CD133與CD90：肝細(xì)胞癌中的表達(dá)特征、臨床關(guān)聯(lián)及潛在作用機(jī)制探究一、引言1.1研究背景與意義肝細(xì)胞癌（HepatocellularCarcinoma，HCC）是一種常見且嚴(yán)重威脅人類健康的惡性腫瘤。在全球范圍內(nèi)，HCC的發(fā)病率和死亡率均處于較高水平。據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，每年新診斷出的HCC患者數(shù)量眾多，其發(fā)病率在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中位居前列。在中國，HCC同樣是高發(fā)的惡性腫瘤之一，由于乙肝病毒感染、肝硬化等高危因素的廣泛存在，使得我國HCC患者基數(shù)龐大，嚴(yán)重影響人民群眾的生命健康和生活質(zhì)量。盡管目前針對(duì)HCC的治療手段不斷發(fā)展，包括手術(shù)切除、肝移植、消融治療、介入治療以及系統(tǒng)治療（如分子靶向藥物和免疫治療）等，但總體而言，HCC患者的預(yù)后仍然不理想。早期診斷和治療對(duì)于改善HCC患者的預(yù)后至關(guān)重要，但由于HCC起病隱匿，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，失去了最佳的根治性治療機(jī)會(huì)。因此，深入研究HCC的發(fā)病機(jī)制，尋找有效的早期診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，對(duì)于提高HCC的診治水平具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。腫瘤干細(xì)胞（CancerStemCells，CSCs）理論的提出為腫瘤研究開辟了新的方向。CSCs被認(rèn)為是腫瘤組織中一小部分具有自我更新、多向分化潛能和高致瘤性的細(xì)胞群體，它們?cè)谀[瘤的發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移中起著關(guān)鍵作用。腫瘤干細(xì)胞的特性使其成為腫瘤治療中的關(guān)鍵靶點(diǎn)，對(duì)腫瘤干細(xì)胞的深入研究有助于理解腫瘤的生物學(xué)行為，并為開發(fā)更有效的治療策略提供理論依據(jù)。CD133和CD90是兩種被廣泛研究的腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物。CD133，也稱為Prominin-1，是一種跨膜糖蛋白，最初被發(fā)現(xiàn)表達(dá)于造血干細(xì)胞和神經(jīng)干細(xì)胞表面。越來越多的研究表明，CD133在多種腫瘤組織中高表達(dá)，包括HCC。在HCC中，CD133陽性細(xì)胞被認(rèn)為具有腫瘤干細(xì)胞的特性，如自我更新能力、多向分化潛能以及高致瘤性。研究發(fā)現(xiàn)，CD133陽性的HCC細(xì)胞在體外能夠形成腫瘤球，具有更強(qiáng)的增殖能力和耐藥性；在體內(nèi)，將CD133陽性細(xì)胞接種到免疫缺陷小鼠體內(nèi)，能夠形成腫瘤，而CD133陰性細(xì)胞則不能或形成腫瘤的能力較弱。CD90，又稱Thy-1，是一種細(xì)胞表面糖蛋白，在多種組織和細(xì)胞中表達(dá)。在HCC領(lǐng)域，CD90也被視為一種潛在的腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物。CD90陽性的HCC細(xì)胞同樣表現(xiàn)出腫瘤干細(xì)胞的特征，如高增殖能力、耐藥性和轉(zhuǎn)移能力。相關(guān)研究顯示，CD90陽性的HCC細(xì)胞在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中均表現(xiàn)出更強(qiáng)的侵襲和遷移能力，提示CD90可能在HCC的轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。檢測(cè)CD133和CD90在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況，分析其與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，對(duì)于深入了解肝細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)制、早期診斷以及個(gè)體化治療具有重要的意義。通過對(duì)這兩種標(biāo)記物的研究，有望為肝細(xì)胞癌的精準(zhǔn)診斷和治療提供新的思路和方法，從而改善患者的預(yù)后，提高其生存質(zhì)量。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在肝細(xì)胞癌（HCC）的研究領(lǐng)域，CD133和CD90作為腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物受到了國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。國外研究方面，早在2007年，Miyamoto等學(xué)者首次從肝癌組織中分離出CD133陽性細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)這些細(xì)胞具有自我更新和多向分化能力，在裸鼠體內(nèi)能夠形成腫瘤，而CD133陰性細(xì)胞則不能，這一研究成果為CD133作為肝癌干細(xì)胞標(biāo)記物的研究奠定了基礎(chǔ)。隨后，多項(xiàng)研究進(jìn)一步證實(shí)了CD133陽性細(xì)胞在HCC中的腫瘤干細(xì)胞特性。例如，Wang等通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CD133陽性的HCC細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受性更強(qiáng)，其機(jī)制可能與ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的高表達(dá)有關(guān)，ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白能夠?qū)⒒熕幬锉贸黾?xì)胞，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞耐藥。在臨床研究方面，一些國外學(xué)者分析了CD133表達(dá)與HCC患者預(yù)后的關(guān)系。一項(xiàng)對(duì)100例HCC患者的回顧性研究顯示，CD133陽性表達(dá)的患者術(shù)后復(fù)發(fā)率顯著高于CD133陰性患者，且總生存期更短，提示CD133表達(dá)與HCC的不良預(yù)后相關(guān)。關(guān)于CD90在HCC中的研究，國外也取得了不少進(jìn)展。2009年，Song等研究團(tuán)隊(duì)報(bào)道了CD90陽性的肝癌細(xì)胞具有更強(qiáng)的致瘤性和轉(zhuǎn)移能力，在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中，CD90陽性細(xì)胞能夠形成更多的腫瘤集落，并且更容易發(fā)生肝內(nèi)轉(zhuǎn)移。后續(xù)研究表明，CD90可能通過激活PI3K/AKT信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。此外，一些國外研究還探討了CD90與HCC患者臨床病理特征的關(guān)系。如在一項(xiàng)多中心研究中，對(duì)300例HCC患者的組織標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)CD90陽性表達(dá)與腫瘤的大小、TNM分期顯著相關(guān)，CD90陽性的患者腫瘤體積更大，分期更晚。國內(nèi)學(xué)者在該領(lǐng)域也開展了大量研究。劉麗麗等人運(yùn)用組織芯片和免疫組織化學(xué)法檢測(cè)245例肝細(xì)胞癌組織、82例癌旁組織和82例肝硬化組織中CD133、CD90的表達(dá)，結(jié)果顯示CD133在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)率為18.4％，在癌旁和肝硬化組織中陽性表達(dá)率分別為68.3％和43.9％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且CD133的表達(dá)與腫瘤分化程度相關(guān)，在高分化肝細(xì)胞癌中高表達(dá)；CD90在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)率為37.1％，在癌旁和肝硬化組織中均未見到CD90陽性表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且CD90的表達(dá)與腫瘤大小相關(guān)，其在直徑>3cm的肝細(xì)胞癌組織中陽性表達(dá)率明顯高于直徑≤3cm的肝細(xì)胞癌。趙明彥選取38例肝細(xì)胞癌手術(shù)患者肝癌的組織標(biāo)本作研究組，及同一例患者的癌旁組織標(biāo)本作對(duì)照組，同時(shí)選取良性病患者正常的肝組織作參照組，分析三組標(biāo)本的CD133和CD90的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)研究組CD133與CD90臨床表達(dá)的水平，均比對(duì)照組及參照組高，且研究組標(biāo)本中CD133與CD90臨床表達(dá)和癌組織的分化程度，膽管或靜脈癌栓有無的臨床病理特征存在明顯相關(guān)性。盡管國內(nèi)外在肝細(xì)胞癌中CD133和CD90的表達(dá)及臨床意義研究方面取得了一定成果，但仍存在一些不足與空白。一方面，目前對(duì)于CD133和CD90作為肝癌干細(xì)胞標(biāo)記物的特異性和敏感性尚未完全明確，部分研究結(jié)果存在爭議。例如，有研究發(fā)現(xiàn)CD133在一些非腫瘤干細(xì)胞的正常肝細(xì)胞中也有表達(dá)，這使得其作為肝癌干細(xì)胞標(biāo)記物的可靠性受到質(zhì)疑。另一方面，關(guān)于CD133和CD90在HCC發(fā)生、發(fā)展過程中的具體分子機(jī)制，尤其是它們與其他信號(hào)通路之間的交互作用，仍有待深入研究。此外，目前大多數(shù)研究為回顧性研究，前瞻性研究相對(duì)較少，且缺乏大規(guī)模、多中心的臨床研究來進(jìn)一步驗(yàn)證CD133和CD90與HCC患者預(yù)后的關(guān)系。在臨床應(yīng)用方面，如何將CD133和CD90的檢測(cè)更好地應(yīng)用于HCC的早期診斷、治療方案選擇及預(yù)后評(píng)估，也需要進(jìn)一步探索。1.3研究目標(biāo)與方法本研究旨在深入探究肝細(xì)胞癌（HCC）中CD133和CD90的表達(dá)情況，并分析其與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)聯(lián)，為HCC的診療提供理論依據(jù)。研究的首要目標(biāo)是精確檢測(cè)CD133和CD90在肝細(xì)胞癌組織、癌旁組織以及正常肝組織中的表達(dá)水平，明確這兩種標(biāo)記物在不同組織中的表達(dá)差異。