第十五章體內(nèi)藥物分析第一節(jié)概述第二節(jié)樣品的種類(lèi)、采集及儲(chǔ)存第三節(jié)

體內(nèi)樣品的預(yù)處理目錄學(xué)習(xí)目標(biāo)

掌握

體內(nèi)樣品的制備方法及預(yù)處理方法。

熟悉

體內(nèi)樣品的種類(lèi)、采集、儲(chǔ)存

了解

體內(nèi)藥物分析的性質(zhì)、任務(wù)、特點(diǎn)及發(fā)展趨勢(shì)體內(nèi)藥物分析是指體內(nèi)樣品(生物體液、器官或組織)中藥物及其代謝物或內(nèi)源性生物活性物質(zhì)的定量分析。第一節(jié)概述（一）體內(nèi)藥物分析的性質(zhì)體內(nèi)藥物分析又稱(chēng)體液藥物分析、生物藥物分析，是隨著臨床藥學(xué)、臨床藥理學(xué)的發(fā)展和需要而建立起來(lái)的一門(mén)新興學(xué)科，就是利用各種分析手段了解藥物在體內(nèi)的變化情況，獲得各種藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)，從而為藥品生產(chǎn)、臨床醫(yī)療、實(shí)驗(yàn)研究等方面對(duì)所研究的藥物做出估計(jì)與評(píng)價(jià)，以及對(duì)藥物的改進(jìn)與發(fā)展提供參考依據(jù)。

第一節(jié)概述一、體內(nèi)藥物分析的性質(zhì)和任務(wù)（二）體內(nèi)藥分的任務(wù)1.

提供藥物在動(dòng)物和人體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)、生物利用度及血漿蛋白結(jié)合率等基本數(shù)據(jù)，完成新藥的注冊(cè)審批；2.需要研究和開(kāi)發(fā)新的有效的測(cè)定方法，為常規(guī)測(cè)定提供靈敏、專(zhuān)屬、可靠的分析方法；3.為臨床藥物監(jiān)測(cè)、藥物動(dòng)力學(xué)等方面提供數(shù)據(jù)與信息；4.監(jiān)測(cè)和研究體內(nèi)藥物的濃度變化，為某些疾病的診斷及治療具有重要意義；5.完成對(duì)于麻醉藥品和精神藥品濫用的檢測(cè)和運(yùn)動(dòng)員體內(nèi)違禁藥物的監(jiān)測(cè)。

一、體內(nèi)藥物分析的性質(zhì)和任務(wù)第一節(jié)概述（一）體內(nèi)藥物分析的特點(diǎn)

1.藥物或代謝物的濃度或活性極低2.樣品復(fù)雜3.樣品量少，而且不易重新獲得4.要求能很快地提供測(cè)定結(jié)果5.方法具有類(lèi)型多樣化和綜合性第一節(jié)概述二、體內(nèi)藥物分析的特點(diǎn)與發(fā)展趨勢(shì)1.藥物和代謝物的濃度或活性極低2.樣品復(fù)雜3.樣品量少，不易重新獲得4.要求能很快地提供測(cè)定結(jié)果5.分析方法具有類(lèi)型多樣化和綜合性的特點(diǎn)6.干擾因素多三、體內(nèi)藥物分析的特點(diǎn)第一節(jié)概述一、體內(nèi)樣品的種類(lèi)體內(nèi)藥物分析的樣品種類(lèi)包括各種體液、組織和排泄物等。比如血液、淚液、胃液、尿液、淋巴液、唾液、乳汁、精液、腦脊液、膽汁、胰液、毛發(fā)、臟器組織、糞便等。在體內(nèi)藥物分析中最常用并且易于獲得的樣品主要有血液、尿樣和唾液三種。第二節(jié)樣品的種類(lèi)、采集及儲(chǔ)存樣品采集的原則

根據(jù)不同的分析目的和要求進(jìn)行選?。凰悠窇?yīng)能正確反映藥物濃度與效應(yīng)之間的關(guān)系；樣品應(yīng)易于獲取，便于處理和分析。二、常用體內(nèi)樣品的采集及制備第二節(jié)樣品的種類(lèi)、采集及儲(chǔ)存(一)血樣血樣包括血漿、血清和全血，是體內(nèi)藥物分析中最常用的樣品。二、常用體內(nèi)樣品的采集及制備1.血樣采集方法

靜脈取血或毛細(xì)血管取血。2.血樣采集的量

一般取血量為1～3ml。（一）血樣3.血樣制備（1）血漿：全血與抗凝劑混合，以2500～3000r/min離心5分鐘所得的上清液。（2）血清：全血在室溫下放置30分鐘～1小時(shí)，待血塊凝結(jié)析出后，以2000～3000r/min離心5～10分鐘，分取所得的上清液。4.血樣的取樣時(shí)間間隔

隨測(cè)定目的不同而異。二.樣品的采集（二）尿液尿液包括隨時(shí)尿、晨尿、白天尿、夜間尿和時(shí)間尿。1.采集：應(yīng)是自然排尿，根據(jù)監(jiān)測(cè)指標(biāo)不同，收集適量。2.制備：尿液放置時(shí)間長(zhǎng)會(huì)因細(xì)菌繁殖而變渾濁,所以取樣后應(yīng)即時(shí)測(cè)定。二、樣品的采集（三）唾液

