DetectionstandardofantibodyagainstSchistosomajaponicum—Enzyme-linkedimmunosorbentassayWS/T792—WS/TWS/T792—日本血吸蟲抗體檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)enzyme-linkedimmunosorbentsolubleegg staphylococalprotein控溫范圍5℃～99.9℃，溫度分辨率/波動(dòng)度0.1℃/±0.5℃增量5μL。0.05mol/LpH9.6碳酸鹽緩沖液，制備方法見附錄A.2含0.05%吐溫-200.01mol/LpH7.4磷酸鹽緩沖液（PBS-T），制備方法見附錄A.3%%pH5.0磷酸-檸檬酸緩沖液，制備方法見附錄A.92mol/L硫酸，制備方法見附錄A.11采集末梢血100μL或靜脈血2mL，室溫下放置至血塊收縮后，800g離心5min，分離出血清進(jìn)行100μL1:1000～1:30004℃100μL封閉液過(guò)夜，甩干。4℃保存?zhèn)溆谩?:100100μL稀釋血清加入酶標(biāo)371h6.2.1洗滌甩干。371h6.2.1100μL3730min50μL以空白對(duì)照調(diào)零，450nm（TMB為底物）492nm（OPD為底物）OD630nm作為參比波長(zhǎng)。0.05計(jì)算。附錄即為0.05mol/LpH9.6碳酸鹽緩沖液，密封蓋好，4℃保存?zhèn)溆?，有效?周。（PBS），再加0.5mL吐溫-20，即配成含0.05-20的洗滌緩沖液（PBS-T），4稱取2gBSA，加入PBS-T緩沖液100mL，即為2%牛血清白蛋白，4選擇體重2.5kg～3.0kg的健康家兔，每只感染800條～1000條日本血吸蟲尾蚴，飼養(yǎng)60d后，抽取選擇體重2.5kg～3.0kg（56℃稱取0.1gBSA，加入PBS-T緩沖液至100mL，4常用過(guò)碘酸鈉法標(biāo)記稱取5mg辣根過(guò)氧化物（HRP）溶于0.5mL蒸餾水中加入新鮮配制的0.06室溫放置30min后，加入含5mg純化抗體的水溶液1mL，混勻并裝透析袋，在0.05mol/LpH9.5碳酸緩沖液緩慢攪拌透析6h或過(guò)夜，然后加5mg/mL硼氫化鈉（NaBH4）溶液0.2mL，置4℃2h。將上述結(jié)合物混合液加入等體積飽和硫酸銨，4℃30min后離心，將所得沉淀物溶于少許0.02mol/L pH7.4磷酸鹽緩沖液中，并透析過(guò)夜，次日離心除去不溶物，即得酶-抗體結(jié)合物，用磷酸鹽緩沖液加至5mL進(jìn)蒸餾水）50mL，即為pH5.0磷酸-檸檬酸緩沖液?，F(xiàn)配現(xiàn)用。稱取100mgTMB溶解在10mL二甲基亞砜（DMSO）或無(wú)水乙醇中，配成1TMB溶液，4℃保存69.9mL加入0.1mL1TMB1mLTMB溶液加入30%過(guò)氧化氫（H2O2）1μL，混勻后立即使用。稱取4mgOPD溶解在10mL底物緩沖液中，再加30H2O215μL附錄圖B.1樣本采集與保存：末梢血一般采用聚乙烯塑料管采集，塑料管孔徑2mm，長(zhǎng)度10cm。靜脈血一般采用一次性真空采血管采集。全血采集后應(yīng)在4h內(nèi)進(jìn)行血清分離。血清樣本不能混有紅細(xì)胞或被細(xì)菌污