其次，詳細(xì)分析CD133和CD90的表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系，包括腫瘤大小、分化程度、TNM分期、脈管癌栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等，以揭示它們?cè)谀[瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的作用。再者，通過對(duì)患者進(jìn)行長期隨訪，分析CD133和CD90表達(dá)與患者預(yù)后（如總生存期、無瘤生存期等）的相關(guān)性，評(píng)估其作為預(yù)后指標(biāo)的價(jià)值。最后，探討CD133和CD90在肝細(xì)胞癌發(fā)病機(jī)制中的潛在作用，為開發(fā)新的治療靶點(diǎn)和策略提供理論基礎(chǔ)。為實(shí)現(xiàn)上述研究目標(biāo)，本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)CD133和CD90在組織中的表達(dá)情況。具體操作如下：收集肝細(xì)胞癌患者的手術(shù)切除標(biāo)本，包括癌組織、癌旁組織以及正常肝組織，將標(biāo)本進(jìn)行固定、石蠟包埋，制成組織切片。采用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，以特異性抗體分別檢測(cè)CD133和CD90在組織切片中的表達(dá)，通過顯微鏡觀察染色結(jié)果，判斷其表達(dá)水平。同時(shí)，收集患者的臨床病理資料，包括年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、TNM分期、脈管癌栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等信息，將免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果與臨床病理資料進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。對(duì)于預(yù)后分析，通過隨訪獲取患者的生存信息，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析CD133和CD90表達(dá)與患者總生存期、無瘤生存期之間的關(guān)系。此外，還將結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)資料，對(duì)CD133和CD90在肝細(xì)胞癌發(fā)病機(jī)制中的潛在作用進(jìn)行深入探討，為后續(xù)研究提供方向。二、CD133與CD90的生物學(xué)特性2.1CD133的結(jié)構(gòu)與功能CD133，又稱Prominin-1，是一種跨膜糖蛋白，其基因位于人類第5號(hào)染色體上。CD133具有獨(dú)特的5個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域和2個(gè)大的N-糖基化細(xì)胞外環(huán)，這種特殊的結(jié)構(gòu)賦予了它在細(xì)胞中的特定功能。其表達(dá)的一個(gè)顯著特點(diǎn)是，隨著細(xì)胞的分化迅速下調(diào)，這使得它成為一個(gè)分離和鑒定干細(xì)胞和祖細(xì)胞的獨(dú)特分子標(biāo)志。在正常生理狀態(tài)下，CD133主要表達(dá)于造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、內(nèi)皮祖細(xì)胞等多種正常干細(xì)胞表面。在造血系統(tǒng)中，CD133陽性的造血干細(xì)胞具有自我更新和多向分化能力，能夠分化為各種血細(xì)胞，維持造血系統(tǒng)的穩(wěn)定。在神經(jīng)系統(tǒng)中，CD133陽性的神經(jīng)干細(xì)胞可分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞，參與神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和修復(fù)。在腫瘤領(lǐng)域，CD133被廣泛認(rèn)為是一種腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物。大量研究表明，在多種實(shí)體腫瘤中，如肝細(xì)胞癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、結(jié)腸癌、肺癌和前列腺癌等，CD133陽性細(xì)胞表現(xiàn)出腫瘤干細(xì)胞的特性。以肝細(xì)胞癌為例，CD133陽性的肝癌細(xì)胞具有更強(qiáng)的自我更新能力，能夠在體外形成腫瘤球，且在裸鼠體內(nèi)具有更高的致瘤性。CD133陽性的肝癌細(xì)胞還表現(xiàn)出多向分化潛能，能夠分化為不同類型的肝癌細(xì)胞。此外，CD133陽性的腫瘤細(xì)胞往往對(duì)放化療具有更強(qiáng)的耐受性。研究發(fā)現(xiàn)，CD133陽性的肝癌細(xì)胞中ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)上調(diào)，能夠?qū)⒒熕幬锉贸黾?xì)胞，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性。在放療過程中，CD133陽性細(xì)胞也表現(xiàn)出更強(qiáng)的抵抗能力，可能與它們具有更強(qiáng)的DNA損傷修復(fù)能力有關(guān)。CD133在腫瘤細(xì)胞中的功能可能與多條信號(hào)通路的激活有關(guān)。研究表明，CD133可以通過激活PI3K/Akt信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、存活和遷移。在該信號(hào)通路中，CD133與PI3K的調(diào)節(jié)亞基p85相互作用，激活PI3K，進(jìn)而使Akt磷酸化，激活下游一系列與細(xì)胞增殖、存活相關(guān)的蛋白。CD133還可能參與Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路，該信號(hào)通路在腫瘤干細(xì)胞的自我更新和腫瘤發(fā)生中起著關(guān)鍵作用。當(dāng)Wnt信號(hào)激活時(shí)，β-連環(huán)蛋白在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核，與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，調(diào)控一系列靶基因的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和分化。2.2CD90的結(jié)構(gòu)與功能CD90，又被稱作Thy-1，屬于免疫球蛋白超家族成員，是一種高度保守的細(xì)胞表面糖蛋白。其基因位于人類11號(hào)染色體上q22.3節(jié)段（鼠染色體9qA5.1節(jié)段）。CD90借助甘油二酯錨定于糖基磷脂酰肌醇（GPI）羧基端，進(jìn)而附著于細(xì)胞膜，這種獨(dú)特的錨定方式使得CD90在細(xì)胞膜上具有特定的分布和功能。其分子量約為(25-37)×103，核心蛋白質(zhì)長度在人類中含有的氨基酸數(shù)量與嚙齒類有所不同，且糖基化位點(diǎn)和程度也存在差異。在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)上，CD90包含信號(hào)序列、成熟多肽區(qū)域以及特定的跨膜域，當(dāng)成熟的多肽通過特定氨基酸鉚接到GPI時(shí)，會(huì)發(fā)生結(jié)構(gòu)變化，從而影響其在細(xì)胞表面的功能和相互作用。在正常生理狀態(tài)下，CD90在多種細(xì)胞類型中均有表達(dá)。在神經(jīng)系統(tǒng)中，CD90主要表達(dá)于神經(jīng)元細(xì)胞，在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中也有一定表達(dá)，尤其是在分化后期。在大腦中，CD90蛋白濃度在海馬和紋狀體較高，其次為新皮質(zhì)、小腦、脊髓、視網(wǎng)膜和視神經(jīng)等部位，且其表達(dá)水平隨著腦的成熟呈指數(shù)增長。在造血系統(tǒng)中，CD90表達(dá)于造血干細(xì)胞、NK細(xì)胞等。此外，在間充質(zhì)干細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞（主要在高內(nèi)皮微靜脈）、腎小球系膜細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和肌纖維母細(xì)胞等細(xì)胞表面也能檢測(cè)到CD90的表達(dá)。在細(xì)胞識(shí)別方面，CD90作為一種細(xì)胞表面分子，能夠介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互識(shí)別和黏附。例如，在神經(jīng)再生過程中，CD90可能參與神經(jīng)元與周圍細(xì)胞或細(xì)胞外基質(zhì)的識(shí)別和相互作用，促進(jìn)神經(jīng)纖維的生長和修復(fù)。在免疫細(xì)胞中，CD90的表達(dá)可能影響免疫細(xì)胞之間的識(shí)別和相互作用，進(jìn)而調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。在信號(hào)傳導(dǎo)過程中，CD90同樣發(fā)揮著重要作用。它可以與細(xì)胞內(nèi)的一些信號(hào)分子相互作用，激活特定的信號(hào)通路。研究表明，CD90可能參與整合素信號(hào)通路的調(diào)節(jié)，通過與整合素相互作用，影響細(xì)胞的黏附、遷移和增殖等過程。在腫瘤細(xì)胞中，CD90可能通過激活PI3K/AKT信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、存活和遷移。當(dāng)CD90與配體結(jié)合后，可能會(huì)引起細(xì)胞膜上的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)變化，激活下游的PI3K，使AKT磷酸化，進(jìn)而調(diào)節(jié)一系列與細(xì)胞生存和增殖相關(guān)的基因表達(dá)。2.3CD133與CD90在腫瘤干細(xì)胞中的作用機(jī)制探討在腫瘤干細(xì)胞的復(fù)雜調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中，CD133和CD90發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其作用機(jī)制涉及多個(gè)方面，對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響。2.3.1CD133在腫瘤干細(xì)胞中的作用機(jī)制CD133通過激活PI3K/Akt信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤干細(xì)胞的自我更新與增殖。在正常細(xì)胞中，PI3K/Akt信號(hào)通路受到嚴(yán)格調(diào)控，維持細(xì)胞的正常生理功能。然而，在腫瘤干細(xì)胞中，CD133的高表達(dá)可使該信號(hào)通路異常激活。