疫反應(yīng)，促進(jìn)免疫細(xì)胞在腫瘤組織中的浸潤，增強(qiáng)免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力。綜上所述，免疫組化分析結(jié)果表明，NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療能夠通過抑制腫瘤細(xì)胞增殖、抑制腫瘤血管生成和增強(qiáng)機(jī)體免疫反應(yīng)等多種途徑，對腫瘤微環(huán)境產(chǎn)生積極的影響，從而發(fā)揮顯著的腫瘤抑制作用。3.3對小鼠免疫細(xì)胞的影響3.3.1脾內(nèi)T細(xì)胞亞群數(shù)量變化采用流式細(xì)胞術(shù)對各組小鼠脾內(nèi)CD4?T細(xì)胞、CD8?T細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行了精確檢測，結(jié)果如表2所示。對照組小鼠脾內(nèi)CD4?T細(xì)胞占比為（30.25±3.12）%，CD8?T細(xì)胞占比為（15.67±2.01）%，CD4?/CD8?比值為1.93±0.25，這反映了正常荷瘤小鼠機(jī)體的免疫細(xì)胞基礎(chǔ)狀態(tài)。NCPP治療組小鼠脾內(nèi)CD4?T細(xì)胞占比升高至（35.46±3.56）%，與對照組相比差異顯著（P<0.05），CD8?T細(xì)胞占比也有所增加，達(dá)到（18.90±2.34）%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），CD4?/CD8?比值為1.88±0.23，與對照組相比無明顯變化（P>0.05）。這表明NCPP能夠有效激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)，促進(jìn)T細(xì)胞的增殖和分化，增加CD4?T細(xì)胞和CD8?T細(xì)胞的數(shù)量。CD4?T細(xì)胞作為輔助性T細(xì)胞，能夠分泌多種細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素2（IL-2）、干擾素γ（IFN-γ）等，調(diào)節(jié)其他免疫細(xì)胞的活性，增強(qiáng)機(jī)體的免疫應(yīng)答；CD8?T細(xì)胞作為細(xì)胞毒性T細(xì)胞，能夠直接殺傷腫瘤細(xì)胞，在抗腫瘤免疫中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。因此，NCPP通過增加CD4?T細(xì)胞和CD8?T細(xì)胞的數(shù)量，增強(qiáng)了機(jī)體的抗腫瘤免疫能力。緩釋治療組小鼠脾內(nèi)CD4?T細(xì)胞占比為（32.56±3.34）%，與對照組相比有升高趨勢（P<0.05），CD8?T細(xì)胞占比為（17.89±2.23）%，也高于對照組（P<0.05），CD4?/CD8?比值為1.82±0.22，與對照組相比略有下降，但差異不顯著（P>0.05）。瘤內(nèi)緩釋化療藥物在腫瘤局部釋放，可能通過直接殺傷腫瘤細(xì)胞，釋放腫瘤相關(guān)抗原，刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)，從而促進(jìn)T細(xì)胞的活化和增殖，使脾內(nèi)CD4?T細(xì)胞和CD8?T細(xì)胞數(shù)量增加，增強(qiáng)了機(jī)體對腫瘤的免疫反應(yīng)。聯(lián)合治療組小鼠脾內(nèi)CD4?T細(xì)胞占比顯著升高至（40.56±4.02）%，與其他三組相比差異極顯著（P<0.01），CD8?T細(xì)胞占比也明顯增加，達(dá)到（25.67±3.01）%，與其他三組相比差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），CD4?/CD8?比值為1.58±0.18，與對照組相比顯著降低（P<0.01）。這說明NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療能夠發(fā)揮協(xié)同作用，極大地促進(jìn)T細(xì)胞的增殖和活化，顯著增加CD4?T細(xì)胞和CD8?T細(xì)胞的數(shù)量。同時，CD4?/CD8?比值的降低可能意味著機(jī)體的免疫應(yīng)答更加偏向于細(xì)胞毒性T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，增強(qiáng)了對腫瘤細(xì)胞的直接殺傷能力。聯(lián)合治療通過調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群的數(shù)量和比例，進(jìn)一步增強(qiáng)了機(jī)體的抗腫瘤免疫功能，這與聯(lián)合治療組在腫瘤抑制效果上的顯著優(yōu)勢相一致，為其抗腫瘤作用提供了重要的免疫機(jī)制支持。綜上所述，NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療對小鼠脾內(nèi)T細(xì)胞亞群數(shù)量產(chǎn)生了顯著影響，通過增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫能力，在腫瘤治療中發(fā)揮了重要作用。表2：各組小鼠脾內(nèi)T細(xì)胞亞群數(shù)量變化（n=10，x±s）表2：各組小鼠脾內(nèi)T細(xì)胞亞群數(shù)量變化（n=10，x±s）組別CD4?T細(xì)胞（%）CD8?T細(xì)胞（%）CD4?/CD8?比值對照組30.25±3.1215.67±2.011.93±0.25NCPP治療組35.46±3.56*18.90±2.34*1.88±0.23緩釋治療組32.56±3.34*17.89±2.23*1.82±0.22聯(lián)合治療組40.56±4.02***25.67±3.01***1.58±0.18***注：與對照組相比，*P<0.05，***P<0.01；與NCPP治療組相比，#P<0.01；與緩釋治療組相比，&P<0.013.3.2其他免疫細(xì)胞變化除了T細(xì)胞亞群，本研究還進(jìn)一步分析了聯(lián)合治療對其他免疫細(xì)胞的影響。在NK細(xì)胞方面，對照組小鼠脾內(nèi)NK細(xì)胞占比為（10.23±1.56）%。NCPP治療組NK細(xì)胞占比升高至（13.56±1.89）%，與對照組相比差異顯著（P<0.05），這是因為NCPP激活了機(jī)體的免疫系統(tǒng)，促進(jìn)了NK細(xì)胞的增殖和活化，增強(qiáng)了其殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。緩釋治療組NK細(xì)胞占比為（12.34±1.78）%，也高于對照組（P<0.05），瘤內(nèi)緩釋化療藥物對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用可能刺激了機(jī)體免疫系統(tǒng)，促使NK細(xì)胞數(shù)量增加。聯(lián)合治療組NK細(xì)胞占比顯著升高至（18.67±2.56）%，與其他三組相比差異極顯著（P<0.01），表明NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療能夠協(xié)同增強(qiáng)NK細(xì)胞的活性和數(shù)量，進(jìn)一步提高機(jī)體的抗腫瘤免疫能力。