bcr/abI融合基因

慢性粒細胞白血病(ChronicMyelogenousLeukemia,CML)是一種發(fā)生于造

血干細胞的血液系統(tǒng)惡性克隆增生性疾病。在受累的細胞系中可找到Ph標記染

色體或(和)bcr/abI基因重排。

基因結構

人abl基因位于9號染色體長臂,有1b、1a和271共12個外顯子。轉錄

始自1b或1a,形成的兩種mRNA長度分別為7kb和6kb,合成的兩種蛋白質分子

量均約為145,前者定位于細胞膜，而后者主要在細胞核內。abl主要結構有N

端的肉瘤同源2(srchomology,SH2)XSH1oSH2結合磷酸化的酪氨酸殘基,SH1

具有酪氨酸激酶活性。近C端富含酸性氨基酸殘基，可結合DNA。abl蛋白參與

細胞周期調節(jié)。在GO期，abl-Rb蛋白復合物與DNA結合。在G1TS轉變過程中，

Rb被磷酸化，abl與之分離，并激活，使RNA聚合酶磷酸化，促進轉錄，細抱進

入S期。

bcr基因位于22號染色體長臂,有23個外顯子。蛋白產物分子量均為160。

bcr蛋白第1-63個氨基酸是二聚體化結構，參與bcr蛋白多聚體的形成。bcr

蛋白參與細胞周期調節(jié)，但詳細過程還不十分明確。bcr基因斷裂點集中在三個

區(qū)域:主要(majorbcr,M-bcr)x次要(minorbcr,m-bcr)和〃(fj-bcr)區(qū)

域。abl基因斷裂位于第1或第2內含子。因斷裂點不一，bcr/abI融合基因及

其mRNA和蛋白產物呈多樣性。。儀的bcr基因斷裂點常位于M-bcr,主要是b2a2

和b3a2,蛋白分子量為210kb。bcr基因在ALL中大約2/3為m-BCR位點。Ph1

染色體和bcr/abI融合基因是CML的分子基礎，并可作為區(qū)分典型CML和非典型

CML的診斷指標。

由于t(9；22)(q34；而產生的費城染色體(Ph)在血液腫瘤中具有重要的

診斷和預后意義，出現于90%以上的CML、30%的成人ALL、2%70%的兒童ALL、

以及少數的AML和MM患者。位于9q34的ABL基因與位于22q11的BCR基因相互

易位,形成bcr/abI融合基因。此基因產生一種新的mRNA,編碼的蛋白為P210。

P210具有增強酪氨酸激酶的活性，改變了細胞多種蛋白質酪氨酸磷酸化水平和

細胞微絲機動蛋白的功能，從而擾亂了細胞內正常的信號傳導途徑，使細胞失去

了對周圍環(huán)境的反應性，并抑制了凋亡的發(fā)生。具有BCR/ABL融合基因的患者預

后差。

基因檢測

SouthernBIot

即DNA印跡,可以對bcr-abl融合基因DNA重排進行分子生物學檢測。將經

限制性內切酶酶切及瓊脂糖電泳分離購DNA片段轉移到固相雜交膜上，胚系DNA

會產生特征性片段，但發(fā)生過基因重排的細胞DNA因酶切位點有所改變會產生有

別于胚系的DNA酶切片段。大多數bcr基因的斷裂點集中于的主要斷裂點集簇區(qū)