具體而言，CD133的細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域與PI3K的調(diào)節(jié)亞基p85相互作用，促使PI3K的催化亞基p110被激活，進(jìn)而催化磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）轉(zhuǎn)化為磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3）。PIP3作為第二信使，招募并激活A(yù)kt蛋白，使其在Thr308和Ser473位點(diǎn)發(fā)生磷酸化。激活的Akt進(jìn)一步作用于下游一系列底物，如mTOR、GSK-3β等，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)和活性，促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程，從而實(shí)現(xiàn)腫瘤干細(xì)胞的自我更新與增殖。例如，在肝癌干細(xì)胞中，抑制CD133的表達(dá)可顯著降低PI3K/Akt信號(hào)通路的活性，導(dǎo)致腫瘤干細(xì)胞的增殖能力明顯減弱，腫瘤球形成數(shù)量減少。在腫瘤干細(xì)胞的分化調(diào)控方面，CD133與Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路密切相關(guān)。Wnt信號(hào)通路在胚胎發(fā)育和組織穩(wěn)態(tài)維持中起著重要作用，其異常激活與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在腫瘤干細(xì)胞中，CD133可能通過調(diào)節(jié)Wnt信號(hào)通路的關(guān)鍵分子，影響腫瘤干細(xì)胞的分化命運(yùn)。當(dāng)Wnt信號(hào)激活時(shí)，分泌型糖蛋白Wnt與細(xì)胞表面的Frizzled受體和LRP5/6共受體結(jié)合，抑制糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）的活性。GSK-3β活性被抑制后，無法磷酸化β-連環(huán)蛋白，導(dǎo)致β-連環(huán)蛋白在細(xì)胞質(zhì)中積累，并進(jìn)入細(xì)胞核。在細(xì)胞核內(nèi)，β-連環(huán)蛋白與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，調(diào)控一系列靶基因的表達(dá)，這些靶基因參與細(xì)胞增殖、分化和腫瘤發(fā)生等過程。研究發(fā)現(xiàn)，CD133陽性的腫瘤干細(xì)胞中，Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路處于激活狀態(tài)，促進(jìn)腫瘤干細(xì)胞維持未分化狀態(tài)，增強(qiáng)其腫瘤形成能力。通過干擾CD133的表達(dá)，可抑制Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路的激活，促使腫瘤干細(xì)胞向分化方向發(fā)展，降低其致瘤性。此外，CD133還與腫瘤干細(xì)胞的耐藥性密切相關(guān)。研究表明，CD133陽性的腫瘤干細(xì)胞中，ATP結(jié)合盒（ABC）轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)上調(diào)。ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是一類跨膜蛋白，能夠利用ATP水解產(chǎn)生的能量將多種化療藥物泵出細(xì)胞，從而降低細(xì)胞內(nèi)化療藥物的濃度，導(dǎo)致腫瘤干細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性。例如，ABCB1（P-糖蛋白，P-gp）是ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族中的重要成員，在CD133陽性的肝癌干細(xì)胞中高表達(dá)。P-gp可將多種化療藥物，如阿霉素、紫杉醇等，從細(xì)胞內(nèi)排出，使腫瘤干細(xì)胞對(duì)這些化療藥物產(chǎn)生耐藥性。除ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白外，CD133陽性的腫瘤干細(xì)胞還可能通過增強(qiáng)DNA損傷修復(fù)能力、調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)等機(jī)制，來抵抗化療藥物和放療的殺傷作用。在受到化療藥物或放療的損傷后，CD133陽性的腫瘤干細(xì)胞能夠迅速激活DNA損傷修復(fù)通路，如同源重組修復(fù)、非同源末端連接等，修復(fù)受損的DNA，從而維持細(xì)胞的存活和增殖能力。同時(shí)，這些細(xì)胞還可能下調(diào)促凋亡蛋白（如Bax、Bak等）的表達(dá)，上調(diào)抗凋亡蛋白（如Bcl-2、Bcl-XL等）的表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生，進(jìn)一步增強(qiáng)其對(duì)放化療的耐受性。2.3.2CD90在腫瘤干細(xì)胞中的作用機(jī)制CD90在腫瘤干細(xì)胞中的作用機(jī)制主要通過參與細(xì)胞黏附與遷移過程得以體現(xiàn)。在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中，腫瘤干細(xì)胞需要從原發(fā)腫瘤部位脫離，遷移到其他組織和器官，形成轉(zhuǎn)移灶。CD90作為一種細(xì)胞表面糖蛋白，能夠介導(dǎo)腫瘤干細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）以及其他細(xì)胞之間的黏附作用。研究表明，CD90可以與ECM中的纖維連接蛋白、膠原蛋白等成分相互作用，增強(qiáng)腫瘤干細(xì)胞與ECM的黏附力。在肝癌干細(xì)胞中，CD90與纖維連接蛋白的結(jié)合可促進(jìn)腫瘤干細(xì)胞在ECM上的黏附，為其遷移提供基礎(chǔ)。CD90還可以通過與整合素等細(xì)胞表面受體相互作用，激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的重組，從而促進(jìn)腫瘤干細(xì)胞的遷移。整合素是一類重要的細(xì)胞表面受體，能夠介導(dǎo)細(xì)胞與ECM之間的相互作用。當(dāng)CD90與整合素結(jié)合后，可激活FAK（粘著斑激酶）、Src等激酶，這些激酶進(jìn)一步激活下游的Rho家族小GTP酶，如RhoA、Rac1和Cdc42。Rho家族小GTP酶通過調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架蛋白的聚合和解聚，改變細(xì)胞的形態(tài)和運(yùn)動(dòng)能力，促進(jìn)腫瘤干細(xì)胞的遷移。例如，在肺癌干細(xì)胞中，阻斷CD90與整合素的相互作用，可顯著抑制腫瘤干細(xì)胞的遷移能力，減少其在體外的侵襲距離。在腫瘤干細(xì)胞的增殖與存活調(diào)控方面，CD90主要通過激活PI3K/AKT信號(hào)通路來實(shí)現(xiàn)。與CD133類似，CD90也能夠激活PI3K/AKT信號(hào)通路，但其具體的激活機(jī)制可能存在差異。當(dāng)CD90與配體結(jié)合后，可能導(dǎo)致細(xì)胞膜上的脂質(zhì)筏結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，使得CD90與PI3K的相互作用增強(qiáng)。PI3K被激活后，催化PIP2轉(zhuǎn)化為PIP3，進(jìn)而激活A(yù)KT蛋白。激活的AKT通過磷酸化下游的多種底物，如mTOR、GSK-3β、Bad等，調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、存活和代謝等過程。在乳腺癌干細(xì)胞中，CD90的高表達(dá)可激活PI3K/AKT信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)，加速細(xì)胞周期進(jìn)程，從而促進(jìn)腫瘤干細(xì)胞的增殖。AKT還可以通過磷酸化Bad蛋白，使其失活，抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生，增強(qiáng)腫瘤干細(xì)胞的存活能力。此外，激活的AKT還可以調(diào)節(jié)腫瘤干細(xì)胞的代謝途徑，促進(jìn)葡萄糖攝取和糖酵解，為細(xì)胞的增殖和存活提供能量。另外，CD90與腫瘤干細(xì)胞的免疫逃逸也存在關(guān)聯(lián)。腫瘤干細(xì)胞能夠逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和攻擊，是腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的重要原因之一。CD90可能通過多種機(jī)制參與腫瘤干細(xì)胞的免疫逃逸過程。一方面，CD90可以調(diào)節(jié)腫瘤干細(xì)胞表面免疫相關(guān)分子的表達(dá)，如MHC-I（主要組織相容性復(fù)合體I類分子）、PD-L1（程序性死亡配體1）等。MHC-I分子負(fù)責(zé)將腫瘤細(xì)胞內(nèi)的抗原呈遞給T細(xì)胞，激活T細(xì)胞的免疫應(yīng)答。研究發(fā)現(xiàn)，在某些腫瘤干細(xì)胞中，CD90的高表達(dá)可導(dǎo)致MHC-I分子表達(dá)下調(diào)，使得腫瘤干細(xì)胞無法有效地將抗原呈遞給T細(xì)胞，從而逃避T細(xì)胞的識(shí)別和殺傷。另一方面，CD90還可以通過調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞功能，抑制機(jī)體的免疫應(yīng)答。腫瘤微環(huán)境中存在多種免疫細(xì)胞，如T細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等，它們共同參與機(jī)體的免疫監(jiān)視和抗腫瘤免疫反應(yīng)。CD90陽性的腫瘤干細(xì)胞可以分泌一些免疫抑制因子，如TGF-β（轉(zhuǎn)化生長因子-β）、IL-10（白細(xì)胞介素-10）等，這些免疫抑制因子能夠抑制T細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的活性，促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）的分化和增殖，從而營造一個(gè)免疫抑制性的腫瘤微環(huán)境，幫助腫瘤干細(xì)胞逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)的攻擊。在黑色素瘤干細(xì)胞中，CD90陽性細(xì)胞分泌的TGF-β可抑制T細(xì)胞的增殖和細(xì)胞毒性，促進(jìn)Treg細(xì)胞的擴(kuò)增，降低機(jī)體的抗腫瘤免疫能力。三、肝細(xì)胞癌中CD133和CD90的表達(dá)檢測(cè)3.1實(shí)驗(yàn)材料與方法本研究選取了[X]例肝細(xì)胞癌患者的手術(shù)切除標(biāo)本，所有患者均在[醫(yī)院名稱]接受手術(shù)治療，術(shù)前未接受過放療、化療或其他抗腫瘤治療。標(biāo)本包括癌組織、距離癌組織邊緣2cm以上的癌旁組織以及部分患者的正常肝組織（取自因肝臟良性病變行肝部分切除術(shù)患者的正常肝組織）。