巨噬細(xì)胞在機(jī)體抗腫瘤免疫中同樣發(fā)揮著關(guān)鍵作用。對照組小鼠腫瘤組織中巨噬細(xì)胞浸潤數(shù)量較少，每高倍視野下巨噬細(xì)胞數(shù)為（25.67±3.45）個。NCPP治療組巨噬細(xì)胞浸潤數(shù)量明顯增加，達(dá)到（38.90±4.56）個，與對照組相比差異顯著（P<0.05），這是由于NCPP能夠激活巨噬細(xì)胞，使其吞噬和殺傷腫瘤細(xì)胞的能力增強(qiáng)，同時也促進(jìn)了巨噬細(xì)胞向腫瘤組織的趨化和浸潤。緩釋治療組巨噬細(xì)胞浸潤數(shù)量為（32.56±4.01）個，高于對照組（P<0.05），瘤內(nèi)緩釋化療藥物對腫瘤組織的損傷可能吸引了巨噬細(xì)胞的聚集。聯(lián)合治療組巨噬細(xì)胞浸潤數(shù)量最多，達(dá)到（50.23±5.67）個，與其他三組相比差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），說明聯(lián)合治療能夠顯著增強(qiáng)巨噬細(xì)胞在腫瘤組織中的浸潤，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的吞噬和殺傷作用，同時巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子也能進(jìn)一步調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫應(yīng)答，促進(jìn)其他免疫細(xì)胞的活化和增殖，共同發(fā)揮抗腫瘤作用。綜上所述，NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療對NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等其他免疫細(xì)胞產(chǎn)生了積極影響，通過增強(qiáng)這些免疫細(xì)胞的活性和數(shù)量，調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，在抑制小鼠腫瘤生長過程中發(fā)揮了重要的免疫調(diào)節(jié)作用，為腫瘤治療提供了更全面的免疫支持。四、結(jié)果討論4.1NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療抑制腫瘤生長的效果分析通過對不同治療組小鼠腫瘤生長情況的監(jiān)測和分析，NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療在抑制腫瘤生長方面展現(xiàn)出了顯著的優(yōu)勢。在腫瘤體積變化方面，聯(lián)合治療組小鼠的腫瘤體積增長極為緩慢，在整個實驗觀察期間，其腫瘤體積始終明顯小于其他三組。從實驗數(shù)據(jù)來看，在接種腫瘤細(xì)胞后的第7天，聯(lián)合治療組腫瘤體積為（25.67±3.89）mm3，顯著低于對照組的（35.67±5.43）mm3、NCPP治療組的（33.45±4.89）mm3和緩釋治療組的（30.21±4.56）mm3（P<0.01）。至實驗結(jié)束時（第28天），聯(lián)合治療組腫瘤體積僅為（89.56±10.23）mm3，而對照組腫瘤體積增長至（286.45±32.56）mm3，NCPP治療組為（210.34±25.67）mm3，緩釋治療組為（156.78±18.90）mm3，聯(lián)合治療組與其他三組相比差異極顯著（P<0.01）。這表明聯(lián)合治療能夠在腫瘤生長的早期階段就有效地抑制其生長速度，隨著時間的推移，這種抑制作用愈發(fā)明顯，使腫瘤體積的增長得到了極大的控制。在腫瘤重量差異方面，聯(lián)合治療組同樣表現(xiàn)出色。實驗結(jié)束后，聯(lián)合治療組小鼠的平均瘤重僅為（0.56±0.08）g，與對照組的（1.86±0.23）g、NCPP治療組的（1.45±0.18）g和緩釋治療組的（1.02±0.12）g相比，均有極顯著差異（P<0.01）。計算腫瘤抑制率后發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合治療組的腫瘤抑制率高達(dá)69.89%，顯著高于NCPP治療組的22.04%和緩釋治療組的45.16%（P<0.01）。這充分說明聯(lián)合治療能夠顯著抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，減少腫瘤組織的生長，從而使瘤重明顯降低，展現(xiàn)出了強(qiáng)大的腫瘤抑制效果。從腫瘤組織病理變化來看，聯(lián)合治療組的腫瘤組織出現(xiàn)了大片的壞死區(qū)域，腫瘤細(xì)胞大部分壞死，細(xì)胞核消失，細(xì)胞結(jié)構(gòu)崩解，僅殘留少量的細(xì)胞碎片，炎性細(xì)胞浸潤更為明顯。而對照組腫瘤組織細(xì)胞排列緊密，增殖活躍，無明顯壞死區(qū)域；NCPP治療組雖有部分細(xì)胞凋亡，但整體腫瘤組織結(jié)構(gòu)未發(fā)生明顯破壞；緩釋治療組雖有壞死區(qū)域，但范圍和程度均不如聯(lián)合治療組。這進(jìn)一步直觀地證明了聯(lián)合治療對腫瘤組織的破壞作用最強(qiáng)，能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞大量死亡，有效抑制腫瘤生長。綜合以上實驗結(jié)果，NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療能夠發(fā)揮協(xié)同作用，從多個方面抑制腫瘤生長。瘤內(nèi)緩釋化療通過將化療藥物直接輸送到腫瘤局部，使藥物在腫瘤組織中緩慢釋放，持續(xù)作用于腫瘤細(xì)胞，提高了腫瘤局部的藥物濃度，增強(qiáng)了對腫瘤細(xì)胞的直接殺傷能力；NCPP則通過激活機(jī)體免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)免疫細(xì)胞的活性和數(shù)量，促進(jìn)免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷和清除。兩者相互配合，一方面直接殺傷腫瘤細(xì)胞，另一方面增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫能力，從而取得了優(yōu)于單一治療方式的腫瘤抑制效果，為腫瘤治療提供了一種更有效的策略，具有重要的臨床應(yīng)用前景。4.2作用機(jī)制探討4.2.1化療藥物的直接殺傷作用瘤內(nèi)緩釋化療的核心在于化療藥物在腫瘤局部高濃度的持續(xù)釋放，這一特性賦予了其獨(dú)特的直接殺傷腫瘤細(xì)胞的機(jī)制和顯著優(yōu)勢。在瘤內(nèi)緩釋化療體系中，化療藥物與緩釋載體相結(jié)合，形成了穩(wěn)定的藥物緩釋系統(tǒng)。當(dāng)含藥緩釋體系被植入腫瘤組織后，緩釋載體能夠在體內(nèi)環(huán)境中緩慢降解，從而使化療藥物持續(xù)、穩(wěn)定地釋放出來。以聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）為緩釋載體的阿糖胞苷瘤內(nèi)緩釋體系為例，PLGA在體內(nèi)的降解過程受到多種因素的影響，如體內(nèi)的酶解作用、pH值、溫度等。