專題10生物技術(shù)與工程

第32練微生物培養(yǎng)

1堆練基礎(chǔ)

1.（2022?海南?高考真題）為探究校內(nèi)植物園土壤中的細(xì)菌種類，某興趣小組采集園內(nèi)土壤樣本并開展

相關(guān)實驗。下列有關(guān)敘述錯族的是（）

A.采樣時應(yīng)隨機采集植物園中多個不同地點的土壤樣本

B.培養(yǎng)細(xì)菌時，可選用牛肉膏蛋白豚固體培養(yǎng)基

C.土壤溶液稀釋倍數(shù)越低，越容易得到單菌落

D.鑒定細(xì)菌種類時，除形態(tài)學(xué)鑒定外，還可借助生物化學(xué)的方法

【答案】C

【詳解】A、采集植物園中土壤樣本的原則之一是要隨機采樣，A正確；

B、牛肉膏蛋白豚固體培養(yǎng)基中含有細(xì)菌生長所需的碳源、氮源、水、無機鹽等，可用于細(xì)菌的培養(yǎng)，B正

確；

C、土壤溶液稀釋倍數(shù)足夠高時，才能將聚集的細(xì)菌分散開，有助于在培養(yǎng)基表面形成單菌落，C錯誤；

D、不同種類細(xì)菌的理化特性一般不同，鑒定細(xì)菌種類時，除根據(jù)菌落特征進行形態(tài)學(xué)鑒定外，還可以借助

生物化學(xué)的方法進行鑒定，D正確。

2.（2021?天津?高考真題）下列操作能達(dá)到滅菌目的的是（）

A.用免洗酒精凝膠擦手B.制作泡菜前用開水燙洗容器

C.在火焰上灼燒接種環(huán)D.防疫期間用石炭酸噴灑教室

【答案】C

【詳解】A、用免洗酒精凝膠擦手屬于消毒，A錯誤；

B、制作泡菜前用開水燙洗容器屬于消毒過程，B錯誤；

C、在火焰上灼燒接種環(huán)能達(dá)到滅菌目的，C正確；

D、防疫期間用石炭酸噴灑教室，屬于消毒，D錯誤。

3.（2021?北京?高考真題）野生草本植物多具有根系發(fā)達(dá)、生長較快、抗逆性強的特點，除用于生態(tài)治

理外，其中一些可替代木材栽培食用菌，收獲后剩余的菌渣可作肥料或飼料。相關(guān)敘述錯誤的是（

A.種植此類草本植物可以減少水土流失

B.菌渣作為農(nóng)作物的肥料可實現(xiàn)能量的循環(huán)利用

C.用作培養(yǎng)基的草本植物給食用菌提供碳源和氮源

D.菌渣作飼料實現(xiàn)了物質(zhì)在植物、真菌和動物間的轉(zhuǎn)移

【答案】B

【詳解】A、此類草本植物根系發(fā)達(dá)可以固定更多的土壤，故種植此類草本植物可以減少水土流失，A正確;

B、能量可多級利用，但不能循環(huán)利用，B錯誤；

C、草本植物含有蛋白質(zhì)和纖維素，可給食用菌提供碳源和氮源，C正確；

D、草本植物可栽培食用菌，而菌渣可作肥料或飼料，故實現(xiàn)了物質(zhì)在植物、真菌和動物間的轉(zhuǎn)移，D正確。

4.（2021?北京?高考真題）人體皮膚表面存在著多種微生物，某同學(xué)擬從中分離出葡萄球菌。下述操作

不正確的是（）

A.對配制的培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌

B.使用無菌棉拭子從皮膚表面取樣

C.用取樣后的棉拭子在固體培養(yǎng)基上涂布

D.觀察菌落的形態(tài)和顏色等進行初步判斷

【答案】C

【詳解】A、為避免雜菌污染干擾，需對配制的培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌，A正確；