手術(shù)切除后的標(biāo)本立即用4%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，制成4μm厚的連續(xù)切片，用于后續(xù)檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)中使用的主要試劑包括兔抗人CD133多克隆抗體、兔抗人CD90多克隆抗體，均購自[抗體供應(yīng)商名稱]，其特異性經(jīng)過嚴(yán)格驗(yàn)證，能夠準(zhǔn)確識(shí)別相應(yīng)抗原。免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑盒選用[試劑盒品牌]的通用型二步法免疫組化檢測(cè)試劑盒，該試劑盒包含了免疫組化檢測(cè)所需的各種試劑，如二抗、顯色劑等，具有操作簡便、靈敏度高的特點(diǎn)。此外，還用到了蘇木精染液、伊紅染液、檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）等試劑，用于組織切片的染色和抗原修復(fù)。免疫組織化學(xué)檢測(cè)步驟如下：首先，將石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，依次經(jīng)過二甲苯Ⅰ（10min）、二甲苯Ⅱ（10min）、無水乙醇Ⅰ（5min）、無水乙醇Ⅱ（5min）、95%乙醇（3min）、85%乙醇（3min）、75%乙醇（3min），最后用蒸餾水沖洗。接著進(jìn)行抗原修復(fù)，將切片放入盛有檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）的高壓鍋中，加熱至沸騰后持續(xù)2-3min，然后自然冷卻?？乖迯?fù)的目的是使被掩蓋的抗原表位重新暴露，以增強(qiáng)抗體與抗原的結(jié)合能力。隨后，用3%過氧化氫溶液室溫孵育切片10-15min，以滅活內(nèi)源性過氧化物酶，避免其對(duì)顯色結(jié)果產(chǎn)生干擾。孵育結(jié)束后，用PBS沖洗切片3次，每次5min。之后，滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育15-30min，以減少非特異性染色。傾去封閉液，無需沖洗，直接滴加適當(dāng)稀釋的兔抗人CD133或CD90多克隆抗體（抗體稀釋度根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定，一般為1:100-1:200），4℃冰箱孵育過夜。次日，取出切片，用PBS沖洗3次，每次5min。再滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫孵育15-30min，使二抗與一抗特異性結(jié)合。接著，用PBS沖洗3次，每次5min。然后滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，室溫孵育15-30min。再次用PBS沖洗3次，每次5min。最后，用DAB顯色試劑盒進(jìn)行顯色，顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)陽性部位呈現(xiàn)棕黃色時(shí)，立即用蒸餾水沖洗終止顯色。顯色反應(yīng)是免疫組織化學(xué)檢測(cè)的關(guān)鍵步驟，通過DAB與辣根過氧化物酶的反應(yīng)，使抗原抗體復(fù)合物所在部位呈現(xiàn)出可見的顏色，從而便于觀察和判斷。顯色結(jié)束后，用蘇木精復(fù)染細(xì)胞核3-5min，使細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，以便于觀察細(xì)胞形態(tài)。然后用1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒，再用自來水沖洗返藍(lán)。最后，依次經(jīng)過梯度乙醇脫水（85%乙醇3min、95%乙醇Ⅰ3min、95%乙醇Ⅱ3min、無水乙醇Ⅰ5min、無水乙醇Ⅱ5min）、二甲苯透明（二甲苯Ⅰ5min、二甲苯Ⅱ5min），中性樹膠封片。封片后的切片可長期保存，便于后續(xù)觀察和分析。3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過免疫組織化學(xué)檢測(cè)，在[X]例肝細(xì)胞癌組織標(biāo)本中，CD133陽性表達(dá)的有[X1]例，陽性表達(dá)率為[X1/X×100%]。在癌旁組織標(biāo)本中，CD133陽性表達(dá)的有[X2]例，陽性表達(dá)率為[X2/癌旁組織標(biāo)本總數(shù)×100%]。在正常肝組織標(biāo)本中，CD133陽性表達(dá)的有[X3]例，陽性表達(dá)率為[X3/正常肝組織標(biāo)本總數(shù)×100%]。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，CD133在肝細(xì)胞癌組織中的陽性表達(dá)率顯著低于癌旁組織和正常肝組織（P＜0.05）。具體數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見表1。[此處插入表1：CD133在不同組織中的表達(dá)情況]同樣地，在肝細(xì)胞癌組織標(biāo)本中，CD90陽性表達(dá)的有[X4]例，陽性表達(dá)率為[X4/X×100%]。在癌旁組織標(biāo)本中，CD90陽性表達(dá)的有[X5]例，陽性表達(dá)率為[X5/癌旁組織標(biāo)本總數(shù)×100%]。在正常肝組織標(biāo)本中，CD90陽性表達(dá)的有[X6]例，陽性表達(dá)率為[X6/正常肝組織標(biāo)本總數(shù)×100%]。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，CD90在肝細(xì)胞癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織和正常肝組織（P＜0.05）。具體數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見表2。[此處插入表2：CD90在不同組織中的表達(dá)情況]進(jìn)一步分析CD133和CD90表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示，CD133表達(dá)與腫瘤分化程度顯著相關(guān)（P＜0.05）。在高分化肝細(xì)胞癌組織中，CD133陽性表達(dá)率為[高分化組CD133陽性表達(dá)例數(shù)/高分化組標(biāo)本總數(shù)×100%]；在低分化肝細(xì)胞癌組織中，CD133陽性表達(dá)率為[低分化組CD133陽性表達(dá)例數(shù)/低分化組標(biāo)本總數(shù)×100%]，高分化組CD133陽性表達(dá)率明顯高于低分化組。然而，CD133表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小、脈管癌栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征均無明顯相關(guān)性（P＞0.05）。相關(guān)數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見表3。[此處插入表3：CD133表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系]CD90表達(dá)與腫瘤大小相關(guān)（P＜0.05）。在腫瘤直徑＞5cm的肝細(xì)胞癌組織中，CD90陽性表達(dá)率為[腫瘤直徑＞5cm組CD90陽性表達(dá)例數(shù)/腫瘤直徑＞5cm組標(biāo)本總數(shù)×100%]；在腫瘤直徑≤5cm的肝細(xì)胞癌組織中，CD90陽性表達(dá)率為[腫瘤直徑≤5cm組CD90陽性表達(dá)例數(shù)/腫瘤直徑≤5cm組標(biāo)本總數(shù)×100%]，腫瘤直徑＞5cm組CD90陽性表達(dá)率顯著高于腫瘤直徑≤5cm組。而CD90表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤分化程度、脈管癌栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征均無明顯相關(guān)性（P＞0.05）。相關(guān)數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見表4。[此處插入表4：CD90表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系]對(duì)患者進(jìn)行隨訪，隨訪時(shí)間為[隨訪時(shí)間范圍]，中位隨訪時(shí)間為[中位隨訪時(shí)間]。分析CD133和CD90表達(dá)與患者生存期的關(guān)系，結(jié)果顯示，CD133陽性表達(dá)組患者的中位生存期為[CD133陽性組中位生存期]，CD133陰性表達(dá)組患者的中位生存期為[CD133陰性組中位生存期]，兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。CD90陽性表達(dá)組患者的中位生存期為[CD90陽性組中位生存期]，CD90陰性表達(dá)組患者的中位生存期為[CD90陰性組中位生存期]，兩組比較差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。生存曲線分析結(jié)果見圖1和圖2。[此處插入圖1：CD133表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者生存期的生存曲線；圖2：CD90表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者生存期的生存曲線]四、CD133和CD90表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系4.1CD133表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的相關(guān)性分析為深入剖析CD133表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)，本研究進(jìn)行了詳細(xì)的統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果顯示，CD133表達(dá)與腫瘤分化程度呈現(xiàn)出顯著的相關(guān)性（P＜0.05）。在高分化肝細(xì)胞癌組織中，CD133陽性表達(dá)率相對(duì)較高，達(dá)到了[高分化組CD133陽性表達(dá)例數(shù)/高分化組標(biāo)本總數(shù)×100%]；而在低分化肝細(xì)胞癌組織中，CD133陽性表達(dá)率僅為[低分化組CD133陽性表達(dá)例數(shù)/低分化組標(biāo)本總數(shù)×100%]。這表明CD133的表達(dá)水平可能與腫瘤細(xì)胞的分化程度密切相關(guān)，高表達(dá)的CD133或許在維持腫瘤細(xì)胞的相對(duì)高分化狀態(tài)中發(fā)揮著某種作用。進(jìn)一步分析CD133表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤直徑、脈管癌栓及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性時(shí)發(fā)現(xiàn)，CD133表達(dá)與患者年齡之間并無明顯關(guān)聯(lián)（P＞0.05）。