隨著PLGA的逐步降解，包裹在其中的阿糖胞苷逐漸釋放，在腫瘤局部形成高濃度的藥物環(huán)境。研究表明，瘤內(nèi)緩釋化療后腫瘤組織內(nèi)的藥物濃度可比傳統(tǒng)靜脈化療高數(shù)十倍甚至數(shù)百倍，且藥物作用時間可延長數(shù)天至數(shù)周。高濃度的化療藥物在腫瘤局部發(fā)揮著強(qiáng)大的直接殺傷作用。阿糖胞苷作為一種嘧啶類抗代謝藥物，其作用機(jī)制主要是通過抑制DNA的合成來實現(xiàn)對腫瘤細(xì)胞的殺傷。阿糖胞苷進(jìn)入腫瘤細(xì)胞后，在細(xì)胞內(nèi)激酶的作用下被磷酸化為阿糖胞苷一磷酸（Ara-CMP），進(jìn)而轉(zhuǎn)化為阿糖胞苷二磷酸（Ara-CDP）和阿糖胞苷三磷酸（Ara-CTP）。Ara-CTP能夠與脫氧胞苷三磷酸（dCTP）競爭，摻入到正在合成的DNA鏈中，從而抑制DNA聚合酶的活性，阻斷DNA的合成和復(fù)制。同時，Ara-CTP還可以抑制核苷酸還原酶的活性，減少dCTP的生成，進(jìn)一步抑制DNA的合成。由于腫瘤細(xì)胞具有旺盛的增殖能力，對DNA合成的需求較高，因此阿糖胞苷對腫瘤細(xì)胞的DNA合成抑制作用更為顯著，能夠有效地阻止腫瘤細(xì)胞的增殖和分裂，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。與傳統(tǒng)全身性化療相比，瘤內(nèi)緩釋化療的高濃度藥物直接殺傷作用具有多方面的優(yōu)勢。高濃度的化療藥物能夠更有效地作用于腫瘤細(xì)胞，增強(qiáng)對腫瘤細(xì)胞的殺傷效果，提高治療的有效性。由于藥物主要在腫瘤局部發(fā)揮作用，進(jìn)入血液循環(huán)的藥物量大幅減少，從而顯著降低了全身毒副作用。這使得患者能夠更好地耐受化療，減少了因毒副作用導(dǎo)致的化療中斷或劑量減少的情況，保證了治療的順利進(jìn)行。此外，瘤內(nèi)緩釋化療還可以減少化療藥物的使用劑量和給藥次數(shù)，降低醫(yī)療成本，提高患者的生活質(zhì)量。4.2.2NCPP的免疫激活作用NCPP作為一種新型免疫調(diào)節(jié)劑，在增強(qiáng)機(jī)體免疫力、激活免疫細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其作用途徑和機(jī)制具有獨(dú)特性和復(fù)雜性。NCPP能夠激活巨噬細(xì)胞，這是其發(fā)揮免疫激活作用的重要環(huán)節(jié)。巨噬細(xì)胞在機(jī)體抗腫瘤免疫中扮演著重要角色，它不僅可以直接吞噬和殺傷腫瘤細(xì)胞，還能分泌多種細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)，調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫應(yīng)答。NCPP通過與巨噬細(xì)胞表面的模式識別受體（PRRs）相互作用，啟動細(xì)胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)通路，從而激活巨噬細(xì)胞。研究表明，NCPP主要通過與巨噬細(xì)胞表面的Toll樣受體（TLRs）結(jié)合，激活MyD88依賴的信號通路。TLRs是一類重要的PRRs，能夠識別病原體相關(guān)分子模式（PAMPs）和損傷相關(guān)分子模式（DAMPs）。當(dāng)NCPP與TLRs結(jié)合后，招募接頭蛋白MyD88，進(jìn)而激活下游的一系列蛋白激酶，如IRAK1、IRAK4、TRAF6等。這些蛋白激酶的激活導(dǎo)致核因子-κB（NF-κB）的活化，NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核后，與相關(guān)基因的啟動子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)的基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。巨噬細(xì)胞被NCPP激活后，其吞噬能力顯著增強(qiáng)，能夠更有效地攝取和清除腫瘤細(xì)胞。巨噬細(xì)胞分泌的腫瘤壞死因子（TNF-α）、白細(xì)胞介素（IL-1、IL-6等）、一氧化氮（NO）等細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)的水平也明顯升高。NCPP還能夠調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞的活性和功能，進(jìn)一步增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫能力。T淋巴細(xì)胞在抗腫瘤免疫中發(fā)揮著核心作用，包括CD4?輔助性T細(xì)胞（Th）和CD8?細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）。NCPP通過激活巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，如IL-1、IL-6、IL-12等，間接調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞的活化、增殖和分化。IL-12是一種重要的細(xì)胞因子，它能夠促進(jìn)CD4?T細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化，Th1細(xì)胞分泌的干擾素γ（IFN-γ）等細(xì)胞因子可以增強(qiáng)CTL的活性，促進(jìn)CTL對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。同時，IL-12還可以直接激活NK細(xì)胞，增強(qiáng)NK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力。此外，NCPP還可能通過調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞表面的共刺激分子和抑制性分子的表達(dá)，影響T淋巴細(xì)胞的活化和功能。例如，NCPP可以上調(diào)T淋巴細(xì)胞表面的共刺激分子CD28的表達(dá)，增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞的活化信號；同時下調(diào)抑制性分子程序性死亡受體1（PD-1）的表達(dá)，解除對T淋巴細(xì)胞的抑制，從而增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的免疫應(yīng)答。4.2.3協(xié)同作用機(jī)制化療與免疫調(diào)節(jié)協(xié)同抑制腫瘤生長是一個復(fù)雜而精細(xì)的過程，涉及到免疫微環(huán)境的改變、免疫細(xì)胞的活化以及多種信號通路的相互作用。瘤內(nèi)緩釋化療藥物在直接殺傷腫瘤細(xì)胞的同時，會導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的死亡和裂解，釋放出大量的腫瘤相關(guān)抗原（TAAs）。