B、葡萄球菌需從人體皮膚的微生物中分離，為避免雜菌污染，故需要使用無菌棉拭子從皮膚表面取樣，B

正確；

C、用取樣后的棉拭子浸出液在固體培養(yǎng)基上涂布，C錯誤；

D、根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進行鑒別，D正確。

5.（2021?山東?高考真題）解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸

會使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色。將不能直接吸收脂肪的甲，乙兩種菌分別等量接種在醇溶青瓊脂平板上

培養(yǎng)。甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色，乙菌菌落周圍不變色，下列說法錯誤的是（）

A.甲菌屬于解脂菌

B.實驗中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源

C.可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進行對比

D.該平板可用來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力

【答案】B

【詳解】A、根據(jù)題干信息“甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色”，說明甲可以分泌脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪

酸，脂肪酸會使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色，因此甲菌屬于解脂菌，A正確；

B、乙菌落周圍沒有出現(xiàn)深藍(lán)色，說明乙菌落不能產(chǎn)生脂肪酶，不能利用脂肪為其供能，但乙菌落也可以在

培養(yǎng)基上生存，說明該培養(yǎng)基不是以脂肪為唯一碳源，B錯誤；

C、可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進行對比，更加直觀，C正確；

D、可以利用該平板可用來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力，觀察指標(biāo)可以以菌落周圍深藍(lán)色圈的大小，D正

確。

2維練能力J//

6.（2021?浙江?高考真題）下列關(guān)于原生質(zhì)體和細(xì)胞計數(shù)的敘述，錯誤的是（）

A.測定植物原生質(zhì)體的密度時，可用血細(xì)胞計數(shù)板

B.紅墨水不能進入活細(xì)胞，可用于檢測細(xì)胞的存活狀態(tài)并計數(shù)

C.涂布分離法和劃線分離法均能得到單菌落，都可用于細(xì)胞計數(shù)

D.酵母菌在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間后，可用比濁計測定其密度

【答案】C

【詳解】A、可用血細(xì)胞計數(shù)板對原生質(zhì)體進行計數(shù)，一般計數(shù)總數(shù)不少于300個細(xì)胞，A正確；

B、活細(xì)胞的細(xì)胞膜具有選擇透過性，紅墨水中的色素分子不能透過細(xì)胞膜，當(dāng)細(xì)胞死亡后，細(xì)胞膜失去選

擇透過性，紅墨水中的色素分子能進入細(xì)胞，所以可用紅墨水檢測細(xì)胞的存活狀態(tài)并計數(shù)，B正確；

C、劃線分離法不能用于細(xì)胞計數(shù)，C錯誤；

D、酵母細(xì)胞的密度與渾濁度指標(biāo)存在一定的數(shù)量關(guān)系，所以酵母菌在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間后，可用

比濁計測定其密度，D正確。

7.（2020?江蘇?高考真題）為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。

下列敘述正確的是（）

111區(qū)

A.倒平板后需間歇晃動，以保證表面平整

B.圖中I、II區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從III區(qū)挑取單菌落

C.該實驗結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的

D.菌落周圍的纖維素被降解后，可被剛果紅染成紅色

【答案】B

【詳解】A、倒平板后無需晃動，A錯誤；

B、I區(qū)、II區(qū)沒有出現(xiàn)單菌落，說明細(xì)菌數(shù)量太多，故應(yīng)從III區(qū)挑取單菌落，B正確；

C、出現(xiàn)單菌落即達(dá)到了菌種純化的目的，C錯誤；

D、剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解

后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)，D錯誤。

8.（2020?山東?高考真題）野生型大腸桿菌可以在基本培養(yǎng)基上生長，發(fā)生基因突變產(chǎn)生的氨基酸依賴

型菌株需要在基本培養(yǎng)基上補充相應(yīng)氨基酸才能生長。將甲硫氨酸依賴型菌株M和蘇氨酸依賴型菌株N單

獨接種在基本培養(yǎng)基上時，均不會產(chǎn)生菌落。某同學(xué)實驗過程中發(fā)現(xiàn)，將比N菌株混合培養(yǎng)一段時間，充

分稀釋后再涂布到基本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后出現(xiàn)許多由單個細(xì)菌形成的菌落，將這些菌落分別接種到基本培