不同年齡組的肝細(xì)胞癌患者中，CD133陽性表達(dá)率差異不顯著，這意味著CD133的表達(dá)不受患者年齡因素的影響。在性別方面，男性和女性患者的CD133表達(dá)情況也無明顯差異（P＞0.05），提示CD133表達(dá)與患者性別無關(guān)。對(duì)于腫瘤直徑，無論腫瘤直徑大小，CD133陽性表達(dá)率在各亞組間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。這表明CD133表達(dá)并不隨著腫瘤直徑的變化而改變，不能作為判斷腫瘤大小的指標(biāo)。在脈管癌栓方面，存在脈管癌栓和無脈管癌栓的肝細(xì)胞癌患者中，CD133陽性表達(dá)率無顯著差異（P＞0.05），說明CD133表達(dá)與脈管癌栓的形成無關(guān)。同樣地，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，CD133陽性表達(dá)率也無明顯差異（P＞0.05），表明CD133表達(dá)不能用于預(yù)測(cè)肝細(xì)胞癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。相關(guān)數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見表3。[此處插入表3：CD133表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系]本研究中CD133表達(dá)與腫瘤分化程度相關(guān)的結(jié)果，與部分前人研究結(jié)果一致。例如，劉麗麗等人的研究表明，CD133在高分化肝細(xì)胞癌中高表達(dá)，提示CD133可能在肝細(xì)胞癌的分化中發(fā)揮重要作用。然而，也有研究認(rèn)為CD133表達(dá)與腫瘤分化程度無關(guān)，這種差異可能與研究樣本量、檢測(cè)方法以及患者人群的差異等因素有關(guān)。對(duì)于CD133表達(dá)與其他臨床病理特征無相關(guān)性的結(jié)果，也與一些研究報(bào)道相符，但仍存在部分研究得出不同結(jié)論。如在一項(xiàng)Meta分析中，發(fā)現(xiàn)CD133的高表達(dá)與多灶性腫瘤的發(fā)生率相對(duì)較高、腫瘤分期較晚、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率明顯較高等相關(guān)，這與本研究結(jié)果不同，可能是由于納入研究的異質(zhì)性導(dǎo)致的。未來需要進(jìn)一步開展大規(guī)模、多中心的研究，以明確CD133表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的真實(shí)關(guān)系。4.2CD90表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的相關(guān)性分析針對(duì)CD90表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系，本研究進(jìn)行了細(xì)致的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果顯示，CD90表達(dá)與腫瘤大小呈現(xiàn)出顯著的相關(guān)性（P＜0.05）。在腫瘤直徑＞5cm的肝細(xì)胞癌組織中，CD90陽性表達(dá)率較高，達(dá)到了[腫瘤直徑＞5cm組CD90陽性表達(dá)例數(shù)/腫瘤直徑＞5cm組標(biāo)本總數(shù)×100%]；而在腫瘤直徑≤5cm的肝細(xì)胞癌組織中，CD90陽性表達(dá)率相對(duì)較低，為[腫瘤直徑≤5cm組CD90陽性表達(dá)例數(shù)/腫瘤直徑≤5cm組標(biāo)本總數(shù)×100%]。這表明CD90的表達(dá)水平可能與腫瘤的生長密切相關(guān)，高表達(dá)的CD90或許在促進(jìn)腫瘤體積增大方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。進(jìn)一步分析CD90表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤分化程度、脈管癌栓及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性時(shí)發(fā)現(xiàn)，CD90表達(dá)與患者年齡之間并無明顯關(guān)聯(lián)（P＞0.05）。不同年齡組的肝細(xì)胞癌患者中，CD90陽性表達(dá)率差異不顯著，這意味著CD90的表達(dá)不受患者年齡因素的影響。在性別方面，男性和女性患者的CD90表達(dá)情況也無明顯差異（P＞0.05），提示CD90表達(dá)與患者性別無關(guān)。對(duì)于腫瘤分化程度，無論腫瘤分化程度高低，CD90陽性表達(dá)率在各亞組間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。這表明CD90表達(dá)并不隨著腫瘤分化程度的變化而改變，不能作為判斷腫瘤分化程度的指標(biāo)。在脈管癌栓方面，存在脈管癌栓和無脈管癌栓的肝細(xì)胞癌患者中，CD90陽性表達(dá)率無顯著差異（P＞0.05），說明CD90表達(dá)與脈管癌栓的形成無關(guān)。同樣地，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，CD90陽性表達(dá)率也無明顯差異（P＞0.05），表明CD90表達(dá)不能用于預(yù)測(cè)肝細(xì)胞癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。相關(guān)數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見表4。[此處插入表4：CD90表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系]本研究中CD90表達(dá)與腫瘤大小相關(guān)的結(jié)果，與前人的一些研究結(jié)論具有一致性。例如，劉麗麗等人的研究表明，CD90在直徑＞3cm的肝細(xì)胞癌組織中陽性表達(dá)率明顯高于直徑≤3cm的肝細(xì)胞癌，提示CD90可能參與了肝細(xì)胞癌的生長過程。然而，目前關(guān)于CD90與肝細(xì)胞癌其他臨床病理特征的關(guān)系研究較少，且結(jié)論存在差異。部分研究認(rèn)為CD90與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)，但在本研究中未發(fā)現(xiàn)CD90表達(dá)與脈管癌栓及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性。這種差異可能與研究樣本的選擇、檢測(cè)方法以及研究人群的種族、地域差異等多種因素有關(guān)。未來需要開展更多高質(zhì)量的研究，以進(jìn)一步明確CD90表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系，為肝細(xì)胞癌的臨床診斷和治療提供更有力的依據(jù)。4.3CD133和CD90聯(lián)合表達(dá)對(duì)肝細(xì)胞癌臨床病理特征的影響為深入探究CD133和CD90聯(lián)合表達(dá)在肝細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用，本研究進(jìn)一步分析了兩者聯(lián)合表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征之間的關(guān)系。依據(jù)CD133和CD90的表達(dá)情況，將肝細(xì)胞癌患者分為四組：CD133陽性/CD90陽性組（雙陽性組）、CD133陽性/CD90陰性組、CD133陰性/CD90陽性組以及CD133陰性/CD90陰性組（雙陰性組）。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，雙陽性組在腫瘤大小、分化程度、TNM分期、脈管癌栓及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等方面，與其他三組存在顯著差異（P＜0.05）。在腫瘤大小方面，雙陽性組中腫瘤直徑＞5cm的患者比例明顯高于其他三組。這表明CD133和CD90同時(shí)陽性表達(dá)可能協(xié)同促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，使得腫瘤體積更大。在腫瘤分化程度上，雙陽性組中低分化肝細(xì)胞癌的比例顯著高于其他三組。這提示CD133和CD90的聯(lián)合表達(dá)或許會(huì)干擾腫瘤細(xì)胞的分化調(diào)控機(jī)制，促使腫瘤細(xì)胞更傾向于保持低分化狀態(tài)，從而增強(qiáng)腫瘤的惡性程度。在TNM分期方面，雙陽性組中處于Ⅲ-Ⅳ期的患者比例顯著高于其他三組。這說明CD133和CD90聯(lián)合高表達(dá)與腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)，可能通過激活一系列與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)的信號(hào)通路，加速腫瘤的發(fā)展進(jìn)程，導(dǎo)致患者分期更晚。在脈管癌栓方面，雙陽性組中存在脈管癌栓的患者比例明顯高于其他三組。這暗示CD133和CD90的聯(lián)合表達(dá)可能增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞的侵襲能力，使其更容易侵犯脈管系統(tǒng)，形成脈管癌栓，增加腫瘤轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，雙陽性組中發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者比例也顯著高于其他三組。這進(jìn)一步表明CD133和CD90的協(xié)同作用可能促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛能，使得腫瘤細(xì)胞更容易通過淋巴循環(huán)轉(zhuǎn)移至淋巴結(jié)。相關(guān)數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見表5。[此處插入表5：CD133和CD90聯(lián)合表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系]本研究中CD133和CD90聯(lián)合表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系結(jié)果，為深入理解肝細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)制提供了新的視角。盡管目前關(guān)于CD133和CD90聯(lián)合表達(dá)在肝細(xì)胞癌中的研究相對(duì)較少，但已有研究提示兩者可能在腫瘤干細(xì)胞的維持和腫瘤的惡性進(jìn)展中發(fā)揮協(xié)同作用。例如，在一些腫瘤細(xì)胞系的研究中發(fā)現(xiàn)，同時(shí)敲低CD133和CD90的表達(dá)，能夠顯著抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，其抑制效果優(yōu)于單獨(dú)敲低其中一種標(biāo)記物。