2021-09-04實(shí)施2021-09-04實(shí)施本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由甘肅省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并監(jiān)督實(shí)施。本文件由甘肅省糧食作物栽培標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本文件起草單位：甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所、甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所、慶陽(yáng)市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院、白銀市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所、甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所、西和縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局。文件主要起草人：張艷萍、趙瑋、劉亞亞、俞華林、李曉蓉、陳玉梁、張建平、陳玉霞、王利民、齊燕妮。I2規(guī)范性引用文件僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T3543.4農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程發(fā)芽試驗(yàn)下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。作物在鹽脅迫下，種子萌發(fā)和生長(zhǎng)發(fā)育形成對(duì)鹽脅迫的反應(yīng)能力。烘箱，培養(yǎng)箱，1000mL容量瓶，25mL量筒，直徑9cm培養(yǎng)皿，定性子天平(感量0.001g)等。試劑分析純氯化鈉(NaC1),蒸餾水。124.1.2鑒定步驟按GB/T3543.4進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)。將400粒種子分為4組并編號(hào)1～4,每組100粒，分別放入墊有雙層濾對(duì)照培養(yǎng)按GB/T3543.4進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)。將400粒種子分為4組并編號(hào)1～4,每組100粒，分別放入墊有雙層濾測(cè)量與數(shù)據(jù)處.1.1測(cè)量方法：發(fā)芽第3d～7d,每天同一時(shí)刻統(tǒng)計(jì)發(fā)芽種子數(shù)。對(duì)鹽脅迫培養(yǎng)和對(duì)照培養(yǎng)的.1.2數(shù)據(jù)按式(1)～式(4)進(jìn)行計(jì)算： (1) (2)Gi——發(fā)芽指數(shù)；Dt——發(fā)芽天數(shù)，單位為天(d);Gt——每日相對(duì)應(yīng)的發(fā)芽種子數(shù)(粒);G1ck——對(duì)照培養(yǎng)下發(fā)芽指數(shù)的平均值；.2芽苗總鮮重.2.1測(cè)量方法：發(fā)芽7d結(jié)束后，每組隨機(jī)取10粒發(fā)芽的種子，去種皮且株苗形態(tài)完整，用蒸餾水洗滌3次后置于濾紙上，吸取表面附著蒸餾水后用電子天平測(cè)量芽苗.2.2數(shù)據(jù)按式(5)～式(7)進(jìn)行計(jì)算：XTw.Tn——鹽脅迫培養(yǎng)下每組總鮮重，.3.1測(cè)量方法：發(fā)芽7d結(jié)束后，每組隨機(jī)取10粒發(fā)芽的種子，從下胚軸和胚根的結(jié)節(jié)處剪下胚根部，先用烘箱105℃殺青30min,然后80℃下恒溫烘至恒重，用電子天平測(cè)量胚根部干重。