這些TAAs被抗原呈遞細(xì)胞（APCs）攝取、加工和處理后，以抗原肽-MHC復(fù)合物的形式呈遞給T淋巴細(xì)胞，激活T淋巴細(xì)胞的免疫應(yīng)答。巨噬細(xì)胞作為重要的APCs，在這個過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。NCPP激活的巨噬細(xì)胞不僅吞噬能力增強(qiáng)，能夠更有效地攝取TAAs，而且其抗原呈遞功能也得到提升。巨噬細(xì)胞表面的MHCⅡ類分子和共刺激分子（如CD80、CD86等）的表達(dá)上調(diào)，使其能夠更有效地將抗原肽呈遞給CD4?T細(xì)胞，促進(jìn)CD4?T細(xì)胞的活化和增殖。同時，CD4?T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子（如IL-2、IFN-γ等）又可以進(jìn)一步激活CD8?T細(xì)胞，增強(qiáng)CD8?T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力。這種化療與免疫調(diào)節(jié)之間的相互作用，形成了一個正反饋循環(huán)，不斷增強(qiáng)機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的免疫應(yīng)答，從而更有效地抑制腫瘤生長。聯(lián)合治療還能夠改變腫瘤免疫微環(huán)境，使其更有利于免疫細(xì)胞的浸潤和活化。腫瘤免疫微環(huán)境是一個由腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞以及細(xì)胞外基質(zhì)等組成的復(fù)雜生態(tài)系統(tǒng)，對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移起著重要的調(diào)控作用。在腫瘤的發(fā)展過程中，腫瘤細(xì)胞會通過分泌多種免疫抑制因子（如轉(zhuǎn)化生長因子-β，TGF-β；白細(xì)胞介素-10，IL-10等），招募免疫抑制細(xì)胞（如調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，Tregs；髓源性抑制細(xì)胞，MDSCs等），營造一個免疫抑制性的微環(huán)境，從而逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視和殺傷。NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療能夠打破這種免疫抑制狀態(tài)，重塑腫瘤免疫微環(huán)境。瘤內(nèi)緩釋化療藥物對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用可以減少免疫抑制因子的分泌，降低免疫抑制細(xì)胞的數(shù)量和活性。同時，NCPP激活的免疫系統(tǒng)能夠促進(jìn)免疫激活細(xì)胞（如巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞等）向腫瘤組織的浸潤和聚集。巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子可以趨化T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞，使其更容易進(jìn)入腫瘤組織。這些免疫激活細(xì)胞在腫瘤組織中發(fā)揮著殺傷腫瘤細(xì)胞的作用，同時還可以分泌細(xì)胞因子，進(jìn)一步調(diào)節(jié)腫瘤免疫微環(huán)境，增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫能力。4.3研究的創(chuàng)新性與局限性本研究在聯(lián)合治療方案上具有顯著的創(chuàng)新性。首次將新型免疫調(diào)節(jié)劑NCPP與瘤內(nèi)緩釋化療相結(jié)合應(yīng)用于小鼠腫瘤模型，這種聯(lián)合方式為腫瘤治療提供了一種全新的策略。傳統(tǒng)的腫瘤治療方法往往側(cè)重于單一的治療手段，難以全面有效地抑制腫瘤生長。而本研究通過將免疫調(diào)節(jié)與局部化療相結(jié)合，充分發(fā)揮了兩者的優(yōu)勢。NCPP能夠激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力，從全身免疫層面抑制腫瘤；瘤內(nèi)緩釋化療則將化療藥物直接輸送到腫瘤局部，實現(xiàn)高濃度、長時間的藥物作用，直接殺傷腫瘤細(xì)胞。兩者的協(xié)同作用，打破了傳統(tǒng)治療的局限性，為腫瘤治療開辟了新的思路，有望在臨床實踐中提高腫瘤治療效果，改善患者的生存質(zhì)量。然而，本研究也存在一定的局限性。在實驗動物模型方面，雖然小鼠腫瘤模型在腫瘤研究中被廣泛應(yīng)用，具有操作簡便、成本較低、實驗周期相對較短等優(yōu)點，但小鼠與人類在生理結(jié)構(gòu)、免疫系統(tǒng)和腫瘤生物學(xué)特性等方面存在一定差異。小鼠的免疫系統(tǒng)相對簡單，對藥物的反應(yīng)和代謝過程也與人類不同，這可能導(dǎo)致研究結(jié)果在向臨床轉(zhuǎn)化時存在一定的偏差。因此，后續(xù)研究需要進(jìn)一步開展臨床前研究，如在大型動物模型中驗證該聯(lián)合治療方案的有效性和安全性，以提高研究結(jié)果的臨床相關(guān)性。樣本量相對較小也是本研究的一個局限性。本研究每組僅選用了10只小鼠，較小的樣本量可能導(dǎo)致實驗結(jié)果的偶然性增加，降低研究結(jié)果的可靠性和統(tǒng)計學(xué)效力。在后續(xù)研究中，應(yīng)適當(dāng)擴(kuò)大樣本量，進(jìn)行多中心、大樣本的實驗研究，以更準(zhǔn)確地評估NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療的治療效果和安全性，減少實驗誤差，使研究結(jié)果更具說服力和推廣價值。此外，本研究僅觀察了一定時間內(nèi)的腫瘤生長情況和相關(guān)指標(biāo)變化，對于該聯(lián)合治療方案的長期療效和潛在的遠(yuǎn)期不良反應(yīng)尚未進(jìn)行深入研究。未來需要開展長期隨訪研究，觀察聯(lián)合治療對小鼠生存期、腫瘤復(fù)發(fā)率以及對機(jī)體其他器官和系統(tǒng)的長期影響，為臨床應(yīng)用提供更全面、更可靠的依據(jù)。4.4對未來腫瘤治療的展望本研究中NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療在小鼠腫瘤模型中展現(xiàn)出的顯著效果，為未來腫瘤治療帶來了廣闊的前景和新的方向。在臨床應(yīng)用前景方面，這種聯(lián)合治療模式有望成為腫瘤綜合治療的重要組成部分。對于一些無法進(jìn)行手術(shù)切除或?qū)鹘y(tǒng)化療耐藥的腫瘤患者，NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療提供了一種新的治療選擇。瘤內(nèi)緩釋化療能夠?qū)⒒熕幬锞珳?zhǔn)地輸送到腫瘤局部，提高藥物濃度，增強(qiáng)對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，同時減少全身毒副作用，使患者能夠更好地耐受治療。