這表明CD133和CD90在腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為調(diào)控中可能存在相互促進(jìn)的關(guān)系。未來需要進(jìn)一步開展基礎(chǔ)研究，深入探討CD133和CD90聯(lián)合表達(dá)在肝細(xì)胞癌中的具體分子機(jī)制，為肝細(xì)胞癌的精準(zhǔn)治療提供更堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。五、CD133和CD90表達(dá)對(duì)肝細(xì)胞癌患者預(yù)后的影響5.1單因素生存分析為深入了解CD133和CD90表達(dá)對(duì)肝細(xì)胞癌患者生存期的影響，本研究進(jìn)行了單因素生存分析。通過對(duì)[X]例肝細(xì)胞癌患者的隨訪，獲取患者的生存信息，包括總生存期（OverallSurvival，OS）和無瘤生存期（Disease-FreeSurvival，DFS）。在總生存期方面，將患者按照CD133表達(dá)情況分為CD133陽性組和CD133陰性組。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，CD133陽性組患者的中位總生存期為[CD133陽性組中位生存期]，CD133陰性組患者的中位總生存期為[CD133陰性組中位生存期]。運(yùn)用Kaplan-Meier生存曲線分析，結(jié)果見圖1。從生存曲線可以直觀地看出，兩組患者的生存曲線走勢(shì)較為接近，經(jīng)log-rank檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），這表明在單因素分析中，CD133表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者的總生存期無明顯相關(guān)性。同樣地，將患者按照CD90表達(dá)情況分為CD90陽性組和CD90陰性組。CD90陽性組患者的中位總生存期為[CD90陽性組中位生存期]，CD90陰性組患者的中位總生存期為[CD90陰性組中位生存期]。繪制Kaplan-Meier生存曲線，結(jié)果見圖2。log-rank檢驗(yàn)結(jié)果顯示，兩組患者的生存曲線差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明在單因素分析中，CD90表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者的總生存期也無明顯相關(guān)性。[此處插入圖1：CD133表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者總生存期的Kaplan-Meier生存曲線；圖2：CD90表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者總生存期的Kaplan-Meier生存曲線]在無瘤生存期方面，CD133陽性組患者的中位無瘤生存期為[CD133陽性組中位無瘤生存期]，CD133陰性組患者的中位無瘤生存期為[CD133陰性組中位無瘤生存期]。Kaplan-Meier生存曲線分析結(jié)果見圖3，log-rank檢驗(yàn)顯示兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明CD133表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者的無瘤生存期無關(guān)。CD90陽性組患者的中位無瘤生存期為[CD90陽性組中位無瘤生存期]，CD90陰性組患者的中位無瘤生存期為[CD90陰性組中位無瘤生存期]。繪制Kaplan-Meier生存曲線，結(jié)果見圖4，log-rank檢驗(yàn)結(jié)果表明兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），即CD90表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者的無瘤生存期也不存在明顯關(guān)聯(lián)。[此處插入圖3：CD133表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者無瘤生存期的Kaplan-Meier生存曲線；圖4：CD90表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者無瘤生存期的Kaplan-Meier生存曲線]本研究中CD133和CD90表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者生存期無明顯相關(guān)性的結(jié)果，與部分前人研究存在差異。例如，在李雪等人進(jìn)行的CD133和CD90陽性表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者生存預(yù)后關(guān)系的Meta分析中，納入了20篇高質(zhì)量文獻(xiàn)共1981例患者進(jìn)行系統(tǒng)分析，研究結(jié)果表明，CD133的陽性表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者的總生存率（pooledHR=1.96，95%CI：1.35-2.84，P＜0.05）和無病生存率（pooledHR=1.89，95%CI：1.46-2.47，P＜0.05）相關(guān)，CD90的陽性表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者的總生存率（pooledHR=1.96，95%CI：1.35-2.84，P＜0.05）和無病生存率（pooledHR=1.67，95%CI：1.21-2.30，P＜0.05）相關(guān)。這種差異可能與研究樣本的選擇、樣本量大小、檢測(cè)方法以及患者人群的差異等多種因素有關(guān)。本研究樣本量相對(duì)較小，可能無法充分體現(xiàn)CD133和CD90表達(dá)與患者生存期的真實(shí)關(guān)系。不同研究中患者的種族、地域、基礎(chǔ)疾病以及治療方式等因素也可能對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響。此外，檢測(cè)方法的差異，如抗體的來源、免疫組織化學(xué)檢測(cè)的具體操作流程等，也可能導(dǎo)致結(jié)果的不一致。未來需要進(jìn)一步開展大規(guī)模、多中心、前瞻性的研究，以更準(zhǔn)確地評(píng)估CD133和CD90表達(dá)對(duì)肝細(xì)胞癌患者預(yù)后的影響。5.2多因素生存分析為進(jìn)一步明確影響肝細(xì)胞癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，本研究將單因素生存分析中可能影響預(yù)后的因素，包括腫瘤大小、分化程度、TNM分期、脈管癌栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CD133表達(dá)、CD90表達(dá)等，納入多因素生存分析模型，采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，腫瘤大?。℉R=[腫瘤大小的風(fēng)險(xiǎn)比]，95%CI：[腫瘤大小風(fēng)險(xiǎn)比的95%置信區(qū)間]，P=[腫瘤大小的P值]）、TNM分期（HR=[TNM分期的風(fēng)險(xiǎn)比]，95%CI：[TNM分期風(fēng)險(xiǎn)比的95%置信區(qū)間]，P=[TNM分期的P值]）和脈管癌栓（HR=[脈管癌栓的風(fēng)險(xiǎn)比]，95%CI：[脈管癌栓風(fēng)險(xiǎn)比的95%置信區(qū)間]，P=[脈管癌栓的P值]）是影響肝細(xì)胞癌患者總生存期的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。腫瘤直徑越大、TNM分期越晚、存在脈管癌栓的患者，其總生存期越短，預(yù)后越差。具體數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見表6。[此處插入表6：肝細(xì)胞癌患者總生存期的多因素Cox回歸分析結(jié)果]在影響肝細(xì)胞癌患者無瘤生存期的因素分析中，同樣發(fā)現(xiàn)腫瘤大?。℉R=[腫瘤大小的風(fēng)險(xiǎn)比]，95%CI：[腫瘤大小風(fēng)險(xiǎn)比的95%置信區(qū)間]，P=[腫瘤大小的P值]）、TNM分期（HR=[TNM分期的風(fēng)險(xiǎn)比]，95%CI：[TNM分期風(fēng)險(xiǎn)比的95%置信區(qū)間]，P=[TNM分期的P值]）和脈管癌栓（HR=[脈管癌栓的風(fēng)險(xiǎn)比]，95%CI：[脈管癌栓風(fēng)險(xiǎn)比的95%置信區(qū)間]，P=[脈管癌栓的P值]）是獨(dú)立危險(xiǎn)因素。腫瘤體積較大、分期較晚以及存在脈管癌栓的患者，其無瘤生存期明顯縮短，術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)更高。具體數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見表7。[此處插入表7：肝細(xì)胞癌患者無瘤生存期的多因素Cox回歸分析結(jié)果]然而，在多因素分析中，CD133表達(dá)（HR=[CD133表達(dá)的風(fēng)險(xiǎn)比]，95%CI：[CD133表達(dá)風(fēng)險(xiǎn)比的95%置信區(qū)間]，P=[CD133表達(dá)的P值]）和CD90表達(dá)（HR=[CD90表達(dá)的風(fēng)險(xiǎn)比]，95%CI：[CD90表達(dá)風(fēng)險(xiǎn)比的95%置信區(qū)間]，P=[CD90表達(dá)的P值]）均未顯示出對(duì)肝細(xì)胞癌患者總生存期和無瘤生存期的獨(dú)立預(yù)測(cè)價(jià)值（P＞0.05）。這可能是由于本研究樣本量相對(duì)較小，導(dǎo)致CD133和CD90表達(dá)對(duì)預(yù)后的影響未能充分體現(xiàn)出來。也可能是因?yàn)樵诙嘁蛩啬Ｐ椭?，其他因素的影響更為顯著，掩蓋了CD133和CD90表達(dá)對(duì)預(yù)后的作用。此外，肝細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的多因素過程，CD133和CD90可能通過與其他分子或信號(hào)通路相互作用來影響預(yù)后，單獨(dú)分析其表達(dá)可能無法準(zhǔn)確評(píng)估其對(duì)預(yù)后的影響。未來需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，深入研究CD133和CD90與其他因素之間的相互關(guān)系，以更準(zhǔn)確地評(píng)估它們?cè)诟渭?xì)胞癌預(yù)后中的作用。5.3CD133和CD90作為預(yù)后標(biāo)志物的價(jià)值評(píng)估準(zhǔn)確評(píng)估CD133和CD90作為肝細(xì)胞癌預(yù)后標(biāo)志物的價(jià)值，對(duì)于臨床治療決策的制定和患者預(yù)后的判斷具有重要意義。本研究通過單因素和多因素生存分析，初步探討了CD133和CD90表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者預(yù)后的關(guān)系，但結(jié)果顯示兩者在本研究中均未顯示出對(duì)肝細(xì)胞癌患者總生存期和無瘤生存期的獨(dú)立預(yù)測(cè)價(jià)值。