養(yǎng)基上，培養(yǎng)后均有菌落出現(xiàn)。該同學(xué)對這些菌落出現(xiàn)原因的分析，不合理的是（）

A.操作過程中出現(xiàn)雜菌污染

B.M、N菌株互為對方提供所缺失的氨基酸

C.混合培養(yǎng)過程中，菌株獲得了對方的遺傳物質(zhì)

D.混合培養(yǎng)過程中，菌株中已突變的基因再次發(fā)生突變

【答案】B

【詳解】A.操作過程當(dāng)中出現(xiàn)雜菌污染，基本培養(yǎng)基上生長的為雜菌，A合理；

B.若M、N菌株互為對方提供所缺失的氨基酸形成的菌落，需要MN混合在一起才能生存，而該菌落來自于

單個細(xì)菌形成的菌落，而題干中進行了充分稀釋，單個細(xì)菌缺少必須的氨基酸，不能形成菌落，B不合理；

C.M,N菌株混合培養(yǎng)后在基本培養(yǎng)基上可以生存。推測可能是混合培養(yǎng)過程當(dāng)中，菌株間發(fā)生了基因交流,

獲得了對方的遺傳物質(zhì)，C合理；

D.基因突變是不定向的，在混合培養(yǎng)過程中，菌株當(dāng)中已突變的基因也可能再次發(fā)生突變得到可在基本培

養(yǎng)基上生存的野生型大腸桿菌，D合理。

9.（2021?山東?高考真題）含硫蛋白質(zhì)在某些微生物的作用下產(chǎn)生硫化氫導(dǎo)致生活污水發(fā)臭。硫化氫可

以與硫酸亞鐵鏤結(jié)合形成黑色沉淀。為探究發(fā)臭水體中甲、乙菌是否產(chǎn)生硫化氫及兩種菌的運動能力，用

穿刺接種的方法，分別將兩種菌接種在含有硫酸亞鐵錢的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，如圖所示。若兩種菌繁殖速

度相等，下列說法錯誤的是()

甲乙

A.乙菌的運動能力比甲菌強

B.為不影響菌的運動需選用液體培養(yǎng)基

C.該實驗不能比較出兩種菌產(chǎn)生硫化氫的量

D.穿刺接種等接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染

【答案】B

【詳解】A、從圖中可以看出甲菌在試管中分布范圍小于乙菌，說明了乙菌的運動能力比甲菌強，A正確;

B、為不影響菌的運動需選用半固體培養(yǎng)基，B錯誤；

C、根據(jù)題意，黑色區(qū)域的面積大小反映兩種菌運動能力的大小，而不能表示二者產(chǎn)生硫化氫的能力大小,

C正確;

D、微生物接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染，D正確。

10.(2022?湖南?高考真題)黃酒源于中國，與啤酒、葡萄酒并稱世界三大發(fā)酵酒。發(fā)酵酒的釀造過程

中除了產(chǎn)生乙醇外，也產(chǎn)生不利于人體健康的氨基甲酸乙酯(EC)oEC主要由尿素與乙醇反應(yīng)形成，各國

對酒中的EC含量有嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)?；卮鹣铝袉栴}:

(1)某黃酒釀制工藝流程如圖所示，圖中加入的菌種a是，工藝b是(填“消毒”或“滅菌”),

采用工藝b的目的是____________________

米漿水a(chǎn)

|原料H浸泡田蒸煮麗H滅活陽麴H壓榨?、

~T—酒糟

|成品kTbk~|灌裝卜~|同研T陳貯卜一|煎酒卜『

(2)以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入指示劑，根據(jù)顏色變化，可以初步鑒定分解尿素的細(xì)菌。尿

素分解菌產(chǎn)生的胭酶可用于降解黃酒中的尿素，胭酶固定化后穩(wěn)定性和利用效率提高，固定化方法有

__________________________(答出兩種即可)。

(3)研究人員利用胭酶基因構(gòu)建基因工程菌L,在不同條件下分批發(fā)酵生產(chǎn)胭酶，結(jié)果如圖所示。推測

是決定工程菌L高胭酶活力的關(guān)鍵因素，理由是。

zQz9

L6HH

6.5

.L26dd

.0e撇

。5.。胭酶活力

鐘

.5贊

a5..0r-培養(yǎng)pH

.484..5

4..0

O

培養(yǎng)時間(h)培養(yǎng)時間(h)