NCPP的免疫激活作用可以增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫能力，彌補(bǔ)瘤內(nèi)緩釋化療主要針對局部腫瘤細(xì)胞的局限性，從全身免疫層面抑制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。兩者的協(xié)同作用有可能提高腫瘤患者的生存率和生活質(zhì)量，延長患者的生存期。例如，在腦膠質(zhì)瘤的治療中，由于血腦屏障的存在，傳統(tǒng)化療藥物難以有效到達(dá)腫瘤部位，而瘤內(nèi)緩釋化療可以直接將藥物植入腫瘤組織內(nèi)，實現(xiàn)高濃度的局部化療。聯(lián)合NCPP的免疫激活作用，有望打破腫瘤的免疫逃逸機(jī)制，增強(qiáng)機(jī)體對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視和殺傷能力，為腦膠質(zhì)瘤患者帶來更好的治療效果。從對腫瘤治療發(fā)展的推動作用來看，NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療的成功應(yīng)用，將進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤治療領(lǐng)域的研究和創(chuàng)新。它為聯(lián)合治療策略的開發(fā)提供了重要的理論依據(jù)和實踐經(jīng)驗，鼓勵更多的科研人員探索不同治療方式和藥物之間的協(xié)同作用，開發(fā)出更多有效的聯(lián)合治療方案。這種聯(lián)合治療模式也將促使相關(guān)技術(shù)的發(fā)展和改進(jìn)，如緩釋載體材料的優(yōu)化、免疫調(diào)節(jié)劑的研發(fā)等。研發(fā)更加高效、安全、生物相容性好的緩釋載體，以提高瘤內(nèi)緩釋化療的效果和穩(wěn)定性；探索更多新型的免疫調(diào)節(jié)劑，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，優(yōu)化聯(lián)合治療的方案。此外，NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療還將推動腫瘤治療理念的轉(zhuǎn)變，從傳統(tǒng)的單一治療模式向綜合治療模式轉(zhuǎn)變，強(qiáng)調(diào)多種治療手段的協(xié)同作用，提高腫瘤治療的整體效果。這將促進(jìn)多學(xué)科合作的深入開展，腫瘤內(nèi)科、外科、放療科、免疫科等多個學(xué)科將更加緊密地協(xié)作，為腫瘤患者提供更加個性化、精準(zhǔn)化的治療方案，推動腫瘤治療向更加高效、安全、個性化的方向發(fā)展，為腫瘤患者帶來更多的生存希望和更好的生活質(zhì)量。五、研究結(jié)論本研究深入探究了NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療對小鼠腫瘤的抑制作用及機(jī)制，取得了一系列重要成果。實驗結(jié)果表明，NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療對小鼠腫瘤生長具有顯著的抑制效果。通過對腫瘤體積和重量的監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合治療組小鼠的腫瘤體積增長極為緩慢，在整個實驗觀察期間，腫瘤體積始終明顯小于其他三組；實驗結(jié)束時，聯(lián)合治療組的平均瘤重僅為（0.56±0.08）g，腫瘤抑制率高達(dá)69.89%，顯著高于NCPP治療組和緩釋治療組（P<0.01）。腫瘤組織病理變化也直觀地顯示出聯(lián)合治療組腫瘤組織出現(xiàn)大片壞死區(qū)域，腫瘤細(xì)胞大部分壞死，炎性細(xì)胞浸潤更為明顯，對腫瘤組織的破壞作用最強(qiáng)。從作用機(jī)制來看，瘤內(nèi)緩釋化療通過將化療藥物與緩釋載體結(jié)合，在腫瘤局部持續(xù)釋放高濃度的化療藥物，直接殺傷腫瘤細(xì)胞。以阿糖胞苷為例，其在腫瘤細(xì)胞內(nèi)通過抑制DNA合成，有效阻止腫瘤細(xì)胞的增殖和分裂，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。NCPP則主要通過激活巨噬細(xì)胞和調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞活性來增強(qiáng)機(jī)體免疫力。NCPP與巨噬細(xì)胞表面的模式識別受體結(jié)合，啟動細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)通路，激活巨噬細(xì)胞，使其吞噬能力增強(qiáng)，分泌多種細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答；同時，NCPP通過調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞表面共刺激分子和抑制性分子的表達(dá)，以及激活巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子間接調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞的活化、增殖和分化，增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的免疫應(yīng)答。兩者聯(lián)合時，化療藥物殺傷腫瘤細(xì)胞釋放的腫瘤相關(guān)抗原被抗原呈遞細(xì)胞攝取、加工和處理后，激活T淋巴細(xì)胞的免疫應(yīng)答，形成正反饋循環(huán)，增強(qiáng)機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的免疫應(yīng)答；聯(lián)合治療還改變了腫瘤免疫微環(huán)境，減少免疫抑制因子的分泌，降低免疫抑制細(xì)胞的數(shù)量和活性，促進(jìn)免疫激活細(xì)胞向腫瘤組織的浸潤和聚集，增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫能力。本研究首次將NCPP與瘤內(nèi)緩釋化療相結(jié)合，為腫瘤治療提供了一種全新的聯(lián)合治療策略，具有創(chuàng)新性。然而，研究也存在一定局限性，如實驗動物模型與人類存在差異，樣本量較小，對聯(lián)合治療的長期療效和遠(yuǎn)期不良反應(yīng)尚未深入研究等。未來，NCPP聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療有望在臨床腫瘤治療中得到應(yīng)用，為無法手術(shù)切除或?qū)鹘y(tǒng)化療耐藥的腫瘤患者提供新的治療選擇，提高患者的生存率和生活質(zhì)量。本研究也將推動腫瘤治療領(lǐng)域的進(jìn)一步研究和創(chuàng)新，促進(jìn)聯(lián)合治療策略的開發(fā)、相關(guān)技術(shù)的發(fā)展以及腫瘤治療理念的轉(zhuǎn)變，推動腫瘤治療向更加高效、安全、個性化的方向發(fā)展。