DB13DB13/T2276—2015食用菌母種質(zhì)量評(píng)價(jià)及復(fù)壯方法2015-12-25發(fā)布2016-2-1實(shí)施河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：王立安、張金秀、姚清國、劉紅1本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食用菌母種的質(zhì)量評(píng)價(jià)、復(fù)壯及檢測(cè)方法。2規(guī)范性引用文件NY/T528-2010食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1845-2010食用菌菌種區(qū)NY/T1097-2006食用菌菌種真實(shí)性鑒定酯酶同工酶電泳法24母種質(zhì)量評(píng)價(jià)4.1培養(yǎng)基選擇根據(jù)母種特性，按NY/T528-2010相關(guān)要4.2接種及培養(yǎng)4.3評(píng)價(jià)5母種復(fù)壯方法5.1提純復(fù)壯5.1.1母種來源5.1.2接種培養(yǎng)板培養(yǎng)基中，每一平板可接3～4塊。按菌種最適溫度要求置恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7d～10d后，觀察菌落形5.1.3復(fù)壯操作35.1.4菌種保藏5.2原生質(zhì)體脫毒復(fù)壯5.2.1母種來源5.2.2菌絲體制備5.2.3原生質(zhì)體制備30℃~34℃水浴，每30min搖晃一次。3h之后，加入等體積0.6M甘露醇，用400目細(xì)胞篩過濾，將濾液收5.2.4原生質(zhì)體再生用0.6M甘露醇將原生質(zhì)體懸浮，調(diào)整生質(zhì)體懸液濃度到1×107個(gè)/mL。稀釋后吸取1于適合該菌種生長的最適平板培養(yǎng)基上，于恒溫培養(yǎng)箱中最適溫度下培養(yǎng)5.2.5復(fù)壯母種篩選置顯微鏡下觀察。具鎖狀聯(lián)合結(jié)構(gòu)的菌絲即為脫毒復(fù)壯試驗(yàn)6復(fù)壯母種的檢測(cè)方法4后，每隔24h測(cè)量菌落直徑，連測(cè)3d～5d，計(jì)算并統(tǒng)計(jì)菌絲平均生長速度。復(fù)壯后菌絲平均生長速度應(yīng)置恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，7d～10d后觀察菌絲生長狀況。復(fù)壯后母種與未復(fù)壯的母種相比，菌塊萌發(fā)快并迅速向培養(yǎng)料中生長伸展，吃料能力應(yīng)明顯增5A.1常用母種培養(yǎng)基配方：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊A.1.2CPDA培養(yǎng)基完全融化。過濾。用90℃~100℃水補(bǔ)足至1000mL。趁熱分裝試管或三角瓶，封口、包裝后，121℃滅菌PDA、CPDA+木屑煮汁：在PDA、CPDA.1.3麥粒、麥麩浸汁培養(yǎng)基續(xù)加熱、攪拌，直至瓊脂完全融化，過濾。90℃~100℃水補(bǔ)足至1000mL。趁熱分裝試管或三角瓶，封A.2常用原種和栽培種培養(yǎng)基A.2.1谷粒培養(yǎng)基拌勻后分裝。121℃~124℃滅菌2h～2.5h。A.2.2棉籽殼培養(yǎng)基配方：棉籽殼84%，麥麩（或米糠）15%，石膏1%，含水量60%6A.2.3木屑培養(yǎng)基逐漸加入糖水