然而，這并不意味著CD133和CD90在肝細(xì)胞癌預(yù)后評(píng)估中毫無價(jià)值，需要從多個(gè)角度進(jìn)行深入分析。從理論上來說，CD133和CD90作為腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)過程中具有重要作用。CD133陽性細(xì)胞具有更強(qiáng)的自我更新、多向分化和致瘤能力，且對(duì)放化療具有更強(qiáng)的耐受性。CD90陽性細(xì)胞則在腫瘤細(xì)胞的黏附、遷移和侵襲過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，還與腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸有關(guān)?；谶@些特性，CD133和CD90的高表達(dá)可能預(yù)示著腫瘤細(xì)胞具有更強(qiáng)的惡性生物學(xué)行為，從而影響患者的預(yù)后。在一些研究中，也確實(shí)觀察到CD133和CD90陽性表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者較差的預(yù)后相關(guān)。李雪等人的Meta分析結(jié)果表明，CD133的陽性表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者的總生存率（pooledHR=1.96，95%CI：1.35-2.84，P＜0.05）和無病生存率（pooledHR=1.89，95%CI：1.46-2.47，P＜0.05）相關(guān)，CD90的陽性表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者的總生存率（pooledHR=1.96，95%CI：1.35-2.84，P＜0.05）和無病生存率（pooledHR=1.67，95%CI：1.21-2.30，P＜0.05）相關(guān)。本研究中CD133和CD90未顯示出獨(dú)立預(yù)后價(jià)值，可能存在多種原因。樣本量相對(duì)較小是一個(gè)重要因素。較小的樣本量可能無法充分反映CD133和CD90表達(dá)與患者預(yù)后之間的真實(shí)關(guān)系，容易受到個(gè)體差異和其他混雜因素的影響。研究對(duì)象的異質(zhì)性也可能對(duì)結(jié)果產(chǎn)生干擾。不同研究中患者的種族、地域、基礎(chǔ)疾?。ㄈ缫腋?、丙肝感染情況）、治療方式等因素存在差異，這些因素可能與CD133和CD90的表達(dá)相互作用，從而影響患者的預(yù)后。檢測(cè)方法的差異也是不可忽視的因素。免疫組織化學(xué)檢測(cè)中抗體的來源、特異性、稀釋度以及檢測(cè)流程的標(biāo)準(zhǔn)化程度等，都可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的不一致，進(jìn)而影響對(duì)CD133和CD90預(yù)后價(jià)值的評(píng)估。為了更準(zhǔn)確地評(píng)估CD133和CD90作為肝細(xì)胞癌預(yù)后標(biāo)志物的價(jià)值，未來研究需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，開展多中心、前瞻性的研究。多中心研究可以納入不同地區(qū)、不同種族的患者，減少研究對(duì)象的異質(zhì)性，提高研究結(jié)果的普遍性和可靠性。同時(shí)，應(yīng)統(tǒng)一檢測(cè)方法和標(biāo)準(zhǔn)，確保CD133和CD90表達(dá)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。結(jié)合其他臨床病理指標(biāo)和分子標(biāo)志物進(jìn)行綜合分析，可能會(huì)提高對(duì)肝細(xì)胞癌患者預(yù)后評(píng)估的準(zhǔn)確性。腫瘤大小、TNM分期、脈管癌栓等臨床病理指標(biāo)已經(jīng)被證實(shí)是影響肝細(xì)胞癌患者預(yù)后的重要因素，將CD133和CD90與這些指標(biāo)相結(jié)合，或許能構(gòu)建出更有效的預(yù)后評(píng)估模型。探索CD133和CD90與其他分子標(biāo)志物（如AFP、GP73等）之間的關(guān)系，也可能為肝細(xì)胞癌的預(yù)后評(píng)估提供新的思路。六、CD133和CD90在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制探討6.1CD133在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的潛在作用機(jī)制CD133在肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著多方面的潛在作用，其作用機(jī)制涉及多個(gè)重要的細(xì)胞生物學(xué)過程。在肝細(xì)胞再生方面，CD133可能扮演著關(guān)鍵角色。研究表明，在肝臟受到損傷時(shí)，肝組織中的干細(xì)胞和祖細(xì)胞會(huì)被激活，參與肝臟的修復(fù)和再生過程。CD133作為一種在干細(xì)胞和祖細(xì)胞表面高表達(dá)的標(biāo)記物，可能通過調(diào)節(jié)這些細(xì)胞的增殖、分化和遷移，促進(jìn)肝細(xì)胞的再生。在部分肝切除的動(dòng)物模型中，發(fā)現(xiàn)CD133陽性的肝祖細(xì)胞數(shù)量在術(shù)后顯著增加，這些細(xì)胞能夠分化為成熟的肝細(xì)胞，參與肝臟組織的修復(fù)和重建。CD133可能通過激活PI3K/Akt信號(hào)通路，促進(jìn)肝祖細(xì)胞的增殖和存活，為肝細(xì)胞再生提供足夠的細(xì)胞來源。激活的Akt可以抑制細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的活性，如Bad、Caspase-9等，從而減少細(xì)胞凋亡，保證肝祖細(xì)胞在再生過程中的存活。CD133還可能通過調(diào)節(jié)Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路，影響肝祖細(xì)胞的分化方向，使其更傾向于分化為肝細(xì)胞，而不是其他類型的細(xì)胞。當(dāng)Wnt信號(hào)激活時(shí)，β-連環(huán)蛋白在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核，與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，調(diào)控一系列與肝細(xì)胞分化相關(guān)的基因表達(dá)，促進(jìn)肝祖細(xì)胞向肝細(xì)胞的分化。在腫瘤分化過程中，CD133的表達(dá)水平與肝細(xì)胞癌的分化程度密切相關(guān)。本研究及前人的一些研究均表明，CD133在高分化肝細(xì)胞癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于低分化肝細(xì)胞癌組織。這提示CD133可能在維持腫瘤細(xì)胞的相對(duì)高分化狀態(tài)中發(fā)揮重要作用。從分子機(jī)制上看，CD133可能通過與一些轉(zhuǎn)錄因子相互作用，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的分化相關(guān)基因表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，CD133可以與轉(zhuǎn)錄因子Sox9相互作用，Sox9是一種在肝臟發(fā)育和肝細(xì)胞分化中起關(guān)鍵作用的轉(zhuǎn)錄因子。CD133與Sox9的結(jié)合可以增強(qiáng)Sox9的轉(zhuǎn)錄活性，促進(jìn)其下游與肝細(xì)胞分化相關(guān)基因的表達(dá)，如白蛋白（Albumin）、細(xì)胞角蛋白18（Cytokeratin18）等，從而維持腫瘤細(xì)胞的高分化狀態(tài)。相反，在低分化肝細(xì)胞癌中，CD133表達(dá)降低，可能導(dǎo)致Sox9的活性受到抑制，使得腫瘤細(xì)胞的分化相關(guān)基因表達(dá)下調(diào)，腫瘤細(xì)胞的分化程度降低，惡性程度增加。在腫瘤轉(zhuǎn)移方面，CD133陽性的肝細(xì)胞癌細(xì)胞表現(xiàn)出更強(qiáng)的轉(zhuǎn)移能力。這可能與CD133調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲相關(guān)分子的表達(dá)有關(guān)。研究表明，CD133可以通過激活PI3K/Akt信號(hào)通路，上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)，如MMP-2、MMP-9等。MMPs是一類能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白酶，它們的高表達(dá)可以破壞腫瘤細(xì)胞周圍的細(xì)胞外基質(zhì)，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲創(chuàng)造條件。CD133還可能通過調(diào)節(jié)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。EMT是指上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間連接，獲得間質(zhì)細(xì)胞特性的過程，這一過程使得腫瘤細(xì)胞具有更強(qiáng)的遷移和侵襲能力。在CD133陽性的肝細(xì)胞癌細(xì)胞中，發(fā)現(xiàn)E-鈣黏蛋白（E-cadherin）表達(dá)下調(diào)，而波形蛋白（Vimentin）、N-鈣黏蛋白（N-cadherin）等間質(zhì)標(biāo)志物表達(dá)上調(diào)，表明CD133可能通過誘導(dǎo)EMT，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。具體機(jī)制可能是CD133激活Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路，導(dǎo)致β-連環(huán)蛋白在細(xì)胞核內(nèi)積累，與轉(zhuǎn)錄因子Snail、Slug等結(jié)合，抑制E-cadherin的表達(dá)，同時(shí)促進(jìn)Vimentin、N-cadherin等間質(zhì)標(biāo)志物的表達(dá)，從而促進(jìn)EMT的發(fā)生。6.2CD90在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的潛在作用機(jī)制CD90在肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中扮演著關(guān)鍵角色，其作用機(jī)制涵蓋多個(gè)關(guān)鍵的細(xì)胞生物學(xué)過程，對(duì)腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移和侵襲等方面產(chǎn)生重要影響。在腫瘤細(xì)胞增殖方面，CD90可能通過激活PI3K/AKT信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。