(4)某公司開發(fā)了一種新的黃酒產(chǎn)品，發(fā)現(xiàn)EC含量超標(biāo)。簡要寫出利用微生物降低該黃酒中EC含量的思路

【答案】(1)酵母菌滅菌殺死黃酒中全部的微生物及芽狗、抱子，防止成品酒變酸或腐敗變質(zhì)

(2)酚紅化學(xué)結(jié)合法、包埋法、物理吸附法

(3)pH兩圖中JR酶活力隨時間變化的曲線基本一致，而維持pH在6.5不變與pH從6.5

降為4.5相比較而言，酶活力值始終要高

⑷方案一：配置一種選擇培養(yǎng)基，篩選出產(chǎn)生EC降解酶的細(xì)菌，從細(xì)菌中分離得到EC降解酶，純化的EC

降解酶進行固定化操作后，加入該黃酒中。

方案二：配置一種選擇培養(yǎng)基，篩選出產(chǎn)生服酶的細(xì)菌，從細(xì)菌中分離得到酥酶，純化的服酶進行固定化

操作后，在黃酒工藝流程的發(fā)酵環(huán)節(jié)中加入。

【分析】

(1)制造果酒利用的是酵母菌的無氧呼吸，加入的菌種a是酵母菌。過濾能除去啤酒中部分微生物，工藝

b是滅菌，滅菌能殺死啤酒中全部微生物，，包括芽抱和抱子，防止雜菌污染，延長其保存期。黃酒釀造好

后須經(jīng)煎酒(滅菌)后灌壇貯存，貯存一定時間后,經(jīng)過濾，灌瓶壓蓋、滅菌、包裝。

(2)由于細(xì)菌分解尿素的過程中合成厥酶，厥酶將尿素分解成氨，會使培養(yǎng)基堿性增強，pH升高，所以可

以用檢測pH的變化的方法來判斷尿素是否被分解，故在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑可以

鑒別尿素分解菌。固定化酶實質(zhì)上是將相應(yīng)酶固定在不溶于水的載體上，實現(xiàn)酶的反復(fù)利用，并提高酶穩(wěn)

定性，酶的各項特性(如高效性、專一性和作用條件的溫和性)依然保持。固定化酶的方法包括化學(xué)結(jié)合

法、包埋法、物理吸附法等。

(3)對比兩坐標(biāo)曲線，兩圖中胭酶活力隨時間變化的曲線基本一致，說明培養(yǎng)時間不是決定因素；而維持

pH在6.5不變與pH從6.5降為4.5相比較而言，酶活力值始終要高，說明pH為6.5時，有利于酶結(jié)構(gòu)的

穩(wěn)定，故pH是決定工程菌L高JR酶活力的關(guān)鍵因素。

(4)從坐標(biāo)圖形看，利用掘酶消除其前體物質(zhì)尿素可降低該黃酒中EC含量。配置一種選擇培養(yǎng)基，篩選

出產(chǎn)生EC降解酶的細(xì)菌，從細(xì)菌中分離得到EC降解酶，純化的EC降解酶進行固定化操作后，加入該黃酒

中。或者配置一種選擇培養(yǎng)基，篩選出產(chǎn)生版酶的細(xì)菌，從細(xì)菌中分離得到麻酶，純化的版酶進行固定化

操作后，在黃酒工藝流程的發(fā)酵環(huán)節(jié)中加入。

3維練素養(yǎng)

11.（2021?湖南?高考真題）大熊貓是我國特有的珍稀野生動物，每只成年大熊貓每日進食竹子量可達(dá)

12~38kg。大熊貓可利用竹子中8%的纖維素和27%的半纖維素。研究人員從大熊貓糞便和土壤中篩選纖維素

分解菌。回答下列問題：

（1）纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即0為篩選纖維素分解菌，將大

熊貓新鮮糞便樣品稀釋液接種至以為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，該培養(yǎng)基從功能上分類