六、參考文獻(xiàn)[1]SungH,FerlayJ,SiegelRL,etal.Globalcancerstatistics2020:GLOBOCANestimatesofincidenceandmortalityworldwidefor36cancersin185countries[J].CA:acancerjournalforclinicians,2021,71(3):209-249.[2]孫燕，石遠(yuǎn)凱。臨床腫瘤內(nèi)科手冊[M].人民衛(wèi)生出版社，2017.[3]SharmaP,AllisonJP.Thefutureofimmunecheckpointtherapy[J].Science,2015,348(6230):56-61.[4]李進(jìn)，王理偉。腫瘤內(nèi)科方案的藥物不良反應(yīng)及對策[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[5]HurwitzH,FehrenbacherL,NovotnyW,etal.Bevacizumabplusirinotecan,fluorouracil,andleucovorinformetastaticcolorectalcancer[J].NewEnglandJournalofMedicine,2004,350(23):2335-2342.[6]LiuY,WangY,ZhangL,etal.Intratumoralimplantationof5-fluorouracil-loadedPLGAmicrospheresforlocalchemotherapyofglioma[J].JournalofControlledRelease,2009,137(2):117-123.[7]郭春，吳南，洪海潔，等。無細(xì)胞短棒狀桿菌制劑聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療對鼠黑色素瘤的抑制效應(yīng)[J].山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2009,47(5):67-70.[8]陳慰峰。醫(yī)學(xué)免疫學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[9]周光炎。免疫學(xué)原理[M].科學(xué)出版社，2019.[10]陸德源。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[11]李玉林。病理學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[12]王吉耀。內(nèi)科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[13]葛均波，徐永健。內(nèi)科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[14]吳在德，吳肇漢。外科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[15]趙玉沛，陳孝平。外科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[16]曹雪濤。免疫學(xué)前沿進(jìn)展[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[17]張學(xué)軍。皮膚性病學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[18]楊寶峰。藥理學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[19]詹啟敏。分子腫瘤學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[20]顧健人。腫瘤分子醫(yī)學(xué)[M].上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2019.[21]韓啟德。分子醫(yī)學(xué)導(dǎo)論[M].北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2018.[22]陳竺。系統(tǒng)生物學(xué)——從基礎(chǔ)研究到臨床應(yīng)用[M].科學(xué)出版社，2019.[23]曾益新。腫瘤學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[24]湯釗猷?，F(xiàn)代腫瘤學(xué)[M].復(fù)旦大學(xué)出版社，2018.[25]赫捷，陳萬青.2018中國腫瘤登記年報[M].北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2018.[26]萬德森。臨床腫瘤學(xué)[M].科學(xué)出版社，2018.[27]劉彤華。診斷病理學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[28]張奉春。中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志[J].2018,12(4):241-244.[29]王辰，王建安。內(nèi)科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[30]陳灝珠，林果為。實用內(nèi)科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[2]孫燕，石遠(yuǎn)凱。臨床腫瘤內(nèi)科手冊[M].人民衛(wèi)生出版社，2017.[3]SharmaP,AllisonJP.Thefutureofimmunecheckpointtherapy[J].Science,2015,348(6230):56-61.[4]李進(jìn)，王理偉。腫瘤內(nèi)科方案的藥物不良反應(yīng)及對策[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[5]HurwitzH,FehrenbacherL,NovotnyW,etal.Bevacizumabplusirinotecan,fluorouracil,andleucovorinformetastaticcolorectalcancer[J].NewEnglandJournalofMedicine,2004,350(23):2335-2342.[6]LiuY,WangY,ZhangL,etal.Intratumoralimplantationof5-fluorouracil-loadedPLGAmicrospheresforlocalchemotherapyofglioma[J].JournalofControlledRelease,2009,137(2):117-123.[7]郭春，吳南，洪海潔，等。無細(xì)胞短棒狀桿菌制劑聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療對鼠黑色素瘤的抑制效應(yīng)[J].山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2009,47(5):67-70.[8]陳慰峰。醫(yī)學(xué)免疫學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[9]周光炎。免疫學(xué)原理[M].科學(xué)出版社，2019.[10]陸德源。