(Mbcr)0從白血病患者白細胞中抽提的基因組DNA,經一組限制性內切酶消化

及瓊脂糖凝膠電泳分離后轉移到尼龍膜上，用取自M-bcr3'和5'端的bcr探針

與之雜交。放射自顯影洗片后即可顯示所要檢測的條帶，對于CML患者，除可見

到一條與胚系bcr基因組DNA相對應的條帶外，其他的條帶說明存在重排的bcr

等位基因。

RT-PCR

采用異硫氨酸肌酚、氯仿一步法提取細胞總RNA,方法見參考文獻，用RT-PCR

技術擴增bcr-abl基因接合區(qū)mRNA是檢測CML敏感而特異的方法，設計兩對引

物，先進行逆轉錄反應合成cDNA,再進行PCR擴增，取擴增后產物10Ul,用

2%的瓊脂糖凝膠進行電泳，在紫外燈下觀察結果。

實時定量PCR

利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線,其中縱坐標為

起始拷貝數的對數,橫坐標代表Ct值,然后根據待測樣本的Ct

值從標準曲線上計算出該樣本的起始拷貝數。

另外bcr/abl融合基因編碼的蛋白P210可以用Western印跡或酶聯(lián)免疫反

應加以檢測。

PML/RARa融合基因

急性早幼粒細胞白血病(APL)是急性髓細胞白血病(AML)的一種特殊類型(M3),

占所有AML病例的APL具有獨特的臨床表型及細胞形態(tài)學、細胞遺傳

學和分子生物學特征。目前發(fā)現約95%的APL患者伴有異常染色體核型

t(15;17)(q22;q21),該易位使15號染色體上的PML基因與17號染色體上的

RARa基因發(fā)生相互易位形成PML/RARa融合基因，是APL的一個特異分子標志。

PML/RARa融合蛋白通過顯性負抑制作用抑制早幼粒細胞分化成熟，從而阻斷細

胞分化導致持續(xù)增殖。全反式維甲酸(ATRA)和三氧化二碑能靶向降解PML/RARa

融合蛋白，恢復野生型PML和RARa基因功能，解除其對基因轉錄的抑制，誘導

細胞發(fā)生分化和凋亡，使APL得到有效治療。ATRA與化療聯(lián)合使用可使APL的

完全緩解率達90295%,并可使70%以上的患者得到長期生存。PML/RARa融合

基因檢測可作為APL早期診斷、治療方案選擇及微小殘留病灶監(jiān)測的一項檢測手

段。用熒光原位雜交方法或熒光定量RT-PCR方法來檢測PML/RARa融合基因，

的情況，可對融合基因進一步具體分型。

廣州安必平

上海之江

上海源奇

TEL-AML1融合基因

當染色體12和21號發(fā)生易位形成TEL-AML1時,TEL的斷裂點位于內含子5,

AML1斷裂點80%-90%位于內含子1(外顯子1和外顯子2間),余則發(fā)生于內含子

2。TEL和AML1斷裂后,DNA修復時將TEL基因HLH區(qū)和幾乎整個AML1基因拼接

在一起形成TEL-AML7融合基因,所表達TEL-AML1融合蛋白突出作用是抑制轉錄

活性。

白血病相關融合基因檢測試劑盒(TEL-AML1)

品名：白血病相關融合基因檢測試劑(TEL-AML1)(RT-PCR法)

廠商：上海源奇生物醫(yī)藥科技有限公司

Constrtutr/erepression

TEL-AML1雜合體的檢測不僅可以快速鑒定預后相關的分子marker,常被學者作

為檢測MRD的標記，可以據此判斷疾病的進展、治療效果以及預后轉歸等。

TEL-AML1融合基因陽性ALL的特點：

1、病年齡。t(12;21)的兒童ALL多發(fā)生在170歲，1-5歲者占％。

2、免疫表型特征。所有的t(12;21)病人都表達B祖細胞免疫表型，以CD19、

CD10陽性最為多見，偶見前-前B表型，未見成熟B細胞及T細胞表型。

3、與預后的關系。TEL-AML1表達陽性組屬高危ALL的占13%,而陰性組屬

高危ALL的占68%,說明TEL-AML1往往與低危ALL相關，預后較好；TEL-AML1

陽性組地塞米松誘導實驗陽性率為88%,而陰性組僅為38%,陽性組地塞米松誘

導實驗效果明顯優(yōu)于陰性組。

TEL-AML1融合基因

t(12;21)(p12;q22)易位產生的TEL-AML1融合基因主要見于25%B-系急性淋

巴白血病的兒童和3%成人中。

偌戰(zhàn)珈521VWRPY7M

$10

TEL基因習慣上又稱ETV6(ETS-variantgene6),基因位于12Pl3上，全長

300kb,編碼452個氨基酸，其所編碼蛋白由螺旋一環(huán)-螺旋

(heIix-loop-heIixtHLH)和ETS結構域組成。

AML1又稱CBFa2,是核心結合因子CBF(corebindingfactor)的亞基，基因

定位于21q22上，全長超過260kb,含有12個外顯子，表達480氨基酸的核磷

酸蛋白，TEL和AML1的融合使AML1編碼的CBRa失去與DNA結合能力或不能正

常轉錄而發(fā)揮激活靶基因的作用，即AML1從轉錄激活因子轉變成轉錄抑制因子。

檢測原理：

本試劑盒由白血病TEL-AML1融合基因特異性引物、熒光探針、逆轉錄酶以

及Taq酶等成分組成，采用一步法在同一反應管中相繼完成逆轉錄和PCR過程，

從而檢測人骨髓標本中的白血病TEL-AML1融合基因RNA；同時使用尿昔酶(UNG)