屬于培養(yǎng)基。

（2）配制的培養(yǎng)基必須進行滅菌處理，目的是o檢測固體培養(yǎng)基滅菌效果的常

用方法是。

（3）簡要寫出測定大熊貓新鮮糞便中纖維素分解菌活菌數(shù)的實驗思路。

（4）為高效降解農(nóng)業(yè)秸稈廢棄物，研究人員利用從土壤中篩選獲得的3株纖維素分解菌，在37℃條件下進

行玉米秸稈降解實驗，結(jié)果如表所示。在該條件下纖維素酶活力最高的是菌株,理由是o

菌株秸稈總重（g）秸稈殘重（g）秸稈失重（％）纖維素降解率（％）

A2.001.5124.5016.14

B2.001.5323.5014.92

C2.001.4229.0023.32

【答案】G酶、Q酶和葡萄糖甘酶纖維素選擇高壓蒸汽

為了殺死培養(yǎng)基中的所有微生物（微生物和芽抱、抱子）不接種培養(yǎng)（或空白培養(yǎng)）將

大熊貓新鮮糞便樣液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后，取0.1mL涂布到若干個平板（每個稀釋度至少涂布三個平板），對

菌落數(shù)在30~300的平板進行計數(shù)，則可根據(jù)公式推測大熊貓新鮮糞便中纖維素分解菌活菌

數(shù)C接種C菌株后秸稈失重最多，纖維素降解率最大

【詳解】（1）纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C酶、Cx酶和葡萄糖昔酶，前兩

種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，

纖維素分解菌能夠很好地生長，其他微生物則不能生長。為篩選纖維素分解菌，將大熊貓新鮮糞便樣品稀

釋液接種至以纖維素為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)；培養(yǎng)基從功能上分類可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別

培養(yǎng)基，故該培養(yǎng)基從功能上分類屬于選擇培養(yǎng)基。

（2）配制培養(yǎng)基的常用高壓蒸汽滅菌，即將培養(yǎng)基置于壓力100kPa、溫度121℃條件下維持15-30分鐘，

目的是為了殺死培養(yǎng)基中的所有微生物（微生物和芽抱、抱子）。為檢測滅菌效果可對培養(yǎng)基進行空白培

養(yǎng)，即將未接種的培養(yǎng)基在適宜條件下培養(yǎng)一段時間，若在適宜條件下培養(yǎng)無菌落出現(xiàn)，說明培養(yǎng)基滅菌

徹底，否則說明培養(yǎng)基滅菌不徹底。

（3）為測定大熊貓新鮮糞便中纖維素分解菌活菌數(shù)，常采用稀釋涂布平板法，在適宜的條件下對大熊貓新

鮮糞便中纖維素分解菌進行純化并計數(shù)時，對照組應(yīng)該涂布等量的無菌水。將大熊貓新鮮糞便樣液稀釋適

當(dāng)倍數(shù)后，取0.1mL涂布到若干個平板（每個稀釋度至少涂布三個平板），對菌落數(shù)在30?300的平板進

行計數(shù)，則可根據(jù)公式推測大熊貓新鮮糞便中纖維素分解菌活菌數(shù)。

（4）測定酶活力時可以用單位時間內(nèi)、單位體積中反應(yīng)物的減少量或產(chǎn)物的增加量來表示。由表格可知，

在適宜的條件下，C菌株在相同的溫度和時間下，秸稈失重最多，纖維素降解率最大，說明該菌株的纖維素

分解菌產(chǎn)生的纖維素酶活力最大。

12.（2021?河北?高考真題）葡萄酒生產(chǎn)過程中會產(chǎn)生大量的釀酒殘渣（皮渣）。目前這些皮渣主要用

作飼料或肥料，同時研究者也采取多種措施拓展其利用價值。

回答下列問題：

（1）皮渣中含有較多的天然食用色素花色音，可用萃取法提取。萃取前將原料干燥、粉碎的目的分別是

萃取效率主要取決于萃取劑的o萃取過程需要在適宜溫度下進行，溫度過高會導(dǎo)