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[11]李玉林。病理學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[12]王吉耀。內(nèi)科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[13]葛均波，徐永健。內(nèi)科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[14]吳在德，吳肇漢。外科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[15]趙玉沛，陳孝平。外科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[16]曹雪濤。免疫學(xué)前沿進(jìn)展[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[17]張學(xué)軍。皮膚性病學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[18]楊寶峰。藥理學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[19]詹啟敏。分子腫瘤學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[20]顧健人。腫瘤分子醫(yī)學(xué)[M].上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2019.[21]韓啟德。分子醫(yī)學(xué)導(dǎo)論[M].北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2018.[22]陳竺。系統(tǒng)生物學(xué)——從基礎(chǔ)研究到臨床應(yīng)用[M].科學(xué)出版社，2019.[23]曾益新。腫瘤學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[24]湯釗猷?，F(xiàn)代腫瘤學(xué)[M].復(fù)旦大學(xué)出版社，2018.[25]赫捷，陳萬青.2018中國腫瘤登記年報[M].北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2018.[26]萬德森。臨床腫瘤學(xué)[M].科學(xué)出版社，2018.[27]劉彤華。診斷病理學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[28]張奉春。中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志[J].2018,12(4):241-244.[29]王辰，王建安。內(nèi)科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[30]陳灝珠，林果為。實用內(nèi)科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[3]SharmaP,AllisonJP.Thefutureofimmunecheckpointtherapy[J].Science,2015,348(6230):56-61.[4]李進(jìn)，王理偉。腫瘤內(nèi)科方案的藥物不良反應(yīng)及對策[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[5]HurwitzH,FehrenbacherL,NovotnyW,etal.Bevacizumabplusirinotecan,fluorouracil,andleucovorinformetastaticcolorectalcancer[J].NewEnglandJournalofMedicine,2004,350(23):2335-2342.[6]LiuY,WangY,ZhangL,etal.Intratumoralimplantationof5-fluorouracil-loadedPLGAmicrospheresforlocalchemotherapyofglioma[J].JournalofControlledRelease,2009,137(2):117-123.[7]郭春，吳南，洪海潔，等。無細(xì)胞短棒狀桿菌制劑聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療對鼠黑色素瘤的抑制效應(yīng)[J].山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2009,47(5):67-70.[8]陳慰峰。醫(yī)學(xué)免疫學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[9]周光炎。免疫學(xué)原理[M].科學(xué)出版社，2019.[10]陸德源。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[11]李玉林。病理學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[12]王吉耀。內(nèi)科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[13]葛均波，徐永健。內(nèi)科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[14]吳在德，吳肇漢。外科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[15]趙玉沛，陳孝平。外科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[16]曹雪濤。免疫學(xué)前沿進(jìn)展[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[17]張學(xué)軍。皮膚性病學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[18]楊寶峰。藥理學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[19]詹啟敏。分子腫瘤學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[20]顧健人。腫瘤分子醫(yī)學(xué)[M].上海科學(xué)技術(shù)出版社，2019.[21]韓啟德。分子醫(yī)學(xué)導(dǎo)論[M].北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2018.[22]陳竺。系統(tǒng)生物學(xué)——從基礎(chǔ)研究到臨床應(yīng)用[M].科學(xué)出版社，2019.[23]曾益新。腫瘤學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[24]湯釗猷。現(xiàn)代腫瘤學(xué)[M].復(fù)旦大學(xué)出版社，2018.[25]赫捷，陳萬青.2018中國腫瘤登記年報[M].