對(duì)鹽.3.2數(shù)據(jù)按式(8)～式(10)進(jìn)行計(jì)算：…XRDw.T——鹽脅迫培養(yǎng)下胚根干重的平均值，單位為克(g);XRDw.ck——對(duì)照培養(yǎng)下胚根干重的平均值，單位為克(g);.4下胚軸長(zhǎng).4.1測(cè)量方法：發(fā)芽7d結(jié)束后，每組隨機(jī)取10粒發(fā)芽的種子，去子葉和根部獲得下胚軸，.4.2數(shù)據(jù)按式(11)～式(13)進(jìn)行計(jì)算：…34 (12) (13)XHLTn——鹽脅迫培養(yǎng)下每組下胚軸長(zhǎng)，單位為厘米(cm),n=1、2、3、4;XHLT鹽脅迫培養(yǎng)下下胚軸長(zhǎng)的平均值，單位為厘米(cm);XHL.CK對(duì)照培養(yǎng)下下胚軸長(zhǎng)的平均值，單位為厘米(cm);RX?下胚軸長(zhǎng)相對(duì)值。耐鹽鑒定綜合Z值計(jì)算綜合Z值計(jì)算如式(14)所示。Z=-155.359+126.107RX?+89.940RX?+39.447RX?+53.582RX?…………萌發(fā)期耐鹽性判定胡麻種子萌發(fā)期耐鹽性判定應(yīng)符合表1。表1胡麻種子萌發(fā)期耐鹽性判定級(jí)別耐鹽性等級(jí)1級(jí)極強(qiáng)(HR)2級(jí)強(qiáng)(R)3級(jí)中等(MR)弱(S)5級(jí)極弱(HS)4.2苗期耐鹽性鑒定4.2.1鑒定準(zhǔn)備儀器和用具人工氣候室，1000mL容量瓶，32孔穴育苗盤(上口徑58mm,下口徑20mm,深度110mm),50cm托盤，50mL量筒，直尺(精度0.1cm),紫外分光光度計(jì)，離心機(jī)，秒表，電子天平(感量0.001g),研缽，可調(diào)移液器(200μL,1000μL),吸頭，100mL容量瓶，500mL量筒，試管，燒杯，比色皿，試管架，剪刀等。試劑分析純氯化鈉(NaCl),蒸餾水，愈創(chuàng)木酚，30%雙氧水(H?O?),磷酸氫二鈉(Na?HPO?),磷酸二氫鈉(NaH?PO?)。需配置試劑需配置試劑如下所示：a)MS營(yíng)養(yǎng)液(配置見附錄A);b)磷酸緩沖液：1)0.1mol/L,pH6.0的磷酸緩沖液：量取12.3mLA液，再量取87.7mLB液，混合；2)0.05mol/L,pH7.0的磷酸緩沖液：量取61.0mLA液，再量取39.0mLB液，混合，再用蒸餾水稀釋4倍；A液——將71.64g磷酸氫二鈉(Na?HPO?)溶解于1L蒸餾水中；B液——將31.202g磷酸二氫鈉(NaH?PO?)溶解于1蒸餾水中。c)反應(yīng)混合液：400mL磷酸緩沖液(0.1molL,pH6.0)+224μL愈創(chuàng)木酚+15加入愈創(chuàng)木酚，需加熱攪拌，直至愈創(chuàng)木酚溶解，待溶液冷卻后，加入雙氧水，混合均勻，保存于冰箱);d)脅迫溶液：將17.6gNaCl溶解在800mLMS營(yíng)養(yǎng)液中，溶解后用MS營(yíng)養(yǎng)液定容至1000mL,配置成300mmol/LNaCl脅迫溶液。4.2.2鑒定步驟將待測(cè)材料種子樣品充分混勻后，用四分法獲得試樣，從試樣中隨機(jī)取800粒。把800粒種子再均分成兩份，一份用于脅迫育苗，一份用于對(duì)照育苗。育苗盤放在托盤上，育苗盤中裝入9cm厚的75μm蛭石。每穴播種20粒種子，再覆蛭石2cm,緩緩加入50mLMS營(yíng)養(yǎng)液，放置于溫度為25℃,濕度為60%,光照為15000lux,每天16h光照8h黑暗的人工氣候室育苗。.2脅迫育苗將20穴(400粒種子)分為4組，編號(hào)1～4,每5穴一組。幼苗長(zhǎng)至8片～10片真葉時(shí)每穴定苗在15株，開始鹽脅迫處理，每穴澆灌50mL的300mmol/LNaCl脅迫溶液，每隔4d澆灌一次。將20穴(400粒種子)分為4組，編號(hào)1～4,每5穴一組。幼苗長(zhǎng)至8片～10片真葉時(shí)每穴定苗在15株，每穴澆灌50mLMS營(yíng)養(yǎng)液，每隔4d澆灌一次。