致花色昔o研究發(fā)現(xiàn)，萃取時輔以纖維素酶、果膠酶處理可提高花色普的提取率，原因是

（2）為了解皮渣中微生物的數(shù)量，取10g皮渣加入90mL無菌水，混勻、靜置后取上清液，用稀釋涂布平

板法將0.1mL稀釋液接種于培養(yǎng)基上。104倍稀釋對應(yīng)的三個平板中菌落數(shù)量分別為78、91和95,則每克

皮渣中微生物數(shù)量為個。

（3）皮渣堆積會積累醋酸菌，可從中篩選優(yōu)良菌株。制備醋酸菌初篩平板時，需要將培養(yǎng)基的pH調(diào)至

性，滅菌后須在未凝固的培養(yǎng)基中加入無菌碳酸鈣粉末、充分混勻后倒平板，加入碳酸鈣的目

的是。培養(yǎng)篩選得到的醋酸菌時，在缺少糖源的液體培養(yǎng)基中可加入乙

醇作為=

（4）皮渣堆積過程中也會積累某些兼性厭氧型乳酸菌。初篩醋酸菌時，乳酸菌有可能混入其中，且兩者菌

落形態(tài)相似。請設(shè)計一個簡單實驗，區(qū)分篩選平板上的醋酸菌和乳酸菌_________o（簡要寫出實驗步驟和

預(yù)期結(jié)果）

【答案】利于萃取劑溶解花色甘、使原料與萃取劑充分接觸性質(zhì)和使用量分解纖

維素酶、果膠酶可破壞細(xì)胞壁，有利于提高花色昔的提取率8.8X106中性至微堿

性使培養(yǎng)基不透明，從而使醋酸菌菌落周圍出現(xiàn)透明圈碳源實驗步驟：將平

板置于無氧環(huán)境下繼續(xù)培養(yǎng)，觀察菌落形態(tài)和透明圈大小

預(yù)期結(jié)果：若菌落繼續(xù)生長，且透明圈增大，則為兼性厭氧型的乳酸菌菌落，若菌落不能繼續(xù)生長，透明

圈不再擴大，則為醋酸菌菌落

【詳解】（1）天然食用色素花色昔可用萃取法提取，萃取劑與水應(yīng)不混溶，萃取前將原料干燥，有利于萃

取劑溶解花色甘，提高溶解率；粉碎的目的是使原料與萃取劑充分接觸；萃取效率主要取決于萃取劑的性

質(zhì)和使用量。萃取過程需要在適宜溫度下進行，溫度過高會導(dǎo)致花色音分解。萃取時輔以纖維素酶、果膠

酶處理，可破壞細(xì)胞壁，有利于提高花色昔的提取率。

（2）為了解皮渣中微生物的數(shù)量，取10g皮渣加入901nL無菌水，混勻、靜置后取上清液，用稀釋涂布平

板法將0.1mL稀釋液接種于培養(yǎng)基上。10'倍稀釋對應(yīng)的三個平板中菌落數(shù)量分別為78、91和95,則三個

平板中平均菌落數(shù)為（78+91+95）4-3=88,每克皮渣中微生物數(shù)量為88+0.1義104=8.8X10$個。

（3）醋酸菌屬于細(xì)菌，制備醋酸菌初篩平板時，需要將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性至微堿性，滅菌后在未凝固

的培養(yǎng)基中加入無菌碳酸鈣粉末、充分混勻后倒平板，加入碳酸鈣可使培養(yǎng)基不透明，醋酸菌產(chǎn)生的醋酸

可分解碳酸鈣，產(chǎn)生透明圈，根據(jù)這一特點可篩選出醋酸菌，在缺少糖源的液體培養(yǎng)基中醋酸菌以乙醇為

碳源，先把乙醇氧化為乙醛，再把乙醛氧化為乙酸。

（4）醋酸菌為好氧菌，與兼性厭氧型的乳酸菌菌落形態(tài)相似，且二者產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物均可使碳酸鈣分解，