北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2018.[26]萬德森。臨床腫瘤學(xué)[M].科學(xué)出版社，2018.[27]劉彤華。診斷病理學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[28]張奉春。中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志[J].2018,12(4):241-244.[29]王辰，王建安。內(nèi)科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[30]陳灝珠，林果為。實用內(nèi)科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[4]李進(jìn)，王理偉。腫瘤內(nèi)科方案的藥物不良反應(yīng)及對策[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[5]HurwitzH,FehrenbacherL,NovotnyW,etal.Bevacizumabplusirinotecan,fluorouracil,andleucovorinformetastaticcolorectalcancer[J].NewEnglandJournalofMedicine,2004,350(23):2335-2342.[6]LiuY,WangY,ZhangL,etal.Intratumoralimplantationof5-fluorouracil-loadedPLGAmicrospheresforlocalchemotherapyofglioma[J].JournalofControlledRelease,2009,137(2):117-123.[7]郭春，吳南，洪海潔，等。無細(xì)胞短棒狀桿菌制劑聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療對鼠黑色素瘤的抑制效應(yīng)[J].山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2009,47(5):67-70.[8]陳慰峰。醫(yī)學(xué)免疫學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[9]周光炎。免疫學(xué)原理[M].科學(xué)出版社，2019.[10]陸德源。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[11]李玉林。病理學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[12]王吉耀。內(nèi)科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[13]葛均波，徐永健。內(nèi)科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[14]吳在德，吳肇漢。外科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[15]趙玉沛，陳孝平。外科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[16]曹雪濤。免疫學(xué)前沿進(jìn)展[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[17]張學(xué)軍。皮膚性病學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[18]楊寶峰。藥理學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[19]詹啟敏。分子腫瘤學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[20]顧健人。腫瘤分子醫(yī)學(xué)[M].上海科學(xué)技術(shù)出版社，2019.[21]韓啟德。分子醫(yī)學(xué)導(dǎo)論[M].北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2018.[22]陳竺。系統(tǒng)生物學(xué)——從基礎(chǔ)研究到臨床應(yīng)用[M].科學(xué)出版社，2019.[23]曾益新。腫瘤學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[24]湯釗猷?，F(xiàn)代腫瘤學(xué)[M].復(fù)旦大學(xué)出版社，2018.[25]赫捷，陳萬青.2018中國腫瘤登記年報[M].北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2018.[26]萬德森。臨床腫瘤學(xué)[M].科學(xué)出版社，2018.[27]劉彤華。診斷病理學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[28]張奉春。中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志[J].2018,12(4):241-244.[29]王辰，王建安。內(nèi)科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[30]陳灝珠，林果為。實用內(nèi)科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[5]HurwitzH,FehrenbacherL,NovotnyW,etal.Bevacizumabplusirinotecan,fluorouracil,andleucovorinformetastaticcolorectalcancer[J].NewEnglandJournalofMedicine,2004,350(23):2335-2342.[6]LiuY,WangY,ZhangL,etal.Intratumoralimplantationof5-fluorouracil-loadedPLGAmicrospheresforlocalchemotherapyofglioma[J].JournalofControlledRelease,2009,137(2):117-123.[7]郭春，吳南，洪海潔，等。無細(xì)胞短棒狀桿菌制劑聯(lián)合瘤內(nèi)緩釋化療對鼠黑色素瘤的抑制效應(yīng)[J].山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2009,47(5):67-70.[8]陳慰峰。醫(yī)學(xué)免疫學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[9]周光炎。免疫學(xué)原理[M].科學(xué)出版社，2019.[10]陸德源。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[11]李玉林。病理學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[12]王吉耀。內(nèi)科學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2018.[