防污染體系，經加熱可選擇性地降解PCR產物中的U-DNA,以防止先前PCR擴增

產物的污染；采用內參基因，控制整個試劑盒檢測過程及標本的有效性。

實驗操作步驟說明：

UNG和real-timePCR體系

和一步法操作

顯#降低污染的風險

一步法西步法

?操作簡便?操作繁琰

?RT和PCR反應之間無需開管從而減少污?大部分不使用特異引物，結果專一性差

染的可能性?一次開益，易造成氣溶膠污染

?由于得到的全部cDNA產物都一起經?僅部分cDNA產物進入后期PCR擴增，靈

PCR擴增，使靈敏度更高敏度低

產品特性說明：

1.本試劑盒能從抗凝骨髓提取的RNA中檢測TEL-AML1的相關融合基因，最

低檢出量達到100拷貝/反應。

2.試劑盒對各精密度質控品，在相應的反應液中重復做10次，均能檢出，

且其實驗數據CV值均小于10機

CBFp/MYH11融合基因

M4"是M4型白血病中的一種特殊類型，約占急性粒細胞白血病的10%?；颊吖?/p>

髓中粒系和單核系原始細胞同時惡性增生，嗜酸粒細胞占5%?30%。含有CBFB

-MYH11融合基因的M4Eo患者預后較好。

lnv（16）/t（16；16）（p13；q22）為急性髓系白血?。ˋML）-M4Eo的非隨機染色體

異常，16q22斷裂區(qū)受累基因CBFB編碼CBF的B亞單位，inv（16）/t（16；

16）導致形成CBFP/MYH11融合基因。inv（16）/L（16；16）（P13；q22）的結果是

16號染色體長臂的CBFB基因與短臂的平滑肌肌球蛋白重鏈1（MYH11）基因發(fā)生

重排,形成CBFB-MYH11和MYH11-CBF0兩種融合基因,其中CBFB-MYH11融合

基因易促使白血病發(fā)病。CBFB鏈不直接結合DNA,而是通過與CBFQ形成異二

聚體來增加a鏈與DNA結合的親和力，穩(wěn)定該異二聚體的穩(wěn)定性。目前已識別

了一些CBF結合位點，它們存在于TCR、GM-CSF、GM-CSF受體、髓過氧化物酶及

中性粒細胞彈性蛋白基因的調控區(qū)，因此可能是由這些基因的表達失控而致白血

病O

CBFB基因斷裂點恒定地位于3,端編碼區(qū)的17個氨基酸處（nt495）,而MYH11

基因的斷裂點存在5和不同方式，因此根據MYH11斷裂點的不同，CBF3-MYH11

轉錄本有5種不同的剪接方式，迄今共發(fā)現10余種CBF0/MYH11融合基因轉錄

本，但最常見的為A型（即MYH11基因的斷裂點在于nt1921）,占80%,其余均少

見。

AML1/ET0融合基因

t（8；21）（q22；q22）是初治急性粒細胞白血?。ˋML）患者中常見的細胞

遺傳學異常，大約20%?40%的AML-M2患者有t（8；21）（q22；q22）,并且在

M2b亞型中發(fā)生率高達90%以上。位于染色體21q22的AML1基因與8q22的ETO

基因融合,產生AML1/'ETO融合基因°AML1/ETO融合基因是轉錄激活基因,導致

細胞不斷增殖。'臨床上t（8；21）白血病好發(fā)于青年和兒童（5%?10%）,主要

與M2型密切相關，并且年齡越小發(fā)生率越高。t（8；21）代表預后較好的急性

白血病類型，成人患者對治療反應佳，完全緩解率高，中位生存時間長，但易復

發(fā)；兒童患者的治療和預后不如成人患者理想。AML1/ET0融合基因可作為M2b

診斷分型的標志，以及微小殘留病灶監(jiān)測的一項檢測手段。

AML：acutemyelocyticleukemia急性髓細胞白血病,一類白

血病的總稱,臨床中急性骨髓系白血病可分為M0-M7共8種。

M1急性髓細胞白血病未成熟型

M2急性髓細胞白血病部分成熟型:（染色體和分子生物學檢驗）

t（8；21）（q22；q22）易位是M2b的一種常見非隨機染色體重

排,其檢出率高達90%。AML1基因重排可作為本病基因診斷的

木不志。

M3急性早幼粒細胞白血病:（染色體及分子生物學檢驗）約70%?

