DB15Detectionforaerobicplatecoun2020-02-25發(fā)布內(nèi)蒙古自治區(qū)市場監(jiān)督管理局發(fā)布本標準起草單位：中華人民共和國呼和浩特海I動物墊料中菌落總數(shù)檢測本標準規(guī)定了動物墊料中菌落總數(shù)的平板計數(shù)法。本標準適用于動物墊料中菌落總數(shù)的定量檢測。下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值得表示和判定SN/T1538.1培養(yǎng)基制備指南第1部分：實驗室培養(yǎng)基制備質(zhì)量保證通則SN/T1538.2培養(yǎng)基制備指南第2部分：培養(yǎng)基性能測試實用指南下列術(shù)語和定義適用于本文件。動物墊料animalbedding用于吸收動物排泄物，使動物保持舒適生活環(huán)境的鋪墊物。包括動物籠內(nèi)非直接與動物機體接觸的鋪墊菌落總數(shù)aerobicplatecount菌落形成單位colonyformingunit（CFU）在瓊脂平板上經(jīng)過一定溫度和時間培養(yǎng)后形成的每一個菌落，是計算細菌或霉菌數(shù)目的單位。4設(shè)備和材料4.2冰箱：2℃~5℃。14.5均質(zhì)器。4.6振蕩器。4.8無菌錐形瓶：250mL、500m4.11放大鏡或/和菌落計數(shù)器。4.13漩渦混合器。4.18無菌濾膜均質(zhì)袋。5培養(yǎng)基和試劑5.4平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基：見附錄A.樣品采集應(yīng)遵循隨機性、代表性的原則。采樣過程遵循無菌操作程序，防止一切可能的外來污染。對送檢樣品包裝內(nèi)不同部位樣品進行隨機多點取樣至少250g，充分混勻后稱取25g顆粒狀或粉末狀墊料樣品，加入225mL無菌稀釋液（磷酸鹽緩沖液或生理鹽水），充分振搖或均質(zhì)1min～2min，制成1:10的樣品勻液。212346.2.4及時將20mL～25mL冷卻至46℃的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(可置于46℃±1℃恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。置水平臺面待培6.2.5如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(約4mL)，凝固后翻轉(zhuǎn)平板，再進行培養(yǎng)。瓊脂凝固后倒置平板，置36℃±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h±2h，觀察并計數(shù)結(jié)果。6.4.1用肉眼觀察，必要時可用放大鏡或低倍鏡，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落總數(shù)。以菌落形成6.4.3其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該6.4.4當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線37.1.1若只有一個稀釋度的兩個平板……………（1）N——樣品中菌落總數(shù)；∑C——平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；n1——第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)；n2——第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)；d——稀釋因子（第一稀釋度）。7.1.4若所有平板上菌落數(shù)均小于30CFU，則應(yīng)按稀釋度4培養(yǎng)基和試劑A.1培養(yǎng)基制備及質(zhì)量保證A.2生理鹽水A.2.1成分氯化鈉8.5g蒸餾水1000mLA.2.2制法氯化鈉加入1000mL蒸餾水中，攪拌至完全溶解，分裝后，121℃滅菌15min，備用。A.3磷酸鹽緩沖液A.3.1成分磷酸二氫鉀34.0g蒸餾水1000mLA.3.2制法貯存液：稱取34.0g的磷酸二氫鉀溶于500mL蒸餾水中，用大約175mL的1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.2±0.1，用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰箱。稀釋液：取貯存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15min。A.4平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基A.4.1成分胰蛋白胨5.0g酵母浸膏2.5g葡萄糖1.0g瓊脂15.0g蒸餾水