區(qū)分篩選平板上的醋酸菌和乳酸菌，可將平板置于無氧環(huán)境下繼續(xù)培養(yǎng)，觀察菌落形態(tài)和透明圈大小。若

菌落繼續(xù)生長，且透明圈增大，則為兼性厭氧型的乳酸菌菌落，若菌落不能繼續(xù)生長，透明圈不再擴大，

則為醋酸菌菌落。

13.（2021?廣東?高考真題）中國科學(xué)家運用合成生物學(xué)方法構(gòu)建了一株嗜鹽單胞菌H,以糖蜜（甘蔗榨

糖后的廢棄液，含較多蔗糖）為原料，在實驗室發(fā)酵生產(chǎn)PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗

的整體利用價值。工藝流程如圖。

開放式發(fā)酗系統(tǒng)

回答下列問題：

（1）為提高菌株H對蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液體培養(yǎng)基中將蔗糖作為,并不斷提

高其濃度，經(jīng)多次傳代培養(yǎng)（指培養(yǎng)一段時間后，將部分培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入新配的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)）以獲得目

標(biāo)菌株。培養(yǎng)過程中定期取樣并用的方法進行菌落計數(shù)，評估菌株增殖狀況。止匕外，選育優(yōu)良

菌株的方法還有等。（答出兩種方法即可）

（2）基于菌株H嗜鹽、酸堿耐受能力強等特性，研究人員設(shè)計了一種不需要滅菌的發(fā)酵系統(tǒng)，其培養(yǎng)基鹽

濃度設(shè)為60g/L,pH為10,菌株H可正常持續(xù)發(fā)酵60d以上。該系統(tǒng)不需要滅菌的原因是o（答

出兩點即可）

（3）研究人員在工廠進行擴大培養(yǎng)，在適宜的營養(yǎng)物濃度、溫度、pH條件下發(fā)酵，結(jié)果發(fā)現(xiàn)發(fā)酵液中菌株

H細(xì)胞增殖和PHA產(chǎn)量均未達(dá)到預(yù)期，并產(chǎn)生了少量乙醇等物質(zhì)，說明發(fā)酵條件中可能是高密

度培養(yǎng)的限制因素。

（4）菌株H還能通過分解餐廚垃圾（主要含蛋白質(zhì)、淀粉、油脂等）來生產(chǎn)PHA,說明其能分泌o

【答案】唯一碳源稀釋涂布誘變育種、基因工程育種鹽濃度為60g/L的條

件下,其他雜菌因失水過多而死亡;pH為10的條件下,其他雜菌的酶變性失活,生長繁殖受抑制氧

氣（。2或溶解氧）蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等

【詳解】（1）根據(jù)題意分析，該實驗的目的是提高菌株H對蔗糖的耐受能力和利用效率，結(jié)合微生物的代

謝需求，其液體培養(yǎng)基應(yīng)該以蔗糖作為唯一碳源。并不斷提高其濃度，經(jīng)多次傳代培養(yǎng)（指培養(yǎng)一段時間

后，將部分培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入新配的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)）以獲得目標(biāo)菌株。培養(yǎng)過程中定期取樣并用稀釋涂布的

方法進行菌落計數(shù)，評估菌株增殖狀況。止匕外，選育優(yōu)良菌株的方法還有誘變育種、基因工程育種等。

（2）已知，菌株H具有嗜鹽、酸堿耐受能力強等特性，因此當(dāng)培養(yǎng)基鹽濃度為60g/L,pH為10時，菌株H

可正常持續(xù)發(fā)酵60d以上，而鹽濃度為60g/L的條件下，其他雜菌因失水過多而死亡；pH為10的條件下，

其他雜菌的酶變性失活，生長繁殖受抑制，故該系統(tǒng)不需要滅菌。

（3）分析題意，擴大培養(yǎng)時，營養(yǎng)物濃度、溫度、pH等條件下適宜，而發(fā)酵液中菌株H細(xì)胞增殖和PHA產(chǎn)