唾液的pH約在6.9±0.5，個(gè)體差異較大，此外尚受到一些其他因素，如有無(wú)刺激，剌激類(lèi)型、強(qiáng)度與持續(xù)時(shí)間，年齡，性別，疾病，藥物等的影響。二、樣品的采集1.采集：應(yīng)盡可能在刺激少的安靜狀態(tài)下進(jìn)行,一般在漱口后約15分鐘,收集口內(nèi)自然流出或經(jīng)舌在口內(nèi)攪動(dòng)后流出的混合唾液(吸管內(nèi)吸附的少量唾液用稀釋液洗出)。2.制備：唾液采集后,應(yīng)立即測(cè)量其除去泡沫部分的體積,再以2000～3000rpm離心15分鐘,吸取上清液作為測(cè)定的樣品。1.血漿或血清

盡快從全血中分離出來(lái)，分離后再進(jìn)行冷凍保存。2.尿液

冷藏或加防腐劑。3.唾液應(yīng)在4℃以下保存4.組織性樣品

﹣20℃速凍，不需加防腐劑。三、體內(nèi)樣品的儲(chǔ)存與處理

體內(nèi)樣品預(yù)處理的目的就是能夠使待測(cè)藥物游離出來(lái)，滿(mǎn)足測(cè)定方法的要求，從而改善分析的環(huán)境。

體內(nèi)樣品預(yù)處理的原則主要有以下幾點(diǎn)：一、體內(nèi)樣品預(yù)處理的目的和原則第三節(jié)體內(nèi)樣品的預(yù)處理1.盡量避免預(yù)處理后樣品出現(xiàn)玷污或損失。2.確保預(yù)處理后樣品濃度能被最低檢測(cè)限。3.確保預(yù)處理后樣品不會(huì)污染、劣化分析儀器。去蛋白法（1）加入沉淀劑和變性試劑：加入中性鹽、加入酸、加入金屬離子。（2）加入可與水混溶的有機(jī)溶劑：如甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、四氫呋喃等。（3）酶消化法：最常用的酶是蛋白水解酶中的枯草菌溶素。二、樣品的預(yù)處理方法第三節(jié)體內(nèi)樣品的預(yù)處理2.萃取分離法（1）

液-液萃取法：液-液萃取法在體內(nèi)藥物分析中應(yīng)用相當(dāng)廣泛，萃取一次即可除去大部分雜質(zhì)，從大量的樣品中提取藥物經(jīng)濃集后作為分析用樣品，萃取時(shí)應(yīng)注意溶劑的pH調(diào)節(jié)和提取溶劑的選擇。二、樣品的預(yù)處理方法第三節(jié)體內(nèi)樣品的預(yù)處理2.萃取分離法（1）

液-液萃取法1）溶劑的pH調(diào)節(jié)：對(duì)于堿性藥物的最佳pH要高于pKa值1～2個(gè)pH單位；對(duì)于酸性藥物則要低于pKa值1～2個(gè)單位。2）提取溶劑的選擇：一般選擇原則是在滿(mǎn)足提取需要的前提下，盡可能選用極性小的溶劑。二、樣品的預(yù)處理方法第三節(jié)體內(nèi)樣品的預(yù)處理2.萃取分離法（2）

液-固萃取法：將具有吸附分配或離子交換性質(zhì)的、表面積大的載體作為填充劑，裝于小分離管中，使生物樣品的干擾物或藥物保留在載體上而進(jìn)行分離的方法。1）親水性載體：硅藻土；

2）疏水性或離子交換樹(shù)脂載體：活性炭、聚苯乙烯、十八烷基鍵合硅膠等。二、樣品的預(yù)處理方法第三節(jié)體內(nèi)樣品的預(yù)處理3.綴合物水解法

藥物經(jīng)人體代謝后，多與內(nèi)源性物質(zhì)結(jié)合形成綴合物經(jīng)尿液排出。所以在提取之前需要將綴合物中的藥物釋放，常用酸水解、酶水解及溶劑水解的方法。（1）酸水解：通常加入適量的鹽酸溶液；（2）酶水解：常用葡萄糖醛酸苷酶或硫酸酯酶或葡萄糖醛酸苷硫酸酯酶的混合酶。二、樣品的預(yù)處理方法第三節(jié)體內(nèi)樣品的預(yù)處理4.化學(xué)衍生化法

在色譜過(guò)程中，用特殊的化學(xué)試劑借助化學(xué)反應(yīng)給樣品化合物接上某個(gè)特殊基團(tuán)，使其轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)衍生物之后進(jìn)行檢測(cè)的方法。

分離前將藥物進(jìn)行化學(xué)衍生化的主要作用是使藥物變成具有能被分離的性質(zhì)，提高檢測(cè)靈敏度，增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性，以及提高對(duì)光學(xué)異構(gòu)體分離的能力等。第三節(jié)體內(nèi)樣品的預(yù)處理二、樣品的預(yù)處理方法課外拓展：體內(nèi)藥物分析的常用方法方

法檢出限量10-9g（ng）專(zhuān)一性（分離度）分光光度法紫外-可見(jiàn)分光光度法100－熒光分光光度法1+－原子吸收分光光度法1+薄層掃描法紫外掃描10++熒光掃描1++氣相色譜法氫火焰監(jiān)測(cè)器1~10++氮磷檢測(cè)器0.1~0.01+++電子捕獲監(jiān)測(cè)器