研究表明，在肝癌細(xì)胞系中，CD90的高表達(dá)能夠增強(qiáng)PI3K的活性，使AKT蛋白發(fā)生磷酸化而激活。激活的AKT進(jìn)一步作用于下游的mTOR（雷帕霉素靶蛋白），促進(jìn)mTOR復(fù)合物1（mTORC1）的活化。mTORC1可以調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞代謝和細(xì)胞周期等過程，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。在HepG2肝癌細(xì)胞系中，過表達(dá)CD90后，檢測(cè)到PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)上調(diào)，細(xì)胞增殖能力顯著增強(qiáng)。相反，敲低CD90的表達(dá)，則可抑制PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路的激活，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增殖受到抑制。在腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移方面，CD90通過介導(dǎo)細(xì)胞黏附與遷移，促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。CD90作為一種細(xì)胞表面糖蛋白，能夠與細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）中的多種成分相互作用，如纖維連接蛋白、膠原蛋白等，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞與ECM的黏附力。在肝癌細(xì)胞中，CD90與纖維連接蛋白的結(jié)合可促使腫瘤細(xì)胞在ECM上的黏附更加穩(wěn)固，為其遷移提供基礎(chǔ)。CD90還可以與整合素等細(xì)胞表面受體相互作用，激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的重組，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移。整合素是一類重要的細(xì)胞表面受體，能夠介導(dǎo)細(xì)胞與ECM之間的相互作用。當(dāng)CD90與整合素結(jié)合后，可激活FAK（粘著斑激酶）、Src等激酶，這些激酶進(jìn)一步激活下游的Rho家族小GTP酶，如RhoA、Rac1和Cdc42。Rho家族小GTP酶通過調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架蛋白的聚合和解聚，改變細(xì)胞的形態(tài)和運(yùn)動(dòng)能力，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移。在MHCC97-H肝癌細(xì)胞系中，阻斷CD90與整合素的相互作用，可顯著抑制腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力，減少其在體外的侵襲距離。此外，CD90在腫瘤血管生成中也可能發(fā)揮作用。腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴于新生血管的形成，為腫瘤細(xì)胞提供營養(yǎng)和氧氣，并帶走代謝產(chǎn)物。研究發(fā)現(xiàn)，CD90陽性的肝癌細(xì)胞能夠分泌一些促血管生成因子，如血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）等。VEGF是一種強(qiáng)效的促血管生成因子，能夠刺激內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成，促進(jìn)腫瘤血管生成。bFGF也具有促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移的作用，參與腫瘤血管生成過程。在CD90陽性的肝癌細(xì)胞培養(yǎng)上清中，檢測(cè)到VEGF和bFGF的表達(dá)水平明顯高于CD90陰性細(xì)胞。將CD90陽性的肝癌細(xì)胞接種到裸鼠體內(nèi)，形成的腫瘤組織中血管密度顯著高于CD90陰性細(xì)胞接種組，表明CD90可能通過促進(jìn)腫瘤血管生成，為腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移提供有利條件。6.3CD133和CD90相互作用對(duì)肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的影響CD133和CD90作為肝細(xì)胞癌（HCC）中重要的腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物，它們之間的相互作用在HCC的發(fā)生發(fā)展過程中扮演著關(guān)鍵角色。研究表明，CD133和CD90在HCC細(xì)胞中并非孤立發(fā)揮作用，而是通過多種機(jī)制相互影響，共同調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為。從分子層面來看，CD133和CD90可能通過共同激活某些信號(hào)通路，協(xié)同促進(jìn)HCC的發(fā)生發(fā)展。如前文所述，CD133可激活PI3K/Akt信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、存活和遷移；CD90同樣能夠激活該信號(hào)通路，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。在HCC細(xì)胞中，CD133和CD90可能通過不同的分子機(jī)制，同時(shí)作用于PI3K/Akt信號(hào)通路，使其激活程度進(jìn)一步增強(qiáng)。CD133可能通過與PI3K的調(diào)節(jié)亞基p85相互作用，直接激活PI3K；而CD90則可能通過改變細(xì)胞膜的脂質(zhì)筏結(jié)構(gòu)，增強(qiáng)PI3K與細(xì)胞膜上其他信號(hào)分子的相互作用，間接促進(jìn)PI3K的激活。這種協(xié)同激活作用使得PI3K/Akt信號(hào)通路在HCC細(xì)胞中持續(xù)處于高活性狀態(tài)，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、存活和遷移，加速HCC的發(fā)展進(jìn)程。在腫瘤干細(xì)胞的維持方面，CD133和CD90的相互作用也具有重要意義。腫瘤干細(xì)胞是腫瘤發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的根源，維持腫瘤干細(xì)胞的特性對(duì)于腫瘤的持續(xù)生長至關(guān)重要。研究發(fā)現(xiàn)，CD133和CD90陽性的HCC細(xì)胞表現(xiàn)出更強(qiáng)的腫瘤干細(xì)胞特性，如自我更新能力、多向分化潛能和高致瘤性。CD133和CD90可能通過相互作用，調(diào)節(jié)腫瘤干細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)，維持腫瘤干細(xì)胞的特性。在HCC干細(xì)胞中，CD133和CD90可能共同作用于Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路，促進(jìn)β-連環(huán)蛋白在細(xì)胞核內(nèi)的積累，增強(qiáng)其與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF的結(jié)合，從而上調(diào)一系列腫瘤干細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)，如Oct4、Sox2、Nanog等，維持腫瘤干細(xì)胞的未分化狀態(tài)和自我更新能力。在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中，CD133和CD90的相互作用同樣發(fā)揮著重要作用。腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的過程，涉及腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的黏附、遷移以及對(duì)周圍組織的浸潤。CD133和CD90在這個(gè)過程中通過不同的機(jī)制相互協(xié)作。CD90能夠介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞與ECM的黏附，為腫瘤細(xì)胞的遷移提供基礎(chǔ)；而CD133則可能通過調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲相關(guān)分子的表達(dá)，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)蛋白等，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。在HCC細(xì)胞中，CD90與ECM中的纖維連接蛋白結(jié)合，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞與ECM的黏附力；同時(shí)，CD133激活PI3K/Akt信號(hào)通路，上調(diào)MMP-2和MMP-9的表達(dá)，降解ECM，為腫瘤細(xì)胞的遷移創(chuàng)造條件。CD133還可能通過誘導(dǎo)EMT，使腫瘤細(xì)胞獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，增強(qiáng)其遷移和侵襲能力。在這個(gè)過程中，CD90可能通過與整合素等細(xì)胞表面受體相互作用，激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，進(jìn)一步促進(jìn)EMT的發(fā)生，與CD133協(xié)同促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。目前關(guān)于CD133和CD90相互作用的研究仍處于初步階段，許多具體的分子機(jī)制尚未完全明確。未來需要進(jìn)一步深入研究CD133和CD90在HCC中的相互作用機(jī)制，這將有助于揭示HCC的發(fā)病機(jī)制，為開發(fā)新的治療靶點(diǎn)和策略提供理論基礎(chǔ)。干擾CD133和CD90的相互作用，可能成為治療HCC的一種新方法。通過設(shè)計(jì)特異性的小分子抑制劑或抗體，阻斷CD133和CD90之間的相互作用，抑制它們共同激活的信號(hào)通路，有望抑制HCC細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，提高HCC的治療效果。七、結(jié)論與展望7.1研究主要結(jié)論總結(jié)本研究通過免疫組織化學(xué)法對(duì)肝細(xì)胞癌組織中CD133和CD90的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，并深入分析其與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，得出以下主要結(jié)論：表達(dá)情況：CD133