量均未達(dá)到預(yù)期，并產(chǎn)生了少量乙醇等物質(zhì)，說明發(fā)酵條件中氧氣不足，使菌種進行無氧呼吸產(chǎn)生乙醇，

即氧氣（。2或溶解氧）是限制高密度培養(yǎng)的重要因素。

（4）根據(jù)酶的專一性可知，菌株H之所以能通過分解主要含蛋白質(zhì)、淀粉、油脂等的餐廚垃圾來生產(chǎn)PHA,

說明其能分泌蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等。

14.（2020?江蘇?高考真題）產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株，科研人員

開展了相關(guān)研究。請回答下列問題：

<1）常規(guī)微生物實驗中，下列物品及其滅菌方法垂送的是（填編號）。

編號?②③④

物品培養(yǎng)基接種環(huán)培養(yǎng)皿涂布器

滅菌方法高壓蒸汽火焰灼燒干熱臭氧

（2）稱取1.0g某土壤樣品，轉(zhuǎn)入99mL無菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)后，獲得細(xì)胞密度不同

的菌懸液。分別取0.1mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上，其中10倍稀釋的菌懸液培養(yǎng)后平均長出了46個酵

母菌落，則該樣本中每克土壤約含酵母菌個。

（3）為了進一步提高酵母菌產(chǎn)酶能力，對分離所得的菌株，采用射線輻照進行育種。將輻照處

理后的酵母菌涂布在以為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上,培養(yǎng)一段時間后，按照菌落直徑大小進行

初篩，選擇直徑__________的菌落，純化后獲得A、B兩突變菌株。

（4）在處理含油廢水的同時，可獲得單細(xì)胞蛋白，實現(xiàn)污染物資源化。為評價A、B兩菌株的相關(guān)性能，

進行了培養(yǎng)研究，結(jié)果如圖。據(jù)圖分析，應(yīng)選擇菌株進行后續(xù)相關(guān)研究，理由是o

闌株B細(xì)息密度

f(

d％

o)

)X*/蠲株A細(xì)胞密度掌

七

趙涔殍^菌株A脫魴蜩余

弓

里

幅

塞

毒

妥7^^

袋

前株B脂筋剩余

培養(yǎng)時間

【答案】④梯度稀釋4.6X105（或460000）誘變脂肪（或油脂）

較大B該菌株增殖速度快，單細(xì)胞蛋白產(chǎn)量高；降解脂肪能力強，凈化效果好

【詳解】（1）培養(yǎng)基一般進行高壓蒸汽滅菌，接種環(huán)可用火焰灼燒滅菌，培養(yǎng)皿一般通過干熱滅菌，涂布

器應(yīng)該用酒精引燃滅菌；故①②③正確，錯誤的是④。

（2）稀釋涂布平板法是將樣品進行一系列梯度稀釋后，獲得細(xì)胞密度不同的菌懸液，然后涂布到平板上。

根據(jù)題意，1.0g土壤樣品轉(zhuǎn)入99mL無菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)系列梯度稀釋后，分別取0.1mL菌懸液涂

布在固體培養(yǎng)基上，則稀釋的倍數(shù)為1000倍，其中10倍稀釋的菌懸液培養(yǎng)后長出了46個酵母菌落，則總

的稀釋倍數(shù)為10000倍，故每克土壤中含酵母菌數(shù)為46X10000=4.6X105個。

（3）根據(jù)題意，欲提高酵母菌產(chǎn)酶能力，可對分離得到的產(chǎn)脂肪酶酵母菌菌株進行射線輻射，該育種方式

為誘變育種。為了能篩選出符合要求的產(chǎn)脂肪酶酵母菌突變株，可配制以脂肪為唯一碳源的培養(yǎng)基，將輻

射處理的酵母菌涂布在該固體培養(yǎng)基上，形成單菌落；產(chǎn)脂肪酶能力越強的酵母菌，分解利用脂肪的能力

越強，菌落生長越好，一段時間后，按照菌落直徑大小進行初篩，選取直徑較大的菌落即可。

（4）據(jù)題圖分析可知，相同時間