90%的APL具有特異性的染色體易位t（15；17）,是APL特有的

遺傳學標志,t（15；17）染色體易位使17號染色體上的維甲

酸受體a（PARa）基因發(fā)生斷裂。與15號染色體上的早幼粒

細胞白血?。≒ML）基因發(fā)生融合,形成PML-RARa融合基因。

M4急性粒單核細胞白血病

M5急性單核細胞白血病

M6急性紅白細胞白血病

M7急性巨核細胞白血病:(染色體檢驗)染色體有inv(3)或

del(3)、+8、+21異常。

M0急性微分化型粒細胞白血病

E2A/PBX1融合基因

白血病相關融合基因檢測試劑盒(E2A-PBX1)(RT-PCR法)

廠商：上海源奇生物醫(yī)藥科技有限公司

E2A-PBX1基因

t(1;19)易位見于25%的嬰兒ALL和成人ALL(兒童患者為主)，免疫亞

型主要為前B-ALL,易位產生E2A-PBX融合基因。

根據斷裂點的不同，E2A-PBX1存在兩種亞型。

￡2/A(19p13)

123456789101112131415a15b16

—THHUl0-04D—0-0

?-con

bcoakpointregion

~35kb

PBX1(1q23>

2345678

—□(HKHHHHD

<-8n

b

23

<

有該融合基因表型的患者易發(fā)生中樞神經系統(tǒng)白血病，預后差。因此

E2A-PBX1融合基因是個高危的分子生物學標志，與早期的治療失敗有密切關系。

對該融合基因進行定量檢測可以輔助臨床的預后判斷以及對疾病進行實時檢測，

檢測原理:

本試劑盒由白血病E2A-PBX1融合基因特異性引物、熒光探針、逆轉錄酶以

及Taq酶等成分組成，采用一步法在同一反應管中相繼完成逆轉錄和PCR過程,

從而檢測人骨髓標本中的白血病E2A-PBX1融合基因RNA；同時使用尿昔酶（UNG）

防污染體系，經加熱可選擇性地降解PCR產物中的U-DNA,以防止先前PCR擴增

產物的污染；采用內參基因，控制整個試劑盒檢測過程及標本的有效性。

產品特性說明：

1.本試劑盒能檢測包括含E2A-PBX1所有2種剪接體。

2.本試劑盒能從抗凝骨髓提取的RNA中檢測E2A-PBX1的相關融合基因，最

低檢出量達到100拷貝/反應。

3.試劑盒對各精密度質控品，在相應的反應液中重復做10次，均能檢出，

且其實驗數據CV值均小于10%o

白血病30種融合基因檢測試劑盒

本試劑盒適用于白血病中常見30種融合基因的檢測。包括MLL-AF9,MLL-AF4,

MLL-ENL,MLL-AF10,MLL-SEPT6,MLL-ELL,MLL-AF17,MLL-AF1q,MLL-AF1p,

MLL-AF6,PML-RARa,NPM-RARa,PLZF-RARa,AML1-ET0,AML1-MDS1/EV11,

AML1-MTG16,AML1-EAP,TEL-AML1,TEL-PDGFRB,TEL-ABL,E2A-PBX1,E2A-HLF,

BCR-ABL,CBFp-MYH11,SIL-TAL1,FIP1L1-PDGFRA,DEK-CAN,SET-CAN,TLS-ERG,

NPM-MLFo

檢測原理：

本試劑盒采用熒光PCR擴增法，根據各個反應管中是否有陽性信號，獲得是否存

在融合基因的信息。對于每一份樣品，本試劑盒分八管對其進行檢測，對應擴增

世紀中的PCRMixA-Ho

主要組成成分:

5XRT緩沖液*11管22H?

RT酶混合液1管6HI

逆轉錄試劑

RT引物1管22從I

DEPC水1管15H?

LFPCRMixA-H各1管210HI

擴增實際

LF聚合酶1管18^I

LF陽性對照1管100|iI

對照試劑

LF陰性對照1管100^I

本試劑盒熔解分析可使用帶有FAM、