測(cè)量與數(shù)據(jù)處理.1生長(zhǎng)速率.1.1測(cè)量方法：每組隨機(jī)取10株幼苗并標(biāo)記，鹽脅迫開始前用直尺測(cè)量幼苗株高(露出蛭石的地上部分),待鹽脅迫15d后，再測(cè)量標(biāo)記幼苗的株高(露出蛭石的地上部分)。對(duì)照育苗按此方法描述的時(shí)間點(diǎn)測(cè)量前后株高。對(duì)鹽脅迫育苗和對(duì)照育苗按分組編號(hào)分別進(jìn)行測(cè)量。56.1.2數(shù)據(jù)按式(15)～式(18)進(jìn)行計(jì)算： GR——生長(zhǎng)速率；SHend—15d后株高，單位為厘米(cm);GRT——鹽脅迫育苗下生長(zhǎng)速率的平均值；RX?——生長(zhǎng)速率相對(duì)值。.2過氧化物酶(POD)活性每組隨機(jī)取10株幼苗，將莖葉剪碎混合后取0.2g～0.5g,放入研缽中，加入4mL酶液提取液 溫度：4℃)離心10min,獲得上清液(酶液)。對(duì)鹽脅迫育苗和對(duì)照育苗按分組編號(hào)分別進(jìn)行酶液制備。吸取3mL反應(yīng)混合液于另一比色皿中，再吸取上述酶液0.1mL加入，等待5s后470nm波長(zhǎng)下每隔30s記錄1次吸光值A(chǔ)470,連續(xù)記錄2min。對(duì)鹽脅迫育苗和對(duì)照育苗的酶液按分組編號(hào).2.2數(shù)據(jù)按式(19)～式(22)進(jìn)行計(jì)算： XPOD——過氧化物酶活性，單位為U每克分鐘[U/(g.min)]];△A?70——記錄A470的2min內(nèi)，任意2次A470之間的差值；VT——酶液提取液體積，單位為毫升(mL);W——樣品鮮重，單位克(g);Vs——測(cè)定時(shí)吸取的酶液體積，單位為毫升(mL);T計(jì)算△A470時(shí)所對(duì)應(yīng)的時(shí)間差，單位為分鐘(min);XpOD.Tn——鹽脅迫育苗下每組過氧化物酶活性，單位為U每克分鐘[U/(g.min)],n=1,2,3,4;XPOD.CKn—對(duì)照育苗下每組過氧化物酶活性，單位為U每克分鐘[U/(g.min)]],n=1,2,3,4;XPOD.T——鹽脅迫育苗下過氧化物酶活性的平均值，單位為U每克分鐘[U/(g.min)];XPOD.Ck——對(duì)照育苗下過氧化物酶活性的平均值，單位為U每克分鐘[U/(g.min)];RX?——過氧化物酶(POD)活性相對(duì)值。耐鹽鑒定綜合Z值計(jì)算耐鹽鑒定綜合Z值計(jì)算如式(23)所示。苗期耐鹽性判定胡麻苗期耐鹽性判定應(yīng)符合表2。表2胡麻苗期耐鹽性判定級(jí)別耐鹽性等級(jí)1級(jí)極強(qiáng)(HR)2級(jí)強(qiáng)(R)3級(jí)中等(MR)弱(S)5級(jí)極弱(HS)5品種資源選擇在鹽脅迫條件下開展鑒定試驗(yàn)，建議使用在萌發(fā)期和苗期耐鹽性鑒定等級(jí)結(jié)果均為中等或以上的品種資源。78(資料性)MS營(yíng)養(yǎng)液的配制方法A.1試劑(所用藥品均為分析純)硝酸銨(NH?NO?),硝酸鉀(KNO?),硫酸鎂(MgSO?·7H?O),磷酸二氫鉀(KH?PO?),碘化鉀(KI),硼酸(H?BO?)升，硫酸錳(MnSO?·4H?O)升，硫酸鋅(ZnSO?·7H?O),高錳酸鈉(Na?MnO?·2H?O),硫酸銅(CuSO?·5H?O),氯化鈷(CoCl?·6H?O),煙酸，鹽酸吡哆醇，鹽酸硫胺素，氯化鈣(CaCl?·2H?O),硫酸亞鐵(FeSO?·7H?O),乙二胺四乙酸二鈉(Na?-EDTA·2H?O),蒸餾水。A.2用具電子天平(感量0.0001g),1000mL容量瓶，1000mL燒杯，可調(diào)移液器(1000μL),吸頭。A.3MS營(yíng)養(yǎng)液成分MS營(yíng)養(yǎng)液的成分如表A.1所示：表A.1MS營(yíng)養(yǎng)液的成分(I)大量元素(50